预防近视用组合物及功能性食品的制作方法

本发明涉及一种用于近视或眼部疾病的预防或处理的组合物及功能性食品。更详细而言，本发明涉及一种对易患近视或近视易恶化的年龄层，尤其是生长期的儿童或青年层有效的组合物、对眼部疾病的风险升高的中老年层也有效的组合物、及包含该组合物的功能性食品。

背景技术：

近视的频率有人种差异。尤其是亚洲人居多，其中日本人为容易近视的人种，-5d以上的高度近视的比例也高。另外，近年来，近视逐渐全球性地增加，在日本，裸眼视力不足1.0的儿童的比例也逐年增加。另外，已知近视在7岁至12岁的学童期会急剧恶化(参照非专利文献1)。

根据其发病机制，近视可分类为屈光性近视、调节性近视(假性近视)及轴性近视，学童期的近视恶化则主要为轴性近视。人类的眼睛在出生后不久为远视，随着生长期的眼轴伸长，远视的程度逐渐变小，进入学童期视力便转为正常。这种视力正常化现象后的眼轴伸长直接涉及近视，而且眼轴长度一旦伸长，便无法使其复原。因此，通常认为抑制生长期至学童期的期间的眼轴伸长，对于近视预防或处理为有效(参照非专利文献2)。另外，不单在生长期，成人的眼轴也会伸长，据称成人的眼轴伸长为各种眼部疾病的风险因素，眼轴过度伸长的结果的高度近视提高作为其并发症的白内障、青光眼、视网膜脱离、视网膜病、黄斑病、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿及视神经病变等眼部疾病的危险性(参照非专利文献2)。因此，抑制眼轴伸长，不仅可因预防近视而获得生命质量(qol)改善，也有关于终至失明的严重眼部疾病的预防。

关于对此近视恶化(眼轴过度伸长)的抑制，有人探讨各种方法。对这些抑制眼轴伸长相关的过去临床研究结果进行后设分析(meta-analysis)，结果按阿托品滴眼液、哌仑西平眼软膏、角膜矫正术、周边部散焦型软式隐形眼镜、滴眼液渐进多焦点眼镜的顺序对于眼轴长度显示出统计上显著的抑制效果。然而，其中仍存留有尚待解决的课题，例如阿托品滴眼液所显现的副作用、或角膜矫正术等的费用负担的问题或其方法极繁琐，而且配戴眼镜的效果有限等(参照非专利文献3)。

另外，有人进行这种近视恶化(眼轴伸长)的风险因素相关的研究，而指出年龄、性别、遗传、社会·生活环境等与眼轴伸长息息相关(参照非专利文献4)。尤其是近距离工作(阅读写字、vdt(visualdisplayterminals，视觉显示终端)工作)的增加及随之而生的日光(尤其是360～400nm的紫色光)暴露不足，作为眼轴伸长的风险因素而备受瞩目(参照非专利文献5)。然而，在现代日本社会，要改变读书、阅读写字、vdt工作等以室内为主的生活方式不实际，而需求一种在频繁从事此种近距离工作而缺乏紫色光暴露的生活环境下也能抑制近视恶化的方法。

另一方面，就近视相关的研究，有人自1970年代起便开始尝试利用动物来阐明眼轴伸长的机制，wiesel与raviola以恒河猴(rhesusmonkey)证实近视与眼轴伸长的相关性(参照非专利文献6)。此后，也有人以树鼩、鸡等其他动物来进行，从而研究出近视动物模型(参照非专利文献7,8)。有人报导多种与眼轴伸长、罹患近视有关的基因，egr-1/zenk1也为其中之一。就egr-1基因敲除小鼠，可看出眼轴伸长与出现近视，暗示egr-1与眼轴伸长有关(参照非专利文献9)。然而，经敲除egr-1的小鼠虽可看出眼轴伸长与近视的恶化，而对于仅为复数存在的近视相关基因之一的egr-1，尚未确定在体外可增强其表达的药剂在体内实际上是否可抑制眼轴伸长而抑制近视恶化。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：医学的进程《医学のあゆみ》，vol.253,no.2,2015年。

非专利文献2：眼科，第58卷6号，635-641,2016年。

非专利文献3：医学的进程《医学のあゆみ》，vol.245,no.10,2013年。

非专利文献4：ophthalmologica,vol.235,78-86,2016。

非专利文献5：坪田一男著，《あなたのこども、そのままだと近視になります》(你的孩子，如果放任不管就容易近视)isbn978-4-7993-2041-9(出版公司：discover21，发行年月：2017年2月)。

非专利文献6：nature,vol.266,66-68,march1977。

非专利文献7：brainres,vol.124,154-157,1977。

非专利文献8：science,vol.201,1249-1251,1978。

非专利文献9：investigativeophthalmology&visualscience,vol.48,11-17,january2007。

非专利文献10：natneurosci,vo.2,705-712,1999。

技术实现要素：

发明要解决的问题

通常而言，罹患近视与环境因素及遗传原因有关已广为人知。近来，在室外的生活或活动减少、在室内的生活或活动增加，以及随着智能型手机、游戏机、计算机、液晶电视等的普及，从儿童到高龄者的广大年龄层便逐渐在长时间使用这些设备的环境下生活，造成近视出现的近距离工作的增加与室内工作所引起的紫色光暴露不足唯有恶化一途。基于这种背景，便强烈需求与预防近视有关的方法或组合物、或者可寻求该方法或组合物筛选方法。尤其是，有鉴于上述egr-1基因与眼轴伸长有关，只要可筛选出可诱导egr-1基因的表达的物质，再将该物质以食品、医药品、或其他方法导入至体内，便可有效地预防近视或眼部疾病。

本发明目的在于提供一种能够用于近视或者眼部疾病的预防或处理的组合物。尤其是提供一种对易患近视且易恶化的生长期的儿童或青年层，进而对白内障、青光眼、视网膜脱离、视网膜病、黄斑病、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿及视神经病变等眼部疾病的风险升高的中老年层有效的眼科用组合物、包含该眼科用组合物的功能性食品、及可寻求该组合物及功能性食品的筛选方法。

用于解决问题的方案

为解决上述课题，本案发明人等进行各种研究的结果发现具有增强与眼轴伸长有关的egr-1基因的表达的效果的成分，同时发现在近视动物模型中可抑制眼轴伸长、而且可预防近视恶化的成分，终至完成本发明。因此，本发明的组合物可适用于与眼轴伸长有关的近视或者眼部疾病的预防或处理。即，本发明的主旨为如下记载。

[1]一种眼科用组合物，其用于近视或者眼部疾病的预防或处理，所述组合物含有选自由藏红花酸及其药学上允许的盐、以及银杏叶提取物组成的组中至少1种成分。

[2]根据[1]所述的眼科用组合物，所述组合物还含有除了藏红花酸及其药学上允许的盐、以及银杏叶提取物以外的、类胡萝卜素类和/或多酚类。

[3]根据[1]或[2]所述的眼科用组合物，其中，所述近视为轴性近视。

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的眼科用组合物，其为生长期的儿童用。

[5]根据[1]～[4]中任一项所述的眼科用组合物，其中，所述近视为高度近视。

[6]根据[1]或[2]所述的眼科用组合物，其中，所述眼部疾病为随年龄增长所引起的眼部疾病。

[7]根据[1]或[2]所述的眼科用组合物，其中，所述眼部疾病为由高度近视所引起的并发症。

[8]根据[6]或[7]所述的眼科用组合物，其中，所述眼部疾病为白内障及眼后段疾病。

[9]根据[8]所述的眼科用组合物，其中，所述眼后段疾病为选自由青光眼、视网膜脱离、黄斑裂孔、中央凹分离症、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿、近视性黄斑病、及近视性神经病变组成的组中至少一种。

[10]根据[1]～[9]中任一项所述的眼科用组合物，其用于抑制眼轴伸长。

[11]根据[1]～[10]中任一项所述的眼科用组合物，其用于增强egr-1的表达。

[12]一种用于近视或者眼部疾病的预防或处理的功能性食品，其含有选自由藏红花酸及其药学上允许的盐、以及银杏叶提取物组成的组中至少1种成分。

[13]一种功能性食品，其包含[1]～[11]中任一项所述的眼科用组合物。

[14]一种能够用于近视或者眼部疾病的预防或处理的物质的筛选方法，其特征在于，以有无增强egr-1表达的效果为指标。

[15]一种眼科用组合物，其含有egr-1表达增强剂。

[16]根据[15]所述的眼科用组合物，其中，所述egr-1表达增强剂包含抗氧化性植物提取物。

[17]根据[15]或[16]所述的眼科用组合物，其用于抑制眼轴伸长。

[18]一种眼科用组合物，其含有眼轴伸长抑制剂。

[19]根据[18]所述的眼科用组合物，其中，眼轴伸长抑制剂包含抗氧化性植物提取物。

[20]根据[15]～[19]中任一项所述的眼科用组合物，其用于近视或者眼部疾病的预防或处理。

[21]一种眼科用组合物，其为近距离工作者用和/或室内工作者用，所述组合物含有选自由藏红花酸及其药学上允许的盐、以及银杏叶提取物组成的组中至少1种成分。

[22]根据[21]所述的眼科用组合物，其为儿童用。

发明的效果

根据本发明，可提供一种能够用于近视或者眼部疾病的预防或处理的、有效的眼科用组合物、包含其的功能性食品、及可寻求该组合物及功能性食品的筛选方法。尤其是，本发明的眼科用组合物对于易患近视且易恶化的生长期的儿童或青年层，进而对于白内障、青光眼、视网膜脱离、视网膜病、黄斑病、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿及视神经病变等眼部疾病的风险升高的中老年层，可适用于各症状/疾病的预防或处理。

另外，本发明的筛选方法可取得能提升眼轴伸长抑制效果或egr-1表达的物质，从而对于能有效改善近视或眼部疾病的眼科用组合物或功能性食品等的开发有用。

附图说明

图1为表示对本发明的眼科用组合物所含成分的egr-1基因表达的效果的图。

图2为表示改变本发明的眼科用组合物所含试验试剂的含量时对egr-1基因表达的效果的图。

图3为实验2中得到的眼轴长度测定的结果。

图4为实验2中得到的屈光测定的结果。

具体实施方式

以下就本发明的眼科用组合物、功能性食品及筛选方法详细加以说明。就本发明，只要包含其主旨，则不限于以下实施方式，包含变形例及应用例。

<眼科用组合物/第1实施方式>

本发明的眼科用组合物的第1实施方式为含有抗氧化性植物提取物或源自其的成分，优选为类胡萝卜素类、多酚类。这些成分具有调节基因(egr-1)表达的功能，所述基因(egr-1)表达与可能造成轴性近视或各种眼部疾病的眼轴伸长有关。因此，含有这些成分的眼科用组合物可发挥维持视力的效果，对于易患近视且易恶化的年龄层(生长期的儿童、青年层等)特别有效果。另外，对于可认为眼轴伸长是原因之一的白内障、青光眼、视网膜脱离、视网膜病、黄斑病、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿及视神经病变等眼部疾病也有效。此眼科用组合物，除为必需成分的抗氧化性植物提取物或源自其的成分外，在不损及本发明的效果的范围内也可包含其他成分。以下，就本发明的眼科用组合物所含有的成分详细加以说明。

作为本发明的眼科用组合物所含有的类胡萝卜素类，可举出藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、栀子提取物(山栀子)、栀子色素、藏红花提取物、发芽青花菜提取物、花椰菜苗提取物、红甜椒提取物、β-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、虾青素、金盏花色素提取物、红甜椒、红甜椒色素、西洋人参提取物、辣椒提取液、杜仲叶提取物、红花提取物、罗布麻提取物等。需要说明的是，括号内为别称。

多酚类与类胡萝卜素类同样地具有抗氧化作用，是具有植物所含的苦味、涩味、色素的成分的化合物的总称。作为本发明的眼科用组合物所含有的多酚，可举出银杏叶提取物、山竹提取物、草莓种子提取物、核桃多酚、巴西香可可提取物、爪哇姜提取物、川皮苷、蓝莓叶提取物、倪藤提取物、葡萄白藜芦醇、越橘提取物、温普提取物、gnetinc、ε-葡萄素、白藜芦醇、葡萄种子提取物、黑大豆种皮多酚、黑豆种皮多酚、黑加仑提取物、姜黄素、白色姜黄素、多甲氧基黄酮(pmf)、二氢槲皮素、水飞蓟提取物、水飞蓟素、水飞蓟宾、αg橙皮苷、橙皮苷、甲基橙皮苷、源自橙子的芸香糖苷、橙皮素、碧萝芷、寡酚、亚麻木质素、香芹提取物、智利酒果提取物、奇异果种子提取物、紫苏果实提取物、红紫苏提取物、紫苏叶、野樱莓提取物、蓝靛果提取物、花青素-3-葡萄糖苷、白背栎提取提取物、巴西莓提取物、卡姆果提取物、家板栗多酚、大豆异黄酮、柑橘果实提取物、海藻多酚、浮石提取物、橄榄果实提取物、醋橘果皮提取物、莲藕提取物、姜黄提取物、紫松果菊(紫雏菊)、荷叶提取物(莲叶)、管花肉苁蓉、番石榴叶提取物、桑叶提取物、红花提取物、玉米穗黄提取物、五层龙提取物、车前草提取物(车前子)、野山楂提取物、陈皮提取物、田七人参提取物、甜茶提取物、鱼鳞云杉提取液、鱼腥草提取物、菊薯提取物、罗布麻提取物、绿茶提取物等。需要说明的是，括号内为别称。

就上述类胡萝卜素类或多酚类而言，优选抑制眼轴长度的伸长的作用优良，同时可发挥附加特性(例如可维持性、稳定性等)等者。

基于上述观点，就类胡萝卜素类，优选藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、栀子提取物(山栀子)、栀子色素、藏红花提取物、β-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、虾青素、金盏花色素提取物、红甜椒、红甜椒色素、红花提取物、罗布麻提取物，更优选为藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、栀子提取物(山栀子)、栀子色素、藏红花提取物，进一步优选为藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐。

基于上述观点，就多酚类，优选银杏叶提取物、山竹提取物、草莓种子提取物、核桃多酚、巴西香可可提取物、爪哇姜提取物、川皮苷、蓝莓叶提取物、黑加仑提取物、姜黄素、白色姜黄素、香芹提取物、智利酒果提取物、多甲氧基黄酮(pmf)，更优选为银杏叶提取物、山竹提取物、草莓种子提取物、核桃多酚、巴西香可可提取物、爪哇姜提取物，进一步优选银杏叶提取物。

需要说明的是，本说明书中所称“近视”，为轴性近视，是指因眼轴伸长所造成的近视。眼轴伸长可利用调节麻痹剂或散瞳剂检测出来。即，此处所称近视，是指由裸眼原本的焦点偏移所引起者，已去除由晶状体或睫状体经焦点调节的部分，为有别于消除暂时的眼睛疲劳(睫状肌疲劳)便会复原的近视，例如调节性近视(假性近视)。因此，此处所称近视，也可定义为“视觉功能变差”、“视力变差”、“看远方的能力变差”、“看远处物体的能力变差”、“眼睛的基本性能变差”、“原本的视力变差”或者“焦点偏移”。

更详细而言，近视指成像于视网膜的前方而无法在远处对焦的症状，由于眼轴长度变长而发生。此种近视有别于因眼部疲劳(眼睛疲劳)、调节痉挛、调节紧张等，睫状体暂时麻痹，导致晶状体的移动恶化所引起的症状(以下，方便上称为“调节功能异常”)，为不可逆地无法复原。调节功能异常，传统上也称假性近视或调节紧张性近视，这些为暂时性的调节痉挛或调节紧张所引起的功能异常，不是近视。就调节功能异常而言，即便放任此症状不管也不会转移至近视，为使眼睛休息便会改善、或透过以滴眼剂抑制睫状体的痉挛而消除晶状体的紧张等便会改善的症状，根据此种改善方法并无法治愈近视。例如，通常而言，推行消除近视等者以调节功能异常为对象，而非针对近视。因此，当调节功能异常与近视同时存在时，通过使眼睛休息，仅能消除调节功能异常。

因此，本发明为用于近视或者主要因为该近视而出现的眼部疾病的预防或处理者，其特征在于，与用来改善例如因眼部疲劳(眼睛疲劳)、调节痉挛、调节紧张等，睫状体暂时麻痹，导致晶状体的移动恶化所引起的调节功能异常者本质且根本上不同。

另外，本说明书中所称“眼部疾病”是指眼睛相关疾病，尤其是因近视所引起的眼部疾病，具体而言可举出白内障或眼后段疾病。本说明书中所称“眼后段疾病”，是指玻璃体、视网膜、脉络膜、巩膜或视神经的疾病，具体而言包含青光眼、视网膜脱离、黄斑裂孔、中央凹分离症、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿、近视性黄斑病、近视性神经病变。然而，本实施方式不受这些定义所限制，可广泛适用于眼轴伸长所涉及的症状/疾病等。

另外，此处所称近视或者眼部疾病的预防或处理，是指抑制近视恶化(眼轴伸长)，即抑制与婴儿期至学童期的正常的眼轴伸长(正常的正视化)不同的异常的眼轴伸长，而预防、治疗随之而生的并发症。即，此处所称近视或者眼部疾病的预防或处理，非仅指预防或处理之前段落(第0022段落)所述的近视，也可定义为“眼轴伸长所引起的屈光变化或者角膜曲率半径变化的正常化”、“支援健康的眼睛成长”、“支援生长期的眼睛”、“维持视觉功能”或者“眼睛的抗老化”。

以下，就本发明的眼科用组合物的第1实施方式特别优选含有的藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、银杏叶提取物详细加以说明。

藏红花酸为天然色素的一组，属分类为类胡萝卜素的成分之一。藏红花酸为具有强抗氧化作用的成分，可由栀子(茜草科栀子属：gardeniaaugustamerrilvar.、grandiflorahort.、gardeniajasminoidesellis)的果实、藏红花(鸢尾科番红花属：crocussativus)的柱头以高纯度提取出来。

此藏红花酸通常通过将作为类胡萝卜素类的黄色色素的藏红花素(藏红花酸的二龙胆二糖酯)水解而得。藏红花素在栀子的果实、藏红花的柱头的干燥物等中含有，作为用来获得藏红花素的工业原料，优选使用栀子的果实。

从植物基原提取出藏红花素的方法没有特别限定，可采用例如从粉碎的栀子的干燥果实，使用水或醇(例如甲醇、乙醇等)、或这些的混合液进行提取等的公知方法。就提取条件，例如使用水/醇混合液时，优选为0～50℃、1～18小时，更优选为30～40℃、2～4小时。提取操作通常进行多次。

工业上，藏红花素的水解优选使用碱的水解。另外，水解也可在搅拌和/或加热下进行。优选在搅拌下以20～70℃进行水解，以40～60℃进行1～24小时，优选进行3～5小时。

藏红花素的水解使用碱的水解时，通常而言，水解结束后，通过对反应液适量添加盐酸、硫酸、磷酸等无机酸、或柠檬酸等有机酸的水溶液，而调成ph4.0以下，优选为ph1.0～3.0，可使藏红花酸析出。此后，通过将析出藏红花酸的混合液进行离心分离、或过滤，可将藏红花酸以糊状固体回收。

得到的藏红花酸，由于通常在固体表面附着有酸、中和盐及源自原料的杂质，所以以去除该杂质为目的而进行洗净处理。该处理可采用例如使用足量的水清洗糊状固体等公知的方法来进行。接着，使用例如盘式通风干燥机或真空干燥机等，优选在氮气环境下以超过50℃左右的温度，将例如经水洗的固体干燥，可去除残留于固体的水。

基于杂质较少的观点，藏红花酸其纯度优选为50质量％以上，而只要可获得能发挥有效性的藏红花酸含量，则不限定纯度。需要说明的是，藏红花酸的纯度能以纯藏红花酸的色价为基准来计算。色价可依据常见方法，以“化学合成品以外的食品添加物自主规格(第二版)”，日本食品添加物协会编，“栀子黄色素”为参考来计算。

就藏红花酸而言，可如上述通过将植物等天然物所含的藏红花素水解而得，也可使用化学合成品。另外，也可使用含于栀子果实、栀子提取物、藏红花提取物等天然物者。基于安全性或纯度观点，更优选由栀子黄色素(食品标示例)获得藏红花酸。

作为藏红花酸的药理学上可容许的盐，可举出例如钠、钾等碱金属盐；镁、钙等碱土金属盐；吡啶、二甲胺、二乙胺、乙醇胺等药物上可容许的有机胺化合物的盐等。

作为市售藏红花酸制剂，可例示例如rikenvitamin株式会社制chrovit(注册商标)。“chrovitp(商品名)”为藏红花酸含量75％以上的粉末状态，“chrovit2.5wd(商品名)”为藏红花酸含量2.5％以上的水分散性制剂。

本发明的眼科用组合物中的藏红花酸或其药学上允许的盐的定性/定量方法，只要为科学上的适当方法则没有特别限定，能以例如使用ods管柱与浓度梯度流动相(tfa水溶液→tfa水-甲醇溶液)的高效液相层析法将试样分离，以全反式-藏红花酸或13-顺式-藏红花酸等为标准物，使用光二极管阵列检测器来定性/定量受验物质。

银杏叶提取物为以槲皮素或山奈酚、原花色素等多种类黄酮与银杏内酯所代表的萜烯内酯为主成分的植物提取物，为具有血流改善的效果的提取物，可从干燥银杏叶(ginkgobiloba.l.)通过常见方法提取出来。

作为市售银杏叶提取物，可例示例如银杏叶甘草提取物(indenajapan株式会社制)、银杏提取液bg-50(香荣兴业株式会社制)、银杏提取物-fm(tamabiochemical株式会社制)、银杏提取物-f(tamabiochemical株式会社制)、银杏叶提取物c(丸善制药株式会社制)。

本发明的眼科用组合物所含有的藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、银杏叶提取物等抗氧化性植物提取物或源自其的成分的含量没有特别限定，就其每天的配混量为0.001～5000mg/天，优选为0.01～1000mg/天，更优选为0.01～500mg/天。

本发明的眼科用组合物，由于含有具有增强与抑制眼轴伸长有关的egr-1基因的表达的效果的上述成分，而适用于egr-1表达增强，且适用于眼轴伸长抑制。另外，本发明的眼科用组合物为适用于与眼轴伸长有关的近视(尤其是轴性近视)或者眼部疾病(尤其是选自由青光眼、视网膜脱离、黄斑裂孔、中央凹分离症、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿、近视性黄斑病、及近视性神经病变组成的组中至少一种的眼后段疾病)的预防或处理。以下针对属此种眼科用组合物的优选实施方式的药物及食品详细加以说明。

<药物>

将本发明的眼科用组合物作成药物时，可添加药学上可容许的赋形剂等而制成药物制剂。本发明的药物，只要可用于近视或者眼部疾病的预防或处理则没有特别限定，可制成滴眼剂、口服制剂(片剂、胶囊剂、颗粒剂、细粒剂、散剂、咀嚼锭、锭剂等固体制剂；或者液剂、糖浆剂等液体制剂)、注射剂等。这些之中，基于容易发挥本发明的效果的观点，优选为滴眼剂、口服制剂。本发明的眼科用组合物可配合各自的性质状态、用途等，包含上述成分以外的其他添加剂。

将本发明的眼科用组合物作为药物使用时，对象症状/疾病只要是可认为眼轴伸长是原因之一者则不特別限定，优选为近视、眼部疾病。以近视而言，优选为轴性近视，尤以易患轴性近视且容易发生恶化的生长期的儿童、青年层的轴性近视为更优选。就眼部疾病而言，优选为白内障、青光眼、视网膜脱离、视网膜病、黄斑病、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿及视神经病变，尤以白内障、青光眼、视网膜脱离、黄斑裂孔、中央凹分离症、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿、近视性黄斑病、近视性神经病变为更优选。

将本发明的眼科用组合物作成药物使用时，其对象为需要预防或处理近视或者眼部疾病的人，特别是易患近视、其中为轴性近视且容易发生恶化的生长期的儿童或青年层，具体而言主要为不足20岁的儿童及20多岁～30多岁的青年层，优选为2岁～15岁，更优选为6岁～12岁的生长期儿童。另外，对于白内障、青光眼、视网膜脱离、黄斑裂孔、中央凹分离症、网膜水肿、糖尿病视网膜病、视网膜色素病变、黄斑水肿、糖尿病黄斑病、近视性黄斑病、老年黄斑病、近视性神经病变等老年性眼部疾病风险升高的中老年层，也可配合各自的症状而适宜地使用。

将本发明的眼科用组合物供近距离工作者用和/或室内工作者用时，只要是有眼轴伸长的风险因素的人则没有特别限定，其对象为主要频繁从事室内的近距离工作的人，或者主要不常在室外暴露于紫色光(360～400nm的可见光)下的人。尤以花费在读书、阅读写字、计算机、电视、电视游戏的时间较长的儿童或学童为优选，也优选为不常在室外活动的高龄者。

(滴眼剂)

将本发明的眼科用组合物作成滴眼剂使用时，至少考虑藏红花酸或其药学上允许的盐等抗氧化性植物提取物或源自其的成分对水的溶解性及稳定性，而选自水性滴眼剂、使用时溶解的滴眼剂、悬浮性滴眼剂、油性滴眼剂、眼软膏等。例如藏红花酸由于为兼具亲水结构与亲油结构的类胡萝卜素水溶性，因此，本发明的眼科用组合物的剂型，通常可制成水性滴眼剂或悬浮性滴眼剂。

滴眼剂中，除上述成分外，还可配混其他的有效成分(药理活性成分、生理活性成分等)。此种成分的种类不特别限制，可例示例如消除充血成分、眼肌调节药成分、抗发炎药成分、收敛剂成分、抗组胺剂成分、抗过敏药成分、维生素类、氨基酸类、抗菌剂成分、糖类、高分子化合物或其衍生物、纤维素或其衍生物、局部麻醉药成分、上述成分以外的青光眼治疗成分、上述成分以外的白内障治疗成分等。

对于滴眼剂，在不损及本发明的效果的范围内，可进一步根据其用途或形态，依据常见方法适宜选择各种的成分或添加物，组合使用一种或更多而使其含有。作为这些成分或添加物，可举出例如液剂等的调制通常所使用的载体、香料或清凉剂、防腐剂、杀菌剂或抗菌剂、ph调节剂、螯合剂、稳定剂、等渗剂、缓冲剂、增稠剂等各种添加剂。以下例示滴眼剂所使用的代表性成分，但不限定于这些。

作为载体，可举出例如水、含水乙醇等水性溶剂。需要说明的是，当各种成分难溶于水性溶剂时，也可使用增溶剂。作为增溶剂，可举出例如聚氧亚乙基氢化蓖麻油、聚乙二醇40硬脂酸酯、聚维酮、聚山梨醇酯80等。

作为香料或清凉剂，可举出例如萜烯类(具体而言为茴香脑、丁香酚、樟脑、香叶醇、桉油醇、莰醇、薄荷醇、柠檬烯、龙脑等。这些可为d体、l体或dl体任一种)、精油(茴香油、清凉薄荷油、肉桂油、留兰香油、薄荷水、薄荷油、胡椒薄荷油、香柠檬油、桉叶油、玫瑰油等)等。

作为防腐剂、杀菌剂或抗菌剂，可举出例如泊利氯铵、盐酸烷基二氨基乙基甘氨酸、苯甲酸钠、乙醇、苯扎氯铵、苄索氯铵、葡萄糖酸氯己定、氯丁醇、山梨酸、山梨酸钾、无水乙酸钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、硫酸羟基喹啉、苯乙醇、苯甲醇、双胍化合物(具体而言为聚六亚甲基双胍或其盐酸盐等)、glokyl(rhodia公司制商品名)等。

作为ph调节剂，可举出例如盐酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、三乙醇胺、单乙醇胺、二异丙醇胺、硫酸、磷酸等。

作为螯合剂，可举出例如抗坏血酸、乙二胺四乙酸四钠、乙二胺四乙酸钠、柠檬酸等。

作为稳定剂，可举出例如乙二胺四乙酸钠水合物、聚维酮、聚山梨醇酯80、二丁基羟基甲苯、氨丁三醇、甲醛磺酸钠(雕白粉)、生育酚、焦亚硫酸钠、单乙醇胺、单硬脂酸铵、单硬脂酸甘油酯等。

作为等渗剂，可举出例如氯化钾、氯化钠、浓甘油、葡萄糖、d-甘露醇等。

作为缓冲剂，可举出例如柠檬酸钠水合物、乙酸钠水合物、碳酸氢钠、氨丁三醇、硼酸、硼砂、磷酸氢钠水合物、磷酸二氢钠等。

作为增稠剂，可举出例如羧基乙烯基聚合物、聚维酮、聚乙烯醇(部分皂化物)、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、甘油等。

本发明的滴眼剂优选含有0.001～1质量％的藏红花酸或其药学上允许的盐等抗氧化性植物提取物或源自其的成分，更优选含有0.01～0.1质量％。另外，其他的添加剂，可在期望发挥本发明的效果、或不妨害本发明的效果的范围内配混。其含量没有特别限定，以组合物中的含量计优选为0.001～1质量％左右。

滴眼剂的ph只要调成3～10即可，基于使用感观点优选为4～9，基于使用感观点更优选为5～8.5。

供填充本发明的滴眼剂的容器，可不限公知的滴眼药容器地使用。作为滴眼药容器，通常可使用可对眼睛滴加滴眼剂的形状，例如具备喷嘴，且在喷嘴的前端具备容器口的形状者。另外，作为供容纳本发明的滴眼剂的滴眼药容器，可为容器上安装有与其个别成形的喷嘴的构造者、及喷嘴部(液体倒出部)与容器本体一体成型的构造者(例如1次用尽型滴眼剂等)的任一种。

供容纳本发明的滴眼剂的容器，只要通常由塑料制即可。就该塑料容器的构成材质，不特别限制，可举出例如聚对苯二甲酸乙二酯、聚丙烯酸酯、聚萘二甲酸乙二酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚酰亚胺的任1种、这些的共聚物、或这些2种以上的混合物。尤其是基于易随挤出程度等而发挥本案发明的效果的观点，优选为聚对苯二甲酸乙二酯、聚丙烯酸酯、聚萘二甲酸乙二酯或这些的共聚物、或这些2种以上的混合物。

本发明的滴眼剂可填充于以此种材料为主材料的透明容器(具备观察到杂质也不会对其造成妨碍的程度的透明性的容器)，也可填充于遮光容器。遮光例如可通过对透明容器材料添加着色剂来进行，也可通过将容器以收缩薄膜或外盒等覆盖来遮光。另外，就容器的容量，为了易随挤出程度等而进一步发挥本发明的效果，优选为0.5～50ml左右，更优选为3～20ml左右。

另外，就供容纳本发明的滴眼剂的容器所具备的喷嘴，对于其构造或构成原材料也不特别限制。就喷嘴的构造，只要是作为滴眼剂容器的喷嘴通常所采用的构造即可；另外，就喷嘴的构成原材料，可例示例如与上述塑料容器的构成原材料相同者。基于改善本发明的滴眼剂的除液，且可抑制滴加量的不均的观点，适宜为包含聚乙烯、或聚丙烯作为构成原材料的喷嘴。作为聚乙烯的种类，可举出高密度聚乙烯、低密度聚乙烯等，其中适宜为包含低密度聚乙烯作为构成原材料的喷嘴。

(滴眼剂的制造方法)

本发明的滴眼剂能以本领域普通技术人员所惯用/熟知的方法来调制。例如，只要通过使各成分分散于水等载体后，若有必要时添加增溶剂，视需求加热，并使用均化器等予以均匀化、溶解或乳化，再以ph调节剂调节ph来调制。另外，作为制剂的灭菌方法，可选择高压釜灭菌、过滤灭菌等方法。

(使用方法)

本发明的滴眼剂的用法、用量随患者的症状、年龄等而变更，通常只要以1天约1～6次、1次约滴加1～2滴即可。

(口服制剂：固体制剂)

本发明的眼科用组合物可作成例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂等固体制剂。口服制剂有携带性优良，且可由口中容易地摄取一定量的优点。口服制剂的形状考虑取用容易性及摄取容易性来设计其形状、重量、大小、颜色等。对于固体制剂，可依据其用途或形态，依据常见方法适宜选择各种成分或添加物，组合使用一种或更多而使其含有。作为这些成分或添加物，例如除上述藏红花酸或其药学上允许的盐等抗氧化性植物提取物或源自其的成分、类胡萝卜素类、多酚类等成分以外，还可配混赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。另外，也可视需求使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等添加物。以下例示固体制剂所使用的代表性成分，但不限定于这些。

作为赋形剂，可举出例如d-山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇等糖醇、葡萄糖、白糖、乳糖、果糖等糖类、结晶纤维素、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、磷酸氢钙、小麦淀粉、米淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉、糊精、β-环糊精、轻质无水硅酸、氧化钛、硅酸铝镁、滑石、高岭土、橄榄油等。

作为结合剂，可举出例如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等纤维素衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、丙烯酸系高分子、明胶、阿拉伯胶、普鲁兰多糖、α化淀粉、琼脂、黄蓍胶、海藻酸钠、海藻酸丙二醇酯等。

作为崩解剂，可举出例如淀粉、低取代度羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、羟丙基淀粉、部分α化淀粉等。

作为润滑剂，可举出例如硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、聚乙二醇硬脂酸酯、鲸蜡醇、滑石、硬化油、蔗糖脂肪酸酯、二甲基聚硅氧烷、蜜蜡、白蜂蜡等。

这些添加剂可在不妨害本发明的效果的范围内配混。

(口服制剂(固体制剂)的制造方法)

要将本发明的眼科用组合物作成固体制剂时，能以本领域普通技术人员所惯用·熟知的方法来调制。可例示例如：通过将组合物进行捏合并使其通过筛网，再进行成型而得到挤出造粒物，并将此挤出造粒物粉碎、整粒的方法；对前述组合物添加捏合水，通过立式造粒机进行成型的搅拌造粒后，使用comil进行粉碎、筛滤的方法；及、将前述制剂组合物以辊辗压机压缩后，以辊式造粒机进行粉碎、筛滤的方法；在搅拌造粒后进行流动层干燥的方法。另外，例如通过直接压片来制造时，只要将组合物混合后，直接投入压片机进行压片即可。

(口服制剂：液体制剂)

本发明的眼科用组合物也可作成例如糖浆、饮剂等液体制剂。液体制剂中，除上述成分以外，还可配混溶剂、助溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、舒缓剂等。另外，也可视需求使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等添加物。这些添加剂可在不妨害本发明的效果的范围内配混。

作为溶剂，可举出例如水、醇、丙二醇、聚乙二醇、芝麻油、玉米油等。

作为助溶剂，可举出例如聚乙二醇、丙二醇、d-甘露醇、苯甲酸苯甲酯、乙醇、三氨基甲烷、胆固醇、三乙醇胺、碳酸钠、柠檬酸钠等。

作为悬浮剂·乳化剂，可举出例如硬脂酰基三乙醇胺、月桂基硫酸钠、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、苯扎氯铵、苄索氯铵、单硬脂酸甘油酯等表面活性剂；例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素等亲水性高分子；例如虫胶蜡、蜜蜡、巴西棕榈蜡、鲸蜡、羊毛脂、液状羊毛脂、还原羊毛脂、硬质羊毛脂、环状羊毛脂、羊毛脂蜡、小烛树腊、木蜡、褐煤蜡、虫胶、米糠蜡等蜡类等。

作为等渗剂，可举出例如氯化钠、甘油、d-甘露醇等。作为缓冲剂，可举出例如磷酸盐、乙酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐等缓冲液等。作为舒缓剂，可举出例如苯甲醇等。作为防腐剂，可举出例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯甲醇、苯乙醇、无水乙酸、山梨酸等。作为抗氧化剂，可举出例如亚硫酸盐、抗坏血酸等。

要将本发明的眼科用组合物制成液体制剂时，可使用通常方法。要制成液体制剂时，至少考虑藏红花酸或其药学上允许的盐等抗氧化性植物提取物或源自其的成分对水的溶解性及稳定性。例如由于藏红花酸是兼具亲水结构与亲油结构的类胡萝卜素水溶性，因此，本发明的眼科用组合物的剂型，通常可制成水性制剂或悬浮性制剂。

本发明的口服制剂(固体制剂、液体制剂)的给药量可依据对象疾病及状态、疾病的程度、对象者的年龄、体重等来适宜设定。就藏红花酸量，每天为0.075～75mg/天，更优选为0.1～25mg/天，进一步优选为0.25～10mg/天。就藏红花酸以外的提取物量，每天为0.1～5000mg/天，更优选为1～1000mg/天，进一步优选为10～300mg/天。就给药次数，可为每天1次或多次。

<食品>

本发明的眼科用组合物可使其含于食品而提供。作为此种功能性食品，可举出健康食品、功能性标示食品、健康辅助食品、营养功能食品、特别用途食品、特定保健用食品或通常食品等。这些食品由于包含本发明的眼科用组合物，可针对需要预防或处理近视或者眼部疾病的人，尤其是易患近视、其中为轴性近视且易发生恶化的生长期的儿童或青年层、白内障、青光眼、视网膜脱离、视网膜病、黄斑病、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿及视神经病变等老年性眼部疾病的风险升高的中老年层，配合各自的症状适宜地摄取。另外，除这些以外，对于因眼轴伸长所引起的症状/疾病，也可作为眼轴伸长抑制用，期待有改善效果等而广泛地摄取。

就这些食品的形态，可举出果汁、清凉饮料、饮剂、茶等液体型态；小圆饼、锭片、颗粒粉末、粉末、胶囊等固体形态；糊浆、胶冻、汤、调味料、色拉酱等半流动形态等。

具体而言，可例示：米饭；包含披萨、英式松饼、小圆面包、圆饼、佛卡恰、牛角面包的各种面包类；包含荞麦面、乌冬面、粉丝、中华面、速食面、杯面的各种面类；包含意大利面条、通心粉、笔管面、千层面的各种意大利面类；清凉饮料、碳酸饮料、营养饮料、果实饮料、乳酸饮料、运动饮料等饮料；咖喱块、炖菜、各种汤类；冰淇淋、冰果子露冰激凌、刨冰等冰凉甜点；饴糖、饼干、糖果、口香糖、巧克力、锭片型零食、点心零食、小圆面包、果冻、果酱、奶油、其他烘培点心等甜点类；鱼糕、半片(日式鱼浆加工物)、火腿、香肠等水产·畜产加工食品；加工乳、发酵乳等乳制品；色拉油、油炸油、人造奶油、蛋黄酱、酥油、泡沫乳油、色拉酱等油脂及油脂加工食品；酱料、色拉酱、味噌、酱油、酱汁等调味料；汤、炖菜、色拉、熟食、鱼粉拌紫菜、腌制物；其他各种形态的健康·营养辅助食品等。

另外，可使其含有本发明的眼科用组合物而提供的食品中也包含营养补充品(散剂、颗粒剂、软胶囊、硬胶囊、片剂、咀嚼锭、速溶片、糖浆剂、液剂等)。

另外，对于宠物等动物用的饲料，也可使其含有本发明的眼科用组合物。

这些食品均可通过本领域普通技术人员所熟知的方法，添加藏红花酸或其药学上允许的盐来制造。

食品中可视需求添加添加物。作为此类添加物，可举出例如葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、山梨糖醇、甜菊素、甜茶素、玉米糖浆、乳糖、甘露醇、糊精、柠檬酸、柠檬酸钠、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸、l-抗坏血酸、dl-α-生育酚、异抗坏血酸钠、甘油、丙二醇、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、阿拉伯胶、卡拉胶、酪蛋白、明胶、果胶、琼脂、维生素c、维生素b类、维生素e、烟酰胺、泛酸钙、氨基酸类、钙盐类、表面活性剂、色素、香料、保存剂等。

本发明中的食品可附加有：具有近视或者眼部疾病(例如白内障、青光眼、视网膜脱离、黄斑裂孔、中央凹分离症、网膜水肿、糖尿病视网膜病、视网膜色素病变、黄斑水肿、糖尿病黄斑病、近视性黄斑病、老年性黄斑病、近视性神经病变等眼后段疾病)的预防作用、同改善作用等的主旨的标示。另外，本发明中的食品可附加有：易患近视(其中的轴性近视)且容易发生恶化的生长期儿童用；白内障、视网膜脱离、青光眼、黄斑病、脉络膜新生血管等老年性眼后段疾病的风险升高的中老年层用；因眼轴伸长所引起的症状·疾病用；眼轴伸长抑制用等标示。

以上，本发明的眼科用组合物、药物(滴眼剂、口服制剂等)、食品(功能性食品、特定保健用食品等)，对于易患近视或近视易恶化的年龄层，尤其是生长期的儿童或青年层有效。尤其是可抑制视力变差(罹患近视、近视恶化)，可发挥抑制主要为不足20岁的儿童及20多岁～30多岁的青年层，优选为2岁～15岁，更优选为6岁～12岁的生长期儿童所容易发生的眼轴长度伸长的作用效果。另外，对于白内障、青光眼、视网膜脱离、视网膜病、黄斑病、脉络膜新生血管、后巩膜葡萄肿及视神经病变等老年性眼后段疾病的风险升高的中老年层也有效。

<眼科用组合物/第2实施方式>

本发明的眼科用组合物的第2实施方式为一种含有egr-1表达增强剂的眼科用组合物。此处所称egr-1表达增强剂，是指可增强已知与抑制眼轴伸长有关的egr-1基因的表达强度的物质。本发明的眼科用组合物由于含有此egr-1表达增强剂，而能够适用于眼轴伸长分析为原因之一的近视或眼部疾病的预防或处理。本发明的眼科用组合物可发挥维持视力的效果，尤其是对于易患近视且易恶化的年龄层(生长期的儿童、青年层等)有效果。而且，对于眼轴伸长分析为原因之一的白内障、视网膜脱离、青光眼、黄斑病、脉络膜新生血管等眼后段疾病也有效。

egr-1表达增强剂优选包含抗氧化性植物提取物。作为此抗氧化性植物提取物，可举出包含类胡萝卜素类、多酚类的植物提取物作为优选实例。需要说明的是，作为类胡萝卜素类、多酚类，在这里也可同样地例示本发明的第1实施方式中所例示者。

上述类胡萝卜素类之中，基于egr-1表达增强效果(抑制眼轴长度伸长的效果)更优良的观点，优选藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、栀子提取物(山栀子)、栀子色素、藏红花提取物、β-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、虾青素、金盏花色素提取物、红甜椒、红甜椒色素、红花提取物、罗布麻提取物，更优选为藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、栀子提取物(山栀子)、栀子色素、藏红花提取物，进一步优选为藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐。

多酚类中，基于egr-1表达增强效果(抑制眼轴长度伸长的效果)更优良的观点，优选为银杏叶提取物、山竹提取物、草莓种子提取物、核桃多酚、巴西香可可提取物、爪哇姜提取物、川皮苷、蓝莓叶提取物、黑加仑提取物、姜黄素、白色姜黄素、香芹提取物、智利酒果提取物、多甲氧基黄酮(pmf)，更优选为银杏叶提取物、山竹提取物、草莓种子提取物、核桃多酚、巴西香可可提取物、爪哇姜提取物，进一步优选为银杏叶提取物。

本发明的眼科用组合物中的egr-1表达增强剂的含量，只要为可获得本发明的效果的范围则没有特别限定，例如为0.001～20质量％，优选为0.01～10质量％，更优选为0.1～5质量％。

作为含有egr-1表达增强剂的本发明的眼科用组合物的优选实施方式，可举出药物、食品。将本发明的眼科用组合物作成药物、食品时也可含有的其他成分等的具体说明，可应用第1实施方式中的说明。需要说明的是，第1实施方式中记载为抗氧化性植物提取物或源自其的成分之处，可替换理解为“egr-1表达增强剂”。

<眼科用组合物/第3实施方式>

本发明的眼科用组合物的第3实施方式为一种含有眼轴伸长抑制剂的眼科用组合物。此处所称眼轴伸长抑制剂，是指具有抑制眼轴伸长效果的物质，含有其的眼科用组合物可适用于可认为眼轴伸长是原因之一的近视或眼部疾病的预防或处理。本发明的眼科用组合物可发挥维持视力的效果，尤其是对于易患近视且易恶化的年龄层(生长期的儿童、青年层等)有效果。而且，对于眼轴伸长分析为原因之一的白内障、视网膜脱离、青光眼、黄斑病、脉络膜新生血管等眼后段疾病也有效。

作为眼轴伸长抑制剂，可举出例如上述的egr-1表达增强剂，具体而言为抗氧化性植物提取物，优选为类胡萝卜素类、多酚类等，更优选为藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、银杏叶提取物、山竹提取物、草莓种子提取物、核桃多酚、巴西香可可提取物、爪哇姜提取物，进一步优选为藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐、银杏叶提取物，特别优选可举出藏红花酸、藏红花酸的药学上允许的盐。将含有眼轴伸长抑制剂的眼科用组合物作成药物、食品的情形也包含于本发明。其他成分等的具体说明可应用第1实施方式中的说明。需要说明的是，第1实施方式中记载为抗氧化性植物提取物或源自其的成分之处，可替换理解为“眼轴伸长抑制剂”。

<能够用于近视或者眼部疾病的预防或处理的物质的筛选方法>

以已知与眼轴伸长有关的egr-1基因表达强度作为标志，可筛选出能够用于近视或者眼部疾病的预防或处理的物质。egr-1基因已知与眼轴长度的伸展有关，具有增强此基因表达的效果的物质可以说有抑制眼轴伸长的效果。

本发明的筛选方法至少包含：(1)以试验物质或阴性对照物质对细胞、组织、个体等进行处理的步骤(下称“处理步骤”)；(2)测定细胞或组织、或者受验体的细胞或组织中的egr-1基因的表达量的步骤(下称“测定步骤”)。

作为上述试验物质，优选为选自由类胡萝卜素类、多酚类、及这些的药学上允许的盐组成的组中至少1种。尤其是，类胡萝卜素类之中优选使用藏红花酸，多酚类之中优选使用银杏叶提取物，但不限于此。另外，以选自上述群组的2种以上物质作为试验物质时，其中1种优选为藏红花酸或银杏叶提取物。此时，作为藏红花酸或银杏叶提取物以外的物质，优选为以与藏红花酸或银杏叶提取物的相乘效果而促进egr-1的上升的物质，但不限于此。具体而言，试验物质可仅采用藏红花酸，也可采用藏红花酸及银杏叶提取物。

上述处理步骤中，对细胞或组织以试验物质等进行处理时，可通过本领域普通技术人员所熟知的方法来进行。例如，可在培养细胞的培养基中添加上述试验物质等培养一定时间(例如1～72小时)。另外，也可使试验体(人类或其他动物)摄取包含试验物质等的组合物1次或多次。

上述测定步骤中，可通过本领域普通技术人员所熟知的方法来测定细胞或组织的egr-1基因表达。例如，可通过定量rt-pcr法来测定细胞或组织的egr-1mrna的表达。另外，也可通过荧光素酶报告基因分析，依据常见方法来测定egr-1基因表达水平。

即，详细而言，本发明的筛选方法为一种供筛选具有透过含有选自由类胡萝卜素类、多酚类、及这些的药学上允许的盐组成的组中至少1种而产生的眼轴伸长抑制效果或egr-1表达效果的物质的方法，可以说为包含以下步骤的方法：(a)准备添加有选自由类胡萝卜素类、多酚类、及这些的药学上允许的盐组成的组中至少1种试验物质的试验体的步骤(称(a)步骤)；(b)测定上述试验体的egr-1表达的步骤(称(b)步骤)；及(c)选择可看出egr-1表达效果的试验体，并选择该试验体所含的试验物质作为眼轴伸长抑制物质或egr-1表达增强物质的步骤(称(c)步骤)。

上述(a)步骤中，为将包含连结有egr-1基因的报告基因的核酸导入筛选所使用的细胞内，并对该细胞导入选自由类胡萝卜素类、多酚类、及这些的药学上允许的盐组成的组中至少1种试验物质而形成试验体。

作为报告基因，可利用例如绿色荧光蛋白质(gfp)基因、荧光素酶基因等，只要是本领域普通技术人员则可容易地选出。另外，包含报告基因的核酸，只要是可在实施本发明的筛选方法的细胞内使报告基因表达者则可为任意者，可举出例如质粒载体、病毒载体等。

本发明的筛选所使用的细胞，只要是可发挥egr-1基因的功能，而且可使上述报告基因表达(可发挥功能)的细胞则可为任意细胞，而且可源自于任何物种。例如，可使用哺乳类细胞(小鼠、大鼠、人类等)、或鸟类细胞(小鸡等)。

在这里，就添加于试验体的试验物质而言，可先将其浓度循序稀释，而调制成包含多种浓度的试验物质的试验体。另外，包含阴性对照物质的对照实验，除包含阴性对照物质以外，也可与试验体同样地准备。

使用如此调制的试验体，供给以下(b)步骤。

上述(b)步骤为测定上述试验体的egr-1表达的步骤。例如为根据上述报告基因的表达，来测定egr-1表达的步骤。此时，报告基因的表达的变化，只要是本领域普通技术人员则可容易地测定、检测出来。例如，使用如gfp或荧光素酶等发光性蛋白质的基因作为报告基因时，可在培养细胞后，将细胞溶解，再将溶解物移至适于测定发光的孔板来测定发光；或者，也可直接测定源自经培养的细胞的发光。作为测定所使用的仪器，可使用例如公知的照度计等。

上述(c)步骤中，要选出眼轴伸长抑制作用或使egr-1表达的作用较强的物质，只要选择上述(b)步骤中所测得的egr-1表达量大于对照实验的试验体即可。即，使用光蛋白的基因作为报告基因时，只要选择发光量较大的试验体即可。

根据本发明的筛选方法得到的眼轴伸长抑制物质或egr-1表达增强物质，以提升眼轴伸长抑制效果或egr-1上升效果为目的，或者以有效改善近视或者眼部疾病为目的，可配混于眼科用组合物或功能性食品等。

实施例

根据实施例与比较例更详细地说明本发明。

[实验1]

(稳定表达株的制作)

进行egr-1诱导效果的确认实验。首先准备人类胎儿肾细胞株(hek293t)、与经导入egr-1基因的慢病毒载体(制品名“cignallentiegr-1reporter(luc)”，quiagen公司)。在第1天，对24孔孔盘接种人类胎儿肾细胞株，在5％co2保温箱中、37℃下使其生长24小时。在第2天，转导慢病毒150μl/孔，进一步添加12μl的sureentry转导试剂(quiagen公司)，在5％co2保温箱中、37℃下放置一夜。此后，将慢病毒与medium(介质)一并去除，使用嘌呤霉素(1μg/ml)进行筛选。通过此种程序，即制成基因导入与egr-1活性相关的-firefly-luciferase而成的hek293t细胞株(稳定表达株)。

(基因表达解析)

其次，进行使用荧光素酶的基因表达解析。解析为使用多模式平板读数仪(制品名“synergyhtx”，biotek公司)。将基因导入与egr-1活性相关的-firefly-luciferase而成的hek293t细胞株，以1×10⁴个/孔接种于96孔孔盘。使细胞在孔盘底面植活后，添加试验试剂，在24小时后使用promega公司制luciferaseassaysystem进行发光强度的测定。

作为试验试剂，使用藏红花酸(chrovitp,rikenvitaminco.,ltd.制)、银杏叶提取物(银杏叶甘草提取物，indenajapanco.,ltd制)、核桃多酚(walnutpolyphenol-p10，oryzaoil&fatchemicalco.,ltd.制)、山竹提取物(mangostinaqua，日本新药株式会社制)、草莓种子提取物(strawberryseedextract-p，oryzaoil&fatchemicalco.,ltd.制)、巴西香可可提取物(巴西香可可提取物粉末，日本粉末株式会社制)、爪哇姜提取物(爪哇姜提取物粉末，hosodashc株式会社制)，且作为egr-1表达的阳性对照组的pma(12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯，abcam公司制)。以浓度最终成为0.25mg/ml的方式将上述试验试剂溶于dmso(二甲基亚砜)，在常温(约20℃)下放置一夜，此后进行离心并将上清液添加在细胞培养液，而得到0.25mg/ml的试验试剂。

需要说明的是，在改变浓度的试验中，使用chrovitp。chrovitp为藏红花酸含量75％以上的粉末，将此chrovitp溶于dmso(二甲基亚砜)成100mg/ml，在常温(约20℃)下放置一夜。此后，进行离心并将上清液添加于细胞培养液，而得到0.125mg/ml的试验试剂、与0.25mg/ml的试验试剂。

(结果)

图1为表示添加上述各种试验试剂时与未添加时的诱导egr-1表达的结果的图。图2为表示改变作为试验试剂使用的藏红花酸(chrovitp)的浓度时的结果的图。由图1可知，与仅添加不含试验试剂的dmso时相比，添加0.25mg/ml的藏红花酸(chrovitp)时的结果，发光强度达5.7倍，与作为阳性对照的pma相比也可看出显著差异。即，可确认藏红花酸所产生的显著egr-1诱导效果。另外，可确认银杏叶提取物的发光强度也达3.8倍左右，而且其他的试验试剂也为与作为阳性对照的pma同等的发光强度。

另外，由图2可知，添加0.125mg/ml的chrovitp时的结果、与添加0.25mg/ml的chrovitp时的结果，与仅添加不含试验试剂的dmso时相比明显增强。即，实施与dmso的dunnett检定的结果，0.125mg/ml时为5.0倍(p<0.01)，加倍浓度的0.25mg/ml时为5.2倍(p<0.005)，分别为极显著，在体外因藏红花酸而使egr-1表达显著增强。

非专利文献9、10为报导egr-1诱导效果与眼轴长度的关系的研究论文，其验证经基因敲除egr-1的小鼠可看出眼轴伸长(非专利文献9)，以及，若人为抑制眼轴伸长则可增强egr-1表达(非专利文献10)。然而，其中能以细胞水平增强egr-1表达的药剂能以个体水平抑制眼轴伸长，其结果，是否能因此抑制近视恶化还未能验证。因此，以下实施近视模型动物的眼轴伸长的验证试验。

[实验2]

在实验2中，进行近视模型动物的眼轴伸长的验证试验。小鼠使用c57bl/6j小鼠(公、3周大)。对小鼠在光环境(12小时/12小时)下，从3周大至6周大喂食对照组饲料群(mf，orientalyeast工业株式会社)或0.003％chrovitp混合饲料(orientalyeast工业株式会社)。

(测定装置、测定程序)

作为测定装置，使用频谱域光同调断层扫描(envisur4310,leica公司制)、小鼠用红外线光反射器(infraredphotorefractorformice)、与version1.0.15b3，堀内电机制作所株式会社制)。需要说明的是，小鼠用红外线光反射器为由prof.fschaeffel(steinbeistransfercenter,germany)制作的改良成可辨识小鼠眼睛的装置，使用红外线led照射小鼠的眼睛，并与此同时使用红外线摄影机感测由眼睛射出的红外线反射光，而由反射光的形态与强度来判断近视程度的装置。此装置在近视研究领域广泛使用，也可比较整个研究室的数据。屈光为采用取得稳定的值后将100次平均得到的值。针对各群实施welch-t检定，将p值为0.05以下者评为显著(以“*”表示在图表中)、将0.01以下者评为极显著(以“**”表示在图表中)。

作为试验试剂，为了在测定时使瞳孔稳定而使用mydrinp(注册商标，参天制药株式会社)。另外，使用三种混合麻醉(美托咪锭盐酸盐(dimotor/注册商标，日本全药工业株式会社)、咪达唑仑(dormicum/注册商标，astellas制药株式会社)、布托菲诺酒石酸盐(vetorphale/注册商标，meijiseika株式会社))，且为了解除麻醉而使用阿替美唑盐酸盐(antisedan/注册商标，日本全药工业株式会社)、戊巴比妥钠(somnopentyl/注册商标，共立制药株式会社)。

试验首先测定眼参数。此测定为(1)对眼睛滴加mydrinp(注册商标)使两眼散瞳，(2)将三种混合麻醉给药至腹腔内而施予麻醉，(3)以小鼠用红外线光反射器测量屈光，(4)以频谱域光同调断层扫描测定眼轴长度。

其次，对小鼠戴上眼镜。具体而言，以剪刀剪除头顶部的皮肤，以牙科用superbond(4-meta/mma-tbb树脂)将由3d打印机作成的眼镜用支柱粘接于头盖骨上，对左眼安装0diopter镜片、对右眼安装-30diopter镜片。

接着，(a)使用antisedan(注册商标)消除麻醉，(b)分成各饲料群予以饲养(此时，眼镜的镜片弄脏时则随时清洁)，(c)达6周大后再度测定上述的眼参数。

(结果)

图3为眼轴长度测定的结果、图4为屈光测定的结果。由图3的结果，就在体外[实验1]确认egr-1表达增强作用的喂食chrovitp的0.003％混合饲料的诱发近视小鼠(图表中的0.003％)，与喂食对照组饲料的小鼠(图表中的对照组)相比可显著(p<0.05)抑制眼轴伸长。另外，由图4的结果，与未诱发近视的小鼠(图表中的0d的对照组)相比，因诱发近视(图表中的-30d的对照组)而使屈光(diopter)显著(p<0.01)降低，为使小鼠诱发明显的近视。另外，就同样地喂食chrovitp饲料的诱发近视小鼠(图表中的-30d的0.003％)，与喂食对照组饲料的小鼠(图表中的-30d的对照组)相比屈光明显(p<0.05)较高，近视诱发由藏红花酸显著抑制。即，在体外藏红花酸可显著预防近视恶化。另外，经确认通过筛选出在体外具有egr-1表达增强作用的药物，可有效地筛选出生物体中实际的眼轴伸长抑制成分。