本发明涉及中兽药领域，更具体地，涉及一种中药组合物在制备预防和治疗猪链球菌病的药物中的应用。
背景技术：
猪链球菌(streptococcussuis,ss)是一种重要的人兽共患病，多年来一直困扰我国养猪业发展，按其荚膜抗原的差异，可分为35个血清型(1～34及1/2)，对猪致病性较强的血清型是1型、2型、1/2型、7型和9型。猪链球菌病的发病率和致死率较高，给养猪业造成了巨大的经济损失，并对相关从业人员的生命安全构成严重威胁。猪感染链球菌后，发病症状基本相似；急性病例主要表现为抑郁、厌食、发热，然后出现听觉丧失、失明、角弓反张、麻痹、共济失调、呼吸困难、惊厥、振颤发抖。少数育肥猪则以关节炎型为主要特征。病变；最急性和急性死亡的猪，通常没有人肉眼可见的病变，病程稍长的病猪在肺表面可见散在的不规则的出血点和出血斑，肺呈暗红色，高度肿胀，肺门和纵隔淋巴结肿大呈红色和紫红色；心脏损害主要表现为出血性心肌炎，纤维蛋白性化脓性心包炎，心肌内膜有数量不等的出血点或出血斑；脾脏肿大，是正常的2～3倍，呈粉红色或紫红色，脾质易脆；肾脏呈灰红色，稍肿大，包膜脱落，有的髓质呈胶冻样，界限不清，有的肾皮质部见斑点状出血；脑脊髓膜可见点状出血和充血，脑沟和脑室积液，呈淡黄色，脑回变宽；膀胱粘膜可见点状或斑状出血，蓄积淡黄色或微浑浊尿液。
由于猪链球菌的血清型多，虽然有疫苗生产应用，但免疫防控效果不理想。在养猪生产中，很多猪发病后用抗生素治疗，使猪链球菌很多菌株对抗生素存在耐药性，所以有的猪场易感猪群发病后，不做药敏试验，盲目使用抗生素治疗，治疗效果差，给我国养猪业带来重大损失。我国中药资源丰富，容易获取，价格低廉，毒副作用小，几乎无残留，无抗药性，不污染环境，还能达到标本兼治的效果。因此，研究中药制剂治疗猪链球菌病，显得尤为重要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种中药组合物在制备预防和治疗猪链球菌病的药物中的应用，该中药组合物能迅速杀灭体内猪链球菌，排泄体内毒素，提高机体免疫力，达到标本兼治的目的。
本发明的目的是通过下列技术方案来实现的：
一种中药组合物在制备预防和治疗猪链球菌病的药物中的应用，其中，该组合物由下列重量份的组分制成：
大叶金花草14～42重量份，四方草15～45重量份，狮子草6～18重量份，宽瓣金莲花3～9重量份。
上述组合物优选由下列重量份的组分组成：
大叶金花草16～22重量份，四方草15～20重量份，狮子草6～10重量份，宽瓣金莲花4～7重量份。
上述组合物进一步优选由下列重量份的组分组成：
大叶金花草16～18重量份，四方草17～20重量份，狮子草8～10重量份，宽瓣金莲花4～5重量份。
上述防治猪链球菌病的中药组合物该组合物与药学可接受的辅料制成制剂，优选剂型是注射液和散剂。
上述防治猪链球菌病的中药组合物是通过下列步骤制备得到的：
将大叶金花草、四方草、狮子草、宽瓣金莲花混合加水浸泡，煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60％～70％，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75％～80％，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩。
上述防治猪链球菌病的中药注射液的制备方法包括以下步骤：
将大叶金花草、四方草、狮子草、宽瓣金莲花药材总重3～4倍的蒸馏水浸泡24～30小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5～1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％～70％，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加95％乙醇调至醇浓度为75％～80％，搅匀沉淀，过滤，滤液回收乙醇再浓缩至无醇味，药液加蒸馏水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩得浓度为每ml含1～2g生药量的药液，调ph7.0，制成注射液。
上述防治猪链球菌病的中药散剂的制备方法，具体包括下列步骤：
将大叶金花草、四方草、狮子草、宽瓣金莲花混合加水浸泡，煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60％～70％，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75％～80％，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩，浓缩后得到密度为1.15的浸膏，干燥得到干膏，粉碎即得散剂。
本发明的有益效果：
猪链球菌是一种严重的世界范围内流行的人畜共患传染病，oie将猪链球菌感染定为b类疾病，对公众健康造成很大的威胁。
因此，本发明提供一种中药组合物在制备预防和治疗猪链球菌病的药物中的应用。其中，大叶金花草(鳞始蕨科植物)sphenomerischinensis(l)maxon.具有清热解毒、利湿，止血功效。主治感冒发热，咳嗽，咽喉肿痛，肠炎，肝炎，痈疮肿毒，狂犬、毒蛇咬伤，皮肤湿疹，吐血，尿血，便血。四方草(唇形科植物)rabdosiastracheyi(benth.exllook.f.)hara.具有清热利湿，活血散瘀功效。主治急性黄疸型肝炎，急性胆囊炎，水肿，中暑，跌打瘀痛，乳疮。狮子草(唇形科植物)rabdosiayuennanensis(hand-mazz)hara..具有祛风利湿、活血通络，解毒功效。主治感冒，风湿骨痛，食积，痢疾，黄疸，疮疡，疥癣，狂犬咬伤。宽瓣金莲花(毛莨科植物)trolliusasiaticusl.具有清热解毒，消毒，明目功效。主治感冒发热，咽喉肿痛，牙龈肿痛，目赤肿痛，疔疮肿毒，急性淋巴管炎。本发明组合以大叶金花草为君药，4种药物配伍，达到标本兼治的目的，对猪链球菌有很好的防治作用。
下面就本发明的临床效果进一步说明本发明的疗效：
1.实验室药敏试验
中药药敏片的制备：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆形纸片50片放入灭菌、干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15～20分钟高压灭菌后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液(按实施例1制备得到)0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，同时在瓶口上记录药物名称，放在37℃温箱中过夜，干燥后即密盖，置阴凉干燥处存放，有效期6个月。
西药药敏片：替米考星、阿莫西林、头孢拉定、四环素、强力霉素为对照，由杭州天和微生物试剂有限公司生产。
在超净工作台中，用酒精灯火焰灭菌的接种环挑取适量猪链球菌培养液于少量生理盐水中制成细菌混悬液(浓度为105cfu/ml-106cfu)，用灭菌绵拭子将待检细菌混悬液涂布于平血清营养皿培养基表面，要求涂布均匀。
将镊子与酒精灯火焰灭菌后，取药敏片贴到血清营养平皿培养基表面，用镊子轻按药敏片，使药敏片与培养基紧密相贴，在平皿中央贴一片，外周等距离贴若干片，标记每种药敏片的名称。将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时，观察结果。
药敏实验结果观察：按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准，抑菌圈直径(毫米)敏感度：20以上为高度敏感，15～20为中度高敏，15以下为不敏感。结果见表1。从表1可以看出，本发明中药对猪链球菌的抑菌效果比头孢拉定还要强。
表1.猪链球菌药敏实验结果
2、小鼠猪链球菌感染模型
balb/c小鼠(雄性，20～25g)，经腹腔注射200ul猪链球菌悬液(1010cfu/ml)，建立小鼠猪链球菌感染模型。
小鼠接种猪链球菌后2h分别口服80、40和20g/kg口服液，(按实施例2制备得到)每间隔8h给药一次。不给药对照组同时口服1ml水，每组20只小鼠。按给药方案给药后，分别记录小鼠感染猪链球菌24h、48h和72h后的死亡率。结果表明，经本发明给药治疗后，显著降低小鼠猪链球菌感染的死亡率(p＜0.05)，结果见表2
表2中药口服液降低小鼠猪链球菌感染死亡率
3、本发明对猪链球菌的预防效果
2017年6月16日，江苏丰县某猪场，有育肥猪354头，平均体重约60公斤左右，分成三组，中药预防组：150头猪，用本发明中药散剂(按实施例4制备)拌料，每吨饲料加1000克，用药方法是保健5天，停药5天。西药预防组：150头猪，用10％阿莫西林拌料，每吨饲料加1000克，用药方法同中药预防组。空白对照组54头，不用任何药物。在2017年7月21日，西药预防组与空白组对照组的一些猪出现精神沉郁，体温升高，食欲废绝，个别猪有关节肿胀等症状，而中药预防组只有少量猪发病，经诊断为猪链球菌病。结果见表3。
表3中药对猪链球菌的预防效果
4、本发明对临床猪链球菌病的治疗效果1
江苏沭阳县某猪场，有165头育肥猪，平均体重约60公斤，在2017年8月12日有个别猪发病，40.9℃左右。7月13日，有35头猪发病，表现为抑郁、厌食，呼吸困难，少数育肥猪则以关节炎型为主要特征。剖检2头死猪病变；在肺表面可见散在的不规则的出血点，肺呈暗红色，高度肿胀，肺门和纵隔淋巴结肿大呈红色；心肌内膜有数量不等的出血点；脾脏肿大，是正常的2倍，呈粉红色，脾质易脆；肾脏呈灰红色，稍肿大，包膜脱落，髓质呈胶冻样，界限不清，肾皮质部见斑点状出血；膀胱粘膜可见点状出血，蓄积淡黄色或微浑浊尿液。关节腔积液有淡黄色液体渗出。
(1)细菌学诊断
细菌培养：无菌采集的关节液，涂布于血清营养琼脂培养基，放置于37℃培养箱中培养24h后观察菌落形态。挑取直径1.0mm、半透明、圆形、光滑的菌落接种于血清营养琼脂培养基进行纯化。挑取单个菌落进行革兰氏染色，镜检，呈短链状排列的革兰氏阳性球菌。
细菌生化试验：对分离纯化的细菌进行生化试验，发酵乳糖、蔗糖、葡萄糖和七叶苷，不发酵山梨糖、山梨醇、甘露醇、尿素、水杨苷、棉子糖、阿拉伯糖、甘油。符合猪链球菌的生化特性。
(2)治疗情况：30多头病猪，能采食的在每吨饲料中加本发明提取物1000克(按实施例4制备)，不采食或采食量很少的病猪，用本发明注射治疗(按实施例1制备)，每公斤体重0.1毫升，共用药5天，只死亡5头，其余全部康复。
5、本发明对临床猪链球菌病的治疗效果2
本发明(按实施例1方法制备)分别在江苏、浙江、安徽、山东等省市12个猪场应用治疗猪链球菌病，治疗头数达2千多头病猪，治愈率在90％以上，比抗生素治疗效果好，同时进行五组对比实验(对比实验均应用于山东的猪场)，结果见表4。
对比组制备方法如下：
对比1组(大叶金花草组)：取大叶金花草46g，将大叶金花草加药材总重4倍的蒸馏水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量蒸馏水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
对比2组(狮子草组)：取狮子草46g，将狮子草加药材总重4倍的蒸馏水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量蒸馏水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
对比3组(宽瓣金莲花组)：取宽瓣金莲花46g，将宽瓣金莲花加药材总重4倍的蒸馏水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量蒸馏水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
对比4组(大叶金花草+四方草组)：将大叶金花草30g，四方草16g混合，加药材总重4倍的蒸馏水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量蒸馏水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
对比5组(大叶金花草+四方草组+狮子草组)：将大叶金花草18g、四方草20g和狮子草8g混合，加药材总重4倍的蒸馏水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量蒸馏水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
表4.临床治疗猪链球菌病的结果
5.安全性试验
取icr小鼠30只，体重在25～30克，按体重随机分成5组，每组6只，雌雄各半，口服给药(按实施例2制备得到)，给药量分别为0.2毫升/只、0.4毫升/只、0.6毫升/只和0.8毫升/只，每天口服2次，连续给药5天，停药后连续观察20天。对照组口服饮水。结果所有小鼠健存，其活动、饮食、毛发、排泄物未发现异常，未见毒性反应。对小鼠口腔和破损皮肤进行刺激性试验，未见有刺激性反应和其它不良反应。
具体实施方式
为了更清晰的理解本发明，以下结合实例对本发明做进一步描述。但实施例的具体细节仅用于解释本发明，不以任何方式限制本发明。
实施例1：
组方：大叶金花草16g，四方草17g，狮子草8g，宽瓣金莲花5g
具体制备过程如下：
将大叶金花草、四方草、狮子草、宽瓣金莲花混合，加药材总重4倍的蒸馏水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量蒸馏水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
实施例2：
组方：大叶金花草14g，四方草15g，狮子草6g，宽瓣金莲花3g。
具体制备过程如下：
将大叶金花草、四方草、狮子草、宽瓣金莲花混合，加药材总重3倍的蒸馏水浸泡24小时，煎煮2次，每次煮沸后维持1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％，充分搅拌混匀，静置48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为80％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量蒸馏水冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1g的药液，调ph7.0，分装，灭菌即得。
实施例3：
组方：大叶金花草30g，四方草30g，狮子草10g，宽瓣金莲花5g。
具体制备过程如下：
将大叶金花草、四方草、狮子草、宽瓣金莲花混合，加药材总重4倍的蒸馏水浸泡30小时，煎煮2次，每次煮沸后维持1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％，充分搅拌混匀，静置48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量蒸馏水冷藏沉淀60小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成注射液，分装，灭菌即得。
实施例4：
组方：大叶金花草42g，四方草44g，狮子草16g，宽瓣金莲花8g。
具体制备过程如下：
将大叶金花草、四方草、狮子草、宽瓣金莲花混合加药材总重4倍的水浸泡26小时，煎煮3次，，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液后浓缩至稠状，加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为80％，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩后得到密度为1.15的浸膏，干燥得到干膏，粉碎即得散剂。