一种含安吖啶的包封组合物及其制备方法与流程

1.本发明涉及医药制剂技术领域，尤其涉及一种含安吖啶的包封组合物及其制备方法。


背景技术：

2.安吖啶(胺苯吖啶，amsacrine，amsa)，是一种水不溶性吖啶类的衍生物。它是一种广谱抗肿瘤药物，具有抗癌、免疫抑制和抗病毒作用。但本品静脉给药后消除快，血药浓度维持时间短，疗效不理想。因此，要充分发挥安吖啶的疗效，开发一种更好的包覆制剂进行加工处理显得至关重要。
3.常见的包覆材料有脂质载体材料，如硬脂酸、脂肪酸甘油酯等为载体，将药物包裹于类脂核中制成固体胶粒给药体系，但是对于这种固体胶粒给药体系依然存在包封效果低、释放稳定性差、毒副作用大等安全性问题。
4.中国发明专利cn114699367a公开了一种安吖啶产品及其生产工艺，生产工艺包括安吖啶注射液的生产工艺、l-乳酸注射液的生产工艺以及合并包装；其中，安吖啶注射液生产工艺包括n,n-二甲基乙酰胺的精制处理、安吖啶溶液的配制、安吖啶溶液的除菌过滤和安吖啶溶液的后处理；l-乳酸注射液生产工艺包括l-乳酸的精制处理、l-乳酸溶液的配制、l-乳酸溶液的除菌过滤和l-乳酸溶液的后处理；该安吖啶产品通过针对性的优化安吖啶注射液和l-乳酸注射液的生产工艺，使注射液的纯度更高，浓度更准确，从而使安吖啶注射液在l-乳酸注射液中的溶解性更好，不会出现不溶物，澄清度好，用药安全性更高。但是，该发明制备的安吖啶产品的体内循环时间低，生物利用度较差，毒副作用大。


技术实现要素：

5.有鉴于现有技术中安吖啶产品生物利用度较差，毒副作用大的缺点，本发明所要解决的技术问题是提供一种具有较好生物利用度和缓慢稳定释放效果的含安吖啶的包封组合物及其制备方法。
6.为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：一种含安吖啶的包封组合物，由内到外包括如下组分：安吖啶、脂质相、包覆剂。
7.优选的，所述脂质相采用如下方式制备而成，以重量份计：在80~126份水相a中加入32.8~77.8份有机相，以800~1200rpm搅拌1~5h，得到混合物；将混合物加入到81~124份水相b中，在1~10℃连续搅拌1~3h，搅拌速度为200~600rpm，然后超声处理1~10min，超声功率为200~600w，超声频率为20~30khz，再以12000~16000rpm离心20~40min，用水洗涤1~3次，然后冷冻干燥，得到脂质相。
8.优选的，所述有机相的制备方法为将0.5~2重量份棕榈油、2~5重量份大豆卵磷脂和0.3~0.8重量份橙花醇分散在40~70℃的30~70重量份无水乙醇中制备得到。
9.优选的，所述水相a的制备方法为将1~3重量份聚乙烯醇和1~3重量份聚乙二醇分散在40~70℃的80~120重量份水中混合均匀，制备而成。
10.优选的，所述水相b的制备方法为将0.5~2重量份吐温20和0.5~2重量份聚乙二醇加入到80~120重量份水中混合均匀，得到。
11.优选的，所述包覆剂采用如下方式制备而成，以重量份计：将0.5~2份壳聚糖加入到80~120份0.5~2wt%的乙酸水溶液中，搅拌20~50min，搅拌速度为100~500rpm，然后加入0.5~2份巯基乙酸、0.2~0.8份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，100~300rpm搅拌1~3h后加入0.2~0.8份羟胺，使用0.5~3wt%盐酸调整ph值为4.0~6.0，搅拌反应1~5h，搅拌速度为100~300rpm，然后透析，冷冻干燥，得到包覆剂，1~10℃保存备用。
12.优选的，所述透析为采用4~6wt%盐酸透析1~3次，每次时间为0.5~2d。
13.一种含安吖啶的包封组合物的制备方法，以重量份计：称量0.05~0.3份安吖啶，加入脂质相在75~85℃熔化并搅拌混合20~40min，搅拌速度为100~300rpm，得到预包物；将1~3份吐温80完全溶解在80~120份水中，加热至75~85℃，然后加入预包物，温度保持在75~85℃，反应20~40min，用高速均质机以8000~12000rpm的速度均质3~8min，冷却至室温，得到乳剂，将乳剂在12500~16500rpm下离心1~5min，然后冷冻干燥得到冷冻干燥乳剂，然后将包覆剂加入到10~30份水中制备成包覆剂水溶液，将冷冻干燥乳剂加入到包覆剂水溶液中，并磁力搅拌0.5~2d，磁力搅拌速度为800~1200rpm，然后经12500~16500rpm的离心机分离1~20min，经0.4~0.5μm滤膜过滤后，冷冻干燥，得到含安吖啶的包封组合物。
14.优选的，所述冷冻干燥的温度各自独立地为-50~-20℃，冷冻干燥的时间各自独立地为5~20h。
15.优选的，所述滤膜过滤为采用孔径0.4~0.5μm的滤膜过滤。
16.本发明通过将壳聚糖在乙酸水溶液中与巯基乙酸和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应，再与羟胺进行改性得到包覆剂；采用棕榈油、大豆卵磷脂和橙花醇与聚乙烯醇进行复合，再通过吐温20进行修饰，得到脂质相；将脂质相与安吖啶在高温环境中混合加工制成预包物，再采用包覆剂进一步加工，制备成含安吖啶的包封组合物。通过以上物质的反应制备出了具有较高包封率的含安吖啶的包封组合物。
17.药物释放初期有突释现象的发生，随后药物呈现持续而缓慢的释放。可能原因在于含安吖啶的包封组合物外部具有一层包覆剂和脂质相的包裹，由于包覆剂比表面积较大，药物分子可能一部分吸附在包覆剂的表面，或者富集在包覆剂的外层，另一部分镶嵌在包覆剂和脂质相的骨架中。外层药物快速释放，产生初始阶段的突释。此后，药物的释放主要是从包封内部中扩散出来，具有持续和缓慢的特点。
18.安吖啶静脉给药后消除快，血液中药物维持时间短，疗效不理想，因此，本发明通过包封技术实现靶向给药。然而，脂质相包覆材料的的疏水特性使得它们容易通过网内皮系统被快速清除，这需要通过制备亲水性涂层来解决。本发明通过壳聚糖改性合成了包覆剂，并将其作为安吖啶的外包材料。包覆剂通过调节电荷的水平，阻止了药物被排泄出体外，而且经过巯基乙酸和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应，再与羟胺进行改性得到包覆剂，由于反应产生的二硫化交联结构提供了更可控和更慢的吸水能力，具有一定的膨胀能力，膨胀后可以有效地与体液相互作用，同时保持其完整性。包覆剂具有可电离官能团，与水的相互作用增强，而且由于羟胺带正电荷的-nh2基团通过静电相互作用附
着在带负电荷的体液上，从而提高了黏附性能，因此可以到达细胞表面进行有效的跨细胞运动。后期受控的缓慢释放可能原因在于脂质颗粒周围亲水性涂层的存在，为安吖啶的移动提供了障碍，使药物受控缓慢释放。另外脂质相可以通过纳米封装保护其不受氧、光、ph值、水分和降解的影响，使安吖啶在特定环境中更容易溶解，并在所需的位置以可接受的速度释放，从而保护化学结构，延长药物释放。
19.与现有技术相比，本发明的有益效果：1）本发明将壳聚糖在乙酸水溶液中与巯基乙酸和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应，再与羟胺进行改性得到包覆剂；采用棕榈油、大豆卵磷脂和橙花醇与聚乙烯醇进行复合，再通过吐温20进行修饰，得到脂质相；将脂质相与安吖啶在高温环境中混合加工制成预包物，再采用包覆剂进一步加工，制备成含安吖啶的包封组合物。安吖啶产品包封率较高，具有较好的稳定性、低毒性和减少药物浸出的优点，提高了安吖啶的作用效果。
20.2）本发明采用科学的制备方法生产出含安吖啶的包封组合物，具有加工过程简单、安全稳定、应用面广的特点。
具体实施方式
21.下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明，但是应该明确提出这些实施例用于举例说明，但是不解释为限制本发明的范围。
22.本发明实施例中部分原料的参数如下：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，上海易势化工有限公司，cas号：25952-53-8；棕榈油，深圳市帝纬嘉生物科技有限公司，货号：dvja028，cas：8002-75-3；大豆卵磷脂，山东创天生物科技有限公司，货号：2017，型号：食品级；橙花醇，北京北达正元科技有限公司，货号：d169，cas：106-25-2；安吖啶，西安顺亿生化科技有限公司，cas：51264-14-3；聚乙烯醇，广州市敬益新材料有限公司，货号：pva217sb（22-88），分子量：72600~81400，cas：9002-89-5；聚乙二醇，济南鑫凯新材料有限公司，平均相对分子质量：400，货号：12，cas：25322-68-3。
23.实施例1一种含安吖啶的包封组合物，制备方法如下：s1、将1g壳聚糖加入到100g 1wt%的乙酸水溶液中，搅拌30min，搅拌速度为400rpm，然后加入1g巯基乙酸、0.5g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，200rpm搅拌2h后加入0.5g羟胺，使用1wt%盐酸调整ph值为5.0，搅拌反应3h，搅拌速度为200rpm，采用5wt%盐酸透析2次，每次时间为1d，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到包覆剂，4℃保存备用；s2、将1g棕榈油、4g大豆卵磷脂和0.5g橙花醇分散在60℃的50g无水乙醇中制备成有机相；将2g聚乙烯醇和2g聚乙二醇分散在60℃的100g水中，制备成水相a，在水相a中加入有机相，以1000rpm搅拌3h，得到混合物；将1g吐温20和1g聚乙二醇加入到100g水中，得到水
相b；将混合物加入到水相b中，在4℃连续搅拌2h，搅拌速度为400rpm，然后超声处理5min，超声功率为400w，超声频率为25khz，再以15000rpm离心30min，用水洗涤3次，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到脂质相；s3、称量0.2g安吖啶，加入步骤s2制备的脂质相在80℃熔化并搅拌混合30min，搅拌速度为200rpm，得到预包物；将2g吐温80完全溶解在100g水中，加热至80℃，然后加入预包物，温度保持在80℃，反应30min，用高速均质机以10000rpm的速度均质5min，冷却至室温，得到乳剂，将乳剂在14500rpm下离心3min，然后-40℃冷冻干燥10h，得到冷冻干燥乳剂，然后将步骤s1制备的包覆剂加入到20g水中制备成包覆剂水溶液，将冷冻干燥乳剂加入到包覆剂水溶液中，并磁力搅拌1d，磁力搅拌速度为1000rpm，然后经14500rpm的离心机分离8min，经0.45μm滤膜过滤后，-20℃冷冻干燥10h，得到含安吖啶的包封组合物。
24.实施例2一种含安吖啶的包封组合物，制备方法如下：s1、将1g壳聚糖加入到100g 1wt%的乙酸水溶液中，搅拌30min，搅拌速度为400rpm，然后加入1g巯基乙酸，200rpm搅拌2h后加入0.5g羟胺，使用1wt%盐酸调整ph值为5.0，搅拌反应3h，搅拌速度为200rpm，采用5wt%盐酸透析2次，每次时间为1d，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到包覆剂，4℃保存备用；s2、将1g棕榈油、4g大豆卵磷脂和0.5g橙花醇分散在60℃的50g无水乙醇中制备成有机相；将2g聚乙烯醇和2g聚乙二醇分散在60℃的100g水中，制备成水相a，在水相a中加入有机相，以1000rpm搅拌3h，得到混合物；将1g吐温20和1g聚乙二醇加入到100g水中，得到水相b；将混合物加入到水相b中，在4℃连续搅拌2h，搅拌速度为400rpm，然后超声处理5min，超声功率为400w，超声频率为25khz，再以15000rpm离心30min，用水洗涤3次，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到脂质相；s3、称量0.2g安吖啶，加入步骤s2制备的脂质相在80℃熔化并搅拌混合30min，搅拌速度为200rpm，得到预包物；将2g吐温80完全溶解在100g水中，加热至80℃，然后加入预包物，温度保持在80℃，反应30min，将乳剂用高速均质机以10000rpm的速度均质5min，冷却至室温，得到乳剂，在14500rpm下离心3min，然后-40℃冷冻干燥10h，得到冷冻干燥乳剂，然后将步骤s1制备的包覆剂加入到20g水中制备成包覆剂水溶液，将冷冻干燥乳剂加入到包覆剂水溶液中，并磁力搅拌1d，磁力搅拌速度为1000rpm，然后经14500rpm的离心机分离8min，经0.45μm滤膜过滤后，-20℃冷冻干燥10h，得到含安吖啶的包封组合物。
25.实施例3一种含安吖啶的包封组合物，制备方法如下：s1、将1g壳聚糖加入到100g 1wt%的乙酸水溶液中，搅拌30min，搅拌速度为400rpm，然后加入1g巯基乙酸、0.5g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，200rpm搅拌2h后，使用1wt%盐酸调整ph值为5.0，搅拌反应3h，搅拌速度为200rpm，采用5wt%盐酸透析2次，每次时间为1d，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到包覆剂，4℃保存备用；s2、将1g棕榈油、4g大豆卵磷脂和0.5g橙花醇分散在60℃的50g无水乙醇中制备成有机相；将2g聚乙烯醇和2g聚乙二醇分散在60℃的100g水中，制备成水相a，在水相a中加入有机相，以1000rpm搅拌3h，得到混合物；将1g吐温20和1g聚乙二醇加入到100g水中，得到水
相b；将混合物加入到水相b中，在4℃连续搅拌2h，搅拌速度为400rpm，然后超声处理5min，超声功率为400w，超声频率为25khz，再以15000rpm离心30min，用水洗涤3次，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到脂质相；s3、称量0.2g安吖啶，加入步骤s2制备的脂质相在80℃熔化并搅拌混合30min，搅拌速度为200rpm，得到预包物；将2g吐温80完全溶解在100g水中，加热至80℃，然后加入预包物，温度保持在80℃，反应30min，用高速均质机以10000rpm的速度均质5min，冷却至室温，得到乳剂，将乳剂在14500rpm下离心3min，然后-40℃冷冻干燥10h，得到冷冻干燥乳剂，然后将步骤s1制备的包覆剂加入到20g水中制备成包覆剂水溶液，将冷冻干燥乳剂加入到包覆剂水溶液中，并磁力搅拌1d，磁力搅拌速度为1000rpm，然后经14500rpm的离心机分离8min，经0.45μm滤膜过滤后，-20℃冷冻干燥10h，得到含安吖啶的包封组合物。
26.实施例4一种含安吖啶的包封组合物，制备方法如下：s1、将1g壳聚糖加入到100g 1wt%的乙酸水溶液中，搅拌30min，搅拌速度为400rpm，然后加入1g巯基乙酸、0.5g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，200rpm搅拌2h后加入0.5g羟胺，使用1wt%盐酸调整ph值为5.0，搅拌反应3h，搅拌速度为200rpm，采用5wt%盐酸透析2次，每次时间为1d，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到包覆剂，4℃保存备用；s2、将2g吐温80完全溶解在100g水中，加热至80℃，然后加入0.2g安吖啶，温度保持在80℃，反应30min，用高速均质机以10000rpm的速度均质5min，冷却至室温，得到乳剂，将乳剂在14500rpm下离心3min，然后-40℃冷冻干燥10h，得到冷冻干燥乳剂，然后将步骤s1制备的包覆剂加入到20g水中制备成包覆剂水溶液，将冷冻干燥乳剂加入到包覆剂水溶液中，并磁力搅拌1d，磁力搅拌速度为1000rpm，然后经14500rpm的离心机分离8min，经0.45μm滤膜过滤后，-20℃冷冻干燥10h，得到含安吖啶的包封组合物。
27.对比例1一种含安吖啶的包封组合物，制备方法如下：s1、将1g棕榈油、4g大豆卵磷脂和0.5g橙花醇分散在60℃的50g无水乙醇中制备成有机相；将2g聚乙烯醇和2g聚乙二醇分散在60℃的100g水中，制备成水相a，在水相a中加入有机相，以1000rpm搅拌3h，得到混合物；将1g吐温20和1g聚乙二醇加入到100g水中，得到水相b；将混合物加入到水相b中，在4℃连续搅拌2h，搅拌速度为400rpm，然后超声处理5min，超声功率为400w，超声频率为25khz，再以15000rpm离心30min，用水洗涤3次，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到脂质相；s2、称量0.2g安吖啶，加入步骤s1制备的脂质相在80℃熔化并搅拌混合30min，搅拌速度为200rpm，得到预包物；将2g吐温80完全溶解在100g水中，加热至80℃，反应30min，然后加入预包物，温度保持在80℃，用高速均质机以10000rpm的速度均质5min，冷却至室温，得到乳剂，将乳剂在14500rpm下离心3min，经0.45μm滤膜过滤后，-20℃冷冻干燥10h，得到冷冻干燥乳剂，将冷冻干燥乳剂加入到20g水溶液中，并磁力搅拌1d，磁力搅拌速度为1000rpm，然后经14500rpm的离心机分离8min，经0.45μm滤膜过滤后，-20℃冷冻干燥10h，得到含安吖啶的包封组合物。
28.对比例2
一种含安吖啶的包封组合物，制备方法如下：s1、将1g壳聚糖加入到100g 1wt%的乙酸水溶液中，搅拌30min，搅拌速度为400rpm，然后加入1g巯基乙酸，200rpm搅拌2h后，使用1wt%盐酸调整ph值为5.0，搅拌反应3h，搅拌速度为200rpm，采用5wt%盐酸透析2次，每次时间为1d，然后冷冻干燥10h，冷冻干燥温度为-20℃，得到包覆剂，4℃保存备用；s2、将2g吐温80完全溶解在100g水中，加热至80℃，然后加入0.2g安吖啶，温度保持在80℃，反应30min，用高速均质机以10000rpm的速度均质5min，冷却至室温，得到乳剂，将乳剂在14500rpm下离心3min，然后-40℃冷冻干燥10h，得到冷冻干燥乳剂，然后将步骤s1制备的包覆剂加入到20g水中制备成包覆剂水溶液，将冷冻干燥乳剂加入到包覆剂水溶液中，并磁力搅拌1d，磁力搅拌速度为1000rpm，然后经14500rpm的离心机分离8min，经0.45μm滤膜过滤后，-20℃冷冻干燥10h，得到含安吖啶的包封组合物。
29.测试例1包封率测试参考硕士论文（注射用安吖啶固体脂质纳米粒的研究，沈阳药科大学，王丽滨，2006）的测试方法进行测试，取4mg本发明实施例和对比例制备的含安吖啶的包封组合物加入二甲基乙酞胺(dma)与氯仿1：1的有机溶剂超声破坏并定容至25ml静置，上清液过0.45μm的滤膜，取续滤液在λ=410nm处测得a值，从而求算出药物的总浓度c
l
。另取4mg安吖啶产品加水配置成30ml混合溶液于4℃超速离心2h离心速度为70000rpm，将沉在底部的固体物质加入dma与氯仿为1：1的有机溶剂超声破坏定容至25ml静置，上清液过0.45μm的滤膜，取续滤液在λ=410nm处测得另一a值，从而得被包封进去的药物的浓度c2。则包封率采用如下公式计算。每个实施例或者对比例测试三次，取计算结果的平均值，测试结果见表1。
30.表1：包封率测试结果方案包封率（%）实施例178.3实施例271.5实施例369.2实施例473.9对比例131.3对比例225.0测试例2体外释药测试取4mg实施例和对比例制备的含安吖啶的包封组合物加水配置成20ml混合溶液，置透析袋中，两端扎紧，放入装有释放介质(ph7.4磷酸盐缓冲液+40%乙醇溶液)的50ml的溶出杯中，将其放入恒温37℃，搅拌速度为150rpm的溶出仪中。分别于释放开始后的1h、8h、24h、48h、72h时取样4ml，用紫外分光光度法测定出透析液中安吖啶的浓度，取样的同时将释放介质全部更换。每个实施例或对比例测试三次，取测试结果的平均值。测试结果见表2。
31.表2：体外释药测试结果
测试例3毒性测试采用动物的急性毒性试验方法从动物水平上进行初步的评价。急性毒性试验是指使用小鼠一次或24h多次给药，观测其所引起中毒反应的形态行为及死亡现象来进行初步评价药物毒性的试验方法。取预处理后并进行称重的小鼠，根据其体重确定给药浓度，取4mg实施例和对比例制备的含安吖啶的包封组合物添加生理盐水配置成10ml的样品，将配置好的药物装入灌胃器并注入小鼠胃部。根据小鼠体重按照0.01ml/g的注射量进行注射，然后观察小鼠的反应状态并记录。
32.测试结果：所有实施例或者多比例注射的小鼠都表现正常无特殊反应。
33.从表1、表2和毒性测试的测试结果可以看出，实施例1的包封率最高，缓释效果最明显，而且本发明制备的安吖啶产品均无明显毒性。可能原因在于本发明通过将壳聚糖在乙酸水溶液中与巯基乙酸和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应，再与羟胺进行改性得到包覆剂；采用棕榈油、大豆卵磷脂和橙花醇与聚乙烯醇进行复合，再通过吐温20进行修饰，得到脂质相；将脂质相与安吖啶在高温环境中混合加工制成预包物，再采用包覆剂进一步加工，制备成含安吖啶的包封组合物。通过以上物质的反应制备出了具有较高包封率的含安吖啶的包封组合物。
34.药物释放初期有突释现象的发生，随后药物呈现持续而缓慢的释放。可能原因在于含安吖啶的包封组合物外部具有一层包覆剂和脂质相的包裹，由于包覆剂比表面积较大，药物分子可能一部分吸附在包覆剂的表面，或者富集在包覆剂的外层，另一部分镶嵌在包覆剂和脂质相的骨架中。外层药物快速释放，产生初始阶段的突释。此后，药物的释放主要是从包封内部中扩散出来，具有持续和缓慢的特点。
35.安吖啶静脉给药后消除快，血液中药物维持时间短，疗效不理想，因此，本发明通过包封技术实现靶向给药。然而，脂质相包覆材料的的疏水特性使得它们容易通过网内皮系统被快速清除，这需要通过制备亲水性涂层来解决。本发明通过壳聚糖改性合成了包覆剂，并将其作为安吖啶的外包材料。包覆剂通过调节电荷的水平，阻止了药物被排泄出体外，而且经过巯基乙酸和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应，再与羟胺进行
改性得到包覆剂，由于反应产生的二硫化交联结构提供了更可控和更慢的吸水能力，具有一定的膨胀能力，膨胀后可以有效地与体液相互作用，同时保持其完整性。包覆剂具有可电离官能团，与水的相互作用增强，而且由于羟胺带正电荷的-nh2基团通过静电相互作用附着在带负电荷的体液上，从而提高了黏附性能，因此可以到达细胞表面进行有效的跨细胞运动。后期受控的缓慢释放可能原因在于脂质颗粒周围亲水性涂层的存在，为安吖啶的移动提供了障碍，使药物受控缓慢释放。另外脂质相可以通过纳米封装保护其不受氧、光、ph值、水分和降解的影响，使安吖啶在特定环境中更容易溶解，并在所需的位置以可接受的速度释放，从而保护化学结构，延长药物释放。