一种治疗免疫细胞失衡、异型细胞生长的血栓性疾病的中药组合物及其应用的制作方法

本发明涉及中药技术领域，具体地说，是一种治疗免疫细胞失衡、异型细胞生长的血栓性疾病的中药组合物及其应用。

背景技术：

血栓形成和血栓栓塞，临床上称为血栓性疾病。分为动脉性血栓、静脉性血栓和毛细血管性血栓，严重威胁人类的生命健康，其发病率高居各种疾病之首，且近年来还有渐增之势，是当代医学研究的重点和热点之一。

传统认为血栓形成机制是凝血功能亢进、血流缓慢和血管壁损伤。随着科学研究的深入，近年来认为血栓形成是一个炎症过程，与免疫功能状态相关的炎症反应。血栓性疾病，无论是在动脉还是在静脉，都是全身性疾病在局部的表达。

十九世纪末至今，血栓性疾病的治疗聚焦在针对特定靶点的抗凝和抗栓治疗，但预防与康复血栓性疾病的效果不佳。目前治疗血栓性疾病的中药有多种，但诸药成分各异，疗效不一，且从实践中可知，效果并不理想，有复发的可能性。

中国专利申请：cn100431579c公开了一种治疗下肢静脉血栓形成和血栓性浅静脉炎的药物，其组成包括：中药，所述的中药包括：丹参、王不留行、土茯苓、三七、大蓟、玄参和川牛膝，其重量份数为丹参3～5、王不留行3～7、土茯苓5～20、三七0.5～3、大蓟3～5、玄参1～5、川牛膝1.5～3。但该专利中原料药数目较多，这为患者增加了经济负担且制备较麻烦。

针对上述存在的不足，发明人经过长期系统的研究，提出了血栓形成机制的新认识，即免疫细胞平衡功能崩溃下，机体排除异型抗原的炎症反应。中医中药作为民族瑰宝，认为疾病是一种系统性疾病，在调节免疫细胞平衡功能，抑制炎症反应方面具有独特优势。发明人研究出了本发明一种治疗血栓性疾病的中药组合物及其应用，所述的中药组合物各组分综合作用，可有效调节免疫细胞平衡，抑制异型细胞，抗血栓形成。

技术实现要素：

本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种治疗血栓性疾病的中药组合物。

本发明的第二个目的是针对现有技术的不足，提供如上所述中药组合物的应用。

本发明的第三个目的是针对现有技术的不足，提供如上所述中药组合物的制备方法。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种治疗血栓性疾病的中药组合物，所述组合物由以下重量份的原料药制成：三七1-5份、黄芪10-50份、金银花5-25份。

作为本发明的一个优选实施方案，所述组合物由以下重量份的原料药制成：三七2-4份、黄芪20-40份、金银花10-20份。

作为本发明的一个优选实施方案，所述组合物由以下重量份的原料药制成：三七3份、黄芪30份、金银花15份。

作为本发明的一个优选实施方案，按照中药常规制备方法制备成临床上可接受的药物制剂，所述药物制剂为颗粒剂、散剂、胶囊剂、片剂、合剂或口服液。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述中药组合物在制备治疗血栓性疾病的药物中的应用。

作为本发明的一个优选实施方案，如上任一所述中药组合物在制备调节免疫细胞平衡、抑制异型细胞的药物中的应用。

作为本发明的一个优选实施方案，所述血栓性疾病是动脉性血栓、静脉性血栓和毛细血管性血栓。

如上任一所述中药组合物在制备抑制巨噬细胞炎性细胞因子表达的药物中的应用，所述细胞因子是tnf-α、il-1、il-6、inos、ccl-2、icam-1。

如上任一所述中药组合物在制备抑制iκb-α降解和抑制nf-κb核内转移的药物中的应用。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取原料药：三七、黄芪，加水煎煮0.5-1.5小时；

(2)加入金银花，煎煮20-40分钟；

(3)沥出汁水，沉淀取清液，装瓶备用；

(4)整个制备过程，只需煎一次即可。

本发明优点在于：

1、本发明的中药组合物相辅相成，符合中医理论，各组分综合作用，可有效调节免疫细胞平衡，抑制异型细胞，抗血栓形成。

2、本发明的中药组合物经实验证实，可显著减少小鼠血栓形成重量，对于调节免疫细胞平衡，抑制异型细胞，抵抗血栓形成效果显著。

3、本发明选取的原料药数目少、来源广泛、制备方法简单，同时原料药之间的配比是经过试验筛选得到的最佳配比。本发明既为患者减轻了经济负担，又具有治疗效果佳的优点，具有很强的实用性，具有很好的应用前景。

附图说明

附图1是各组il-1，il-6，inos和tnf-α转录水平的mrna表达。

附图2是各组nf-kb和ikb-a表达。

附图3是qrt-pcr检测各组ccl-2，il-6，icam-1和tf的mrna水平。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

以下实施例中所述tj2均是指取实施例9所述中药组合物并按照口服液常规制剂方法制备得到的药物。

实施例1一种治疗血栓性疾病的中药组合物(一)

按比例取中药原料药：三七1份、黄芪50份、金银花5份。

实施例2一种治疗血栓性疾病的中药组合物(二)

按比例取中药原料药：三七5份、黄芪10份、金银花25份。

实施例3一种治疗血栓性疾病的中药组合物(三)

按比例取中药原料药：三七1份、黄芪10份、金银花25份。

实施例4一种治疗血栓性疾病的中药组合物(四)

按比例取中药原料药：三七5份、黄芪50份、金银花5份。

实施例5一种治疗血栓性疾病的中药组合物(五)

按比例取中药原料药：三七2份、黄芪40份、金银花10份。

实施例6一种治疗血栓性疾病的中药组合物(六)

按比例取中药原料药：三七4份、黄芪20份、金银花20份。

实施例7一种治疗血栓性疾病的中药组合物(七)

按比例取中药原料药：三七2份、黄芪20份、金银花20份。

实施例8一种治疗血栓性疾病的中药组合物(八)

按比例取中药原料药：三七4份、黄芪40份、金银花10份。

实施例9一种治疗血栓性疾病的中药组合物(九)

按比例取中药原料药：三七3份、黄芪30份、金银花15份。

实施例10汤剂的制备

取实施例1-9任一所述的中药组合物，加水按照常规方法煎煮。即按照重量份配比取中药原料药，加水煎煮成汤剂。

实施例11颗粒剂的制备

按照实施例1-9任一所述配比取原料药：三七、黄芪，加水煎煮0.5-1.5小时；然后加入金银花，煎煮20-40分钟；沥出汁水，滤过，滤液浓缩，待冷却至室温；上清液浓缩，加水，搅拌，静置，取上清液浓缩成清膏。取清膏，制成颗粒。整个制备过程，只需煎一次即可。

实施例12片剂/胶囊的制备

按照实施例1-9任一所述配比取原料药：三七、黄芪，加水煎煮0.5-1.5小时，之后加入金银花，煎煮20-40分钟；滤过，滤液浓缩，待冷却至室温；取上清液，浓缩至稠浸膏；加入制药辅料，真空干燥，粉碎制粒，压制成片剂或填充装胶囊。整个制备过程，只需煎一次即可。

实施例13动物实验(一)

本实验是先制备小鼠深静脉血栓形成模型，然后对其用药，测量小鼠下肢静脉血栓重量。

一、实验动物：

40只雄性c57bl/6j小鼠，7–8周龄，18-22g，购于charlesriverlaboratories(maastricht,thenetherlands)。

二、实验方法：

1、小鼠深静脉血栓模型的制备

将40只雄性c57bl/6j小鼠按照ivc结扎制作小鼠深静脉血栓形成模型，方法如下：

先腹腔注射1％戊巴比妥钠(01ml/20g)麻醉小鼠后，固定并腹部消毒后沿其腹白线逐层打开腹腔，切口不能太大，下至凝固腺，上至露出肝脏一角即可。将腹腔内小肠等器官拖出放置于小鼠左侧，暴露出下腔静脉，动作要轻柔，避免损伤器官，拖出的器官用浸润过生理盐水的纱布包裹，防止长期置于空气中造成脱水。移至体视显微镜下，钝性分离血管周围结缔组织，暴露下腔静脉及其分支，在肾静脉下方将腹主动脉和下腔静脉剥离开，然后用7/0缝合线将下腔静脉结扎，之后逐个将其分支结扎。按解剖位置将肠道等器官放回腹腔，在腹腔中加入1％氨苄溶液0.2ml，防止感染。用5/0缝合线逐层缝合腹腔，术后置于25～28℃的环境中，直至小鼠复苏。

2、动物分组：

将40只深静脉血栓模型小鼠按照随机数字表法随机分为5组：生理盐水组(对照组)8只，对比一组8只，对比二组8只，对比三组8只，实验组8只，小鼠造模完成24h后开始对每组小鼠给药，实验组小鼠按照实施例9的配比取原料药，对比一组小鼠按照实施例1的配比取原料药，对比二组小鼠按照实施例4的配比取原料药，对比三组小鼠按照实施例7的配比取原料药，并按照口服液常规制剂方法制备成口服液，然后每天按50g/kg的剂量饲胃。对照组每天饲胃等量的生理盐水。连续服用14d。测量各组深静脉血栓重量。

三、实验结果：

各组小鼠静脉血栓重量的结果见表1。

表1各组小鼠静脉血栓重量(mg)

表1表明实施例9动物中药组合物使模型小鼠的血栓重量降低14.18％，其余各组无显著差异。

实施例14动物实验(二)

本实验采用细胞试验法测试本发明的中药组合物对腹腔巨噬细胞炎性因子的影响。

一、实验动物：

雄性c57bl/6j小鼠，7–8周龄，18-22g，购于charlesriverlaboratories(maastricht,thenetherlands)。

按照常规提取方法提取小鼠的腹腔巨噬细胞。

二、实验方法：

将提取到的小鼠腹腔巨噬细胞分为两组，分别为试验组和空白组，试验组用5mmtj2预处理24小时，然后用100μg/mllps刺激6小时。qrt-pcr检测小鼠il-1，il-6，inos和tnf-α的mrna水平。空白组直接用100μg/mllps刺激6小时。qrt-pcr检测il-1，il-6，inos和tnf-α的mrna水平。

三、实验结果：

各组il-1，il-6，inos和tnf-α转录水平的mrna表达见图1。

图1表明本发明的中药组合物可通过抑制il-1、il-6、inos和tnf-α的mrna表达，来下调lps刺激的巨噬细胞炎性因子分泌。

实施例15动物实验(三)

本实验采用细胞法测试本发明的中药组合物对raw264.7巨噬细胞lps诱导的nf-kb和ikb-a表达的影响。

一、实验细胞：

raw264.7巨噬细胞(中国科学院生物化学与细胞生物学研究所提供)。

二、实验方法：

western-blot检测raw264.7巨噬细胞经lps诱导的nf-kb和ikb-a表达。

三、实验结果：

各组nf-kb和ikb-a表达见图2。图2表明，nf-κb核p65亚单位的蛋白质表达水平在细胞暴露于lps后显著增加，表明lps诱导了nf-κbp65从细胞浆向细胞核内转移。然而，tj2预处理可降低lps诱导的nf-κbp65向细胞核中转移。此外，iκb-α在暴露于lps后表现出降解，tj2阻断了lps诱导的iκb-α的降解。这些结果表明，tj2可通过抑制iκb-α降解和nf-κb核内转移来抑制raw264.7细胞中的nf-κb激活。

实施例16动物实验(四)

本实验通过细胞法测试本发明的中药组合物对haec和huvec影响。

一、实验细胞：

haec和huvec(科佰生物提供)。

二、实验方法：

haec和huvec用5mmtj2预处理24小时，然后用100μg/mlil-1刺激6小时。qrt-pcr检测ccl-2，il-6，icam-1和tf的mrna水平。

三、实验结果：

qrt-pcr检测各组ccl-2，il-6，icam-1和tf的mrna水平见图3。如图3所示，il-1刺激细胞ccl-2，il-6，icam-1和tf的mrna表达上调，而用tj2预处理可以显著抑制ccl-2，il-6，icam-1和tf的mrna表达上调。

本发明的中药组合物具有调节免疫细胞平衡功能、抑制异型细胞的功效，能用于血栓性疾病的治疗、预防和康复。能显著减少患者血栓形成重量，为患者提供了新的治疗途径，且本发明选取的原料药数目少、来源广泛、制备方法简便，既具有疗效佳的优点，也为患者减轻了经济负担，具有很强的实用性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。