四氢姜黄素在改善过敏性哮喘的应用的制作方法

本发明属于生物医学领域，特别涉及四氢姜黄素在治疗过敏性哮喘中的应用。

背景技术

过敏性哮喘是一种慢性气道炎症疾病，以炎症细胞浸润增加(特别是嗜酸性粒细胞)，异常的气道重塑(杯状细胞化生和平滑肌细胞增生)以及多种炎症细胞因子升高(2型辅助性t细胞(th2)为主的反应)为特征。在过敏性哮喘中，th2细胞的主导地位与疾病的发病和进展相关，th2细胞产生的白介素(interleukin)il-4，il-5和il-13促进过敏性哮喘的发生发展。

姜黄素(curcumin，cur)是存在于姜黄属根茎的一种天然色素，具有一系列生理活性，包括抗炎、抗癌、抗氧化等作用。结果显示口服cur胶囊可改善第一秒用力呼出量和气道阻塞。尽管cur对治疗多种慢性疾病有多样的作用，但是其生物利用度低影响了临床疗效。cur在外周血和局部组织中的低水平可能是由于其吸收差、代谢快。因此，使用cur的主要代谢物被认为是解决其生物利用度低的可行途径。姜黄素对哮喘患者的疗效已在动物实验和人群试验中被证实，但是其生物利用度低影响了临床疗效。

四氢姜黄素(tetrahydrocurcumin，thc)具有抗氧化、清除自由基和抗癌活性等，如thc在保护肾脏氧化损伤以及抑制大肠癌变实验中具有很好的生理活性功能。然而，目前关于thc对哮喘的作用的研究却尚无报道。

技术实现要素：

本发明的首要目的在于提供四氢姜黄素在治疗过敏性哮喘中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

四氢姜黄素在制备治疗过敏性哮喘药剂中的应用。

一种治疗过敏性哮喘药剂，该药剂中含有四氢姜黄素。

四氢姜黄素在制备抑制过敏性哮喘患者肺部嗜酸性粒细胞浸润、减轻肺部杯状细胞黏液生成、或/和降低肺部胶原沉积的药剂中的应用。

四氢姜黄素在制备减轻鼻部过敏瘙痒症状的药剂中的应用。

四氢姜黄素在制备抑制过敏性哮喘患者肺组织th2细胞或/和th2细胞因子的药剂中的应用。

进一步的，抑制th2细胞因子为il-4、il-5、il-13。

本发明的有益效果是：

本发明是首次发现和证明四氢姜黄素(thc)对过敏性哮喘的治疗作用，从表征、病理以及细胞层面，发现thc可以减轻鼻部过敏瘙痒，可以抑制肺组织嗜酸性粒细胞浸润、抑制杯状细胞黏液生成和降低肺部胶原沉积，以及抑制th2细胞因子的产生，具有显著的改善过敏性哮喘效果，这可为临床疾病评估提供有益信息，在哮喘治疗中有良好的应用前景。

附图说明

图1是各组小鼠挠鼻频率的柱形图；正常对照(control)组，哮喘(ova)组，cur干预(ova+cur)组，thc干预(ova+thc)组小鼠挠鼻频率的比较，数据表示为均数±标准误(n＝8)，#p<0.05vs.control；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图2是thc改善过敏性哮喘小鼠肺部病理变化；正常对照(control)组，哮喘(ova)组，cur干预(ova+cur)组，thc干预(ova+thc)组各组小鼠肺组织he染色、pas染色、masson染色的代表性图片。he染色组对照组、ova组、ova+cur以及ova+thc四组的左下角图片是所示部位的放大图，左下角图片内的红色小箭头指示嗜酸性粒细胞。放大倍数×400，刻度尺＝50μm。

图3是各组小鼠肺组织嗜酸性粒细胞浸润数的统计分析条形图。正常对照(control)组，哮喘(ova)组，cur干预(ova+cur)组，thc干预(ova+thc)组；数据表示为均数±标准误(n＝8)，#p<0.05vs.control；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，下同。

图4是各组小鼠肺组织杯状细胞黏液生成的统计分析条形图。

图5是各组小鼠肺组织胶原沉积百分比的统计柱形图。

图6是thc抑制哮喘小鼠肺组织th2细胞(a)和th2细胞因子il-4(b)、il-5(c)il-13(d)的水平柱形图。分为正常对照(control)组，哮喘(ova)组，cur干预(ova+cur)组，thc干预(ova+thc)组。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1四氢姜黄素减轻哮喘小鼠挠鼻的过敏症状

过敏性哮喘小鼠模型建立和四氢姜黄素干预方法：

第0,7,14天模型组小鼠在左下腹腔注射200μl卵清白蛋白(ova)致敏液(含40μgova+4mg氢氧化铝，pbs定容)。间隔1周，从第21天开始，配置5％的ova溶液，进行雾化吸入。具体为：将小鼠编号，放入一个旁侧有直径约2.5cm小洞的透明塑料容器，将压缩空气式雾化器的喷嘴放入其中。然后开启雾化器，对小鼠进行雾化吸入30min。30min后，用40μg/μl的ova溶液滴入小鼠鼻腔，每侧鼻腔各10μl，即每侧鼻腔滴入400μgova。每天激发一次，连续5天，即第21、22、23、24、25天。正常对照组小鼠采用pbs作为安慰剂代替ova进行致敏和激发实验。哮喘小鼠在激发过程中出现烦躁不安，挠鼻症状等激发成功的阳性特征。

所有小鼠喂食ain93g普通饲料，并随机分为4组：正常对照(control)组，哮喘(ova)组，cur干预(ova+cur)组(800mgcur/kg饲料,第0～第25天)，thc干预(ova+thc)组(800mgthc/kg饲料,第0～第25天)。小鼠定期称量体重和记录食量，每周更换两次干净的垫料，每天早晨更换饮水。最后一次激发后观察小鼠10min内的挠鼻的次数用于评估过敏症状，24h后处死小鼠，收集标本。动物实验符合中山大学动物伦理委员会规定。

结果：通过观察小鼠挠鼻频率，发现四氢姜黄素(thc)和姜黄素(cur)均能显著减轻哮喘小鼠的鼻部症状(p<0.001)，并且thc在降低挠鼻频率上比cur更明显，具有统计学差异(p<0.05)(图1)。提示thc具有比cur更好的减轻鼻部过敏瘙痒症状的作用。

实施例2四氢姜黄素改善哮喘小鼠肺部病理变化

方法：将小鼠肺组织固定在10％福尔马林24～48小时，石蜡包埋然后切为4μm厚切片。将切片进行he染色、过碘酸-雪夫(pas)染色和masson染色，对嗜酸性粒细胞浸润、黏液分泌和胶原沉积分别观察。

结果：哮喘小鼠肺部病理改变通过he染色、pas染色、masson染色进行观察和评估，见图2。从图中发现哮喘小鼠组(ova)较正常对照组(control)小鼠肺部具有明显的嗜酸性粒细胞浸润、杯状细胞黏液生成增加、胶原沉积增多(p<0.05)；thc干预(ova+thc)后可明显减轻嗜酸性粒细胞浸润、杯状细胞黏液生成和胶原形成(p<0.05)，且thc具有比cur更强的抑制嗜酸性粒细胞浸润、减轻杯状细胞黏液生成、降低肺部胶原形成和沉积的效果(p<0.05)(见图3～5)。

实施例3四氢姜黄素抑制哮喘小鼠肺组织th2细胞和th2细胞因子

方法：小鼠肺组织中th2细胞通过流式细胞术进行检测。对小鼠肺泡灌洗液(balf)中il-4、il-5、il-13水平用相应elisa试剂盒测定。

结果：使用流式细胞术分析正常对照组、哮喘组(ova)、cur干预组(ova+cur)、thc干预组(ova+thc)小鼠肺组织中th2细胞百分比(见图6(a))。相比正常对照组，哮喘小鼠组的th2细胞百分比显著升高，而thc干预可显著抑制ova诱导的th2百分比的升高(p<0.05)，但cur对th2的抑制作用无统计学差异(p>0.05)。

哮喘小鼠组肺泡灌洗液中th2的标志性细胞因子(il-4、il-5、il-13)水平较正常对照小鼠明显升高(p<0.05)。cur和thc干预均可显著降低il-13水平，而il-4和il-5水平只被thc显著降低，且il-4和il-5水平在thc干预组(ova+thc)与正常对照组接近。上述结果表明thc比cur具有更强的抑制th2反应的作用(图6(b)～(d))。

统计学分析

计量资料的多组比较通过单因素方差分析(anova)，随后使用tukey-kramerposthoc进行两两比较。计量资料表示为平均数±标准误(mean±sem)，统计分析使用graphpadprism5软件，p<0.05认为具有统计学差异。

综上所述，四氢姜黄素(thc)可显著调节过敏性哮喘小鼠的多项炎症指标，此外，thc在减轻鼻部症状，抑制肺组织嗜酸性粒细胞浸润和杯状细胞黏液分泌，还有抑制th2细胞因子水平和th2细胞上都比cur具有更好的效果(表1)。

表1四氢姜黄素(thc)与姜黄素(cur)对过敏性哮喘的作用比较

注:*p<0.05，ns表示无统计学差异。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。