专利名称：生物活性加压素类似物的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物活性加压素类似物。更具体地讲，本发明涉及具有特定的制尿活性并且与广泛施用的制尿化合物1-脱氨基-8-D-精氨酸加压素(也被称为去氧加压素或DDAVP)相比大大改善了生物活性利用率的加压素类似物。
背景技术：
DDAVP作为一种具有制尿活性的药物制剂，是近20多年来市场上公知的一种产品，起初它主要用于患有尿崩症患者的治疗，但是，最近一些年来，它也用于治疗遗尿，特别是夜间遗尿。而且它还成功地用于治疗hemphilia A型、von Willebrand′s疾病以及治疗不明原因的长时间出血。
静脉内使用DDAVP可以得到所述化合物的最佳生物利用率，但是不便于在家庭中使用。因此，DDAVP的常用的用药方式是采用鼻内给药途径，可是所述化合物的生物利用率会降低约10倍。如欧洲专利0 163 723中所述，DDAVP也可以通过口服给药，但其生物利用率比通过鼻粘膜给药降低得更多。
许多研究工作都集中在改进的DDAVP类似物上，现在已经合成出了大量的DDAVP衍生物并且对所研究的化合物的特定制尿活性以及改进的鼻粘膜吸收作用和肠粘膜吸收作用进行了生物利用率试验。关于本发明本发明提供了下式新的加压素类似物 其中X为(S)-2-氨基-2-甲基-丁酸(CαMeAbu)或缬氨酸(Val)，Y为噻吩丙氨酸(Thi)或蛋氨酸(Met)，Z为D-苯丙氨酸(D-Phe)或D-噻吩丙氨酸(Thi)或D-酪氨酸(D-Tyr)和Asn为天冬酰胺Hyp为4-反式-羟脯氨酸D-Arg为D-精氨酸Gly为甘氨酸。
正如下文所述生物利用率试验所表明的，本发明新的化合物除了具有良好的制尿活性以外，与DDAVP相比，其胃肠吸收值高大约12-25倍，而鼻内吸收值高2-5倍。对于本发明化合物的血凝集作用还没有进行试验，但是可以确信它类似于DDAVP，本发明化合物还可用于治疗hemphiliaA型、von Willebrand′s疾病以及治疗不明原因的长时间出血。
本发明另一方面还涉及含有作为活性成分的本发明加压素类似物的药物制剂。本发明的这一方面是指包括任何实用的药物制剂，只要它含有作为活性成分的本发明加压素类似物。所述药物制剂优选的是口服制剂形式，例如片剂或胶囊剂，鼻制剂形式，例如鼻喷雾剂或鼻滴剂，或者静脉内制剂，例如注射用溶液。在药物制剂中，所述活性成分与可药用的添加剂和/或稀释剂相混合，适宜的可药用的稀释剂为生理盐水等渗溶液，而其它可药用的添加剂和稀释剂可以在文献例如the Buropean orUS Pharmacopoeia中找到，这些添加剂的选择应当与适于特定用药途径的具体制剂形式相一致。
本发明另一方面还涉及本发明加压素类似物可用作药物，所述药物优选的是制尿剂。
本发明另一方面还涉及本发明加压素类似物在制备治疗尿崩症的药物中的应用。本发明也包括本发明加压素类似物在制备治疗遗尿，特别是夜间遗尿的药物中的应用。
本发明还涉及一种治疗尿崩症或遗尿患者的方法，所述方法包括给所述患者施用制尿作用有效量的本发明加压素类似物或者本发明药物制剂。合成方法的一般性描述本发明加压素(VP)类似物可以通过合成肽的公知方法即逐步合成法制备，通过在氨基酸残基或被修饰的残基之间形成肽键并最终合环来完成所述的合成反应。
下列实施例中所述制备的所有VP类似物均是通过固相方法合成的(J.M.Stewart，J.D.Young，Solid Phase Peptide Synthesis，PlerceChemical Company，1984；和E.Atherton，R.C.Sheppard，Solid PhasePeptide Synthesis，1989)。
所述的肽可以通过反相色谱法纯化，流动相由乙腈/水/0.1％TFA构成。经纯化的肽再转变成它们的乙酸盐。所述肽的纯度和结构可以通过HPLC、氨基酸分析和FAB-MS确定。
本文中使用了下列缩略语Boc ＝叔丁基氧羰基Fmoc＝芴基甲氧基羰基H-CαMeAbu-OH ＝(S)-2-氨基-2-甲基-丁酸Hyp ＝4-反式-羟脯氨酸Thi ＝2-噻吩丙氨酸TBTU＝2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基-uronium四氟硼酸盐DMF ＝二甲基甲酰胺TFA ＝三氟乙酸除了(S)-2-氨基-2-甲基-丁酸(H-CαMeAbu-OH)是由JanssenChimica(art.nr.29.005.02)提供以外，所述氨基酸衍生物均是由Bachem AG，Switzerland提供。所述Fmoc-基团是通过常规方法引入的(P.B.W.Ten Kortenaar等人，Int.J.Peptide Protein Res.27,1986，398)，而Nα Fmoc-S-(3-叔丁基氧羰丙基)半胱氨酸是按照Z.Prochazka等人在Collect.Czech.Chem.Commun.，57,1992,1335中所述的方法合成的。
所述参照化合物DDAVP是用公知的方法由Ferring AB，Malmo，Sweden合成的，而实施例3的参照化合物也是由Ferring AB，Malmo，Sweden合成的。最后提到的化合物由M.Zaoral等人公开于Peptides 1986，p.468表2中(1987 Walter de Gruyter&Co.，Berlin.New York)。实施例1 用固相法合成所述的肽。除了2位(D-phe)以外，用Fmoc/tBu-法，其中用Nα-Boc-氨基酸(Boc-D-Phe-OH)用作衍生物，用TentaGel-S RAM-树脂(1g，0.2mmol/g；RAPP聚合物S 30 023)作固相。将所述肽由树脂上脱离出并用TFA/乙二硫醇/茴香醚95∶2.5∶2.5(1.5小时；室温)进行脱保护。蒸除掉大部分液体并用乙醚将所述的肽沉淀出，然后冷冻干燥除去水。在无水DMF中用TBTU(1-2当量)和N-甲基-吗啉(15-20当量)进行1位和2位间的合环反应，所述肽的浓度为1mg/ml，反应时间为室温下进行4小时。蒸除溶剂并将所述的肽用乙醚沉淀出，在反相色谱柱上进行纯化，用乙腈/水/0.1％TFA作洗脱剂。将具有可接受纯度的级份进行蒸发并将残余物加到反相色谱柱上，所述色谱柱用0.2M乙酸铵和水洗涤。用乙腈/水/1％乙酸的混合液将所述的肽洗脱掉，将具有可接受纯度的级份进行蒸发并冷冻于燥。用HPLC、氨基酸分析和FAB-MS分析测定所述肽的结构。
收率为36mg，纯度为9％。实施例2 用和实施例1中所述相同的方法合成并纯化所述的肽。
收率为77mg，纯度为99％。实施例3(参照实施例) 用和实施例1中所述相同的方法合成并纯化所述的肽。
收率为23mg，纯度为99％。实施例4 用和实施例1中所述相同的方法合成并纯化所述的肽。
收率为30mg，纯度为99％。实施例5 用和实施例1中所述相同的方法合成并纯化所述的肽。
收率为34mg，纯度为99％。实施例6
用和实施例1中所述相同的方法合成并纯化所述的肽。
收率为57mg，纯度为99％。生物活性对下列特性进行化合物的体内试验研究a)制尿活性(ADiv)在精确设计的鼠模型中测定所述肽的制尿活性，它是基于对静脉内用肽激发后鼠产生的尿的传导性进行连续的检测(J.MedicinalChem.(1978)，21，352-356)。b)肽的胃肠吸收作用[(FAD)v]通过将经肠给药后的制尿作用(曲线下的面积)与经静脉内给药后的制尿作用相比较，测定经外科手术引入的塑料管对肠内给药(幽门末端10cm处)后的肽的吸收作用。所述制尿作用如下文所述(J.MedicinalChem.(1978)21，352-356)。c)肽的鼻内吸收作用(FAD)in通过将经鼻内给药后的制尿作用(曲线下的面积)与经静脉内给药后的制尿作用相比较，测定经与Hamilton注射器相连的PE20插管于鼻腔内给药30μl体积后肽的吸收作用。所述制尿作用如下文所述(J.MedicinalChem.(1978)21，352-356)。结果
上述结果表明，与本发明化合物(实施例1、实施例2、实施例4、实施例5和实施例6)相比，参照化合物DDAVP和实施例3的化合物具有相当低的生物利用率。
权利要求
1.下式加压素类似物 其中X为(S)-2-氨基-2-甲基-丁酸(CαMeAbu)或缬氨酸(Val)，Y为噻吩丙氨酸(Thi)或蛋氨酸(Met)，Z为D-苯丙氨酸(D-Phe)或D-噻吩丙氨酸(Thi)或D-酪氨酸(D-Tyr)和Asn为天冬酰胺Hyp为4-反式-羟脯氨酸D-Arg为D-精氨酸Gly为甘氨酸。
2.一种药物制剂，所述药物制剂含有作为活性成分的权利要求1的加压素类似物。
3.根据权利要求2的药物制剂，所述药物制剂为口服制剂形式。
4.根据权利要求2的药物制剂，所述药物制剂为鼻制剂形式。
5.根据权利要求2的药物制剂，所述药物制剂为静脉内制剂形式。
6.一种用作药物的权利要求1的加压素类似物。
7.根据权利要求6的加压素类似物，其中所述药物为制尿剂。
8.权利要求1的加压素类似物用于制备治疗尿崩症的药物。
9.权利要求1的加压素类似物用于制备治疗遗尿的药物。
10.一种治疗尿崩症或遗尿患者的方法，所述方法包括给所述患者施用制尿作用有效量的权利要求1的加压素类似物或者权利要求2-5的药物制剂。
全文摘要
本文公开了下列式(I)的加压素类似物，其中X为(S)-2-氨基-2-甲基-丁酸(CαMeAbu)或缬氨酸(Val)，Y为噻吩丙氨酸(Thi)或蛋氨酸(Met)，Z为D-苯丙氨酸(D-Phe)或D-噻吩丙氨酸(Thi)或D-酪氨酸(D-Tyr)。本文还公开了含有作为活性成分的加压素类似物的药物制剂并且可列举的实例有口服制剂、鼻制剂和静脉内制剂。本发明加压素类似物可用作药物，特别是用作制尿剂，所述尿剂优选的是用于治疗尿崩症或遗尿。
文档编号A61K38/11GK1125451SQ9419249
公开日1996年6月26日 申请日期1994年6月16日 优先权日1993年6月18日
发明者A·尼尔森, H·奥逊, C·索德堡-阿姆, J·特龙纳 申请人:费灵有限公司