可增加免疫的微生物制剂的制作方法

文档序号:18324832发布日期:2019-08-03 10:53阅读:492来源:国知局

本发明属于生物医药技术领域,具体涉及可增加免疫的微生物制剂。



背景技术:

酿酒酵母(saccharomycescerevisiae),又称面包酵母或出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母,不仅因为传统上它用于制作面包和馒头等食品及酿酒,在现代分子和细胞生物学中用作真核模式生物,其作用相当于原核的模式生物大肠杆菌。酿酒酵母是发酵中最常用的生物种类。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形,直径5-10μm。其繁殖的方法为出芽生殖。

麦冬为百合科植物麦冬(沿阶草)的干燥块根。具有养阴生津,润肺止咳的作用,用于肺胃阴虚之津少口渴、干咳咯血;心阴不足之心悸易惊及热病后期热伤津液等证。麦冬含有大量的多糖类成分,在现有技术中,一般是将其作为杂质除去。除杂方法一般为在麦冬水提液加入一定量的乙醇沉淀多糖,存在操作复杂、具有安全隐患、以及生产成本高的问题。

因此,提供一种制剂,可以充分利用麦冬的多糖类成分,省略除杂步骤,成为了本领域技术人员亟待解决的问题。



技术实现要素:

针对现有技术的不足,本发明提供了一种微生制剂,能充分利用麦冬的多糖类成分,还具有意料不到的增加免疫的作用。

本发明采用的技术方案如下:

本发明所述的可增加免疫的微生物制剂,由包括以下重量份的原料制成:酿酒酵母菌10-30份,麦冬水提物200-500份。

进一步地,由包括以下重量份的原料制成:酿酒酵母菌15-25份,麦冬水提物300-450份。

进一步地,由包括以下重量份的原料制成:酿酒酵母菌22份,麦冬水提物360份。

进一步地,其制备方法包括以下步骤:

步骤1.将酿酒酵母菌于培养基中培养,得到菌剂;

步骤2.将步骤1制得的菌剂与麦冬水提取混合后,密闭发酵,得到发酵产物;

步骤3.将所述发酵产物低温浓缩后,得到所述微生物制剂。

进一步地,所述步骤1中,将酿酒酵母菌置于培养基中在25-35℃条件下培养24-56小时。

进一步地,所述步骤2中,密闭发酵的条件为25-35℃发酵5-7天。

进一步地,将所述发酵产物低温浓缩后,加入适量辅料混合均匀,制粒,低温干燥,装入胶囊,制成胶囊剂。

进一步地,所述麦冬水提物为麦冬加水提取制成,每克麦冬水提物相当于原生药5-10g。

本发明所述的辅料包括填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等;崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等;润滑剂包括:硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等;助悬剂包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等;粘合剂包括:淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等;甜味剂包括:糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等;矫味剂包括:甜味剂及各种香精;防腐剂包括:尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等;基质包括:peg6000,peg4000,虫蜡等。

与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:

本发明设计科学,操作简单,具有良好的增加免疫的作用。

本发明将麦冬水提取物与酿酒酵母混合发酵后,能充分利用麦冬的多糖类成分,省去了传统的麦冬去除多糖的步骤,减少了物料投入,降低了生产成本,提高了生产的安全性。

本发明经药效学实验表明,还具有意料不到的增加免疫的作用。

具体实施方式

以下通过具体实施方式,对本发明的上述内容做进一步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术方案均属于本发明的范围。

实施例1

本实施例提供了本发明的麦冬水提物的制备方法:

取麦冬药材,加水煎煮三次,第一次加药材6倍量的水,第二次和第三次均加药材4倍量的水,过滤,合并滤液,浓缩至每ml液体相当于麦冬药材5-10g,即得。

实施例2

本实施例提供了本发明的微生物制剂的制备方法,具体为:

按以下重量份准备原料:酿酒酵母菌22份,麦冬水提物360份。

将酿酒酵母菌接入马铃薯葡萄糖液体培养基于30℃条件下振荡培养56小时,得到菌剂。其中,振荡培养的转数为200rpm。

将菌剂与麦冬水提物混合均匀,在30℃密闭发酵7天。

将发酵产物在45℃条件下浓缩,加入糊精30份,硬脂酸镁2份,混合均匀,制粒,45℃干燥,装入胶囊,即得微生物制剂。

本实施例中的麦冬水提物每ml液体相当于麦冬药材7g。

实施例3

本实施例提供了本发明的微生物制剂的制备方法,具体为:

按以下重量份准备原料:酿酒酵母菌10份,麦冬水提物500份。

将酿酒酵母菌接入马铃薯葡萄糖液体培养基于25℃条件下振荡培养24小时,得到菌剂。其中,振荡培养的转数为200rpm。

将菌剂与麦冬水提物混合均匀,在25℃密闭发酵5天。

将发酵产物在45℃条件下浓缩,加入糊精30份,硬脂酸镁2份,混合均匀,制粒,45℃干燥,装入胶囊,即得微生物制剂。

本实施例中的麦冬水提物每ml液体相当于麦冬药材10g。

实施例4

本实施例提供了本发明的微生物制剂的制备方法,具体为:

按以下重量份准备原料:酿酒酵母菌30份,麦冬水提物200份。

将酿酒酵母菌接入马铃薯葡萄糖液体培养基于35℃条件下振荡培养48小时,得到菌剂。其中,振荡培养的转数为200rpm。

将菌剂与麦冬水提物混合均匀,在35℃密闭发酵6天。

将发酵产物在45℃条件下浓缩,加入糊精30份,硬脂酸镁2份,混合均匀,制粒,45℃干燥,装入胶囊,即得微生物制剂。

本实施例中的麦冬水提物每ml液体相当于麦冬药材5g。

实施例5

本实施提供了本发明的增加免疫力的药效学实验。

微生物制剂样品:根据实施例2的方法制备的样品进行药效学实验。样品置阴凉干爽通风处保存。人口服推荐用量为每人(成人)每日2次,每次2粒,每粒重0.3g,成人体重按60kg计算,折合给药剂量为20mg/kg。取胶囊内容物加水稀释制成混悬液进行试验。

阴性对照:蒸馏水。

麦冬提取物样品:取麦冬水提物,不加酿酒酵母菌,按实施例2的方法制成麦冬提取物样品。取麦冬提取物样品内容物,加水稀释制成混悬液进行试验。

试验动物:昆明种小鼠,全雌性,体重18-22g。

数据分析:试验数据采用spss10.0forwindows软件包处理。对照组与剂量组的数据经方差齐性检验,方差齐,进行方差分析,如p值小于0.05,则用dunnett法进行两两比较;若方差不齐,则进行数据转换,仍不齐,改用秩和检验,如p值小于0.05,则用dunnett'st3法进行两两比较。

1.试验方法:抗体生成细胞检测(jerne改良玻片法)

每只小鼠腹腔注射2%压积srbc0.2ml,将免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死,取出脾脏放在盛有hank’s的平皿内,磨碎脾脏,制成细胞悬液,经200目筛网过滤,离心(1000r/min)10min,用hank’s液洗2遍,最后将细胞悬浮在5mlrpmi1640培养液中,台酚兰染色计数(应在95%以上),并将细胞浓度调整为5×106个/ml,制成脾细胞悬液。将琼脂糖配制成1%水溶液,水浴煮30分钟,与等量双倍浓度hank’s液混合,分装小试管,每管0.5ml,再向管内加10%(用sa缓冲液配制)压积srbc50μl,脾细胞悬液各20μl做两个平行样,迅速混匀后,倾倒于琼脂糖薄层玻片上,待琼脂凝固后,将玻片水平扣放在片架上,放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h,然后将补体加入到玻片架凹槽内,继续温育1.5h,计数溶血空斑数。补体制备是采集豚鼠血,分离出血清(至少5只豚鼠的混合血清),将1ml压积srbc加入到5ml豚鼠血清中,4℃冰箱放置30min,经常振荡,离心取上清液,分装,-70℃保存。用时以sa缓冲液按1:1.5稀释。试验结果见表1。

表1对小鼠抗体生成细胞的影响

注:*表示与阴性对照相比,具有显著性差异(p<0.05)。

由上表可知,使用了本发明的微生物制剂动物组的溶血空斑数与阴性对照组相比,具有显著性差异,表明本发明的微生物制剂具有增强免疫的作用。

2.试验方法:nk细胞活性测定(乳酸脱氢酶ldh测定法)

颈椎脱臼处死动物,取出脾脏,撕碎,过200目筛网后,用hank’s液洗3次,每次1000r/min离心10min,取细胞浆,灭菌水裂解红细胞,台酚兰染色计数(应在95%以上),用完全1640培养液配成2x107个/ml细胞悬液。将各只小鼠的细胞悬液取300μl分置于96孔培养板中,每孔100μl,每孔加靶细胞(yac-1细胞,4x105个/m)100μl,同时做靶细胞自然释放孔(靶细胞100μl,培养液100μl)及最大释放孔(靶细胞100μ+2.5%triton100μl)各3孔,37℃5%co2培养4小时,取出1500r/min离心5min。将各孔上清液100μl置于另一培养板中,每孔加入100μl基质,10分钟后加1mol/lhcl30μl终止反应,在490nm处测定od值,计算nk细胞活性率。试验结果,见表2。

表2对小鼠nk细胞活性的影响

注:*表示与阴性对照相比,具有显著性差异(p<0.05)。

由上表可知,使用了本发明的微生物制剂动物组的动物的nk细胞活性与阴性对照组相比,有显著性差异(p<0.05),表明本发明的微生物制剂具有增强免疫的作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

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