专利名称：药用组合物的制作方法
缓释剂型能减少服用生物活性化合物的次数，也能通过降低该化合物的血清峰值而减小副作用。服用缓释剂型的生物活性蛋白质和多肽也具有显著的优点，因为这类化合物的生物半衰期一般较短。
药学上可接受的聚合物如明胶、甲基纤维素和聚乙二醇的含水凝胶已经用来控制药物从剂型中释出的速度。药物通过该凝胶的扩散受到该体系的粘度及由凝胶本身立体聚合物网状结构所形成的曲折的扩散通道的妨碍。由于通过皮下注射针注射该粘性物质的困难，所以这类凝胶不能轻而易举地使经肠道外使用的药物缓释。此外，这些聚合物的高分子量妨碍它们从注射部位迅速消除。
卵磷脂凝胶本身已众所周知，参见例如Scartazzini等人，J.Phys.Chem.，92卷第829-833页(1988)和Luisi等人，ColloidPolym.Sci.，268卷第356-374页(1990)。将临界量水加到卵磷脂和卵磷脂用有机溶剂的混合物中，在体外形成该凝胶。卵磷脂凝胶具聚合物凝胶的许多流变学性质。
根据本发明，已发现，通过肌内或皮下注射卵磷脂的有机溶液，可在体内形成卵磷脂凝胶。即通过从注射部位含水隙间体液中吸收水分而在体内形成本发明的卵磷脂凝胶。
进一步发现，在体内形成的卵磷脂凝胶可作为载体使生物活性化合物在体内持续释放。优选的化合物是蛋白质和多肽，例如干扰素α(IFN-α)和人体生长激素释放因子(GRF)或其具GRF活性的类似物。
本发明包括生物活性蛋白质和多肽的可用于注射的缓释组合物，其中，所述的组合物含卵磷脂、药学上可接受的供肌内或皮下注射且基本上不溶于水的卵磷脂用溶剂和生物活性化合物。
本发明也包括用治疗量的生物活性化合物持续治疗人或其他哺乳动物的方法，它包括经肌内或皮下给予本发明组合物。
本发明也包括在体内制备提供持续释放含生物活性化合物的卵磷脂凝胶的方法，它包括经肌内或皮下注射本发明组合物。
更具体地说，本发明包括可用于注射的药用组合物，它在体内形成以持续释放生物活性化合物的卵磷脂凝胶，该组合物包括1)基本上不溶于水且能分散卵磷脂并在吸收体液后能形成卵磷脂凝胶的药学上可接受的有机溶剂;
2)分散在所述溶剂中的治疗有效量的所述生物活性化合物;及3)按在吸收体液时足以引起凝胶化的量分散于所述溶剂中的卵磷脂。
本发明也包括用治疗量的生物活性化合物持续治疗人或其他哺乳动物的方法，它包括经肌内或皮下给予本发明组合物。
本发明也包括在体内制备提供持续释放生物活性化合物的卵磷脂凝胶的方法，它包括经肌内或皮下注射本发明组合物。
本文中术语“卵磷脂”代表不溶于丙酮的复杂的混合物，即极性磷脂，它主要由磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇所组成，还含不同量的其它物质，如甘油三酯、脂肪酸和糖类，其中，丙酮不溶物不低于50%。参见美国药典(1990年版)，第1942页。术语“卵磷脂”也包括含大量的上述中的一种磷脂的组合物。
卵磷脂的来源和具体组成并不重要，只要它能形成凝胶，并适宜给人或其他哺乳动物注射。卵磷脂的来源包括植物来源，例如大豆、玉米、花生和向日葵籽。卵磷脂的动物来源的例子有蛋黄和动物脑组织。
优选的卵磷脂来自大豆，它的磷脂酰胆碱的百分含量相当高。该卵磷脂可从未纯化的工业用大豆卵磷脂(例如IV-S型，SigmaChemicalCo.，St.Louis，Missouri)中用例如上述Scartazzini等人的方法制备;或者，从市场上购买磷脂酰胆碱的含量＞90%的纯化的大豆卵磷脂(如LIPOIDS100，LipoidKG，Frigenstr.4，D-6700Ludwigshafen24，德国;TypeⅢ-S，SigmaChemical，见前述)。
任何一种适宜于注射且卵磷脂、生物活性化合物和下述的任何成分都能在其中分散的有机溶剂，只要它基本上不溶于水，并且在加入临界量水后能形成卵磷脂凝胶，就可以用作制备本发明组合物的溶剂。此处，所谓某些物质被“分散”，指它们在该溶剂中或者形成真溶液，或者形成稳定的悬浮液。可用于实施本发明的溶剂的性能可在体外通过加入临界量的水后形成卵磷脂凝胶的能力所确定，这要借助于先有技术中的任何已知方法，如前述Scartazzini等人公开的方法来确定。
植物来源的脂肪酸甘油酯是优选的溶剂。在本发明中可使用的植物来源的甘油酯的例子有植物油，例如椰子油、玉米油、棉籽油、棕榈仁油、棕榈油、红花油、芝麻油、花生油和豆油。优选的植物油是芝麻油、花生油和豆油。
优选的甘油酯是甘油三酯，其中的脂肪酸具8-10个碳原子。这样的甘油三酯被称作中链甘油三酯(MCT′s)。特别优选分馏后的椰子油中8-10碳脂肪酸的中链甘油三酯，所述脂肪酸含50-65%的辛酸(8个碳)和30-45%的癸酸(10个碳)，不超过2%的己酸(6个碳)和3%的十二烷酸(12个碳)。该MCT是由DynamitNobel制造的，称作MIGLYOL812，它可以从Kay-Fries，Inc.，Montvale，NewJersey获得。
在本发明组合物中卵磷脂和有机溶剂的重量比并不重要，只要该组合物能形成卵磷脂凝胶。卵磷脂与溶剂的重量比以大约在0.1-2.0范围内较好，约在0.3为最好。
本发明组合物也可以包含起稳定活性成分作用的物质。该起稳定作用的物质将随组成该组合物的具体活性成分不同而有差别。常规蛋白质和多肽的稳定剂的例子有人血清白蛋白(HSA)、α-生育酚和乙二胺四乙酸二钠盐(“EDTA二钠盐”)。
本发明组合物也可以包含防腐剂，它可以在贮存期间防止组合物中细菌的生长。常规防腐剂的例子有对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。
在本发明优选的实施方案中，本发明组合物还含有赋形剂，它们起改良经皮下或肌内给予本发明组合物后在体内形成卵磷脂凝胶的性质的作用。所述赋形剂包括(1)渗透剂渗透剂增加吸收水分而成为卵磷脂凝胶的速度，并增加较均匀地分布在凝胶中的活性成分的释放速度。按照本发明，任何常规渗透剂都可以使用。优选的渗透剂有甘露醇、右旋糖和氯化钠;
(2)疏水剂疏水剂降低从注射部位消除卵磷脂凝胶的速度并降低释放活性成分的速度。按照本发明，任何常规疏水剂都可以使用。优选的疏水剂是胆固醇和它的衍生物，例如胆固醇硫酸酯、胆固醇醋酸酯和胆固醇丁二酸单酯;以及(3)表面活性剂表面活性剂增加卵磷脂凝胶从注射部位消除的速度，并提供释放活性成分的初始高速度。根据本发明，任何常规表面活性剂都可使用。优选的表面活性剂有硬脂酸、软脂酸、8-26个碳的羧酸，以及这些酸的盐。其它表面活性剂包括聚氧化亚乙基二醇(例如PLURONIC′s)和聚氧乙烯脱水山梨醇酐一油酸酯(例如吐温类)。
上述赋形剂(1)-(3)最好均按1份重溶剂0.1-1.0份重赋形剂的比例使用。但是，所述赋形剂的总用量最好低于1.5份重，而相应溶剂的用量为1份重。
如果活性成分在卵磷脂/溶剂混合物中不易扩散，则可将该活性成分先溶在少量水中或溶于从先有技术获悉适合该具体活性成分的缓冲溶液中。另外，可将水或缓冲液加到本发明组合物中，以便引起凝胶形成，这样，在注射前就增加了该组合物的粘度。在以上两种情况下，水或缓冲液的体积都应该小于能引起组合物分离成水相和非水相或使该组合物的粘度增大到超出它可以注射给药的粘度范围的量。
由本发明组合物在体内形成的卵磷脂凝胶持续释放生物活性化合物的能力可以通过任何常规方法来测定。例如，可将含生物活性成分的试验组合物注射到适宜的实验动物如小鼠身上。然后在一定的时间内观察该活性成分在实验动物体内的血液浓度。
凝胶持续释放活性成分的能力也可以通过将该凝胶逐次浸入试验溶液中后测定活性成分的释放，从而在体外进行测定。例如，被研究的化合物在体外的释放速度可在pH7.4的磷酸盐缓冲液中测定。将每种凝胶(200mg)一式三份样品用注射器加到1.5ml微型离心试管底部。然后将缓冲液(400微升)加到该凝胶上面。将该离心试管密封后，放入保持37℃的恒温箱振荡器浴中，以120转/分的转速搅拌。一定时间后，将缓冲液从试管中取出，并使用适宜测定该活性成分的任何方法测定该缓冲液。然后，再往含检测样品的微型离心试管中加入新的缓冲液，重复以上步骤，直到其中活性成分浓度为零或极小时为止。
在优选的实施方案中，本发明持续给予干扰素α的本发明组合物按重量计，每克最终组合物含1份的甘油酯溶剂，0.1-2.0份分散在所述溶剂中的含约90%以上磷脂酰胆碱的卵磷脂，0.1-1.0份一种或一种以上的赋形剂，其中，所述赋形剂选自渗透剂、疏水剂和表面活性剂，且该赋形剂的总量不超过1.5份，和约1.0×108-3.0×108国际单位的干扰素α。
本发明组合物可按下述方法制备将卵磷脂、活性成分和根据需要加入的选自渗透剂、疏水剂和表面活性剂或它们的混合物的赋形剂分散到药学上可接受的溶剂中，并将该混合物混合均匀。在该制备方法的特殊情况中，向该混合物中加入附加溶剂如正己烷，混合均匀后再将其蒸除掉。
实施例1(a).-(k)的注射用组合物按下列方法制备非溶剂法(1)在用氮气喷雾的同时，将分散卵磷脂用的溶剂加热到40℃;
(2)加入并分散卵磷脂;
(3)加入并分散赋形剂;
(4)冷却到25℃;
(5)均化10分钟并保持温度在40℃以下;
(6)冷却到25℃，加入活性成分并混合均匀。
本发明的注射用组合物也可按下述方法制备溶剂法(1)在用氮气喷雾的同时，将用于分散卵磷脂的溶剂、卵磷脂和赋形剂溶解在正己烷中;
(2)加入活性成分并使它们乳化;
(3)在保持搅拌的同时，将混合容器置于负压下，直到正己烷被蒸发掉。
实施例1
本发明注射用组合物的实施例如下实施例1(a)干扰素α-2a的浓缩本体溶液0.148ml(2.02×1010IU/ml)pH5.0醋酸铵缓冲液0.052ml卵磷脂(LIPOIDS100)6.0gMCT(MIGLYOL812)14.8g实施例1(b)干扰素α-2a/甘露糖醇冻干粉0.5g(5.4×108IU/mg)卵磷脂(LIPOIDS100)3.0gMCT(MIGLYOL812)1.485g对羟基苯甲酸甲酯0.009g对羟基苯甲酸丙酯0.001gdl-α生育酚0.005g实施例1(c)干扰素α-2a本体溶液0.65ml(2.02×108IU/ml)pH5.0醋酸铵缓冲液0.35ml卵磷脂(LIPOIDS100)6.0g
MCT(MIGLYOL812)2.97g对羟基苯甲酸甲酯0.018g对羟基苯甲酸丙酯0.002gdl-α生育酚0.01g实施例1(d)干扰素α-2a本体溶液1ml(13.2×108IU/ml)胆固醇3.0g甘露糖醇1.5g卵磷脂(LIPOIDS100)3.0gMCT(MIGLYOL812)4.0g实施例1(e)干扰素α-2a本体溶液0.9ml(11.3×108IU/ml)硬脂酸1.0g卵磷脂(LIPOIDS100)4.0gMCT(MIGLYOL812)4.0g人血清白蛋白(25%溶液)0.1ml实施例1(f)干扰素α-2a本体溶液4.86ml
(16.6×108IU/ml)pH5.0醋酸铵缓冲液1.03ml胆固醇9.0gMCT(MIGLYOL812)9.0g甘露糖醇3.0g卵磷脂(LIPOIDS100)3.0g对羟基苯甲酸甲酯0.016g对羟基苯甲酸丙酯0.0018g实施例1(g)干扰素α-2a本体溶液4.86ml(16.6×108IU/ml)pH5.0醋酸铵缓冲液1.03ml硬脂酸9.0gMCT(MIGLYOL812)9.0g甘露糖醇3.0g卵磷脂(LIPOIDS100)3.0g对羟基苯甲酸甲酯0.016g对羟基苯甲酸丙酯0.0018g实施例1(h)干扰素α-2a本体溶液4.86ml(16.6×10IU/ml)pH5.0醋酸铵缓冲液1.03ml
胆固醇4.5g硬脂酸4.5gMCT(MIGLYOL812)9.0g甘露糖醇3.0g卵磷脂(LIPOIDS100)3.0g对羟基苯甲酸甲酯0.016g对羟基苯甲酸丙酯0.0018g实施例1(i)GRF类似物0.003mgpH4.0醋酸钠缓冲液3.957g胆固醇6.0gMCT(MIGLYOL812)6.0g甘露糖醇2.0g卵磷脂(LIPOIDS100)2.0g对羟基苯甲酸甲酯0.04g对羟基苯甲酸丙酯0.004g＊[His1，Val2，Gln8，Ala15，Leu27]-GRF(1-32)-OH含有天然GRF的头32个残基，并在残基1，2，8，15和27上有指示的取代物。
实施例1(j)干扰素α-2a本体溶液0.453ml(16.6×108IU/ml)pH5.0醋酸铵缓冲液2.0ml
卵磷脂(LIPOIDS100)5.0gMCT(MIGLYOL812)10.0g胆固醇7.5g实施例1(k)干扰素α-2a本体溶液0.905ml(16.6×108IU/ml)pH5.0醋酸铵缓冲液1.548ml卵磷脂(LIPOIDS100)5.0gMCT(MIGLYOL812)10.0g胆固醇7.5g实施例2释放IFN-α持续时间的测定将含IFN-α的实施例1(a)-1(h)的组合物给三只Sprague-Dawley大鼠经皮下注射给药。另外的大鼠给予常规溶媒(标准盐水)中的IFN-α作为对照。采集血样，利用免疫放射测定法(CelltechLtd.，Berkshire，England)或酶免疫吸附剂法(EIA)，即由Gallati等人采用的方法(见J.Clin.Chem.Clin.Biochem.，20∶907-914(1982))测定血浆中IFN-α的浓度。
图1-图4显示在给予实施例1(a)-1(h)的组合物的大鼠身上获得的缓释结果。该值是在三只大鼠中测得的干扰素α-2a的平均血清浓度。
图1和图2比较了干扰素α-2a常规溶液与本发明的不含缓释赋形剂的组合物。图1显示当以常规溶液形式，按1.5×108单位剂量给予干扰素α-2a时，干扰素血清浓度在24小时时低于检测线以下。但是，图1也表明实施例1(a)的缓释组合物在至少96小时内其血清浓度能被检出。图2表明按每只大鼠给药量为5.4×107单位，由实施例1(b)和1(c)的组合物获得的持续释药与常规溶液的比较结果。
图3显示本发明组合物中干扰素的释放能通过加入渗透活性试剂(甘露糖醇)和调节疏水性添加剂(胆固醇)及有助于该疏水剂增溶的表面活性剂(硬脂酸)的比例加以改变。实施例1(f)的组合物含30%的胆固醇，且至少336小时内都能检测到血中的干扰素。实施例1(h)的组合物与实施例1(f)的组合物相比，除了前者含14%的胆固醇和15%的硬脂酸而不是含30%的胆固醇外，其它均相同。该组合物中干扰素α-2a的释放期能持续约240个小时。实施例1(g)的组合物含30%的硬脂酸，不含胆固醇，它的释药期最短;只能持续72小时。图3显示本发明组合物中干扰素的释放能通过加入附加的赋形剂来控制。
图4显示由实施例1(d)和1(e)的组合物给出的释药期，进一步表明本发明的多方面适合性。
图1-图4的结果表明与常规的IFN-α溶液相比，本发明组合物能显著增加IFN-α在实验动物血中存留的时间。对于常规IFN-α溶液而言，血中IFN-α的浓度在给药24小时内降到零。而对于含IFN-α的本发明组合物而言，血中IFN-α的浓度在给药后47.5-300小时以上才能降到零，该时间的长短决定于该组合物的组成。
实施例3释放GRF类似物持续时间的测定将含GRF类似物的实施例1(i)的组合物给C57/BL6小鼠经皮下注射给药。在7天中，间隔一定时间采集一次血样，并测定其中的生长激素。在图5中显示的结果表明生长激素的血药浓度从注射实施例1(i)的制剂起的168个小时期间呈下降趋势。每一试验组有五只鼠(药物组和安慰剂组)。注射实施例1(i)的制剂后，鼠体内的生长激素存在时间延长，证实了本发明组合物在体内持续释放GRF类似物的能力。
实施例4含IFNα-2a组合物抗肿瘤活性的测定将人体淋巴瘤细胞植入无胸腺的裸鼠，让其生长。每周三次给予该鼠在常规溶媒中的IFNα-2a或每周一次给予该鼠以本发明组合物形式的IFNα-2a(实施例1(j)和1(k)的组合物)。两组每周所给予的IFNα-2a总量是相同的。图6显示在一段时间内，常规IFN-α组合物和实施例1(j)和1(k)的组合物对植入肿瘤大小的影响。
图6的结果表明本发明组合物，一周给药一次，其抑制植入瘤生长效果与常规组合物一周给药三次的效果相同。
权利要求
1.在体内形成卵磷脂凝胶以持续释放生物活性化合物的药用组合物，它含有1)1份(按重量计)基本上不溶于水的药学上可接受的有机溶剂；2)分散在所述溶剂中的治疗有效量的所述生物活性化合物，和3)约0.1-2.0份(按重量计)分散在所述溶剂中的卵磷脂。
2.权利要求1的组合物，它还含有分散在所述溶剂中的赋形剂，其中，该赋形剂选自渗透剂、疏水剂和表面活性剂或它们的混合物。
3.权利要求2所述的组合物，其中，按重量计，相对于1份所述溶剂，单独一种的赋形剂约占0.1-1.0份，但赋形剂总量应少于约1.5份。
4.权利要求3的组合物，其中，溶剂是植物来源的甘油酯或甘油酯的混合物。
5.权利要求4的组合物，其中，溶剂是中链甘油三酯或中链甘油三酯的混合物。
6.权利要求5的组合物，其中，卵磷脂含约90%以上的磷脂酰胆碱。
7.权利要求6的组合物，其中，渗透剂选自甘露糖醇、右旋糖和氯化钠。
8.权利要求7的组合物，其中，疏水剂选自胆固醇和其衍生物。
9.权利要求8的组合物，其中，表面活性剂选自硬脂酸、软脂酸、8-26碳的羧酸以及这些酸的盐、聚氧化亚乙基二醇和聚氧乙烯脱水山梨(糖)醇酐一油酸酯。
10.权利要求9的组合物，其中，生物活性化合物是干扰素α。
11.权利要求9的组合物，其中，生物活性化合物是生长激素释放因子或其具生长激素释放因子活性的类似物。
12.含下列成分的药用组合物1)1份(按重量计)药学上可接受的溶剂，其中，所述溶剂是甘油酯或甘油酯的混合物;2)约0.1-2.0份(按重量计)分散在所述溶剂中的卵磷脂，其中，所述卵磷脂含约90%以上的磷脂酰胆碱;3)在每克分散在所述溶剂中的最终形式组合物中，干扰素α的含量约为1.0×108-3.0×108国际单位。
13.权利要求12的组合物，其中，溶剂是中链甘油三酯或中链甘油三酯的混合物。
14.权利要求13的组合物，按重量计，相对于1份所述溶剂，它还含有0.1-1.0份分散在该溶剂中的一种或一种以上的赋形剂，其中，所述赋形剂选自渗透剂、疏水剂和表面活性剂，且该赋形剂总量不超过1.5份。
15.权利要求1-14中任一权项定义的药用组合物的制备方法，它包括将卵磷脂分散到基本上不溶于水的药学上可接受的溶剂中，加入活性成分，并将该混合物混合均匀。
16.按照权利要求15的方法，其中，将选自渗透剂、疏水剂和表面活性剂或它们的混合物的赋形剂加到该分散体中。
17.按照权利要求15或权利要求16的方法，其中，加入附加溶剂如正己烷并在将该组合物混匀后蒸除。
18.用生物活性化合物以持续释放的凝胶形式来对病人进行持续治疗的方法，它包括经皮下或肌内给予如权利要求1-14中任一权项定义的药用组合物。
19.如说明书中所述的本发明，特别是关于实施例1。
全文摘要
生物活性蛋白质和多肽的可注射用缓释组合物，它包含卵磷脂、药学上可接受的供肌内或皮下注射且基本上不溶于水的卵磷脂用溶剂和生物活性化合物。经肌内或皮下给药后，该组合物在体内形成可持续释放生物活性化合物的卵磷脂凝胶。
文档编号A61K47/24GK1090509SQ9311911
公开日1994年8月10日 申请日期1993年10月13日 优先权日1992年10月14日
发明者R·塔兰廷诺 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司