本发明涉及植物提取技术领域，特别涉及一种长序荆总黄酮的提取方法。
背景技术：
长序荆(vitexpeduncularis)为牡荆属植物。其主要活性成分为黄酮类化合物，具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、降低血压、调节免疫等作用。长期以来对长序荆的提取研究甚少，现有技术中还没有关于长序荆中总黄酮的提取方法的相关报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种长序荆总黄酮的提取方法。本发明提供的提取方法总黄酮提取率高，重现性好。
本发明提供了一种长序荆总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
将长序荆浸泡在乙醇溶液中水浴回流进行提取，然后趁热过滤，完成长序荆总黄酮的提取。
优选地，所述提取的温度为65～90℃，提取的次数为3～5次，每次提取的时间为0.5～1h。
优选地，所述提取时的料液比为1:7～11g/ml，所述乙醇溶液的体积分数为75～95％。
优选地，所述提取的温度为65～70℃，提取的次数为3次，每次提取的时间为0.5h，所述提取时的料液比为1:9g/ml，所述乙醇溶液的体积分数为95％。
优选地，所述趁热过滤后包括合并滤液，提取后所得药渣用乙醇溶液洗涤，一并纳入滤液。
优选地，所述乙醇溶液洗涤的次数为2～3次。
本发明提供了一种长序荆总黄酮的提取方法，将长序荆浸泡在乙醇溶液中水浴回流进行提取，然后趁热过滤，完成长序荆总黄酮的提取。本发明以乙醇溶液作为提取溶剂，提取率高，重现性好，且提取液存放不易腐败变质，而且工艺简单、操作控制容易、稳定性好，适合于工业化生产。实施例的数据表明，采用本发明的提取方法，提取液中总黄酮含量高达7.95mg·g-1，rsd为1.50％。
具体实施方式
本发明提供了一种长序荆总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
将长序荆浸泡在乙醇溶液中水浴回流进行提取，然后趁热过滤，完成长序荆总黄酮的提取。
在本发明中，所述提取的温度优选为65～90℃，更优选为65～70℃，提取的次数优选为3～5次，每次提取的时间优选为0.5～1h，更优选为0.5h。
在本发明中，所述提取时的料液比优选为1:7～11g/ml，更优选为1:9g/ml，所述乙醇溶液的体积分数优选为75～95％，更优选为95％。
在本发明的一个实施例中，所述提取的温度优选为65～70℃，提取的次数优选为3次，每次提取的时间优选为0.5h，所述提取时的料液比优选为1:9g/ml，所述乙醇溶液的体积分数优选为95％。
在本发明中，所述趁热过滤后优选包括合并滤液，提取后所得药渣用乙醇溶液洗涤，一并纳入滤液。
在本发明中，所述乙醇溶液洗涤的次数优选为2～3次。本发明对所述乙醇溶液洗涤时乙醇溶液的用量没有特殊的限定。
在本发明中，优选通过紫外分光光度法测定提取液中总黄酮的含量。本发明对所述紫外分光光度法的具体方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方法即可。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的长序荆总黄酮的提取方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
材料与方法
1.1材料
1)仪器：tu-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，re-2000a旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，al104电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，b-220型恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)，dzf26021型真空干燥箱(上海精密实验设备有限公司)。
2)试剂：长序荆干燥树叶，芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供，其他试剂均为分析纯。
1.2方法
1.2.1提取溶剂的选择
1)水提取法：精密称取长序荆8g，加水50ml浸泡60min后，在水浴上加热回流提取1h，趁热过滤，共提取3次，合并滤液至200ml容量瓶中，药渣用水洗涤2～3次，一并纳入滤液，放冷，用水定容，摇匀，待用。
2)乙醇溶液提取法：精密称取长序荆8g，加乙醇溶液50ml浸泡60min后，水浴回流1h，趁热过滤，共提取3次，合并滤液至200ml容量瓶中，药渣用乙醇溶液洗涤2～3次，一并纳入滤液，放冷，乙醇溶液定容，摇匀，待用。
1.2.2乙醇溶液提取法因素和水平的确定采用正交实验设计，选用提取温度(a)、提取时间(b)、乙醇溶液用量(料液比)(c)及乙醇溶液浓度(体积分数)(d)4个因素，每个因素选择3个水平，以长序荆中总黄酮含量为考核指标，按l9(34)正交表设计方案进行实验，编制因素水平表(见表1)。
表1正交实验因素水平表
1.2.3总黄酮含量测定
1)标准曲线的制备：精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置50ml容量瓶中，加乙醇溶液约30ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每毫升含芦丁对照品0.1mg)。精密量取对照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml，分别至10ml容量瓶中，各加水至5ml，精密加5％亚硝酸钠试液0.3ml，摇匀，放置6min，加10％硝酸铝试液0.3ml，摇匀，放置6min，加4％氢氧化钠试液2.0ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min。采用紫外分光光度法，在512nm波长处测定吸光度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为a＝0.0685c+0.0017，r＝0.9998。
2)样品液总黄酮含量测定：精密量取样品液2ml，置10ml容量瓶中，按标准曲线制备方法进行操作，测定吸光度，由回归方程计算样品中总黄酮含量。
2结果与分析
2.1提取溶剂的选择
表2提取溶剂与含量关系(n＝3)
由表2结果可见，乙醇溶液提取法优于水提取法。用水作溶剂提取黄酮虽然存在生产成本低，无溶剂残留的优点，但提取率较低，且提取液存放易腐败变质，后续的过滤、浓缩等操作困难且费时等。因此本发明选择乙醇溶液作为实验提取溶剂。
2.2正交试验结果分析
以长序荆中总黄酮含量为考核指标，分析结果见表3。通过直观分析，b因素影响不显著，故以b因素作为误差进行方差分析，分析结果见表4。根据表3和表4可以看出提取时间、提取温度对指标影响不显著，料液比对提取率有显著性影响(p<0.05)，乙醇溶液浓度对提取率有极显著性影响(p<0.01)。由分析结果可知影响长序荆总黄酮提取的主次因素依次为乙醇溶液浓度(d)>料液比(c)>提取温度(a)>提取时间(b)。根据正交实验，最佳提取方案为a1b1c2d3，即提取温度65～70℃，提取时间0.5h，料液比1:9(g/ml)，乙醇溶液体积分数95％。
表3正交实验方案及结果分析l9(34)
表4方差分析表
f0.05(2.2)＝19.00,f0.01(2.2)＝99.00
2.3提取工艺的验证实验
为进一步考察上述最佳工艺的稳定性和合理性，按该工艺条件进行重复性实验3次，分别测定长序荆总黄酮的含量，结果见表5。测定的结果均优于正交实验表中的任何一组，重现性好，说明该工艺稳定可行。
表5最佳工艺的验证实验(n＝3)
长序荆总黄酮是长序荆主要成分，经上发现，影响长序荆总黄酮提取的主次因素依次为乙醇溶液浓度(d)>料液比(c)>提取温度(a)>提取时间(b)，提取的最佳方案为a1b1c2d3，即提取温度65～70℃，提取时间0.5h，料液比1:9(g/ml)，乙醇溶液浓度95％。按此方案提取，所得总黄酮含量最高，而且工艺简单、操作控制容易、稳定性好，适合于工业化生产，且提取液存放不易腐败变质。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。