阿德福韦酯在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，特别涉及阿德福韦酯在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

传统的化疗药物如顺铂类药物因不能特异性的杀死肿瘤细胞而具有较大的毒副作用。现有的抗肿瘤靶向药物多为靶标单个癌基因或单个蛋白质的药物，该类药物能够特异识别肿瘤细胞，具有较好的治疗效果。虽然此类靶向药物也可以用来治疗癌症，但靶向基因在该类药物的持续作用压力下容易产生耐药突变，癌细胞内频繁的基因突变使患者在用药2～3个月左右出现耐药性，突变后的肿瘤细胞丧失了对药物的敏感性而不再被药物抑制，造成肿瘤复发，即现有的靶向药物不能继续起作用抑制肿瘤发展。因此开发新的抗肿瘤靶标药物具有重要现实意义。

结肠癌是常见的恶性肿瘤，产生原因比较复杂，目前尚没有专门的靶向药物治疗该类型癌症。手术切除、放疗和化疗依然是结肠癌治疗的三大手段，然而传统治疗策略具有周期长、副作用大、易复发等缺点。原本开发用于肺癌治疗的靶向药物如吉非替尼等在临床上也可以用作结肠癌的治疗，然而这种靶标单个基因或蛋白的抗癌药物临床使用一段时间后常会出现耐药现象。因此找到安全、高效、持久的结肠癌靶向药物具有迫切的现实意义。

阿德福韦酯(adefovirdipivoxil)是经fda批准用于市场和临床的一种小分子药物，该药物通过抑制乙型肝炎病毒(hbv)的复制而起到乙肝治疗的作用。由于乙肝病毒感染是导致肝癌的重要因素之一，因此有研究将阿德福韦酯应用于肝癌的治疗。不过现有技术中的治疗方式仅仅是使用阿德福韦酯抑制乙肝病毒复制，而真正起到肿瘤治疗作用的是其他化疗药物，也就是说，现有技术中将阿德福韦酯用于肝癌患者治疗并不是发现因其有抗癌作用(zhongjh,lileq,wulc.lamivudinewithorwithoutadefovirdipivoxilforpostoperativehepatocellularcarcinoma.cochranedatabasesyst2011；(12):cd008713.，enomotom,nishiguchis,sekis,yamanet,hinom.adefovirdipivoxiltopreventexacerbationoflamivudine-resistanthepatitisbinfectionduringchemotherapyfornon-hodgkin'slymphoma.amjgastroenterol2004；99(8):1619-20.)。

目前，尚未见阿德福韦酯对癌细胞(尤其是结肠癌细胞)生长的影响与作用的相关报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供阿德福韦酯在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

阿德福韦酯在制备抗肿瘤药物中的应用。

所述的阿德福韦酯的有效浓度优选为1～10μm。

所述的抗肿瘤药物含有阿德福韦酯和其药用盐中的至少一种。

所述的抗肿瘤药物含有一种或多种药学上可接受的载体或辅料。

所述的辅料优选为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂或润滑剂中的至少一种。

所述的抗肿瘤药物可以采用本领域的常规方法制备成各种剂型，如胶囊、丸剂、片剂、口服液、颗粒剂、酊剂等口服给药的剂型。

所述的肿瘤优选为结肠癌。

不同于传统的化疗手段和传统的抗肿瘤靶向药物以单个基因或蛋白质为靶点起作用，本发明提供的结肠癌靶向药物阿德福韦酯是以肿瘤细胞信号通路中的蛋白质之间的相互作用为靶点，首次发现了阿德福韦酯的全新作用机制，最大程度避免了耐药性的出现。具体来说，主要通过破坏对癌细胞生长有重要影响的信号通路中的两个蛋白质——kctd12和cdk1之间的相互作用，从而破坏整个信号通路，继而产生抑制结肠癌细胞生长的效果。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1.本发明首次发现了阿德福韦酯可显著破坏蛋白质kctd12和cdk1之间的相互作用，并通过分子生物学、细胞学和动物学实验首次证实了阿德福韦酯能够显著抑制结肠癌细胞的分裂和增殖，扩展了阿德福韦酯的应用范围，提高了其应用价值。

2.与传统化疗药物相比，阿德福韦酯靶向肿瘤的特异性高；同时，阿德福韦酯是经过fda批准的并已经广泛应用于市场和临床的药物，毒副作用较小且副作用应对措施较为明确、价格适中。

3.与现有的肿瘤靶向药物相比，阿德福韦酯并不是靶向单个基因或单个蛋白质，而是靶标于两个蛋白质的相互作用，不会对癌细胞内特定分子或单一蛋白质造成持续的药物压力而导致其产生突变，大大降低了临床耐药的可能性。

4.目前尚没有专门的肿瘤靶向药物用于结肠癌的治疗，本发明所提供的阿德福韦酯对结肠癌生长的抑制作用具有重要的现实意义。

附图说明

图1是实施例1基于kctd12与cdk1构建的superelisa体系示意图。

图2是实施例1中不同小分子药物的吸光度值结果分析图。

图3是实施例2中1～3号药物的免疫共沉淀实验结果图。

图4是实施例3的流式细胞仪检测结果图。

图5是实施例4的克隆形成实验结果分析图。

图6是实施例5的动物皮下成瘤实验结果分析图。

图7是实施例5的动物体重分析统计图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1通过superelisa技术研究阿德福韦酯的抗肿瘤机制

一、融合蛋白kctd12-his，cdk1-gst的制备

(一)kctd12-his融合蛋白的表达纯化

1.构建重组表达载体pet-kctd12：根据ncbi数据库人源kctd12蛋白基因序列(ncbi登录号：nm_138444.3)，利用primerpremier5.0设计并合成编码kctd12基因的引物，在两端加入双酶切位点(上游末端酶切位点为bamh1，下游末端酶切位点为ecor1，均购买自takara公司)，pcr扩增出目的基因条带。

2.用1％琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物，利用dna回收试剂盒(天根生化科技有限公司，货号：dp214)回收纯化目的片段。用内切酶进行双酶切目的基因片段及空载体pet(碧云天生物技术公司，货号d2902)，分别取目的基因片段470ng和空载体200ng进行酶切，条件为37℃酶切4h；之后混合目的基因和空载体的酶切产物进行dna纯化回收(总体积50μl)，取纯化回收产物35μl混合2μlt4dna连接酶(takara公司)、5μl缓冲液和8μlddh2o；取10μl连接产物转化至e.colitop10感受态细胞，经卡纳抗性平板筛选阳性重组子，对其进行菌落pcr验证及dna测序验证，经ncbiblast比对分析测序结果。质粒置于-20℃长期保存，菌株加入15％甘油保存于-80℃。

3.融合蛋白的诱导表达：将测序正确的top10-pet-kctd12接种于含有氨苄抗性(100ng/μl)的lb培养基中，37℃振荡培养过夜。次日将活化的菌种按1:100比例将菌液接入新鲜培养基扩大培养，在37℃以220rpm振荡培养至od600＝0.6～0.8时，加入异丙基硫代半乳糖苷(iptg)，iptg终浓度为0.5mm，同样的条件继续诱导表达4～6h后收集菌体，4700rpm于4℃离心45min，1×pbs缓冲液重悬菌体并再次离心收集菌体。将收集到的菌体于液氮和37℃反复冻融3次，然后冰浴超声30min(5s开，5s关)至菌液变澄清透亮，超声破碎物于4℃以10000rpm离心30min，弃沉淀，0.22mm孔径滤膜过滤上清，上清用于过柱纯化。取少量上清(约15μl)用12％sds-page检测融合蛋白表达状况。

4.采用qiagen公司的ni-nta亲和层析纯化柱对重组蛋白进行纯化。具体步骤为：将ni-nta树脂混匀后，取2ml上柱，室温静置30min。

a)用10倍柱体积灭菌超纯水ddh2o清洗柱子。

b)用10倍柱体积的平衡缓冲液平衡柱子。

c)将收集的上清样液缓缓装入层析柱中。

d)用10倍柱体积的平衡液冲洗树脂并收集上样流出液；

e)分别用含有10mm咪唑，25mm咪唑，50mm咪唑，100mm咪唑和500mm咪唑的缓冲液洗脱镍柱，分别收集洗脱液。用12％sds-page对kctd12-his融合蛋白的表达量及纯度进行检测。

f)分别用10倍柱体积的平衡缓冲液(20mm十二水合磷酸钠，500mmnaclph7.0～7.5)和10倍柱体积ddh2o清洗柱子，向柱子中加入5ml的20％乙醇，4℃保存。

5.kctd12-his融合蛋白的浓缩：利用10kd超滤管(millipore,货号：acs501012)进行融合蛋白浓缩，5000rpm离心，4℃超滤至500μl，之后使用20mmtris-hcl(含100mmnacl)冲洗浓缩液三次，并重复离心三次。获得的浓缩蛋白使用bca蛋白浓度检测试剂盒(thermofisher，货号：23227)测得浓度并放置在-80℃保存。

(二)cdk1-gst融合蛋白的表达纯化

1.构建重组表达载体pgex-4t-1-cdk1：根据ncbi数据库人源cdk1蛋白基因序列(ncbi登录号：nm_001786.4)，利用primerpremier5.0设计并合成编码cdk1基因的引物，在两端加入双酶切位点(上游末端酶切位点为bamh1，下游末端酶切位点为ecor1，均购买自takara公司)，pcr扩增。

2.用1％琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物，利用dna回收试剂盒(天根生化科技有限公司，货号：dp214)回收纯化目的片段。分别取目的基因片段500ng和空载体200ng进行酶切，条件为：37℃酶切4h；之后混合目的基因和空载体的酶切产物进行dna纯化回收(总体积50μl)，取纯化回收产物35μl混合2μlt4dna连接酶(takara公司)、5μl缓冲液和8μlddh2o，混合均匀于16℃连接过夜；取10μl连接产物转化至e.colibl21感受态细胞，经氨苄抗性平板筛选阳性重组子，对其进行菌落pcr验证及dna测序验证，经ncbiblast比对分析测序结果。质粒置于-20℃长期保存，菌株加入15％甘油保存于-80℃。

3.融合蛋白的诱导表达：将测序正确的bl21-pgex-4t-1-cdk1接种于含有氨苄抗性(100ng/μl)的lb培养基中，37℃振荡培养过夜。次日将活化的菌种按1:100比例将菌液接入新鲜培养基扩大培养，在37℃以220rpm振荡培养至od600＝0.6～0.8时，iptg至终浓度为0.5mm，以同样的条件继续诱导表达4～6h后收集菌体，4700rpm于4℃离心45min，1×pbs缓冲液重悬菌体并再次离心收集菌体。将收集到的菌体于液氮和37℃反复冻融3次，然后冰浴超声30min(5s开，5s关)至菌液变澄清透亮，超声破碎物于4℃以10000rpm离心30min，弃沉淀，上清用于过柱纯化。取少量上清(约15μl)用12％sds-page检测融合蛋白表达状况。

4.采用ge公司的gst亲和层析纯化柱对重组蛋白进行纯化，具体步骤为：

(1)将gst亲和层析树脂混匀后，取2ml上柱，室温静置30min。

(2)用10倍柱体积灭菌超纯水ddh2o清洗柱子。

(3)用10倍柱体积的bindingbuffer(1×pbs,ph7.4)平衡柱子。

(4)将收集的上清样液缓缓装入层析柱中。

(5)用10倍柱体积的bindingbuffer洗下杂蛋白。

(6)用5倍柱体积的elutionbuffer(10mm谷胱甘肽+50mmtris-hcl)洗脱，收集流出液，即cdk1-gst融合蛋白。用12％sds-page对cdk1-gst融合蛋白的含量及纯度进行检测。

(7)用10倍柱体积的bindingbuffer和10倍柱体积ddh2o清洗柱子，向柱子中加入5ml的20％乙醇，4℃保存。

5.融合蛋白的浓缩：利用10kd超滤管(millipore,货号：acs501012)进行融合蛋白浓缩，5000rpm离心，4℃超滤至500μl，之后使用1×pbs冲洗浓缩液三次，并重复离心三次。获得的浓缩蛋白使用bca蛋白浓度检测试剂盒(thermofisher，货号：23227)测得浓度并放置在-80℃保存。

二、设置superelisa实验

相关操作步骤流程图如图1所示。

1.包被：根据elisa的包被方法进行第一层抗体gst-tagantibody(货号：66001-2-ig，购自proteintechgroup)的包被，使用普通elisa包被液(购自neobioscience，货号：nbc01)将抗体稀释为浓度为1ng/μl的抗体稀释液，每个96孔elisa板的孔中加入100μl抗体稀释液，4℃包被过夜。

2.封闭：使用磷酸盐缓冲液(pbs)(pbs配方：4gnacl，0.1gkcl，1.815g十二水合磷酸氢二钠，0.12g磷酸氢二钾，溶解在400ml的超纯水中，定容至500ml使用)清洗elisa板1次5分钟；每孔加入300μl5％(w/v)牛血清白蛋白(bsa)(pbs配制)；37℃封闭2小时。

3.加入纯化的蛋白质cdk1-gst：将1μg纯化蛋白预先混匀稀释在200μlpbs中，按照1μg/孔加入稀释后的cdk1-gst蛋白，最终每个孔中的蛋白质浓度为5μg/ml；室温慢摇5小时；之后按照上述清洗方法清洗elisa板5次，每次5分钟。

4.加入纯化的蛋白质kctd12-his：将1μg纯化蛋白预先混匀稀释在200μlpbs中，按照1μg/孔加入稀释后的kctd12-his蛋白，最终每个孔中的蛋白质浓度为5μg/ml；37℃静置孵育3～4小时；之后按照上述清洗方法清洗elisa板5次，每次5分钟。与此同时将计算好的药物按加入反应孔中，使药物终浓度为10μm。

5.加入his-tagantibody(货号：ab9108，购自abcam)抗体：按照1:2000比例，将1μg抗体在2000μl5％bsa中稀释，得到抗体稀释液，每孔加入100μl抗体稀释液，室温孵育2小时或者4℃孵育过夜。注意：anti-his抗体来源属性需与anti-gst抗体属性不同，本实施例中，gst-tagantibody是鼠抗，则his-tagantibody应为兔抗。

6.清洗掉多余抗体：清洗方法如上，清洗5次，每次5分钟。

7.孵育二抗：将够结合his-tagantibody的带有辣根过氧化酶的二抗山羊抗兔igghrp(货号：ab6721，购自abcam)按照质量体积比1:2000，也即将1μg抗体稀释到2000μl的5％bsa中，得到抗体稀释液，每孔加入100μl抗体稀释液进行孵育。

8.显色：每孔加入100μl普通elisa显色液tmb(购自neobioscience，货号：tms.12)，37℃放置1分钟，立即用50μl终止液(购自neobioscience，货号：est001)终止显色。

9.读取数值：待显色稳定后使用分光光度计进行双波长测定，按照od450-od630计算得到每个孔的吸光度值，进而分析药物作用效果。

用于本实验筛选的药物来源于美国食品药品监督管理局(fda)批准的用于临床使用的小分子药物库(fda-approveddruglibrary，购自selleck，货号：l1300)。本实施例中一共对176个小分子药物进行了研究筛选，该批次小分子药物随同纯化的kctd12-his蛋白质一起加入反应体系中(即上述步骤(4))。

三、结果分析

通过superelisa技术，对该elisa板中各个孔的吸光度值od450-od630的值进行分析，结果如图2所示。图2中的横线指只进行蛋白质相互作用，不加药处理的阳性对照组，横线及横线以上指未出现抑制效果的药物，横线以下指出现了抑制效果的药物。分析时与同一块elisa板上的对照组作比较(吸光度值接近零的几组即为阴性对照组，横线上的一组为阳性对照组)。从图中可以看出，一共有3个孔的吸光度值显著降低(吸光度值最低的6个孔为阴性对照组)，意味着这3个孔中的cdk1-kctd12相互作用被打破，其中，1号药物为托吡(topiramate)，2号药物为司他夫定(stavudine)，3号药物即为阿德福韦酯。

根据文献报道，癌基因kctd12通过与细胞周期因子cdk1相互作用而不断激活cdk1导致肿瘤细胞无序增殖进而导致癌症恶化(zhongy,yangj,xuww,wangy,zhengcc,lib,etal.kctd12promotestumorigenesisbyfacilitatingcdc25b/cdk1/auroraa-dependentg2/mtransition.oncogene2017；36(44):6177-6189.)。

本实施例通过superelisa实验证明阿德福韦酯能够显著破坏kctd12和cdk1的相互作用，该药物是治疗肝炎的临床用药，迄今为止并没有用于癌症治疗的报道，因此本实验证明该药物可能是一个潜在的靶向kctd12-cdk1相互作用的抗癌药物。

实施例2免疫共沉淀实验

免疫共沉淀实验(co-ip)是检验蛋白质体内相互作用重要手段，为了进一步研究验证阿德福韦酯的抗癌机制和效果，本实施例进行免疫共沉淀实验(co-ip)对阿德福韦酯的进行进一步研究。

提前将4组，每组100万个结肠癌hct116(购自atcc；货号：ccl-247)或ht29细胞(购自atcc，货号：htb-38)铺在细胞培养皿中，并分别加入dmso，1号药物，2号药物，3号药物。dmso按照1μl：1000μldmem培养液比例加入，1～3号药物使用dmem培养液稀释，最终浓度均为10μm；37℃环境下培养处理细胞24小时，之后用pbs清洗细胞两次，每个培养皿加1ml0.25％胰酶消化细胞使其脱落培养皿壁；随后用每孔5ml完全培养液终止消化，300g转速常温离心3分钟，收集细胞并用5mlpbs重悬，重复离心1次。

(1)将清洗好的结肠癌细胞收集到1.5ml的ep管中。加入配置好的裂解液，此裂解液为含有1％pmsf、1％pi和磷酸酶抑制剂的western及ip裂解液(货号：p0013；购自碧云天生物技术公司)，冰上裂解，每5min上下颠倒几次，轻柔的，不能涡旋，裂解30min后，13200rpm4℃离心30min。

(2)取上清至新ep管，使用bca法测蛋白浓度，随后每组取1mg蛋白质进行co-ip反应。每组加入proteina/gagarose30μl和兔igg(货号：10284-1-ap；购自proteintech)1μg，4℃旋转孵育1小时。随后4℃，2500rpm离心5min，取上清蛋白样至新ep管中。此步骤为去除样品中能与下一步中cdk1抗体孵育时非特异性结合的蛋白质。

(3)dmso处理的对照组蛋白样中加入2μg兔igg抗体，其他三组药物处理蛋白样中分别加入2μgcdk1抗体(货号：28439s；购自cellsignalingtechnology)作为实验组，4℃旋转孵育16～18h。

(4)每组样品中加入30μlproteina/gagarosebeads，4℃旋转孵育4h。

(5)2500rpm离心5分钟，去除上清；用western及ip裂解液洗轻柔润洗beads，之后2500rpm离心5分钟，重复三次。去除上清液，每组加入30μlsds裂解液(货号：p0013g；购自碧云天生物技术公司)。涡旋震荡一分钟，开水煮10min。离心，将上清进行sds-page电泳分离及westernblot分析co-ip效果。

westernblot步骤参考文献：细胞周期中蛋白质更新的定量蛋白质组学研究.何桂卫.硕士毕业论文。

结果如图3所示，co-ip证明3号药物(即阿德福韦酯)破坏cdk1-kctd12的作用最强。

本实施例通过分子生物学手段证明阿德福韦酯能够显著抑制kctd12和cdk1的相互作用，能够破坏结肠癌细胞中与癌细胞增殖相关的信号通路，证明了阿德福韦酯对结肠癌细胞信号通路的影响。

实施例3阿德福韦酯对癌细胞分裂的影响

1.将结肠癌细胞hct116铺到6孔板中，每孔50万个细胞。实验组加2μl10mm的阿德福韦酯到2ml的完全培养液中，使其终浓度为10μm；对照组加2μldmso到2ml的完全培养液中。37℃培养48小时。

2.消化细胞并计数，实验组和对照组各取50万细胞。使用pbs清洗细胞，洗掉附着的培养液，300g离心5分钟。

3.预先配置600μlpbs和fbs的混合物，配置方法为540μlpbs+60μlfbs，混匀后冰上预冷。分别取pbs和fbs混合物300μl重悬细胞，随后每组各加入700μl预冷的100％乙醇，4℃旋转过夜(16～18小时)固定。

4.4℃，1400g离心7分钟。1mlpbs重悬细胞，重复离心7分钟。

5.每组细胞样品中加入1.4ml0.25％triton100重悬细胞，0.25％triton100使用pbs稀释纯的triton100进行配制。冰上孵育15分钟。之后1400g离心去除上清液。

6.取h3p-fitc抗体(货号：3465s；购自cellsignalingtechnology)按照1:1600稀释到1％bsa中(1μg抗体+1600μl1％bsa)。每组使用800μl抗体稀释液重悬细胞，室温避光旋转孵育3小时。

7.1400g离心7分钟，去除上清液。使用800μl1％bsa清洗细胞一次，重复离心7分钟。此步骤需要避光操作。

8.进行pi染色，具体操作参考：细胞周期中蛋白质更新的定量蛋白质组学研究.何桂卫.硕士毕业论文

9.样品进行流式细胞仪检测。

蛋白质kctd12-cdk1的相互作用是促进细胞从g2期过渡到m期的重要步骤，若两者的相互作用被破坏，则癌细胞不能继续分裂而积累在g2期。因此通过检测阿德福韦酯处理后结肠癌细胞是否发生g2期积累可验证该药物是否是通过破坏kctd12-cdk1的相互作用而影响癌细胞分裂。

通过流式细胞仪检测阿德福韦酯处理结肠癌细胞后，结果如图4所示，发生g2期积累的细胞明显增多。黑色方框内为g2期细胞，灰色方框内是m期细胞(用来确定黑色方框的位置，两者的上下位置，宽度应保持一致)；dmso为对照组。

实施例4阿德福韦酯对癌细胞增殖的影响

通过克隆形成实验研究阿德福韦酯对癌细胞增殖的影响。

1.10μm阿德福韦酯浓度处理结肠癌细胞

将结肠癌细胞hct116(货号：ccl-247，购自美国模式培养物集存库atcc)铺到六孔板中，每孔50万个细胞。用dmso配制原始浓度为10mm的阿德福韦酯溶液，加药时按照2μl药物+2000μl细胞培养液的比例，使细胞接触到的药物最终浓度为10μm，10μm阿德福韦酯浓度处理结肠癌细胞处理48小时后，收集细胞并计数。

2.将步骤1得到的细胞，按每个孔500个细胞的密度接种到六孔板中；

3.每孔加入2ml的培养基，所述的培养基为dmem培养液+终浓度为10％的fbs(dmem培养液货号：11965092；fbs货号：10082147，均购自thermofisherscientific)；

4.培养10天后，用pbs清洗细胞两遍；

5.无水甲醇固定10min；

6.pbs清洗2两遍；

7.0.5％的结晶紫染色10min；

8.用pbs清洗两遍，洗去非特异的染色以及背景；

9.晾干，用扫描仪扫描结果。

以药物等体积的dmso进行处理作为参照。

结果如图5所示，发现肿瘤细胞的恶性增殖能够被阿德福韦酯显著抑制(细胞克隆数量的多少和大小是癌细胞恶性增殖的指标之一)。

实施例5动物实验研究

通过动物实验，进一步研究口服阿德福韦酯对结肠癌增殖的影响。

1.购买spf级裸鼠18只(购买自中山大学实验动物中心)，分为3组，每组6只进行饲养。扩大培养结肠癌细胞，按照每只裸鼠200万个癌细胞的量进行皮下注射。

2.裸鼠皮下注射细胞7天后进行灌胃给药。三组小鼠的给药剂量分别为：0(150μldmso)，10(150μl药物)，50(150μl药物)；单位均为mg/kg/天。

3.连续给药24天，两天测量一次小鼠肿瘤体积和小鼠体重。

结果如图6所示，阿德福韦酯能够显著抑制小鼠体内结肠癌肿瘤的增长(肿瘤体积)，并且抑制效应随着给药浓度的增加而增强。图7表明阿德福韦酯给药并不会影响体重，表明该药副作用较小。

以上实施例证明阿德福韦酯能够显著破坏蛋白质kctd12和cdk1之间的相互作用，并因此能够强效的抑制结肠癌细胞的增殖，具有重要的临床价值和商业价值。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。