本发明涉及一种药物的制备方法，具体涉及一种具有降血糖功效的复方铁皮石斛片及其制备方法。
背景技术：
：糖尿病是一种全球性的常见病和多发病，已成为继肿瘤和心血管疾病之后的第三大疾病。糖尿病合并瘀热病症是糖尿病主要的并发病症，临床上常见的有糖尿病性心脏病，糖尿病性心脏病包括糖尿病特异性心肌病变，与糖尿病有关的心脏微血管病变、大血管病变、心脏植物神经病变等，同时常伴有非特异性的冠状动脉粥样硬化性心脏病和(或)高血压心脏病，在患有糖尿病的基础上，可以统称为糖尿病性心脏病。糖尿病性心脏病与非糖尿病人发生的冠状动脉粥样硬化性心脏病和心肌病相比，有病情重、矛盾多、治疗难度大、预后差及病死率高的特点。目前治疗糖尿病及其并发症的药物较多，临床上使用的西药，虽具有一定的疗效，但多数存在较大的不良反应，如出现停药后反弹，患者肝肾损害、横纹肌融解症等副作用，治标不治本，而中医药在治疗糖尿病方面具有其独特的优势，具有疗效持久，无明显毒副作用的优点，但目前针对糖尿病的中药多偏于单方、验方，缺乏系统完善的临床药效研究，且中药组方依据各有不同，治则不统一。因此，积极寻找和努力探索研究出具有安全性好，不良反应低，具有很好的防治糖尿病功效药物及其制备方法具有重要意义。技术实现要素：发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种具有降血糖功效的复方铁皮石斛片的制备方法。
背景技术：
技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：一种具有降血糖功效的复方铁皮石斛片，它由下列原料制成：桑叶提取物、苦荞麦提取物、铁皮石斛、灵芝孢子粉，稀释剂、矫味剂、润滑剂、黏合剂。作为优选方案，以上所述的具有降血糖功效的复方铁皮石斛片，它由下列原料制成：作为优选方案，以上所述的具有降血糖功效的复方铁皮石斛片，它由下列原料制成：作为优选方案，以上所述的具有降血糖功效的复方铁皮石斛片，所述的桑叶提取物是通过以下方法制备得到的：取桑叶，加10倍量体积浓度80％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，得乙醇提取液；药渣加10倍量水提取1次，每次1.5h，滤过，得水提取物，将乙醇提取液和水提取液合并，减压浓缩至60℃相对密度1.20，备用；取浓缩液，减压或喷雾干燥，粉碎，过筛，得桑叶提取物；所述的苦荞麦提取物是通过以下方法制备得到的：取苦荞，加10倍量体积浓度60％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度1.20，备用；取浓缩液，常压或减压干燥，低温粉碎，过筛，得苦荞麦提取物，备用；所述的铁皮石斛是通过以下方法制备得到的：取铁皮石斛100℃烘干30分钟，粉碎，过100目筛，得铁皮石斛粉。本发明所述的具有降血糖功效的复方铁皮石斛片的制备方法：包括以下步骤：取桑叶提取物、苦荞麦提取物、铁皮石斛和灵芝孢子粉混合均匀，加入辅料乳糖、甘露醇、奶精、阿斯巴甜、柠檬酸、硬脂酸镁，用10％淀粉浆制粒，60℃烘干0.5h，整粒，加入矫味剂和润滑剂，混合均匀后压片。压片工艺参数为转速20.3，片径14mm。有益效果：本发明提供的具有降血糖功效的复方铁皮石斛片及其制备方法具有以下优点：本发明通过大量是实验筛选出最佳的原料组成和最佳的辅料组成和辅料用量，制备得到的复方铁皮石斛片具有明显的降血糖降血脂功效，整个工艺设计合理，可操作性强，可实现工业化生产。具体实施方式下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。实施例1工艺筛选实验1、桑叶乙醇回流提取工艺优选试验因素水平设计采用L9(34)正交设计表，以桑叶中芦丁和总黄酮含量为指标，考察醇浓度、料液比、提取次数对指标性成分提取的影响。表1正交试验因素水平表因素A醇浓度(％)B料液比C提取次数D空白1601:8112701:10223801:12332、结果分析按照L9(34)正交表进行正交试验，称取桑叶药材10g，加乙醇回流，过滤，合并药液。每组试验平行3次。表2正交试验结果表3芦丁方差分析因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性醇浓度0.041220.50019.000*料液比0.01125.50019.000提取次数0.147273.50019.000*误差0.002表4总黄酮方差分析结果表明，以芦丁为检测指标时，醇浓度和提取次数两个因素有显著性差异，且主次因素顺序为：提取次数>醇浓度>料液比，因此选择桑叶醇提的最佳工艺是料液比1：12，醇浓度为80％，提取次数为3次，但考虑到节约成本，故选择料液比为1：10。以总黄酮为指标时，各因素均无显著性差异，因此选择最佳醇提工艺为料液比1:10，醇浓度为80％，提取次数为3次。加10倍量80％食用乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，药渣加10倍量水提取1次，每次1.5h，滤过，与乙醇提取液合并。减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.20(60℃)2、苦荞麦提取工艺优选试验因素水平的确定通过预实验，影响醇提工艺主要因素有醇浓度、提取次数、料液比。本发明采用L9(34)正交设计表，以芦丁和槲皮素的含量为评价指标，考察醇浓度、提取次数、料液比三个因素对指标性成分提取的影响。表5因素水平表因素A醇浓度(％)B提取次数C料液比(g:mL)空白D16011:6127021:8238031:103正交试验称取苦荞麦药材10g，按照正交设计表安排实验，以芦丁和槲皮素的含量为评价指标，对醇提工艺进行优选，正交试验结果见下表。表6直观分析表表7芦丁方差分析因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性醇浓度12.90523.65419.000料液比12.11423.43019.000提取次数2.43320.68919.000误差3.532表8槲皮素方差分析因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性醇浓度0.01527.50019.000料液比0.045222.50019.000*提取次数0.00321.50019.000误差0.002影响芦丁提取的主次因素为：醇浓度>提取次数>料液比，各因素均无显著性差异。影响槲皮素提取的主次因素为提取次数>醇浓度>料液比，其中料液比有显著性差异，故最佳工艺组合为A1B3C3，即60％乙醇，提取3次，料液比为1:10。工艺验证在正交试验的基础上，选定A1B3C3(60％乙醇，提取3次，料液比为1:10)做验证试验，结果见表9。表9工艺验证结果(n＝3)序号芦丁含量(％)槲皮素含量(％)11.4620.07421.4520.07331.4740.074平均含量1.4630.074RSD(％)0.721.12结果表明，该工艺稳定可行。3、咀嚼片成型工艺3.1填充剂的筛选本发明选用山梨醇、甘露醇、乳糖、mcc作为填充剂，10％淀粉浆为黏合剂进行制粒，筛选辅料，结果见下表10。表10不同填充剂外观和压片情况因甘露醇和山梨醇制得的的片剂表面易吸湿，且辅料用量不宜过多，因此选择乳糖和甘露醇作为片剂的填充剂，且用量分别为为原粉的0.3和0.2倍。3.2黏合剂的筛选选择淀粉浆制粒时硬度较好，且脆碎度合格，因此在咀嚼片成型工艺中，选择10％淀粉浆作为黏合剂。表1110％淀粉浆作为黏合剂时制粒和压片情况3.3矫味剂的筛选因原粉味偏苦，本发明选用阿斯巴甜与柠檬酸作为矫味剂进行筛选，以甜度和总体口感为指标，经多人品尝后选择最佳矫味剂。表12序号阿斯巴甜(％)柠檬酸(％)甜度总体口感10.10微甜苦20.250甜略苦30.40过甜略苦40.250.15甜略苦50.250.25甜酸甜60.250.35甜过酸结果显示，添加0.25％的阿斯巴甜、0.25％柠檬酸总体口感最好。3.4润滑剂的筛选因硬脂酸镁为疏水性润滑剂，易与颗粒混匀，压片后片面光滑美观，应用最广。因此本发明选用硬脂酸镁作为润滑剂进行预试，发现所制片剂表面光洁，边缘完整。表13序号硬脂酸镁用量(％)压片情况10.2片剂表面不够光洁20.4片剂光洁、均匀30.6片剂光洁、均匀由表可知，0.4％硬脂酸镁和0.6％硬脂酸镁作为润滑剂均可制得符合要求的片剂。因咀嚼片中加入疏水性润滑剂会影响口感，应减少其用量，所以选用0.4％的硬脂酸镁。3.4芳香剂的筛选表14序号芳香剂种类气味10.4％澳洲奶精温和，奶香20.4％哈密瓜香精较浓30.4％红枣香精刺鼻通过筛选发现，澳洲奶精可掩盖片剂的不良气味，并且气味温和。实施例2具有降血糖功效的复方铁皮石斛片，它由下列表15所示原料制成：表15桑叶提取物125g苦荞提取物125g铁皮石斛粉250g灵芝孢子粉125g乳糖187.5g甘露醇125g奶精3.75g阿斯巴甜2.34g柠檬酸2.34g硬脂酸镁3.75g10％淀粉浆4g所述的桑叶提取物是通过以下方法制备得到的：取桑叶，加10倍量体积浓度80％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，得乙醇提取液；药渣加10倍量水提取1次，每次1.5h，滤过，得水提取物，将乙醇提取液和水提取液合并，减压浓缩至60℃相对密度1.20，备用；取浓缩液，减压或喷雾干燥，粉碎，过筛，得桑叶提取物；所述的苦荞麦提取物是通过以下方法制备得到的：取苦荞，加10倍量体积浓度60％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度1.20，备用；取浓缩液，常压或减压干燥，低温粉碎，过筛，得苦荞麦提取物，备用；所述的铁皮石斛是通过以下方法制备得到的：取铁皮石斛100℃烘干30分钟，粉碎，过100目筛，得铁皮石斛粉。具有降血糖功效的复方铁皮石斛片的制备方法，其包括以下步骤：取桑叶提取物125g、苦荞麦提取物125g、铁皮石斛250g和灵芝孢子粉125g混合均匀，加入辅料乳糖187.5g、甘露醇125g、奶精3.75g、阿斯巴甜2.34g、柠檬酸2.34g、硬脂酸镁3.75g，用适量10％淀粉浆制粒，60℃烘干0.5h，整粒，加入矫味剂和润滑剂，混合均匀后压片。压片工艺参数为转速20.3，片径14mm。实施例3降血糖降血脂功效性实验一、实验材料1.药物、试剂及其配制方法1.1药物及试剂受试药物：药物组合物(桑叶提取物125g、苦荞麦提取物125g、铁皮石斛250g、灵芝孢子粉125g)临床拟用量为5g(制剂量)/60kg，实验中小鼠设计剂量为2.5g/kg(分别为临床用量的30倍)；大鼠设计剂量为0.21g/kg、0.42g/kg、0.84g/kg、1.26g/kg(分别为临床用量的2.5、5、10、15倍)。二甲双胍，贵州圣济堂制药有限公司，批号：20160505。实验中大鼠设计剂量为0.125g/kg。四氧嘧啶，Sigma公司，批号：批号：BCBW1234V。生理盐水，安徽双鹤药业有限责任公司，批号：1603012D。柠檬酸，国药集团化学试剂有限公司，批号：20130801。柠檬酸钠，成都市科龙化工试剂厂，批号：T20100913。葡萄糖，美国Amresco公司，批号：0188。甘油三酯(TG)测定试剂盒(单试剂GPO-PAP法)，南京建成生物工程研究所，批号：20161126。总胆固醇(TC)测定试剂盒(单试剂GPO-PAP法)，南京建成生物工程研究所，批号：20161126。大鼠血清胰岛素测定试剂盒(Elisa法)，南京建成生物工程研究所，批号：20161201。糖化血清蛋白(GSP)试剂盒(NBT法)，南京建成生物工程研究所，批号：20161128。大鼠糖化血红蛋白测定试剂盒(Elisa法)，南京建成生物工程研究所，批号：20161201。1.2药物及试剂配制方法1.2.1正常小鼠血糖实验本发明组合物高剂量组(2.5g制剂量/kg)：称取浸膏粉50g，用蒸馏水配成400ml，浓度为0.125g/ml，给药容积为20ml/kg。给药剂量按制剂量计算。1.2.2糖尿病大鼠血糖实验本发明组合物Ⅰ(0.21g制剂量/kg)：称取浸膏粉4.2g，用蒸馏水配成400ml，浓度为0.0105g/ml，给药容积为20ml/kg。给药剂量按制剂量计算。本发明组合物Ⅱ(0.42g制剂量/kg)：称取浸膏粉8.4g，用蒸馏水配成400ml，浓度为0.021g/ml，给药容积为20ml/kg。给药剂量按制剂量计算。本发明组合物Ⅲ(0.84g制剂量/kg)：称取浸膏粉16.8g，用蒸馏水配成400ml，浓度为0.042g/ml，给药容积为20ml/kg。给药剂量按制剂量计算。本发明组合物Ⅳ(1.26g制剂量/kg)：称取浸膏粉25.2g，用蒸馏水配成400ml，浓度为0.063g/ml，给药容积为20ml/kg。给药剂量按制剂量计算。二甲双胍(0.125g/kg)，即取20粒(0.25g/粒)，用蒸馏水配成400ml，浓度为0.0125g/ml，给药容积为10ml/kg。给药剂量按制剂量计算。四氧嘧啶(100mg/kg)，称取四氧嘧啶粉末2g溶于200ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，浓度为0.01g/ml，腹腔注射容积为10ml/kg。2.实验动物与饲料清洁级ICR雄性小鼠，体重18-22g，30只，由扬州大学比较医学中心提供，质量合格许可证号：SCXK(苏)2012-0004，用于实验“对正常动物空腹血糖的影响”。SPF级雄性SD大鼠，体重150-170g，120只，由浙江省实验动物中心提供，质量合格许可证号：SCXK(浙)2014-0001，用于实验“对高血糖模型动物的影响”。实验鼠颗粒饲料，高热能饲料由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。3.实验仪器TD6001电子天平，天津市天马仪器厂。电子分析天平(FA2104)，上海精密仪器有限公司。血糖检测试纸(FAD葡萄糖脱氢酶法)，拜耳医药保健有限公司。拜安康contourTS血糖仪，拜耳医药保健有限公司。DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司。Direct-Q超纯水仪，美国MILLIPORE公司。Mix-100混匀小精灵，杭州奥盛仪器有限公司。SynergyHT酶标仪，美国Bio-Tek公司。二、实验条件及统计方法小鼠采用普通颗粒饲料喂养，大鼠适应期和正式实验第1周用普通颗粒饲料饲养，后3周更换高热能饲料。温度：20～24℃；湿度：50～60％。采用SPSS22.0统计软件，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验，数据以表示。三、实验方法及结果(一)正常动物降糖实验1.分组、造模及给药方法取清洁级ICR雄性小鼠30只，18-22g，适应饲养3-5天后，禁食5h，测定给药前空腹血糖值。然后随机分为两组，每组15只，分别为(1)空白对照组：生理盐水20ml/kg；(2)本发明组合物高剂量组：2.5g/kg。每天灌胃1次，灌胃体积为20ml/kg，连续给药35天后禁食5h，测定给药后空腹血糖值。2.观察指标2.1一般情况每天观察小鼠饮食、饮水及排尿情况。2.2体重测定给药前(0周)、给药中期(2周)、给药结束后(5周)的体重。2.3血糖值连续给药35天后禁食5h，测定空腹血糖值，并比较两组动物血糖值。3.结果3.1一般情况观察空白对照组与本发明组合物高剂量组小鼠饮食、饮水状况正常，排尿情况正常，给药前、中、后空白对照组、本发明组合物高剂量组的小鼠体重组间无显著差异(见表16)。表16本发明组合物对正常小鼠体重的影响3.2对正常小鼠空腹血糖的影响实验结果显示：本发明组合物高剂量组对正常小鼠空腹血糖无明显影响，与空白对照组比较无显著性差异(见表17)。表17本发明组合物对正常小鼠空腹血糖(mmol/L)的影响(二)对高血糖模型动物的影响1.基础血糖取清洁级雄性SD大鼠120只，体重150-170g，普通维持料适应饲养3-5天后，禁食4小时，测定基础血糖值(即：测定给葡萄糖前(即0h)血糖值；给2.5g/kg葡萄糖后，测定0.5、2h血糖值)。2.分组、给药及造模选取空腹血糖在4-7mmol/L的大鼠并进行随机分组(空腹血糖组间无显著差异)，每组15只，即(1)空白对照组，不做处理；(2)模型对照组：NS10ml/kg；(3)二甲双胍组：0.125g/kg；(4)本发明组合物Ⅰ组：0.21g/kg；(5)本发明组合物Ⅱ组：0.42g/kg；(6)本发明组合物Ⅲ组：0.84g/kg；(7)本发明组合物Ⅶ组：1.26g/kg。除(1)组外，其余各组连续给药33天。前1周用维持料饲养，后3周更换高热能饲料。给药4周后禁食24h(不禁水)，给予四氧嘧啶100mg/kg腹腔注射，注射后继续给予高热能饲料喂饲5天。3.观察指标3.1一般情况每天观察大鼠饮食、饮水及排尿情况。3.2体重测定给药前(0周)、给药中(3周)、给药结束后(5周)的体重。3.3空腹血糖及糖耐量给药33天后，各组动物禁食4h，检测空腹血糖和糖耐量(15min后各组经口给予葡萄糖2.5g/kg，分别测定给葡萄糖后各组大鼠0.5、2h的血糖值)，计算血糖曲线下面积(AUC)的变化。血糖曲线下面积＝0.25×(0h血糖值+4×0.5h血糖值+3×2h血糖值)。3.4血清胰岛素、胆固醇、甘油三脂及糖化血清蛋白、糖化血红蛋白血糖测定结束后，大鼠眼眶取血4ml，室温静置2h后离心(3000rpm,10min)取血清，待测血清胰岛素及胆固醇、甘油三脂、糖化血清蛋白水平，同时取抗凝全血1ml测糖化血红蛋白的水平。4.结果4.1一般情况观察模型组大鼠饮食量、饮水量、体重均有所增加，排尿较多；二甲双胍组与本发明组合物组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ较模型组饮食饮水量有所减少，排尿量减少。腹腔注射四氧嘧啶后，模型组大鼠死亡6只，二甲双胍组死亡5只，本发明组合物Ⅰ组死亡3只，本发明组合物Ⅱ组死亡2只，本发明组合物Ⅲ死亡5只，本发明组合物Ⅳ死亡5只。4.2对糖尿病大鼠体重的影响给药前(0周)、给药中(3周)、给药结束(5周)各组动物的体重组间无显著差异(见表18)。表18本发明组合物对大鼠体重的影响注：给药前、给药中每组大鼠数n＝15##P<0.01与空白对照组比较4.3对糖尿病大鼠空腹血糖的影响实验结果显示：模型组大鼠与空白对照组大鼠相比空腹血糖明显升高，二甲双胍组，本发明组合物Ⅱ、Ⅲ组大鼠空腹血糖与模型组相比显著降低(见表19)。表19本发明组合物对高血糖大鼠空腹血糖(mmol/L)的影响##P<0.01与空白对照组比较，**P<0.01，*P<0.05与模型组比较4.4对糖尿病大鼠糖耐量的影响实验结果显示：模型组大鼠与空白对照组大鼠相比血糖曲线下面积明显增加，二甲双胍组，本发明组合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血糖曲线下面积与模型组相比明显减少(见表20)。表20本发明组合物对大鼠血糖曲线下面积的影响##P<0.01与空白对照组比较，**P<0.01与模型组比较4.5对糖尿病大鼠糖化血清蛋白和血红蛋白的影响实验结果显示：空白对照组、模型组、各给药组糖化血清蛋白和血红蛋白组间无显著差异(P>0.05)(见表21)。表21本发明组合物对大鼠糖化血清蛋白、糖化血红蛋白的影响4.6对糖尿病大鼠空腹血清胰岛素的影响实验结果显示：模型组大鼠与空白对照组相比空腹血清胰岛素显著降低，各给药组可以不同程度地升高血清胰岛素的水平，其中二甲双胍组，本发明组合物Ⅱ、Ⅲ组与模型组相比空腹血清胰岛素水平显著升高(见表22)。表22本发明组合物对大鼠空腹血清胰岛素的影响##P<0.01与空白对照组比较，**P<0.01，*P<0.05与模型组比较4.7对糖尿病大鼠血脂的影响实验结果显示：模型组大鼠与空白对照组相比血清甘油三脂和总胆固醇水平显著升高，二甲双胍组、本发明组合物Ⅱ、Ⅲ组降低血清甘油三脂水平，二甲双胍组、本发明组合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组降低血清总胆固醇水平，与模型组比较具有显著性差异(见表23)。表23本发明组合物对大鼠血清甘油三脂的影响##P<0.01与空白对照组比较，**P<0.01，*P<0.05与模型组比较以上实验结果表明：1.本发明组合物高剂量组(2.5g/kg，30倍)对正常小鼠空腹血糖值无明显影响。2.本发明组合物Ⅰ(0.21g/kg，2.5倍)预防给药能降低糖尿病大鼠血糖曲线下面积(P<0.01)、血清胆固醇(P<0.05)；本发明组合物Ⅱ(0.42g/kg，5倍)预防给药能显著降低糖尿病大鼠空腹血糖(P<0.05)、血糖曲线下面积(P<0.01)、升高血清胰岛素(P<0.05)、降低血清甘油三脂(P<0.01)和胆固醇(P<0.01)；本发明组合物Ⅲ(0.84g/kg，10倍)预防给药能显著降低糖尿病大鼠空腹血糖(P<0.01)、血糖曲线下面积(P<0.01)、升高血清胰岛素(P<0.01)、降低血清甘油三脂(P<0.01)和胆固醇(P<0.01)；本发明组合物Ⅳ(1.26g/kg，15倍)预防给药能显著降低糖尿病大鼠血糖曲线下面积(P<0.01)。本发明按以上降血糖实验筛选了桑叶提取物、苦荞麦提取物、铁皮石斛、灵芝孢子粉的其它重量比，包括1:1:1:1、1:2:1:1、2:1:1:1、1:1:1:2、3:1:1:1、1:3:1:1、1:1:3:1、1:1:1:3的不同重量比的原料组成，对比结果表明，本发明桑叶提取物、苦荞麦提取物、铁皮石斛、灵芝孢子粉的重量比为：1:1:2:1时，具有最好的降血糖、降血脂的功效。表明在该重量配比下，4味原料起到协同增效的作用，为本发明最佳用量配比。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3