靶向her2的治疗剂
技术领域：
：1.本披露涉及her2靶向疗法的领域。
背景技术：
：：2.工程化支架蛋白(esp)作为放射性核素分子成像中的特异性靶向载体越来越受到关注(krasniqi2018)。esp具有许多吸引人的特征，诸如在原核宿主中高效且廉价地产生，或甚至通过肽合成。此外，它们在广泛的温度和ph范围内显示高稳定性，从而有利于使用各种各样的标记方法。另外，它们的高稳定性和突变耐受性促进对多聚体、多特异性和多功能构建体进行工程化的简易性。“adapt”是衍生自蛋白g的小(46个氨基酸)白蛋白结合结构域(abd)的esp(nilvebranthobers2013)。使用adapt6展示了使用adapt作为成像探针的可行性，该adapt6显示对人表皮生长因子受体2型(her2)具有高亲和力(garousi2015)。然而，在经由肾小球滤过清除之后通过高肾重吸收，已经排除了基于adapt6的放射性核素疗法的使用。共注射l-赖氨酸或佳乐施(gelofusine)不能减少重吸收(lindbo2016)。因此，需要其他策略来允许治疗性用途。技术实现要素：3.本发明的诸位发明人已经认识到，与血清白蛋白非共价结合是延长循环半衰期、增加生物利用度和减少经历肾清除的小治疗剂的肾摄取的一种可能策略。4.本披露的一个目标是提供一种克服现有技术的至少一些缺点的靶向her2的治疗剂。5.为满足这一目标，提供了一种包含融合蛋白和细胞毒性放射性核素的治疗性缀合物，该细胞毒性放射性核素与该融合蛋白结合，其中：-该融合蛋白包含her2结合区(hbr)、白蛋白结合区(abr)和间隔区；-该间隔区的氨基酸的数量为至少7，诸如7-30；-该hbr包含选自以下的氨基酸序列：i)lax3akx6tx8x9yhlx13x14x15gvx18dx20ykx23lidkx28ktvex33vx35ax37yx39x40ilx43alp(seqidno:36)，其中彼此独立地，x3选自a、g、p、s和v；x6选自d和e；x8选自a和v；x9选自l和n；x13选自d和t；x14选自k和r；x15选自i、l、m、t和v；x18选自s和a；x20选自f、y和a；x23选自d和r；x28选自a和v；x33选自g、s和d；x35选自k、m和r；x37选自l和r；x39选自a、f和l；x40选自a和e；并且x43选自a、h、k、p、r、t、q和y；以及ii)与i)中定义的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；并且-该abr包含选自以下的氨基酸序列：a)lax3akx6x7ax9x10eldx14ygvsdx20ykx23lix26x27aktvegvx35alx38x39x40ilx43x44lp(seqidno:37)，其中彼此独立地，x3选自e、s、q和c；x6选自e、s、v和c；x7选自a、l和s；x9选自l和n；x10选自a、s和r；x14选自a、s、c和k；x20选自y和f；x23选自n、d和r；x26选自n、d和e；x27选自n和k；x35选自k和e；x38选自i和k；x39选自d、e和l；x40选自a、e和h；x43选自a和k；x44选自a、s和e；位置45中的l存在或不存在；并且位置46中的p存在或不存在；以及b)与a)中定义的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。6.在一个实施例中，该细胞毒性放射性核素典型地通过基于螯合剂的缀合或共价缀合与该融合蛋白的末端(优选地c末端)偶联。7.在一个实施例中，该间隔区将该hbr的c末端与该abr的n末端连接。8.在一个实施例中，该abr包含氨基酸序列lax3akx6x7ax9x10eldx14ygvsdx20ykx23lix26x27aktvegvx35alx38x39x40ilaalp(seqidno:38)，其中彼此独立地，x3选自e和s；x6选自e和v；x7选自a和l；x9选自l和n；x10选自a和r；x14选自a、s、c和k，优选地a、s和k；x20选自y和f；x23选自n、d和r；x26选自n和d；x27选自n和k；x35选自k和e；x38选自i和k；x39选自d和l；x40选自a、e和h；位置45中的l存在或不存在；并且位置46中的p存在或不存在。9.在一个实施例中，该abr包含氨基酸序列laeakx6x7anx10eldx14ygvsdfykrlix26kaktvegvealkx39x40ilaalp(seqidno:39)，其中彼此独立地，x6选自e和v；x7选自a和l；x10选自a和r；x14选自s和k；x26选自n和d；x39选自d和l；并且x40选自a和h。10.在一个实施例中，该abr包含选自下组的氨基酸序列或由其组成，该组由以下组成：laeakvlanreldkygvsdfykrlinkaktvegvealklhilaalp(seqidno:1)；laeakeaanaeldsygvsdfykrlidkaktvegvealkdailaalp(seqidno:2)；glaeakeaanaeldsygvsdfykrlidkaktvegvealkdailaalp(seqidno:3)；laeakvlanreldkygvsdyyknlinnaktvegvkalideilaalp(seqidno:4)；以及laeakvlalreldkygvsdyykdlidkaktvegvkalideilaalp(seqidno:5)。11.在氨基酸序列i)的一个实施例中：x3选自a、g、p；x6是e；x9是l；x13是d；x14是r；x15选自l和v；x18选自s和a；x20选自f、y和a；x28是a；x33是g；x35选自k和r；x37是l；x39选自f和l；x40是e；并且x43选自h、p和r。12.在一个实施例中，该hbr包含选自下组的氨基酸序列或由其组成，该组由以下组成：laaaketalyhldrlgvadaykdlidkaktvegvkaryfeilhalp(seqidno:6)；laaaketalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvralyleilpalp(seqidno:7)；lapaketalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvralyfeilhalp(seqidno:8)；laaaketalyhldrlgvsdyykdlidkaktvegvkalyfeilhalp(seqidno:9)；lapaketalyhldrlgvsdyykdlidkaktvegvralyleilkalp(seqidno:10)；lagaketalyhldrlgvsdyykdlidkaktvegvralyleiltalp(seqidno:11)；lapaketalyhldrlgvsdyykdlidkaktvegvralyfeilralp(seqidno:12)；lagaketalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvralyleilralp(seqidno:13)；laaaketalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvmalyaeilpalp(seqidno:14)；lagaketalyhldktgvsdyykdlidkaktvegvralyleilqalp(seqidno:15)；laaaketalyhltrvgvsdyykdlidkaktvegvralyfeilyalp(seqidno:16)；以及lasakdtalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvralyaeilaalp(seqidno:17)。13.在一个实施例中，该细胞毒性放射性核素选自下组，该组由以下组成：177lu、90y、188re；186re；166ho、153sm、67cu、64cu、149tb、161tb、47sc；225ac；212pb；213bi、212bi、227th、223ra；58mco、131i、76as、77as和211at。14.在一个实施例中，该细胞毒性放射性核素的组限于177lu、90y、131i、153sm、225ac；188re和186re。15.在一个实施例中，该放射性核素是放射性金属，并且该融合蛋白通过螯合剂与该放射性金属缀合，该螯合剂与该融合蛋白、优选地与该融合蛋白的半胱氨酸(c)残基共价结合。因此，该融合蛋白的一个实施例进一步包含末端半胱氨酸(c)残基，优选地c末端半胱氨酸(c)残基。该末端半胱氨酸(c)残基优选地是该融合蛋白的唯一半胱氨酸(c)残基。16.在一个实施例中，该间隔区的氨基酸的数量为至少8，诸如8-30、诸如8-20、优选地8-14、更优选地10-14。17.在一个实施例中，该间隔区包含氨基酸序列sssg的重复序列。18.在一个实施例中，该治疗性缀合物包含不超过150个氨基酸残基，诸如不超过130个氨基酸残基。19.在一个实施例中，该融合蛋白进一步包含具有氨基酸序列deavdans(seqidno:25)的另外区域。在这种实施例中，该另外区域可以从该hbr的n末端延伸。20.本披露进一步提供了一种药物组合物，该药物组合物包含以上提及的治疗性缀合物和药学上可接受的载剂。mg-deavdans-adaptneg-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu(单次注射)。40.在图16a中：虚线代表mg-deavdans-adaptneg-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu(单次注射)；点线代表mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu(单次注射)；并且实线代表mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu(两次注射)。41.在图16b中：点线代表mg-deavdans-adaptneg-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu(单次注射)；点线代表mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota(未标记的)；并且实线代表pbs。具体实施方式42.adapt6在临床前和临床成像应用中均显示出巨大的前景，这主要是因为其大小较小并且血液清除速度快。然而，大小较小并且因此肾脏摄取的量较大也阻止了进一步的治疗性用途。在本披露中，已利用半衰期延长策略，其中感兴趣的蛋白质与基于蛋白g的白蛋白结合结构域(abd)的序列融合，以利用患者自身血清白蛋白的长半衰期。43.我们的基于hbr-abr的融合蛋白的分子设计允许产生能够正确折叠并与白蛋白和her2两者高亲和力结合的探针(表1)。融合蛋白在热变性后重折叠的能力允许使用高温进行标记，例如用177lu标记，这应确保高偶联稳定性(price2014)。实际上，该标记在大摩尔过量的edta的刺激下是稳定的，并且177lu标记的融合蛋白的结合特异性和亲和力没有受到损害(表4)。使用残留177lu标记的细胞加工研究表明，mg-deavdans-abd035-(sssg)3-adapt6-gssc-dota-177lu和mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu内化缓慢，与非融合adapt6的程度相同(图8)。这可能指示标记的残留特性对于癌细胞保留标记的重要性较低。因此，具有非残留125i-hpem标记、mg-deavdans-abd035-(sssg)3-adapt6-gssc-hpem-125i和mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-hpem-125i的变体也包括在评价中。按照本领域的惯例，125i用作131i的替代品，其在诊所中使用。44.体内靶向实验(图11)显示，与非融合adapt相比，abd融合的adapt在血液中的活性保留明显增强并且其在肾脏中的摄取减少。必须注意的是，尽管靶向蛋白与abd的融合已在早期应用，但由于体内构建体的所有成分相互作用的复杂性，这种效应的程度是不可预测的。例如，将abd与adapt6靶向多肽毒素融合对在血液中的保留和在肾脏中的摄取具有更温和的影响(liu2019)。45.意料之外的是，本披露显示abd035(abr)和adapt6(hbr)的相对定位具有影响，特别是在使用177lu作为细胞毒性放射性核素的情况下。将abr与hbr的c末端连接不仅导致肿瘤摄取显著更高，而且使得肾脏摄取显著降低。肾脏的吸收剂量可能是剂量限制的事实强调了这些结果的重要性。46.本文提供的数据展示了177lu标记和125i标记两者均被递送至肿瘤并且在177lu标记的融合蛋白的情况下递送更有效。177lu和125i两者标记的adapt6-abd035在肿瘤中的积累显然依赖于her2表达(图13)。spect/ct成像确认在注射之后72h，肿瘤中的摄取远高于任何其他组织(图14)。剂量学计算表明，在保持血液剂量限值为2gy并且肾脏剂量限值为20gy的情况下，肿瘤的吸收剂量应为67gy。47.实验疗法的结果确认了该剂量学数据。本文显示，仅用pbs或未标记的hbr-abr(即，缺乏细胞毒性放射性核素的融合蛋白)处理的对照组小鼠的中位存活期为25天。用已被修饰以去除her2结合能力的融合蛋白的放射性核素标记变体处理导致中位存活期略有但显著延长(31d)(图16b)，这很可能是由于因epr作用导致的活性在血液中循环或在肿瘤上吸收。当使用完整版本的hbr时，对肿瘤生长的影响(图15和图16a)明显不同。肿瘤生长以剂量依赖性方式受到抑制，并且中位存活期提高了超过两倍(70天)，即使在单次注射的情况下也是如此。重要的是，该治疗与任何可观察到的毒性无关。例如，治疗组与对照组之间的平均动物体重没有显著差异。治疗结束时切除的肾脏和肝脏的组织病理学检查仅显示肝细胞(圆形细胞质空泡并且细胞核大小和形状变化增加)和肾小管细胞(细胞核大小和染色质边缘增大)的细微改变。然而，这些改变是可逆的。48.当前，对于患有表达her2的播散性乳腺癌的患者，有若干种治疗选择，例如用单克隆抗体曲妥珠单抗和帕妥珠单抗或抗体药物缀合的曲妥珠单抗-dm1治疗。这些治疗剂显著提高乳腺癌患者的存活期。遗憾的是，肿瘤最终会对此类疗法产生耐药性。值得注意的是，耐药性肿瘤保留了高水平的her2表达。使用本披露的治疗性缀合物的治疗是此类患者的另外选择。49.本披露提供了一种包含融合蛋白和细胞毒性放射性核素的治疗性缀合物。该细胞毒性放射性核素与融合蛋白结合。50.在一个优选实施例中，该细胞毒性放射性核素与该融合蛋白的末端偶联。这种偶联典型地通过基于螯合剂的缀合或共价缀合(下文进一步讨论)来实现。在一个特别优选的实施例中，该细胞毒性放射性核素与该融合蛋白的c末端偶联。51.该融合蛋白包含her2结合区(hbr)、白蛋白结合区(abr)和间隔区。优选地，该间隔区将该hbr的c末端与该abr的n末端连接。其优点在以下实例部分中描述。52.该间隔区的氨基酸的数量为至少7，诸如7-30。相对较短、但仍使得能够自由重折叠并防止与白蛋白和her2结合的空间位阻的间隔区是优选的。因此，该间隔区的氨基酸的数量可以是8-30，诸如8-20、优选地8-14、更优选地10-14。53.作为实例，该间隔区可以包含氨基酸序列sssg的重复序列或由其组成。因此，该间隔区可以包含选自下组的氨基酸序列或由其组成，该组由以下组成：sssgsssg((sssg)2，seqidno:31)、sssgsssgsssg((sssg)3，seqidno:32)、sssgsssgsssgsssg((sssg)4，seqidno:33)、sssgsssgsssgsssgsssg((sssg)5，seqidno:34)和sssgsssgsssgsssgsssgsssg((sssg)6，seqidno:35)。优选地，该组由(sssg)2、(sssg)3和(sssg)4组成。54.该hbr包含选自以下的氨基酸序列：i)lax3akx6tx8x9yhlx13x14x15gvx18dx20ykx23lidkx28ktvex33vx35ax37yx39x40ilx43alp，其中彼此独立地，x3选自a、g、p、s和v，优选地a、g和p；x6选自d和e，优选地e；x8选自a和v；x9选自l和n，优选地l；x13选自d和t，优选地d；x14选自k和r，优选地r；x15选自i、l、m、t和v，优选地l和v；x18选自s和a；x20选自f、y和a；x23选自d和r；x28选自a和v，优选地a；x33选自g、s和d，优选地g；x35选自k、m和r，优选地k和r；x37选自l和r，优选地l；x39选自a、f和l，优选地f和l；x40选自a和e，优选地e；并且x43选自a、h、k、p、r、t、q和y，优选地h、p和r；以及ii)与i)中定义的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。55.显示i)和ii)与her2的结合活性的数据在wo2014076179、nilvebrant2014和以下实例部分中呈现。56.在氨基酸序列i)的优选实施例中，x3选自a、g、p，优选地a和g；x6是e；x8是a和v；x9是l；x13是d；x14是r；x15选自l和v；x18选自s和a；x20选自f、y和a；x23选自d和r；x28是a；x33是g；x35选自k和r；x37是l；x39选自f和l；x40是e；并且x43选自h、p和r。57.在另一个优选实施例中，该hbr包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：laaaketalyhldrlgvadaykdlidkaktvegvkaryfeilhalp(seqidno:6)；laaaketalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvralyleilpalp(seqidno:7)；lapaketalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvralyfeilhalp(seqidno:8)；laaaketalyhldrlgvsdyykdlidkaktvegvkalyfeilhalp(seqidno:9)；lapaketalyhldrlgvsdyykdlidkaktvegvralyleilkalp(seqidno:10)；lagaketalyhldrlgvsdyykdlidkaktvegvralyleiltalp(seqidno:11)；lapaketalyhldrlgvsdyykdlidkaktvegvralyfeilralp(seqidno:12)；lagaketalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvralyleilralp(seqidno:13)；laaaketalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvmalyaeilpalp(seqidno:14)；lagaketalyhldktgvsdyykdlidkaktvegvralyleilqalp(seqidno:15)；laaaketalyhltrvgvsdyykdlidkaktvegvralyfeilyalp(seqidno:16)；以及lasakdtalyhldrvgvsdyykdlidkaktvegvralyaeilaalp(seqidno:17)。58.一个特别优选的组由seqidno:6、seqidno:9和seqidno:13组成。在以下实例部分中使用seqidno:6。seqidno:9和13在nilvebrant2014中通过噬菌体展示和facs鉴定，发明人认为这是有益的。59.该abr包含选自以下的氨基酸序列：a)lax3akx6x7ax9x10eldx14ygvsdx20ykx23lix26x27aktvegvx35alx38x39x40ilx43x44lp，其中彼此独立地，x3选自e、s、q和c，优选地e、s和q；x6选自e、s、v和c，优选地e、s和v；x7选自a、l和s；x9选自l和n；x10选自a、s和r；x14选自a、s、c和k，优选地a、s和k；x20选自y和f；x23选自n、d和r；x26选自n、d和e；x27选自n和k；x35选自k和e；x38选自i和k；x39选自d、e和l；x40选自a、e和h；x43选自a和k；x44选自a、s和e；位置45中的l存在或不存在；并且位置46中的p存在或不存在；以及b)与a)中定义的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。60.序列a)的支架是基于蛋白g的白蛋白结合结构域(abdwt，seqidno:4)的野生型。显示i)和ii)与血清白蛋白的结合活性的数据在jonsson2008、wo2012004384和以下实例部分中呈现。61.在一个优选实施例中，该abr包含氨基酸序列lax3akx6x7ax9x10eldx14ygvsdx20ykx23lix26x27aktvegvx35alx38x39x40ilaalp，其中彼此独立地，x3选自e和s；x6选自e和v；x7选自a和l；x9选自l和n；x10选自a和r；x14选自a、s、c和k，优选地a、s和k；x20选自y和f；x23选自n、d和r；x26选自n和d；x27选自n和k；x35选自k和e；x38选自i和k；x39选自d和l；x40选自a、e和h；位置45中的l存在或不存在；并且位置46中的p存在或不存在。62.在一个特别优选的实施例中，该abr包含氨基酸序列laeakx6x7anx10eldx14ygvsdfykrlix26kaktvegvealkx39x40ilaalp，其中彼此独立地，x6选自e和v；x7选自a和l；x10选自a和r；x14选自s和k；x26选自n和d；x39选自d和l；并且x40选自a和h。63.此序列覆盖abd35和wo2012004384中的pep07914。wo2012004384中披露的序列的降低的免疫刺激特性被认为有益于本披露的缀合物。wo2012004384已被授予两项欧洲专利，ep2590993b1和ep2933262b1。本披露的abr可以是如这些专利中所定义的。64.因此，如在ep2933262b1中，该abr包含选自以下的氨基酸序列：aa)lax3akx6x7anx10eldx14ygvsdfykrlix26kaktvegvealkx39x40ilx43x44lp，其中彼此独立地，x3选自e、s、q和c，优选地e、s和q；x6选自e、s和c，优选地e和s；x7选自a和s；x10选自a、s和r；x14选自a、s、c和k，优选地a、s和k；x26选自d和e；x39选自d和e；x40选自a和e；x43选自a和k；x44选自a、s和e；位置45中的l存在或不存在；并且位置46中的p存在或不存在；以及bb)与aa)中定义的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，前提是x7是l、e或d。65.进一步，如在ep2590993b1中，该abr包含选自以下的氨基酸序列：aaa)lax3akeaanaeldx14ygvsdfykrlidkaktvegvealkdailaalp，其中彼此独立地，x3选自e和s；x14选自a、s、c和k，优选地a、s和k；以及bbb)与aaa)中定义的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。66.在一个实施例中，该abr包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：laeakvlanreldkygvsdfykrlinkaktvegvealklhilaalp(seqidno:1)；laeakeaanaeldsygvsdfykrlidkaktvegvealkdailaalp(seqidno:2)；glaeakeaanaeldsygvsdfykrlidkaktvegvealkdailaalp(seqidno:3)；laeakvlanreldkygvsdyyknlinnaktvegvkalideilaalp(seqidno:4)；以及laeakvlalreldkygvsdyykdlidkaktvegvkalideilaalp(seqidno:5)。67.一个特别优选的组由seqidno:1(abd35)、seqidno:2和seqidno:3(wo2012004384中的pep07914)组成。68.该细胞毒性放射性核素优选地选自下组，该组由以下组成：177lu、90y、188re；186re；166ho、153sm、67cu、64cu、149tb、161tb、47sc；225ac；212pb；213bi、212bi、227th、223ra；58mco、131i、76as、77as和211at。69.一种优选的放射性核素是177lu。70.77lu、90y、188re；186re；166ho、153sm、67cu、64cu、149tb、161tb、47sc；225ac；212pb；213bi、212bi、227th、223ra和58mco是可以通过基于螯合剂的缀合与该融合蛋白结合的放射性金属。该螯合剂优选地与该融合蛋白的半胱氨酸残基共价结合，任选地经由硫醇反应性接头进行。与该融合蛋白的氨基酸残基的胺结合也是可能的，但通常不太优选。71.螯合剂可以选自由dota及其衍生物(例如，dota的马来酰亚胺基衍生物)、交联桥接的大环螯合剂和空间受限的非环状螯合剂组成的组。72.对于177lu、90y、166ho、153sm、149tb、161tb、47sc；225ac；212pb；213bi、212bi、227th和58mco特别合适的螯合剂是dota及其衍生物dotaga。73.对于67cu和64cu，交联桥接的螯合剂，诸如cb-te2a是更好的选择。74.对于188re和186re，基于含有半胱氨酸或巯基乙酰基的肽的螯合剂是优选的。75.131i、76as、77as和211at是可以通过共价缀合与该融合蛋白结合的非金属放射性核素。76.可以使用((4-羟基苯基)乙基)马来酰亚胺(hpem)来实现放射性碘化，该hpem可以与该融合蛋白的半胱氨酸(c)残基结合。呈as(iii)形式的76as和77as(及74as)可以直接与该融合蛋白的半胱氨酸(c)残基的(新)还原的硫醇基团偶联。77.对于211at的偶联，可以使用n-[4-(三正丁基甲锡烷基)苯乙基]-马来酰亚胺作为接头。在这种情况下，211at首先通过砹脱甲锡烷基化与接头偶联，从而形成4-砹-苯乙基-马来酰亚胺(atpem)，该atpem进而可以与该融合蛋白的半胱氨酸(c)残基偶联。[0078]因此，该细胞毒性放射性核素优选地经由该融合蛋白的半胱氨酸(c)残基与该融合蛋白连接。为了避免交叉/副反应，这种情况下的融合蛋白优选地仅包含一个半胱氨酸(c)残基。[0079]将该细胞毒性放射性核素与该融合蛋白连接的半胱氨酸(c)残基可以放置在末端位置。优选地，该半胱氨酸(c)残基是该融合蛋白的c末端残基。[0080]在一个实施例中，该半胱氨酸(c)残基是从abr的c末端延伸的氨基酸序列的c末端残基。这种氨基酸序列可以是例如gssc。[0081]该融合蛋白可以进一步包含另外区域，该另外区域例如包含氨基酸序列deavdans(seqidno:25)或mgdeavdans(seqidno:18)或由其组成。此另外区域典型地是该融合蛋白的末端区域，优选地该融合蛋白的n末端区域。在一个实施例中，该另外区域从该hbr的n末端延伸。该另外区域可以使得生物分布改善并促进产生。[0082]同时，限制本披露的治疗性缀合物的大小是有益的。因此，该治疗性缀合物优选地包含不超过150个氨基酸残基，诸如不超过130个氨基酸残基。该治疗性缀合物的总分子量优选地低于20kda，诸如低于15kda。[0083]在一个实施例中，该融合蛋白包含seqidno:21(adapt6-(sssg)3-abd35)、seqidno:22(abd35-(sssg)3-adapt6)、seqidno:23(adapt6-(sssg)5-abd35)或seqidno:24(abd35-(sssg)5-adapt6)的氨基酸序列。在这四个序列中，seqidno:21(adapt6-(sssg)3-abd35)被认为是最优选的。[0084]在一个实施例中，该融合蛋白由seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29或seqidno:30的氨基酸序列组成。在这四个序列中，seqidno:27被认为是最优选的。[0085]本披露进一步提供了一种药物组合物，该药物组合物包含如上讨论的治疗性缀合物和药学上可接受的载剂。[0086]该组合物优选地适用于静脉内施用。因此，该组合物典型地是基于水的。该基于水的组合物优选地是缓冲的，诸如磷酸盐缓冲的。作为实例，该组合物可以基于磷酸盐缓冲盐水。该基于水的组合物可以包含人血清白蛋白(hsa)。hsa清除自由基并防止对治疗性缀合物的辐射损伤。hsa的量可以是10-150mg/ml，诸如50-100mg/ml，优选地75mg/ml。[0087]在一个实施例中，该组合物包含三胺五乙酸(dtpa)。dtpa将游离核素转化为经由肾脏迅速排出的形式。dtpa的量可以是0.1-1.0mg/ml，诸如0.2-0.8mg/ml，优选地0.4mg/ml。[0088]本披露进一步提供了以上提及的用于在治疗癌症、典型地过表达her2的癌症的方法中使用的治疗性缀合物。her2过表达的诊断是技术人员已知的。在一个实施例中，该癌症已对一线her2靶向治疗(诸如基于抗体的治疗，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或抗体-药物缀合的曲妥珠单抗-dm1)产生耐药性。该癌症类型优选地是乳腺癌或胃癌/胃食管癌。[0089]该方法可以包括静脉内施用例如在以上所述的药物组合物中的治疗性缀合物。该治疗性缀合物的注射次数可以是1-5次，诸如1-3次。注射典型地间隔若干天进行。不仅从成本的角度来看，而且为了最大限度地减少注射的疼痛和可能的副作用，注射次数较少是优选的。实例-材料和方法统计[0090]使用graphpadprism软件(microsoftwindows的4.00版；graphpad软件公司(graphpadsoftware))进行统计处理以确定显著差异(p《0.05)。当比较2组时，通过非配对2尾t检验分析细胞摄取和加工以及生物分布的数据。使用anova和bonferroni检验对超过2组的数据进行比较，以进行多重比较。使用配对t检验分析有关双标记研究的生物分布数据。靶向蛋白的产生、纯化、缀合和表征[0091]选择abd变体作为abr。将此变体(被称为abd35(seqidno:1))进行工程化，以亚皮摩尔亲和力结合人血清白蛋白(jonsson2008)。进一步，选择adapt6(seqidno:6)作为hbr，因为它显示与her2的高亲和力。选择sssg重复序列作为间隔区。[0092]通过赛默飞世尔科技公司(thermofisherscientific)(沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国(waltham,ma,usa))合成编码adapt6-(sssg)3-abd35(seqidno:21)、abd35-(sssg)3-adapt6(seqidno:22)、adapt6-(sssg)5-abd35(seqidno:23)和abd35-(sssg)5-adapt6(seqidno:24)的基因，并且通过用含有所需限制性位点以及n末端序列mgdeavdans(seqidno:18)和c末端序列gssc的引物扩增来亚克隆到表达载体中。蛋白质在大肠杆菌bl21*(de3)细胞中表达并通过超声提取。通过将裂解物加载到与人血清白蛋白(hsa)偶联的内部产生的亲和色谱柱上来纯化蛋白质。[0093]通过在c末端半胱氨酸的游离硫醇基团处进行标准马来酰亚胺偶联将用于177lu标记的蛋白质与螯合剂dota(macrocyclics公司，得克萨斯州，美国(macrocyclics,tx,usa))缀合。通过半制备型rp-hplc(zorbax，300sb-c18，9.4×250mm，5μm，安捷伦公司(agilent))进一步纯化用于125i标记的dota缀合蛋白和未缀合蛋白两者。[0094]使用非融合adapt6(mgdeavdans-adapt6-gssc，seqidno:26)作为生物分布测量中的对照，并且如前所述产生并纯化(garousi2019)。[0095]出于放射性核素疗法的目的，设计了adapt的非靶结合版本，表示为adaptneg(seqidno:19)。[0096]通过赛默飞世尔科技公司(沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)合成并如上所述产生非靶结合融合蛋白(mgdeavdans-adaptneg-(sssg)3-abd035-gssc(seqidno:20))的基因。[0097]使用impactiiuhrqqtofms(布鲁克道尔顿公司，马萨诸塞州，美国(brukerdaltonics,ma,usa))通过液相色谱-电喷雾电离-质谱(lc-esi-ms)确认所有蛋白质的分子量，并且如先前所述在chirascan圆二色性光谱仪(应用光物理公司，萨里郡，英国(appliedphotophysics,surrey,uk))上评价二级结构和热稳定性(garousi2019)。[0098]通过将分析物注射在固定有鼠血清白蛋白(msa)、人血清白蛋白(hsa)和人表皮生长因子受体2(her2)的cm5芯片上达到各自～1000ru的响应水平，在biacoret200系统(通用电气医疗公司，斯德哥尔摩，瑞典(gehealthcare,stockholm,sweden))上进行靶结合分析。先前已经描述了实验参数(garousi2019)。放射性标记[0099]使用用乙腈洗脱的硅胶60f254tlc板(20×100mm，洗脱路径80mm；伊默克公司，达姆施塔特，德国(e.merck,darmstadt,germany))，通过放射性tlc来测量125i-hpem的产率。使用放射性itlc(瓦里安医疗系统公司，帕罗奥多，加利福尼亚州，美国(varianmedicalsystems,paloalto,ca,usa))来测量放射化学产率和纯度。对于放射性碘化蛋白质的分析，使用丙酮:水(7:3)的混合物用于显影。在177lu标记的蛋白质的分析中，使用0.2m柠檬酸、ph2.0进行显影。为了交叉验证放射性itlc数据，进行了放射性hplc分析。在室温下使用具有放射性检测器和vydacrpc18柱(3x150mm；5μm)的hitachichromasterhplc系统。溶剂a是在h2o中的0.1％三氟乙酸(tfa)；溶剂b是在乙腈中的0.1％tfa。流速为1ml/min，具有20min内5％b至80％b的梯度。[0100]根据由(tolmachev2009)描述的方法进行125i标记。简而言之，将125i(14mbq)与hpem(10μg，31.5nmol)的5％乙酸甲醇溶液混合。添加氯胺-t(10μl，在mq水中8mg/ml)和10μl在甲醇中的5％乙酸，并且将混合物在室温下温育5min。通过添加10μl焦亚硫酸钠(在水中12mg/ml)来将反应淬灭。通过在40℃下在pbs中与20mm二硫苏糖醇(dtt)一起温育60min来减少adapt6衍生物(500μg，38.9nmol)。使用nh4oac0.2m缓冲液、ph6预平衡的尺寸排阻nap-5柱(通用电气医疗公司，乌普萨拉，瑞典(gehealthcare,uppsala,sweden))纯化还原的蛋白质。添加放射性碘化hpem，并且将混合物在40℃下温育60min。使用nap-5柱纯化放射性标记的蛋白质。[0101]如先前所述(altai2017)进行177lu标记。简而言之，将在1m抗坏血酸缓冲液、ph5.5中的dota缀合蛋白(80μg，6.2nmol)与在0.1mhcl中的345mbq177lu混合。将混合物在95℃下温育45min。此后，添加5000倍摩尔过量的edta以清除松散结合的核素，并且将混合物在95℃下温育15min。使用nap-5柱纯化放射性标记的蛋白质。[0102]通过与1000倍摩尔过量的碘化钾一起温育3-h来测试放射性碘标记的稳定性。通过用5000倍摩尔过量的edta进行3-h刺激来评价177lu标记的稳定性。体外评价[0103]从美国典型培养物保藏中心(atcc，马纳萨斯，弗吉尼亚州(atcc,manassas,va))购买细胞系。使用卵巢癌skov-3和乳腺癌bt474细胞系，使用早前所述的饱和方法(2008)评价放射性标记的adapt6衍生物与表达her2的癌细胞的结合特异性。使用ligandtracer(ridgeviewinstrumentsab公司)通过如先前所述建立的方法(tolmachev2014)确定放射性标记的缀合物与表达her2的活skov-3细胞的结合亲和力。通过如较早所述的改进的酸洗方法(2008)来评价在连续温育过程中skov-3和bt474细胞对放射性标记的adapt6衍生物的内化。动物研究[0104]动物研究的计划与瑞典有关保护实验动物的国家立法一致，并得到了乌普萨拉动物研究伦理委员会的批准。[0105]在携带her2阳性skov-3异种移植物的balb/cnu/nu小鼠中评价生物分布和靶向特性。作为特异性对照，使用her2阴性ramos异种移植物。为了建立异种移植物，皮下植入107个细胞。生物分布测量[0106]为了减少荷瘤小鼠的数量，使用了双标记方法。将125i和177lu标记的adapt6变体的混合物(每只动物具有在100mlpbs中的15kbq125i和90kbq177lu)注射到小鼠的尾静脉中。使用相应的未标记蛋白，将非融合adapt6的总注射蛋白质剂量调整为3μg/小鼠，并且将abd融合变体的总注射蛋白质剂量调整为6μg/小鼠。在麻醉下放血之后，切除感兴趣的器官和组织，并且使用自动伽马光谱仪(1480wizard；华莱克公司(wallacoy))测量它们的活性。在125i的10至45kev和177lu的90至370kev的能量窗口中测量活性。[0107]为了评价与abd035融合的影响、abd035相对于adapt6部分的定位的作用和标记的化学性质，在注射之后48h比较mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-hpem-125i、mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu、mg-deavdans-abd035-(sssg)3-adapt6-gssc-hpem-125i、mg-deavdans-abd035-(sssg)3-adapt6-gssc-dota-177lu、mg-deavdans-adapt6-gssc-hpem-125i和mg-deavdans-adapt6-gssc-dota-177lu的生物分布。在此实验中使用五只小鼠/组。平均小鼠体重为16.9±0.6g，并且平均肿瘤重量为0.42±0.6g。[0108]为了评估最有希望的变体mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-hpem-125i和mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu的剂量学，在携带skov-3异种移植物的小鼠中注射之后4、24、48、72、168和336小时测量它们的生物分布(小鼠平均体重为16.3±1.3g，并且平均肿瘤重量为0.11±0.06g)。为了控制肿瘤摄取是her2特异性的，注射之后48h测量这些缀合物在携带her2阴性ramos异种移植物的小鼠(平均肿瘤重量0.11±0.06g)中的生物分布。在此实验中使用四只小鼠/数据点。如早前所述评价剂量学(westerlund2019)。放射性核素疗法[0109]为了评价与abd融合的adapt6的治疗性作用，将每只小鼠107个skov-3细胞皮下植入腹部中。每周至少两次对小鼠进行称重和目视检查，并且使用电子卡尺测量肿瘤。将肿瘤体积(mm3)计算为[长度(mm)]·[宽度(mm)]2·0.5。当肿瘤达到1,000mm3大小或出现溃疡，或者如果动物的体重在1周内下降超过10％或自研究开始后下降超过15％，则对动物进行安乐死。在安乐死之后，切除肿瘤和肾脏用于后续组织学评价。[0110]肿瘤植入之后7d开始治疗，此时平均肿瘤体积为0.07±0.02mm3并且平均小鼠体重为15.1±0.4g。将小鼠随机分成5组，每组11只动物。向第一组的治疗动物注射6μg(4.7nmol)/18mbq的mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu。第二治疗组中的动物接受两次治疗，第一次在第7天，并且第二次在第一次治疗之后三周。对照组1仅接受媒介物pbs。为了评价未标记的abd融合的adapt6对肿瘤生长的影响，向对照组2注射6μg(4.7nmol)未标记的mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota。为了评价非靶向放射性标记蛋白的作用，向对照组3仅注射mg-deavdans-adaptneg-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu(6μg/18mbq)。[0111]为了确认肿瘤靶向，进行spect/ct成像。如(westerlund2018)中所述在72h处对小鼠进行成像。实例-结果靶向蛋白的产生、纯化、缀合和表征[0112]此研究中使用的所有蛋白质均在大肠杆菌中产生并纯化至均质。为了建立hbr与abr之间sssg重复序列接头的最佳长度，进行spr结合分析以比较变体与(sssg)3间隔区和较长(sssg)5间隔区之间的亲和力。从表1中可以看出，当间隔区的长度从12个氨基酸残基增加至20个氨基酸残基时，spr数据显示亲和力没有增加。因此，研究的其余部分集中在较短的变体上。[0113]表1.abd融合蛋白对hsa、msa和her2的亲和力常数。无论abd的位置和接头的长度如何，所有变体都展示出类似的亲和力。[0114]用于体内研究的变体的纯度通过rp-hplc确定为高于95％(图2)，并且质谱确认了所有蛋白质的正确质量(表2)。圆二色性分析指示高α螺旋含量以及样品热处理之后完全重折叠的能力(图3)。所有变体都展示出高熔融温度，几乎与非融合对照(mgdeavdans-adapt6-gssc)相同。[0115]表2.此研究中使用的融合蛋白的理论和实验分子量。表2.此研究中使用的融合蛋白的理论和实验分子量。[0116]无论abd的位置如何，abd融合构建体的spr测量揭示对her2的类似亲和力(约5nm)。这与先前确定的未融合对照的4nm亲和力相当(garousi2016)。所有构建体对血清白蛋白的亲和力也类似，测得的对msa的亲和力为约1.8nm，并且对hsa的亲和力为约50pm(图4，表1)。图4还展示了her2和hsa的同时结合，因为在hsa饱和浓度的存在下，融合蛋白也可以结合her2。进一步强化这一声明，可以看出饱和蛋白不再结合hsa/msa。[0117]如先前所提及的，设计了一种非靶结合融合蛋白作为疗法研究中的对照。spr测量确认了三点突变有效地去除了与her2的结合(图5)。放射性标记[0118]有关放射化学产率和放射化学纯度的数据在表3中提供。所有标记方案都是有效的，并且使用nap-5进行纯化提供了完全不存在非缀合放射性核素的情况。用125i标记hpem(共价偶联)的放射化学产率为98％。对于实验疗法，mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu获得了高达55.6gbq/μmol的最大摩尔活性。放射性hplc确认了放射性标记的adapt6衍生物的身份(图6和图7)。所有标记在刺激条件下都是稳定的(没有可测量的放射性核素释放)。[0119]表3.放射性标记的adapt6变体的放射化学产率和纯度。射性标记的adapt6变体的放射化学产率和纯度。体外评价[0120]具有未标记构建体的细胞中her2受体的预饱和导致所有放射性标记的adapt6变体与skov-3和bt-474细胞系的结合显著降低(p《5×10-5)。有关表达her2的细胞结合和加工放射性标记的adapt6衍生物的数据在图8和图9中呈现。放射性金属标记的abd035融合变体的结合模式与非融合变体的模式类似；在前两个小时内快速结合，然后在一定程度上较慢增加。非融合变体的数据与111in标记对应物的数据非常相似(lindbo2018)。所有变体的内化速率都很慢，并且截止24小时内化的细胞结合活性不到20％。[0121]有关放射性标记的adapt6衍生物对表达her2的活细胞的亲和力的数据在表4和图10中呈现。所有变体都展示出与活细胞上的her2的两种相互作用，一种具有亚纳摩尔表观解离常数的强相互作用和一种具有在20-50nm范围内的解离常数的较弱相互作用。abd035融合对adapt6与表达her2的细胞的结合强度没有明显的负面影响。adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-hpem-125i和mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu，血液中的生物半衰期分别是29.4h(95％ci25.7至33.7)和28.4h(95％ci24.6至32.8)。在所有时间点处，放射性碘标记的血源活性水平稍微但显著(配对t检验中p《0.05)更高。两种缀合物都显示出有效的靶向性，因为截止24h，两种变体在her2阳性肿瘤中的摄取都已经超过了在任何其他器官或组织中的摄取。从注射之后72h开始，177lu标记的肿瘤摄取更高。总体而言，与125i标记相比，使用177lu提供了显著更高的肿瘤与血液的比率，但肿瘤与肾脏的比率更低。[0127]表5.mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu在携带skov-3异种移植物的balb/cnu/nu小鼠中的生物分布。数据表示为％id/g，并且是4只动物的平均值±sd。d。[0128]表6.mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-hpem-125i在携带skov-3异种移植物的balb/cnu/nu小鼠中的生物分布。数据表示为％id/g，并且是4只动物的平均值±sd。[0129]可以将表5和表6的生物分布数据与现有技术文献liu2019中提供的数据进行比较，其中细胞毒性多肽(pe38x8或pe25)与adapt6-abd035融合蛋白的c末端偶联(参见表7和表8)。这种比较显示本披露的缀合物产生极大改善的生物分布。值得注意地，liu2019的融合毒素在肝脏和/或肾脏中积累，这意味着大部分药物无法靶向肿瘤，并且预期在肝脏和/或肾脏会出现严重且可能无法接受的副作用。在注射后24h，liu2019中的血液与肾脏的比率非常低(分别为0.04和0.12)，但对于具有细胞毒性放射性核素的本发明缀合物而言，血液与肾脏的比率要高得多(分别为1.6和3.5)。类似地，在注射后24h，liu2019中的血液与肝脏的比率非常低(分别为0.3和0.04)，但对于具有细胞毒性放射性核素的本发明缀合物而言，血液与肝脏的比率要高得多(分别为3.5和5.9)。值得注意地，在这个时间点，liu2019尽管具有白蛋白结合区abd035，但未显示高于1.8％的血液浓度。相比之下，本披露的缀合物的血液浓度分别为17％和19％。[0130]表7.与liu2019中呈现的adapt6-abd035-pe38x8(“liu1”)和adapt6-abd035-pe25(“liu2”)相比mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu(“发明1”)和mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-hpem-125i(“发明2”)在注射后4h的生物分布。“b/k比率”意指血液与肾脏的比率。“b/l比率”意指血液与肝脏的比率。[0131]表8.与liu2019中呈现的adapt6-abd035-pe38x8(“liu1”)和adapt6-abd035-pe25(“liu2”)相比mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu(“发明1”)和mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-hpem-125i(“发明2”)在注射后24h的生物分布。“b/k比率”意指血液与肾脏的比率。“b/l比率”意指血液与肝脏的比率。deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota和mg-deavdans-adaptneg-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu进行的治疗，对照组中的中位存活期分别为25d、25d和31d。与通过“冷”物质治疗的小鼠的存活期相比，用mg-deavdans-adaptneg-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu治疗稍微但显著增加了存活期。接受单次注射mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu的组的中位存活期为70天，这显著(p《0.0001)长于用mg-deavdans-adaptneg-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu治疗的组中小鼠的中位存活期。在这组中，一只在疗法开始时具有152-mm3肿瘤的动物在第62天时显示肿瘤几乎完全消失，这种情况一直持续到研究结束(第90天)。在用两次注射mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu治疗的组中，(仅)必须处死一只小鼠(在第29天，由于体重减轻)。其他动物在第一次治疗之后11-14天体重明显减轻。截止第90天，一个肿瘤展示出再生长(倍增时间为16天)，但这组中所有其他动物的肿瘤体积却低于120mm3。[0134]疗法是良好耐受的。在经治疗与未经处理的小鼠之间，皮肤、脂肪垫和眼睛的外观没有差异，并且没有指示疼痛或痛苦的行为。治疗组与对照组之间的平均动物体重没有显著差异(数据未示出)。用mg-deavdans-adapt6-(sssg)3-abd035-gssc-dota-177lu治疗的组中平均体重在第28与第90天之间增加，这反映了从疾病和治疗中恢复(数据未示出)。参考文献[0135]altaim,westerlundk,vellettaj,mitranb,honarvarh,ae.evaluationofaffibodymolecule-basedpna-mediatedradionuclidepretargeting:developmentofanoptimizedconjugationprotocoland177lulabeling.nuclmedbiol.2017nov；54:1-9.[0136]garousij,lindbos,nilvebrantj,m,buijsj,m,honarvarh,orlovaa,tolmachevv,hobers.adapt,anovelscaffoldprotein-basedprobeforradionuclideimagingofmoleculartargetsthatareexpressedindisseminatedcancers.cancerres.2015oct15；75(20):4364-71.[0137]garousij,lindbos,honarvarh,vellettaj,mitranb,altaim,orlovaa,tolmachevv,hobers.influenceofthen-terminalcompositionontargetingpropertiesofradiometal-labeledanti-her2scaffoldproteinadapt6.bioconjugchem.2016nov16；27(11):2678-2688.[0138]garousij,lindbos,borinj,vonwittinge,vorobyevaa,oroujenim,mitranb,orlovaa,buijsj,tolmachevv,hobers.comparativeevaluationofdimericandmonomericformsofadaptscaffoldproteinfortargetingofher2-expressingtumours.eurjpharmbiopharm.2019jan；134:37-48.[0139]jonssona,doganj,hernen,abrahmsénl,nygrenpa.engineeringofafemtomolaraffinitybindingproteintohumanserumalbumin.proteinengdessel.2008aug；21(8):515-27.[0140]krasniqia,d'huyvetterm,devoogdtn,frejdfy,j,orlovaa,keyaertsm,tolmachevv.same-dayimagingusingsmallproteins:clinicalexperienceandtranslationalprospectsinoncology.jnuclmed.2018jun；59(6):885-891.[0141]lindbos,garousij,m,etal.influenceofhistidine-containingtagsonthebiodistributionofadaptscaffoldproteins.bioconjugchem.2016；27:716-726.[0142]lindbos,garousij,mitranb,altaim,buijsj,orlovaa,hobers,tolmachevv.radionuclidetumortargetingusingadaptscaffoldproteins:aspectsoflabelpositioningandresidualizingpropertiesofthelabel.jnuclmed.2018jan；59(1):93-99.[0143]nilvebrantj,hobers.thealbumin-bindingdomainasascaffoldforproteinengineering.computstructbiotechnolj.2013；6:1-8.[0144]nilvebrantj,hobers.engineeringofbispecificaffinityproteinswithhighaffinityforerbb2andadaptablebindingtoalbumin.plosone.august2014,volume9,issue8.[0145]priceew,orvigc.matchingchelatorstoradiometalsforradiopharmaceuticals.chemsocrev.2014jan7；43(1):260-90.[0146]tolmachevv,mumee,s,frejdfy,orlovaa.influenceofvalencyandlabellingchemistryoninvivotargetingusingradioiodinatedher2-bindingaffibodymolecules.eurjnuclmedmolimaging.2009；36:692-701.[0147]tolmachevv,orlovaa,anderssonk.methodsforradiolabellingofmonoclonalantibodies.methodsmolbiol.2014；1060:309-30.[0148]westerlundk,altaim,mitranb,konijnenbergm,oroujenim,atterbyc,dejongm,orlovaa,mattssonj,mickep,ae,tolmachevv.radionuclidetherapyofher2-expressinghumanxenograftsusingaffibody-basedpeptidenucleicacid-mediatedpretargeting:invivoproofofprinciple.jnuclmed.2018；59:1092-1098.[0149]h,orlovaa.slowinternalizationofanti-her2syntheticaffibodymonomer111in-dota-zher2:342-pep2:implicationsfordevelopmentoflabeledtracers.cancerbiotherradiopharm.2008；23:435-442.当前第1页12当前第1页12