本发明属于医药技术领域，涉及一种阴道护理抗菌凝胶及其制备方法和应用。
背景技术：
阴道炎是妇科常见疾病，主要分为细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎、非特异性阴道炎和滴虫性阴道炎。临床主要表现为阴道分泌物增多、有异味及外阴瘙痒等，同时还可能伴有性交痛、外阴灼痛及尿急、尿频、尿痛等症状，严重者甚至会出现阴道出血，并引发其他妇科疾病。
蜂胶中独特的黄酮类、萜烯类物质,对多种细菌、真菌、病毒和寄生虫等有抑制和杀灭作用。研究表明，蜂胶对阴道毛滴虫、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念球菌等阴道炎症均有一定作用。
壳聚糖及其衍生物有较好的抗菌活性，能抑制一些真菌、细菌、和病毒的生长繁殖。
苦参、蛇床子、地肤子功能燥湿止痒、清热解毒，主治老年性阴道炎。
芦荟中含有芦荟酊，是抗菌性很强的物质，能杀灭真菌、霉菌、细菌、病毒等病菌，抑制和消灭病原体的发育繁殖，芦荟多糖类可增强人体对疾病的抵抗力，治愈皮肤炎、阴道炎等炎症。
cn201810188608.x公开了一种用于阴道黏膜抑菌的中药凝胶组合物，它由白芷、依兰精油、天竺葵精油、蜂胶、蛇床子、苦参、乳香、金银花、藏红花、当归、葡萄籽、卡波姆和纯化水组成。它主要用于抑制阴道黏膜感染，具有活血化瘀、抗菌消炎之效果。但是，依兰精油、天竺葵精油、和蜂胶很难溶于水，按此专利配方简单与水和卡波姆等混合难以形成稳定的凝胶产品。而且制得的凝胶产品中这些成分也难以在水相中扩散，影响其抑菌效果的发挥。
cn201210138284.1公开了一种粘膜护理抗菌凝胶组合物及其应用。有效成分包括凝胶，度米芬，蜂胶，苦参，莪术，薄荷脑，紫杉醇。该专利配方中主要抑菌成分是度米芬，而且为了达到配方稳定性效果，以乙醇做为蜂胶、薄荷脑、苦参、莪术、紫杉醇的溶剂，具有一定的刺激性。
因此，为了克服现有技术存在的这些技术缺陷，本发明人在总结现有技术的基础之上，通过大量实验与分析研究，终于完成了本发明。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种阴道护理抗菌凝胶，其组成以重量份计为：
根据本发明的一种优选，所述阴道护理抗菌凝胶的组成以重量份计为：
根据本发明的另一种优选，所述阴道护理抗菌凝胶的组成以重量份计为：
本发明的另一个目的是提供所述阴道护理抗菌凝胶的制备方法，通过以下步骤实现：
i、制备溶液相a
根据凝胶组成，将重量份壳聚糖、重量份羟乙基纤维素、重量份黄原胶与水和重量份甘油在温度60～80℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相a；
这个步骤的基本目的在于使壳聚糖、羟乙基纤维素、黄原胶和甘油充分溶解混匀。
制备溶液相a时需要将其原料混合物温度控制在60～80℃之间，如果超过这个温度范围，则会使溶液的粘稠度发生变化，影响稳定性。
制备溶液相a所使用的设备例如是烧杯、锥形瓶或混合罐等，其搅拌速度通常控制在100-600转/min。
在这个步骤及其后续步骤中使用的原料情况如前面所描述的，因此在此不再赘述。
ii、制备溶液相b
根据凝胶组成，将重量份蜂胶提取物和重量份蛇床子提取物、重量份地肤子提取物、重量份芦荟提取物和重量份苦参提取物与丙二醇在温度45～60℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相b。
这个步骤的基本目的在于使蜂胶提取物、蛇床子提取物、地肤子提取物、芦荟提取物、苦参提取物和丙二醇提取物充分溶解。
在这个步骤将其温度控制在45～60℃的目的在于，低于该温度范围，影响溶解速度，高于该温度会使部分物质发生氧化，影响药理活性。
iii、将步骤i得到的溶液相a冷却至温度40～50℃，然后在磁力搅拌器的搅拌下加入溶液相b，得到溶液相c。
这个步骤的基本目的在于使各组分充分混匀。
在这个步骤中，对步骤i得到的溶液相a进行冷却的方式一般是自然降温。
本发明使用的磁力搅拌器是通常实验室使用的磁力搅拌器，其搅拌速度通常控制在100-600r/min。
ⅳ、将步骤iii得到的溶液相c冷却至室温，再添加适量香精和防腐剂，混匀，得到所述的抗菌凝胶。
这个步骤使用高速乳化搅拌器以搅拌速度1000-2000r/min进行搅拌，这样有利于产品充分混匀，不形成沉淀，保质期延长。
所述阴道护理抗菌凝胶组成中的壳聚糖是羧甲基壳聚糖。所述的蛇床子提取物、地肤子提取物、芦荟提取物、苦参提取物为水提取物。所述的蜂胶提取物是60％～75％乙醇搅拌浸提，经旋转蒸发除去乙醇后得到的流浸膏。
羧甲基壳聚糖是一种水溶性壳聚糖衍生物，具有良好的水溶性、保湿性和成膜性，安全无毒，其抗菌性强，在本发明中，羧甲基壳聚糖的主要作用是抑菌作用。此外，利用其温敏性特征形成水凝胶，达到中药在阴道内的缓释任务。本发明使用的羧甲基壳聚糖是目前市场上销售的产品，例如由郑州市伟丰生物科技有限公司以商品名羧甲基壳聚糖销售的产品。
在本发明中，其它组分含量在所述的范围内时，如果壳聚糖的量小于0.2重量份，则难以形成凝胶；如果壳聚糖的量大于2.0重量份，则形成的凝胶太粘稠，影响中药成分的释放，从而抑菌效果降低。因此，壳聚糖的量为0.2～2.0重量份是合理的，优选地是0.5～1.5重量份，更优选地是0.8～1.2重量份。
蜂胶在本发明阴道护理凝胶中的作用是抑菌作用，充分发挥胶的抑菌活性。本发明使用的蜂胶是60％～75％乙醇提取后得到的含水流浸膏。低于该浓度的蜂胶提取物黄酮含量较低，难以发挥抑菌作用。高于该浓度的蜂胶提取物在凝胶中易沉淀不均，影响稳定性。
苦参、蛇床子、地肤子功能燥湿止痒、清热解毒，主治老年性阴道炎。芦荟中含有芦荟酊，是抗菌性很强的物质，能杀灭真菌、霉菌、细菌、病毒等病菌，抑制和消灭病原体的发育繁殖，芦荟多糖类可增强人体对疾病的抵抗力，治愈皮肤炎、阴道炎等炎症。
在本发明中，其它组分含量在所述范围内时，如果所用量小于所述的重量份，则会使产品的止痒效果降低；如果量大于所述重量份，则会使产品流动性和稳定性降低。
黄原胶和羟乙基纤维素在本发明阴道凝胶中的作用是稳定剂、凝胶增稠剂。在本发明中，其它组分含量在所述范围内时，如果量小于所述重量份，则会产品稳定性下降；如果量大于所述重量份，则会使产品流动性下降，稠度太大，影响活性成分扩散，从而影响药效。
本发明的再一个目的是提供所述阴道护理抗菌凝胶在制备阴道护理药物中的应用，所述药物能够有效深层改善阴道干涩、能够有效地抑制瘙痒，防止各种阴道炎症，保湿滋润。可用于阴道护理保养、有效预防各种阴道炎症。
与现有的阴道护理产品相比，本发明的阴道护理凝胶具有下述特点：
i、有效深层改善阴道干涩、瘙痒等问题；
ii、所用原料均可食用，对人体无损害、对环境无污染；
iii、不含化学抑菌剂，无毒副作用，安全可靠。
本发明提供的阴道护理凝胶能够有效深层改善阴道干涩、能够有效地抑制瘙痒，防止各种阴道炎症等，所用原料为食品级，对人体无害、对环境无污染，不含化学抑菌剂，无毒副作用，安全可靠，不会产生抗药性。
具体实施方式
本发明结合以下实施例做进一步的说明。下述实施例给出了代表性的凝胶制备及相关鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1：本发明阴道护理凝胶的制备
i、制备溶液相a
将0.5重量份壳聚糖、1.0重量份羟乙基纤维素、1.5重量份黄原胶与75份水和8.0重量份甘油在温度70℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相a；
ii、制备溶液相b
取100克蜂胶原料，加入65％乙醇500毫升，搅拌浸提48小时，旋转蒸发除去乙醇，得蜂胶流浸膏提取物。
将5.0重量份蜂胶提取物和1.0重量份蛇床子提取物、3.0重量份地肤子提取物、3.0重量份芦荟提取物和2.0重量份苦参提取物与10.0份丙二醇在温度50℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相b；
iii、将步骤i得到的溶液相a冷却至温度45℃，然后在磁力搅拌器的搅拌下加入溶液相b，得到溶液相c；
ⅳ、将步骤iii得到的溶液相c冷却至室温，再添加适量香精和防腐剂，混匀，得到所述的凝胶。
采用本申请说明书描述的方法对本实施例制备的阴道护理凝胶进行了下述性能测试：
a、稳定性实验
贮存稳定性：
采用如下方法进行高低温稳定性实验：
(1)在温度40℃-50℃电热恒温培养箱中放置50天，恢复室温后观察；
(2)24小时之内，在温度0℃-50℃之间反复频繁变化，如此反复处理30天，恢复室温后观察；
(3)在温度-5℃及40℃下循环存放3次，分别每次存放24h，即在-5℃存放24h后，在室温下存放24h，再放入40℃恒温箱中存放24h，依次循环3次，观察其稳定性；
(4)在-5℃下存放1周，观察其稳定性。
这些实验结果表明，所得产品在各实验条件下均未出现沉淀、断层、析水、粗粒、褪色等现象，产品稳定性好。
b、抑菌实验
(1)菌种：试验菌用金黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(8099)；
(2)试验方法：取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃)中烤干，或置室温下自然干燥后备用。阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20μl，干燥后备用。每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱，培养16h～18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界。
抑菌作用的判断:抑菌环直径大于7mm者，判为有抑菌作用；抑菌环直径小于或等于7mm者，判为无抑菌作用。
结果表明，本申请试验物对不同细菌有明显的抑菌效果(表1)。
表1
结果显示本申请产品对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用明显。
实施例2：本发明阴道护理凝胶的制备
i、制备溶液相a
将1.0重量份壳聚糖、0.8重量份羟乙基纤维素、2.0重量份黄原胶与65份水和12.0重量份甘油在温度75℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相a；
ii、制备溶液相b
取100克蜂胶原料，加入60％乙醇500毫升，搅拌浸提48小时，旋转蒸发除去乙醇，得蜂胶流浸膏提取物。
将10.0重量份蜂胶提取物和0.5重量份蛇床子提取物、2.0重量份地肤子提取物、1.5重量份芦荟提取物和3.0重量份苦参提取物与12.0份丙二醇在温度55℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相b；
iii、将步骤i得到的溶液相a冷却至温度50℃，然后在磁力搅拌器的搅拌下加入溶液相b，得到溶液相c；
ⅳ、将步骤iii得到的溶液相c冷却至室温，再添加适量香精和防腐剂，混匀，得到所述的凝胶。
采用本申请说明书描述的方法对本实施例制备的阴道护理凝胶进行了下述性能测试：
a、稳定性实验
贮存稳定性：
采用如下方法进行高低温稳定性实验：
(1)在温度50℃电热恒温培养箱中放置40天，恢复室温后观察；
(2)24小时之内，在温度0℃-50℃之间反复频繁变化，如此反复处理20天，恢复室温后观察；
(3)在温度-5℃及40℃下循环存放3次，分别每次存放24h，即在-5℃存放24h后，在室温下存放24h，再放入40℃恒温箱中存放24h，依次循环3次，观察其稳定性；
(4)在-5℃下存放1周，观察其稳定性。
这些实验结果表明，所得产品在各实验条件下均未出现沉淀、断层、析水、粗粒、褪色等现象，产品稳定性好。
b、抑菌实验
(1)菌种：试验菌用金黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(8099)；
(2)试验方法：取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃)中烤干，或置室温下自然干燥后备用。阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20μl，干燥后备用。每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱，培养16h～18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界。
抑菌作用的判断:抑菌环直径大于7mm者，判为有抑菌作用；抑菌环直径小于或等于7mm者，判为无抑菌作用。
结果表明，本申请试验物对不同细菌有明显的抑菌效果(表2)。
表2
结果显示本申请产品对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用明显。
实施例3：本发明阴道护理凝胶的制备
i、制备溶液相a
将2.0重量份壳聚糖、0.08重量份羟乙基纤维素、0.1重量份黄原胶与80份水和5.0重量份甘油在温度65℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相a；
ii、制备溶液相b
取100克蜂胶原料，加入70％乙醇500毫升，搅拌浸提48小时，旋转蒸发除去乙醇，得蜂胶流浸膏提取物。
将8.0重量份蜂胶提取物和3.0重量份蛇床子提取物、5.0重量份地肤子提取物、1.0重量份芦荟提取物和2.5重量份苦参提取物与6.0份丙二醇在温度55℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相b；
iii、将步骤i得到的溶液相a冷却至温度50℃，然后在磁力搅拌器的搅拌下加入溶液相b，得到溶液相c；
ⅳ、将步骤iii得到的溶液相c冷却至室温，再添加适量香精和防腐剂，混匀，得到所述的凝胶。
采用本申请说明书描述的方法对本实施例制备的阴道护理凝胶进行了下述性能测试：
a、稳定性实验
贮存稳定性：
采用如下方法进行高低温稳定性实验：
(1)在温度40℃电热恒温培养箱中放置35天，恢复室温后观察；
(2)24小时之内，在温度0℃-50℃之间反复频繁变化，如此反复处理25天，恢复室温后观察；
(3)在温度-5℃及40℃下循环存放3次，分别每次存放24h，即在-5℃存放24h后，在室温下存放24h，再放入40℃恒温箱中存放24h，依次循环3次，观察其稳定性；
(4)在-5℃下存放1周，观察其稳定性。
这些实验结果表明，所得产品在各实验条件下均未出现沉淀、断层、析水、粗粒、褪色等现象，产品稳定性好。
b、抑菌实验
(1)菌种：试验菌用金黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(8099)；
(2)试验方法：取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃)中烤干，或置室温下自然干燥后备用。阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20μl，干燥后备用。每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱，培养16h～18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界。
抑菌作用的判断:抑菌环直径大于7mm者，判为有抑菌作用；抑菌环直径小于或等于7mm者，判为无抑菌作用。
结果表明，本申请试验物对不同细菌有明显的抑菌效果(表3)。
表3
结果显示本申请产品对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用明显。
实施例4：本发明阴道护理凝胶的制备
i、制备溶液相a
将0.6重量份壳聚糖、1.5重量份羟乙基纤维素、0.08重量份黄原胶与50份水和8.0重量份甘油在温度65℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相a；
ii、制备溶液相b
取100克蜂胶原料，加入75％乙醇500毫升，搅拌浸提48小时，旋转蒸发除去乙醇，得蜂胶流浸膏提取物。
将3.0重量份蜂胶提取物和2.5重量份蛇床子提取物、1.5重量份地肤子提取物、3.0重量份芦荟提取物和1.0重量份苦参提取物与5.0份丙二醇在温度45℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相b；
iii、将步骤i得到的溶液相a冷却至温度45℃，然后在磁力搅拌器的搅拌下加入溶液相b，得到溶液相c；
ⅳ、将步骤iii得到的溶液相c冷却至室温，再添加适量香精和防腐剂，混匀，得到所述的凝胶。
采用本申请说明书描述的方法对本实施例制备的阴道护理凝胶进行了下述性能测试：
a、稳定性实验
贮存稳定性：
采用如下方法进行高低温稳定性实验：
(1)在温度45℃电热恒温培养箱中放置50天，恢复室温后观察；
(2)24小时之内，在温度0℃-50℃之间反复频繁变化，如此反复处理30天，恢复室温后观察；
(3)在温度-5℃及40℃下循环存放3次，分别每次存放24h，即在-5℃存放24h后，在室温下存放24h，再放入40℃恒温箱中存放24h，依次循环3次，观察其稳定性；
(4)在-5℃下存放1周，观察其稳定性。
这些实验结果表明，所得产品在各实验条件下均未出现沉淀、断层、析水、粗粒、褪色等现象，产品稳定性好。
b、抑菌实验
(1)菌种：试验菌用金黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(8099)；
(2)试验方法：取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃)中烤干，或置室温下自然干燥后备用。阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20μl，干燥后备用。每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱，培养16h～18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界。
抑菌作用的判断:抑菌环直径大于7mm者，判为有抑菌作用；抑菌环直径小于或等于7mm者，判为无抑菌作用。
结果表明，本申请试验物对不同细菌有明显的抑菌效果(表4)。
表4
结果显示本申请产品对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用明显。
实施例5：本发明阴道护理凝胶的制备
i、制备溶液相a
将1.2重量份壳聚糖、2.5重量份羟乙基纤维素、1.0重量份黄原胶与80份水和15.0重量份甘油在温度80℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相a；
ii、制备溶液相b
取100克蜂胶原料，加入65％乙醇500毫升，搅拌浸提48小时，旋转蒸发除去乙醇，得蜂胶流浸膏提取物。
将3.0重量份蜂胶提取物和1.8重量份蛇床子提取物、5.0重量份地肤子提取物、1.5重量份芦荟提取物和4.0重量份苦参提取物与5.0份丙二醇在温度55℃下加热搅拌使其混合溶解，得到溶液相b；
iii、将步骤i得到的溶液相a冷却至温度50℃，然后在磁力搅拌器的搅拌下加入溶液相b，得到溶液相c；
ⅳ、将步骤iii得到的溶液相c冷却至室温，再添加适量香精和防腐剂，混匀，得到所述的凝胶。
采用本申请说明书描述的方法对本实施例制备的阴道护理凝胶进行了下述性能测试：
a、稳定性实验
贮存稳定性：
采用如下方法进行高低温稳定性实验：
(1)在温度50℃电热恒温培养箱中放置50天，恢复室温后观察；
(2)24小时之内，在温度0℃-50℃之间反复频繁变化，如此反复处理25天，恢复室温后观察；
(3)在温度-5℃及40℃下循环存放3次，分别每次存放24h，即在-5℃存放24h后，在室温下存放24h，再放入40℃恒温箱中存放24h，依次循环3次，观察其稳定性；
(4)在-5℃下存放1周，观察其稳定性。
这些实验结果表明，所得产品在各实验条件下均未出现沉淀、断层、析水、粗粒、褪色等现象，产品稳定性好。
b、抑菌实验
(1)菌种：试验菌用金黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(8099)；
(2)试验方法：取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃)中烤干，或置室温下自然干燥后备用。阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20μl，干燥后备用。每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱，培养16h～18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界。
抑菌作用的判断:抑菌环直径大于7mm者，判为有抑菌作用；抑菌环直径小于或等于7mm者，判为无抑菌作用。
结果表明，本申请试验物对不同细菌有明显的抑菌效果(表5)。
表5
结果显示本申请产品对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用明显。