一种含有非精神活性大麻素的包合物及其制备方法与流程

本发明涉及中药化学和制剂技术领域，具体涉及一种含有非精神活性大麻素的包合物及其制备方法。

背景技术：

包合物是指一种分子被全部或部分包合于另一种分子的空穴结构内形成的特殊的复合物，该复合物是药物分子与包合材料分子通过范德华力结合而成，其中，被包合的分子称为被包合剂或客体分子，具有空穴结构的分子称为包合剂或主体分子。包合物的制备技术作为一种药物制剂技术发展迅速，其在提高难溶性药物的生物利用度、提高药物的稳定性、掩味、油性药物的固体化、掩盖药物的不良气味或味道、调节释放速度、降低药物的刺激性与毒副作用等方面起着重要作用。

大麻中的多酚类成分为其主要活性成分，但该类成分的光稳定性较差，且易于氧化；从目前分离得到的化合物种类来看，主要成分包括以下几种：大麻二酚(cbd)、四氢大麻酚(thc)、次大麻二酚(cbdv)、大麻萜酚(cbg)、δ⁹-四氢化次大麻酚(thcv)、大麻酚(cbn)、大麻色原烯(cbc)等。上述主要成分的结构式如下所示：

其中，cbd、cbdv、cbg、cbc为大麻中的非精神类活性成分，即非精神活性大麻素，thcv、cbn、thc为大麻中的精神活性成分，即精神活性大麻素。

现有技术中对非精神活性大麻素的分离纯化方法集中在仅去除thc的技术。如专利申请cn106278828a公开了采用乙醇作为提取溶剂，结合层析技术去除了大麻中的thc，仅保留大麻二酚的有效成分；cn107337586a公开了从汉麻(即大麻)中提取大麻二酚的方法，其采用大孔吸附树脂吸附大麻二酚，并进一步通过薄层色谱技术纯化获得不含thc的大麻二酚；cn103739585a公开了从工业大麻中提取二氢大麻酚(cbd)的工艺，其通过层析分离的方式纯化cbd。现有的技术目前无法同时去除cbn、thc、thcv等非精神活性大麻素。而仅去除thc，不能同时去除thcv、cbn，这在一定程度上限制了大麻素类药物的开发和应用。

技术实现要素：

为克服现有技术的不足，本发明旨在提供一种含有非精神活性大麻素的包合物及其制备方法。

一方面，本发明提供了一种含有非精神活性大麻素的包合物，其原料包括大麻提取物和包合剂，按照生药原料量计，所述包合剂与大麻提取物的生药原料的重量比例为0.01-10:1(如0.01:1、0.1:1、1:1、3:1、5:1、8:1、10:1)。

进一步地，所述大麻提取物包含非精神活性大麻素和精神活性大麻素。

进一步地，所述包合物中基本不包含精神活性大麻素，此处“基本不包含”是指所述包含物中精神活性大麻素的含量小于0.01％(质量百分数)(甚至小于0.001％)；优选地，所述包含物中不包含精神活性大麻素，即所述包含物中精神活性大麻素的含量为0。

进一步地，所述包合物通过将大麻提取物溶液滴加到包合剂溶液中，经搅拌、分离沉淀并用水-有机溶剂混合液溶解、再分离沉淀并真空干燥得到。

进一步地，所述非精神活性大麻素包括：大麻二酚、次大麻二酚、大麻萜酚、大麻色原烯中的一种或两种以上。

进一步地，所述精神活性大麻素包括：四氢大麻酚、δ⁹-四氢化次大麻酚和大麻酚。

进一步地，所述包合剂为环糊精或其衍生物。

进一步地，上述环糊精选自：α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精中的一种或两种以上任意比例的组合。

进一步地，上述环糊精衍生物选自：2-羟丙基环糊精、3-羟丙基环糊精、支链环糊精、甲基化环糊精、低分子量β-环糊精聚合物(如分子量为3000-6000da)、羧甲基环糊精、硫酸酯环糊精、磷酸酯环糊精、硝酸酯环糊精、环糊精-环氧氯丙烷交联聚合物和大环糊精系列中的一种或两种以上任意比例的组合。

在本发明的一个实施例中，所述包合剂为β-环糊精。

在本发明的另一个实施例中，所述包合剂为2-羟丙基-β-环糊精或3-羟丙基-β-环糊精。

进一步地，所述包合剂溶液为包合剂的水溶液，其中水与上述大麻提取物的生药原料的重量比例为10-40:1(如10:1、15:1、20:1、30:1、35:1、40:1)。

在本发明的一个实施例中，所述大麻提取物是通过将大麻提取物的生药原料经提取，浓缩提取液，纯化，浓缩，得到的稠膏。

进一步地，所述大麻提取物的生药原料选自：大麻叶、大麻花、大麻根、大麻秸秆和大麻种子中的一种或两种以上以任意比例的组合。

在本发明的一个实施例中，所述大麻提取物的生药原料为大麻花和/或大麻叶。

进一步地，所述滴加步骤的温度为25℃-80℃，优选为50-70℃(如50、55、60、65、70℃)。

进一步地，所述搅拌步骤的温度为25℃-80℃，优选为50-70℃(如50、55、60、65、70℃)。

进一步地，所述搅拌的时间为0.5-4小时(如0.5、1、2、3、4小时)。

进一步地，所述水-有机溶剂混合液中，水与有机溶剂的体积比为1:1-5(如1:1、1:2、1:3、1:4、1:5)。

进一步地，所述水-有机溶剂混合液中，有机溶剂选自：乙醇、甲醇、异丙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种以上任意比例的组合。

在本发明的一个实施方式中，所述水-有机溶剂混合液为水-乙醇混合液(如50％-80％的乙醇溶液)。

进一步地，所述包合物包含非精神活性大麻素和环糊精或其衍生物(如β-环糊精、2-羟丙基-β-环糊精、3-羟丙基-β-环糊精)，其中所述非精神活性大麻素的总含量为50％以上(如50％-60％)，且所述包合物中不包含精神活性大麻素。

另一方面，本发明提供了一种上述含有非精神活性大麻素的包合物的制备方法，其包括如下步骤：

(1)将大麻提取物用有机试剂溶解，得到大麻提取物溶液；

(2)称取包合剂，溶于水中，得到包合剂溶液；

(3)将步骤(1)所得溶液缓慢滴加至步骤(2)所得包合剂溶液中，于25℃-80℃搅拌，然后降温至室温后冷藏，过滤，收集滤饼1；

(4)将步骤(3)所得滤饼1，加水-有机溶剂混合液搅拌溶解，过滤，收集滤饼2；

(5)将步骤(4)所得滤饼2真空干燥，即得含有非精神活性大麻素的包合物。

在本发明中，步骤(1)的大麻提取物为从生药原料中提取得到的含大麻素成分(包括精神活性大麻素和非精神活性大麻素，其中精神活性大麻素包括：四氢大麻酚、大麻酚、δ⁹-四氢化次大麻酚中的一种或两种以上)的提取物。在本发明的一个实施方式中，步骤(1)的大麻提取物是通过将生药原料经提取，浓缩提取液，纯化，浓缩，得到的稠膏。

进一步地，所述大麻提取物的生药原料选自：大麻叶、大麻花、大麻根、大麻秸秆和大麻种子中的一种或两种以上以任意比例的组合。

在本发明的一个实施例中，所述大麻提取物的生药原料为大麻花和/或大麻叶。

在本发明的一个实施例中，上述纯化为通过柱层析纯化。

进一步地，步骤(1)的大麻提取物通过以下步骤制得：将生药原料用乙醇溶液提取，得到提取液，将提取液浓缩，经柱层析，洗脱，将洗脱液浓缩。其中，乙醇溶液浓度可为60-95％(v/v，如60％、70％、75％、80％、90％、95％)；柱层析所用的层析柱填料可为苯乙烯型大孔树脂；洗脱可包括依次用水、50-60％乙醇、80-90％乙醇洗脱，收集80-90％乙醇洗脱液。

另外，步骤(1)的大麻提取物也可采用现有技术中的大麻提取物或采用现有制备方法制得。

进一步地，步骤(1)中的有机溶剂选自：乙醇、甲醇、异丙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种以上任意比例的组合。

进一步地，所述包合剂为环糊精或其衍生物。

进一步地，上述环糊精选自：α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精中的一种或两种以上任意比例的组合。

进一步地，上述环糊精衍生物选自：2-羟丙基环糊精、3-羟丙基环糊精、支链环糊精、甲基化环糊精、低分子量β-环糊精聚合物(如分子量为3000-6000da)、羧甲基环糊精、硫酸酯环糊精、磷酸酯环糊精、硝酸酯环糊精、环糊精-环氧氯丙烷交联聚合物和大环糊精系列中的一种或两种以上任意比例的组合。

在本发明的一个实施例中，所述包合剂为β-环糊精。

在本发明的另一个实施例中，所述包合剂为2-羟丙基-β-环糊精或3-羟丙基-β-环糊精。

进一步地，步骤(2)的包合剂与步骤(1)的大麻提取物的生药原料(如大麻花和/或大麻叶)的重量比例为0.01-10:1(如0.01:1、0.1:1、1:1、3:1、5:1、8:1、10:1)。

进一步地，步骤(2)的水与步骤(1)的大麻提取物的生药原料(如大麻花和/或大麻叶)的重量比例为10-40:1(如10:1、15:1、20:1、30:1、35:1、40:1)。

进一步地，步骤(3)中的溶解为加热搅拌溶解或室温搅拌溶解；其中，加热温度可为50-70℃(如50、55、60、65、70℃)。

进一步地，步骤(3)中搅拌温度为50-70℃(如50、55、60、65、70℃)。

进一步地，步骤(3)中搅拌时间为0.5-4小时(如0.5、1、2、3、4小时)。

进一步地，步骤(3)中冷藏时间为12-24小时(如12、16、20、24小时)。

进一步地，步骤(4)中的水-有机溶剂混合液中，水与有机溶剂的体积比为1:1-5(如1:1、1:2、1:3、1:4、1:5)。

进一步地，步骤(4)中的水-有机溶剂混合液中，有机溶剂选自：乙醇、甲醇、异丙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种以上任意比例的组合。

在本发明的一个实施方式中，步骤(4)中的水-有机溶剂混合液为水-乙醇混合液(如50％-80％的乙醇溶液)。

进一步地，步骤(4)中搅拌温度为20-30℃(如20、25、30℃，如室温)。

进一步地，步骤(4)中搅拌时间为0.5-3小时(如0.5、1、2、3小时)。

另一方面，本发明还提供一种药物组合物，其包含上述包合物和药学上可接受的载体。

另一方面，本发明还提供一种上述包合物在制备药物、医疗美容产品和化妆品中的应用。

另一方面，本发明还提供一种上述包合物的制备方法在制备药物、医疗美容产品和化妆品中的应用。

本发明中的大麻可以是来自各产地各亚种的大麻，包括但不限于产自印度、中亚、不丹、尼泊尔、锡金、中国的大麻、sativa和indica亚种。

本发明中的各种试剂可以根据需要选用符合检测、医用、药用标准的国产或进口试剂。

为了有效去除大麻中的精神活性成分，本发明首次将包合物的制备技术应用到具有精神活性大麻素类成分的去除工艺中。通过包合技术，本发明可以高选择性地优先包合cbd、cbdv、cbg、cbc等非精神活性大麻素，而thcv、cbn、thc等精神活性大麻素的选择性包合作用较弱，其通过水或水-有机溶剂混合液易于被过滤和洗涤去除，因此，可极大程度地保留非精神活性成分，洗涤后的包合物将极大地提高非精神活性成分的稳定性，且利于后续制剂成型。

本发明提供了富集、纯化含有非精神活性大麻素的制备方法以及制备的含有非精神活性大麻素的包合物。所用的原辅料、试剂和仪器价廉易得，且得到的包合物可直接作为制剂中间体，利于后续制剂成型，采用的操作和方法简单，易于实现工业化，可用于药用领域。

附图说明

图1所示为本发明实施例1步骤(2)中乙醇溶液的液相色谱图。

图2所示为本发明实施例1步骤(5)中滤液1的液相色谱图。

图3所示为本发明实施例1步骤(5)中滤液2的液相色谱图。

图4所示为本发明实施例1步骤(5)中滤饼2的真空干燥物的液相色谱图。

具体实施方式

除非另有定义，本文使用的所有的技术和科学术语具有与本发明涉及领域的技术人员通常理解的相同的含义，如在本发明中出现的以下缩写及其对应的物质为：

cbdv次大麻二酚

cbd大麻二酚

cbg大麻萜酚

cbn大麻酚

thcvδ⁹-四氢化次大麻酚

thc四氢大麻酚

cbc大麻色原烯

在本发明中，术语“大麻素”指大麻植物中特有的含有烷基和单萜基团分子结构的一类次生代谢产物，例如，cbd、thc、cbdv、cbg、thcv、cbn、cbc等(如“陈璇，杨明，郭鸿彦.大麻植物中大麻素成分研究进展，植物学报，2011，46(2)：197-205”所描述)。精神活性物质是指影响人类情绪、行为，改变意识状态，并由致依赖作用的一类化学物质，在本发明中，术语“精神活性大麻素”是指具有上述精神活性的大麻素，如thc、cbn、thcv等，而“非精神活性大麻素”是指不具有上述精神活性的大麻素，如cbd、cbdv、cbg、cbc等。

术语“生药”指的是纯天然未经过加工或者简单加工后的植物类、动物类和矿物类中药材。在本发明中，所述的大麻提取物的生药即大麻药材，其药用部位包括叶、花、根、秸秆、种子等。

为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明，其目的仅在于更好理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围。

实施例1

含有非精神活性大麻素的包合物的制备步骤如下：

(1)取大麻花叶药材10kg，加入75％乙醇100kg，室温搅拌提取1小时，提取2次，合并提取液，减压浓缩密度为1.014(50℃)，经苯乙烯型大孔树脂柱纯化，上样完毕后，静置吸附30分钟后，依次用5倍柱体积的纯化水、3倍柱体积的55％乙醇、6倍体积的85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，减压浓缩至稠膏；

(2)将步骤(1)得到的稠膏加入95％(v/v，下同)乙醇适量，搅拌溶解，得到乙醇溶液；

(3)称取β-环糊精50kg，加入300kg的纯化水，60℃加热搅拌溶解，得到包合剂溶液；

(4)将步骤(2)得到的乙醇溶液缓慢滴加至步骤(3)得到的包合剂溶液中，60℃条件下保温搅拌4h至滴加完毕，然后降温至室温后冷藏18h；

(5)将步骤(4)得到的冷藏液过滤，收集滤液1和滤饼1，滤饼1加入65％乙醇，在30℃下搅拌溶解滤饼1h，过滤，收集滤液2和滤饼2，将滤饼2真空干燥，即得到非精神活性大麻素的包合物；

(6)分别检测步骤(2)所得的乙醇溶液、步骤(5)所得的滤液1、滤液2及滤饼2的真空干燥物中的cbdv、cbd、cbg、thcv和thc等成分的含量。

样品检测分析方法如下：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相a，以0.1％甲酸乙腈为流动相b，按如下洗脱程序洗脱；检测波长为220nm。理论板数按cbd峰计算应不低于5000：

洗脱时间为0-6分钟时，流动相的体积浓度：流动相a：30％，流动相b：余量；洗脱时间为6-12分钟时，流动相的体积浓度：流动相a：由30％梯度变化为23％，流动相b：余量；洗脱时间为12-22分钟时，流动相的体积浓度：流动相a：23％，流动相b：余量；洗脱时间为22-22.2分钟时，流动相的体积浓度：流动相a：由23％梯度变化为30％，流动相b：余量；洗脱时间为22.2-26分钟时，流动相的体积浓度：流动相a：30％，流动相b：余量。

对照品溶液的制备：精密称取cbd对照品，加甲醇制成每1ml各含0.15mg的对照品溶液，即得；精密称取cbdv对照品，加甲醇制成每1ml各含0.01mg的对照品溶液，即得；精密称取thcv对照品，加甲醇制成每1ml各含0.01mg的对照品溶液，即得；精密称取cbg对照品，加甲醇制成每1ml各含0.01mg的对照品溶液，即得；精密称取thc对照品，加甲醇制成每1ml各含0.01mg的对照品溶液，即得；精密称取cbc对照品，加甲醇制成每1ml各含0.01mg的对照品溶液，即得。

供试品溶液的制备：①取乙醇溶液或滤液1.5ml，加甲醇定容至5ml，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；②取滤饼2.5g，加甲醇定容至50ml，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

乙醇溶液检测色谱图如图1所示，其中，保留时间和对应的物质如下：5.105为cbdv，8.099为cbg，8.517为cbd，8.384为thcv，15.354为thc，19.106为cbc。

滤液1的检测色谱图如图2所示，其中，保留时间和对应的物质如下：5.111为cbdv，8.253为cbg，8.536为cbd，9.402为thcv，15.367为thc。

滤液2的检测色谱图如图3所示，其中，保留时间和对应的物质如下：5.101为cbdv，8.518为cbd，9.3976为thcv，15.363为thc，19.099为cbc。

滤饼2的干燥物的检测色谱图如图4所示，其中保留时间和对应的物质如下：5.073为cbdv，8.049为cbg，8.467为cbd，19.011为cbc。

结果：本实施例制备得到的非精神活性大麻素的包含物中，大麻素类物质总含量为55.5％，未检测到thcv和thc。

实施例2

含有非精神活性大麻素的包合物的制备步骤如下：

(1)取大麻花叶药材10kg，加入95％乙醇100kg，室温搅拌提取0.5小时，提取4次，合并提取液，减压浓缩密度为1.014(50℃)，经苯乙烯型大孔树脂柱纯化，上样完毕后，静置吸附30分钟后，依次用5倍柱体积的纯化水、3倍柱体积的55％乙醇、6倍体积的85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，减压浓缩至稠膏；

(2)将步骤(1)得到的稠膏加入95％异丙醇适量，搅拌溶解，得到异丙醇溶液；

(3)称取2-羟丙基-β-环糊精10kg，加入100kg的纯化水，70℃加热搅拌溶解，得到包合剂溶液；

(4)将步骤(2)得到的异丙醇溶液缓慢滴加至步骤(3)得到的包合剂溶液中，70℃条件下保温搅拌0.5h至滴加完毕，搅拌降温至室温后冷藏12h；

(5)将步骤(4)得到的冷藏液过滤，收集滤液1和滤饼1，滤饼1加入80％异丙醇，在20℃下搅拌溶解滤饼3h，过滤，收集滤液2和滤饼2，将滤饼2真空干燥，即得到非精神活性大麻素的包合物；

(6)检测步骤(5)所得滤饼2的真空干燥物中的cbdv、cbd、cbg、thcv和thc等成分的含量，检测方法和步骤参照实施例1相关方法和步骤。

结果：本实施例制备得到的非精神活性大麻素的包含物中，大麻素类物质总含量为50.5％，未检测到thcv和thc。

实施例3

含有非精神活性大麻素的包合物的制备步骤如下：

(1)取大麻花叶药材10kg，加入75％乙醇150kg，室温搅拌提取1小时，提取3次，合并提取液，减压浓缩密度为1.014(50℃)，经苯乙烯型大孔树脂柱纯化，上样完毕后，静置吸附30分钟后，依次用5倍柱体积的纯化水、3倍柱体积的55％乙醇、6倍体积的85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，减压浓缩至稠膏；

(2)将步骤(1)得到的稠膏加入丙酮适量，搅拌溶解，得到丙酮溶液；

(3)称取3-羟丙基-β-环糊精100kg，加入400kg的纯化水，50℃加热搅拌溶解，得到包合剂溶液；

(4)将步骤(2)得到的丙酮溶液缓慢滴加至步骤(3)得到的包合剂溶液中，50℃条件下保温搅拌2h至滴加完毕，降温至室温后冷藏24h；

(5)将步骤(4)得到的冷藏液过滤，收集滤液1和滤饼1，滤饼1加入50％丙酮，在25℃下搅拌溶解滤饼0.5h，过滤，收集滤液2和滤饼2，将滤饼2真空干燥，即得到非精神活性大麻素的包合物；

(6)检测步骤(5)所得滤饼2的真空干燥物中的cbdv、cbd、cbg、thcv和thc等成分的含量，检测方法和步骤参照实施例1相关方法和步骤。

结果：本实施例制备得到的非精神活性大麻素的包含物中，大麻素类物质总含量为52.4％，未检测到thcv和thc。

实施例4

含有非精神活性大麻素的包合物的制备步骤如下：

(1)取工业大麻花叶原料药材10kg，参照中国申请cn109568389a实施例1的实验步骤(1)-(7)，制备得到大麻提取物稠膏；

(2)将步骤(1)得到的稠膏加入乙醇适量，搅拌溶解，得到乙醇溶液；

(3)称取β-环糊精30kg，加入200kg的纯化水，65℃加热搅拌溶解，得到包合剂溶液；

(4)将步骤(2)得到的丙酮溶液缓慢滴加至步骤(3)得到的包合剂溶液中，65℃条件下保温搅拌4h至滴加完毕，降温至室温后冷藏20h；

(5)将步骤(4)得到的冷藏液过滤，收集滤液1和滤饼1，滤饼1加入80％乙醇25℃搅拌溶解滤饼1.5h，过滤，收集滤液2和滤饼2，将滤饼2真空干燥，即得到非精神活性大麻素的包合物；

(6)检测步骤(5)所得滤饼2的真空干燥物中的cbdv、cbd、cbg、thcv和thc等成分的含量，检测方法和步骤参照实施例1相关方法和步骤。

结果：本实施例制备得到的非精神活性大麻素的包含物中，大麻素类物质总含量为65.8％，未检测到thcv和thc。而根据中国申请cn109568389a记载，其实施例1所得大麻提取物中含4.1％thcv，可见采用本发明的方法制备的水合物，可高选择性地保留非精神性大麻素，排除精神活性大麻素。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。