非晶形苯并噻吩类化合物、其制备方法及使用方法

专利名称：非晶形苯并噻吩类化合物、其制备方法及使用方法
骨质疏松为由各种病因引起的一组疾病，但是其特征在于每单位体积的骨量净丢失。这种骨质丢失的后果和导致的骨折为骨骼不能再为机体提供足够的支持。最普通的骨质疏松之一与绝经有关。在月经停止后3-6年内，大多数妇女骨小梁隔(trabecular compartment)中骨量的丢失为约20％-约60％。这种快速的丢失一般与骨再吸收增加和形成有关。然而，再吸收循环是更主要的，其结果为骨量的净丢失。骨质疏松是绝经后妇女中最普通和严重的疾病。
据估计仅仅在美国就有二千五百万妇女患有这种疾病。骨质疏松的结果对个人是有害的，而且由于其慢性以及该种疾病后果需要广泛和长期的帮助(住院和家庭护理)，因而引起巨大的经济损失。对于年龄较大的病人，情况尤是如此，尽管骨质疏松通常不认为是威胁生命的原因，但是有20％-30％的死亡率与老年妇女的髋部骨折有关。这种死亡率的大的比例与绝经后的骨质疏松直接有关。
绝经后骨质疏松的作用在骨中最易受损的组织为小梁骨。这种组织通常指海绵状骨或松质骨，并且特别集中于所述骨的末端(关节附近)和脊柱的椎骨。小梁组织的特征为相互交联的小骨样结构以及构成骨外表面和中心轴的更坚硬和致密的皮层组织。这种小梁的交联网络为外侧皮层结构提供了外侧支持，并且对于总体结构的生物机械强度也是很关键的。在绝经后的骨质疏松中，主要是小梁的再吸收和丢失导致骨损坏和骨折。至于绝经后妇女的小梁丢失，认为最普通的骨折为那些与高度依赖小梁支持，例如椎骨、颈承重骨例如股骨和前臂有关的那些骨折是不令人吃惊的。的确，髋部骨折、collies骨折和椎骨粉碎性骨折是绝经骨质疏松的标志。
治疗绝经后骨质疏松的最普遍接受的方法为雌激素替代疗法。尽管该疗法一般是成功的，但是病人对该疗法的依从性很低，这主要是由于雌激素治疗常常产生不需要的副作用。另外的治疗方法为给予双膦酸酯化合物，例如Fosama(Merck & Co.，Inc.)。
在绝经前期，大多数妇女比同年龄的男性心血管疾病的发病率低。然而，在绝经后妇女心血管疾病的发病率缓慢上升至与男性中观察到的水平相当。这种保护作用的丧失与雌激素的丢失有关，具体讲与雌激素调节血清脂质水平的能力的丧失有关。人们对于雌激素调节血清脂质的能力的性质还没有很好理解，但是到目前为止的证据表明雌激素可以在肝脏向上调节低密度脂质(LDL)受体，以去除过量的胆固醇。另外，雌激素似乎对胆固醇的生物合成具有部分作用，并且对于心血管的健康具有有利作用。
人们在文献中报道在雌激素替代疗法的绝经后妇女中血清脂质水平可以恢复至绝经前的浓度状态。因此，雌激素似乎为该种疾病的合理的治疗。然而，对于大多数妇女而言，雌激素替代疗法的副作用是不可接受的，因此限制了这种疗法的应用。故而对于该疾病的理想疗法为可以以与雌激素类似的方式调节血清脂质水平，但是避免所述的副作用，并且无雌激素治疗相关的危险的药物。
大量结构上无关的化合物能够与雌激素受体相互作用且在体内产生独特的分布模式(profile)。具有体内典型“纯”拮抗剂(如，ICI164384)或相对“纯”的激动剂(如，17b-雌二醇)的分布模式的化合物代表着该分类中谱系的对立两端。在这两端之间存在SERM(“选择性雌激素受体调节剂”)，其以作为在某些所需的组织中(如，骨)的全部或部分激动剂，以及作为在生殖组织中的拮抗剂及少量激动剂而具有临床和/或临床前选择性为特征。在这种药理学分类中，个别的SERM可以根据在生殖组织中的活性分布模式进一步区别。雷洛昔芬，第二代SERM，在子宫组织中显示出潜在的有用的选择性，且比三苯基乙烯为基础的雌激素受体配合物具有明显的优点。因此，雷洛昔芬显示出至少很适于治疗绝经后并发症，包括骨质疏松症及心血管疾病。期望随着雌激素受体活性剂的药理学及分子生物学方面的进一步进展，更多的SERM亚类会随着对这些新的雌激素化合物类别治疗用途的理解增加而在未来更多的出现。
尤其是雷洛昔芬的发展有些受到其物理性质的阻碍。如生物利用度及其生产。例如，雷洛昔芬一般是不溶性的，这可影响生物利用度。清楚的是，任何雷洛昔芬物理性质以及密切相关的化合物的进展都将潜在地提供一个更为有效的疗法而且增加了制造能力。
因此，提供非晶形的雷洛昔芬及增加了溶解性的有关化合物、其制备方法、药物制剂和使用方法对本领域来讲是一个重大的贡献。
本发明提供了非晶形形式的式I化合物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物
其中R1和R3独立为氢、-CH3、-CO(C1-C6烷基)、或-COAr，其中Ar为任选取代的苯基；R2选自吡咯烷基、六亚甲基亚氨基、及哌啶基。
图表1说明用结晶或非晶形式的I化合物治疗的狗的血浆中雷洛昔芬的平均水平。
本发明还提供了含有式I化合物的药物制剂。
本发明还进一步提供了制备无晶形式的I化合物的方法。
本发明还提供了式I化合物的应用方法，包括抑制骨损失或骨再吸收。
在此说明化合物所用的通用术语具有其通常的意义。例如，术语“C1-C6烷基”指具有1-6个碳原子的直或支链烷基。典型的C1-C6烷基包括甲基、乙基、正丙基及正丁基。术语“C1-C4烷氧基”指如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、及正丁氧基的基团。
任选取代的苯基包括苯基以及由C1-C6烷基、C1-C4烷氧基、羟基、硝基、氯、氟、或三(氯或氟)甲基等取代的苯基。
术语“抑制”包括其通常所接受的意义，其包括禁止、预防、遏制、及减慢、停止、逆转、阻断、或改善所出的症状或效果。
本发明优选的实施方案为其中R1和R3为氢，而R2是吡咯烷基、哌啶基或六亚甲基亚氨基的式I化合物。该优选组中代表性化合物包括6-羟基-2-(4-羟苯基)-3-[4-(2-吡咯烷基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩，6-羟基-2-(4-羟苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]-噻吩，及6-羟基-2-(4-羟苯基)-3-[4-(2-六亚甲基亚氨基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩。
本发明更优选的产物为其中R2为哌啶基的式I化合物。该类更优选的代表性化合物包括6-羟基-2-(4-羟苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩。
本发明的这些化合物可根据已确立的方法来制备，如在美国专利Nos.4133814，4418068及4380635和欧洲专利申请95306050.6(公开号0699672，Kjell等1995年8月30日提出，1996年3月6日公布)中详尽说明的方法，这些专利结合到本发明以作参考。另外也将1995年9月6日公布的欧洲专利申请号0670162A1中说明的信息结合到本发明以作参考。结晶形的盐酸雷洛昔芬可根据以下实施例部分中说明的方法来制备。
术语“非晶形”包括一种物理状态，其可通过X-射线衍射及其它方式包括(但不限于此)偏光显微镜及差示扫描量热法来证实。
一般地，该方法以具有6-羟基和2-(4-羟苯基)基团的苯并[b]噻吩为起始原料。将起始化合物保护、酰基化、脱保护而形成式I化合物。在以上提到的参考中也提供了这些化合物制备的另一些实例。
本发明的式I化合物适于通过构成本发明另一特色的方法来制备，其包括在获得非晶形产物的条件下从其溶液中重新获得式I化合物。
本发明的非晶形物质是通过将结晶形的式I化合物溶解于适当的溶剂或溶剂混合物中如甲醇和水，然后通过任何适当的方法再重新回收该物质来制备。可以从溶液中重新获得非晶形式I化合物的技术包括那些其中从溶液中除去溶剂，优选快速除去，而沉淀出产物的方法，以及那些其中产物从一种溶液中沉淀出的方法。已发现比较满意的应用这些步骤的方法，包括喷雾干燥、滚筒干燥、溶剂析出、旋转蒸发、及冰冻干燥。本发明特别优选的方法是喷雾干燥的方法。
本发明的实验所用的溶剂将根据所用的技术和条件来选择，包括水、甲醇、乙醇等，若要求还包括其混合液。
溶剂中式I化合物的浓度越高越有利于得到同量的非晶形式I化合物，优选的浓度范围在约5-40mg/ml内。所得较高的浓度一般依赖于制备中所用的溶剂系统，和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或羟丙基-b-环糊精(HPBCD)的存在与否。若需要可将溶剂加热以帮助溶解及除去溶剂。
一般地，式I化合物具有足够的热稳定性，经受得住喷雾干燥等操作，因此，喷雾干燥是优选的回收产物的方法。可用熟知的方法进行喷雾干燥系统操作以获得非晶形产物而基本上没有结晶物质及特殊的污染物。封闭循环喷雾干燥系统(干燥物质在该系统中再循环)在用于获得本发明产物上是安全且经济的。
该过程所用的干燥气体可以是空气，但与可燃性溶剂使用时优选惰性气体，如，氮气、氩气和二氧化碳。优选为氮气。根据所用的溶剂来选择喷雾干燥的进气温度，例如，温度在约75℃-150℃之间。
式I化合物的非晶形形式的存在通过在偏光显微镜下观测物质，及确定该物质是否是双折射来确定。若未观测到双折射，该物质即被认为是非晶形的。
本发明的式I化合物优选基本无该物质的结晶形式。长期研究表明本发明的非晶形形式是最稳定的。但是一经恢复为非晶形形式，可通过加入任何量的工艺中熟知的稳定物质来阻止向晶体形式的转化，如加入聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、聚乙二醇(PEG)、羟丙基-b-环糊精(HPB)、环糊精等等。
实验表明非晶形形式的溶解度比结晶形式的溶解度高出约250倍。溶解度增加的优点包括但不限于此制备非晶形物质更易，其包括设备的清洗问题；该物质的形成及释放更易等等。
非晶形的式I化合物也可在喷雾干燥前或后与一些其它物质结合，或另外加工以提供非晶形物质后，反过来再将其进行制剂加工。
已证明非晶形的式I化合物具有几个优点，包括(但不限于)较高的生物利用度，及是有效给药方法的形式。
术语“溶剂化物”指聚合体，其包含一或多个分子的溶质，如式I化合物，与一或多个分子的溶剂。虽然式I化合物的游离碱形式可用于本发明的方法中，但优选制备及应用其药学上可接受的盐的形式。术语“药学上可接受的盐”指酸的或碱的加成盐，其已知是无毒的且一般在药学文献中常用。药学上可接受的盐一般与其所衍生的母体化合物相比能增加其溶解性，因此常常更易制成液体或乳化剂。本发明方法中所用的化合物主要与各种有机及无机酸形成药学上可接受的酸加成盐，及包括药物化学中常用的生理上可接受的盐。这些盐也是本发明的一部分。用于形成这些盐的典型无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、连二磷酸等。也可应用由有机酸衍生的盐，如脂肪族单及双羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸及羟基链烷二酸、芳酸、脂肪及芳香磺酸、因此这些药学上可接受的盐包括乙酸盐、苯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、氢溴酸盐、异丁酸盐、苯丁酸盐、β-羟基丁酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，4-二酸盐、己酸盐、辛酸盐、盐酸盐、肉桂酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、富马酸盐、甘醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二羧盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磺酸盐、苯磺酸盐、对-溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、甲磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、对-甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸盐等。优选的盐为盐酸盐。
药学上可接受的酸加成盐一般通过式I化合物与一等摩尔或过量的酸反应而形成。该反应物一般在一互溶剂如乙醚或乙酸乙酯中结合。该盐正常在约1小时至10天内从溶液中沉淀出来，且可通过过滤分离，或用常用方法除去溶剂。本发明还提供了给予需要此治疗的哺乳动物，包括人药学上可接受的制剂，其包括有效量的式I化合物以及药学上可接受的稀释剂或载体。
在此所用的术语“有效量”指本发明化合物能够抑制、缓解、改善、治疗、或预防患有雌激素缺乏，如停经或卵巢切除，或不适的雌激素刺激如子宫纤维化或子宫内膜异位，或患有主动脉血管平滑肌细胞增生或再狭窄的哺乳动物包括人的症状所需的量。在由雌激素决定的癌症情况下，术语“有效量”指能够缓解、改善、抑制哺乳动物包括人的癌症生长，治疗或预防癌症和/或其症状的本发明化合物的量。
“药学上可接受的制剂”指载体、稀释剂、赋形剂和盐必须与制剂的活性成分(式I化合物)相容，且对其接受体无害。可通过工艺上熟知的方法制备药物制剂。例如，可将本发明的化合物与常用的赋形剂、稀释剂、或载体一起制成片剂、胶囊等。适用于这些制剂的赋形剂、稀释剂和载体的实施例包括以下填充剂和增充剂如淀粉、糖。甘露糖醇和硅衍生物；粘合剂如羧甲基纤维素和其它纤维素衍生物，藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如聚乙烯吡咯酮、羟基乙酸淀粉钠、羧甲基纤维素钠、琼脂、碳酸钙及碳酸氢钠；阻滞溶解剂如石蜡；吸收加速剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇、单硬脂酸甘油酯；吸附载体如高岭土和皂土；及润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和硬脂酸镁及固体聚乙二醇。最后的药物形式依其所用的赋形剂类型可为小丸、片剂、粉末、锭剂、小囊剂、扁囊剂、或无菌包装的粉末等。
另外，本发明的化合物也适于制成缓释剂型。可将该制剂制成在可能的一段时间内，只在或优选在肠道中某一特定部位释放活性成分。这些制剂包括可由聚合物质或蜡制得的包衣、封套(envolopes)、或保护基质。
用于治疗、抑制或预防患有本发明以上所提疾病的哺乳动物包括人的症状及/或疾病的所需式I化合物的特定剂量将依据具体的疾病、症状及严重性而定。剂量、给药途径及给药的次数最好由主治医生来决定。一般地，可接受的且有效的剂量在15-1000mg范围内，更典型地在15mg-80mg范围内。将这种剂量对需要此治疗的患者每日1-3次或按达到有效所需的时间给予，且给药期至少两个月，更通常为至少六个月或长期给药。
在本发明的另一实施方案中，式I化合物可与有效量的其它治疗剂共同给药，包括但不限于此，雌激素、孕甾酮、具有包括雷洛昔芬的苯并噻吩类化合物、具有抗雌激素活性的萘基化合物、二磷酸酯类(bisphosphonate)化合物如阿仑膦酸盐和替氯膦酸盐、甲状旁腺素(PTH)、包括截断和/或重组形式的PTH，如PTH(1-34)、降血钙素、骨形成蛋白(BMPs)，或其组合物。这些不同形式的可获得的这些其它治疗剂以及与其有关的各种使用方法和所用的剂量对那些本领域的技术熟练人员来讲是熟知的。
商业上可提供各种形式的雌激素和孕甾酮。在此所用的术语“雌激素”包括具有雌激素活性的化合物及以雌激素为基础的化合物。本发明所用的雌激素化合物包括，如，雌二醇、雌酮、雌三醇、马烯雌酮、马萘雌酮、环戊丙酸雌二醇、戊酸雌二醇、乙炔基雌二醇、聚磷酸雌二醇、雌哌酯、己烯雌酚、己二烯雌酚、氯烯雌醚及其混合物。以雌激素为基础的制剂包括如，17-a-乙炔雌二醇(0.01-0.03mg/天)、美雌醇(0.05-0.15毫克/天)和联合的雌性激素如Premarin(Wyeth-Ayerst；0.2-2.5毫克/天)。在此所用术语“孕甾酮”包括具有孕激素活性的化合物，如，孕甾酮、异炔诺酮、甲基炔诺酮、醋酸甲地孕酮、炔诺酮、孕甾酮为基础的制剂等。孕甾酮为基础的制剂包括，如甲孕酮如Provera(Upjohn；2.5-10mg/天)、异炔诺酮(1.0-10.0mg/天)、和炔诺酮(0.5-2.0mg/天)。优选雌激素为基础的化合物为Premarin，优选孕甾酮为基础的制剂为异炔诺酮和炔诺酮。每种雌激素及孕甾酮为基础的制剂的给药方法与本领域熟知的方法一致。
以下所给出的制剂是用于说明的目的，而并不以任何方式进行限制。在这些制剂中活性成分的总量占制剂总量的0.1％-99.9％。术语“活性成分”指式I化合物剂型1明胶胶囊组分 用量(毫克/胶囊)活性成分 0.1-1000淀粉NF 0-500可流动淀粉粉末 0-500硅氧烷流体350厘沲0-15将各组分混合，过No.45目U.S.筛，再填充入硬明胶胶囊中。
剂型2片剂组分 用量(毫克/片)活性成分 2.5-1000淀粉 10-50微晶纤维素10-20聚乙烯吡咯烷酮5(为10％的水溶液)羧甲基纤维素钠5硬脂酸镁 1滑石粉1-5将活性成分、淀粉和纤维素通过No.45目U.S.筛，再充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，再过No.14目U.S.筛。将如此产生的颗粒在50-60℃下干燥，再通过No.18目U.S.筛。将先前通过No.60目U.S.筛的羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁和滑石粉加入到上面的颗粒中并充分混合。将所得到的物质在压片机上压制成片。
剂型3栓剂组分 重量活性成分 150mg饱和脂肪酸甘油酯 3000mg将活性成分通过No.60目U.S.筛，再将其悬浮于先前已加热至其熔点的脂肪酸甘油酯中。将混合液倒入栓剂模子中并冷却。
提供以下实施例和制备方法是更好地阐明本发明的实验，并不认为是以任何方式限制其范围。本领域的那些技术熟练人员知道当不违背本发明的精神及范围时，可以做各种改变。在本说明中提到所有出版物和专利申请表明与本发明有关的本领域那些技术熟练人员的水平。
下列实施例中的NMR数据在GE300MHz NMR仪器上测得，除另有说明，用无水d-6DMSO作溶剂。
所有实验在正压力的干燥氮气中进行。所有使用的溶剂和试剂都可得到。百分数一般按重量(w/w)为基础来计算；除了HPLC溶剂按体积(v/v)为基础计算外。质子核磁共振(1H NMR)光谱在Buker AC-300FTNMR光谱仪上在300.135MHz下测定。熔点通过差示扫描量热法(DSC)在TA仪器DCS2920上，用封闭测定池(closed cell)及每分钟2℃的加热速度来测定。反应一般用高效液相色谱(HPLC)来监测完成。X-射线粉末衍射光谱是在Siemens D5000 X-射线粉末衍射仪上，用铜放射及Si(Li)检测器来测得。一些反应是用Zorbax Rx-C8柱((25cm×4.6mm ID，5m粒子)以60mM磷酸盐(KH2PO4)和10mM辛磺酸盐(pH2.0)/乙腈(60∶40)来洗脱)来监测。
酰基化、去烷基化、或酰基化/去烷基化反应也通过HPLC来检查完成。反应混合物的样本用Zorbax Rx-C8柱，(25cm×4.6mm ID，5m粒子)，以以下所示的梯度洗脱来分析梯度溶剂系统时间(分钟) A(％) B(％)0 60 405 60 4010 45 5520 38 6225 45 5532 45 5537 60 4042 60 40A0.05M HClO4(pH＝2.0)B乙腈通过将0.1-0.2ml的样本用60∶40的A/B混合液稀释50ml来分析反应混合液。类似地，以相似的方法对重结晶的母液取样。
6-羟基-2-(4-羟苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩盐酸盐的结晶物质(效能)的量(百分量)按下列方法测定。称得结晶固体样本(5mg)置于100ml容量瓶中，将其溶于70/30(v/v)75mM磷酸钾缓冲液(pH2.0)和乙腈的混合液中。将该溶液的一等份(10ml)通过高效液相色谱，用Zorbax Rx-C8柱(25cm×4.6mm ID，5m粒子)和UV检测器(280nm)来分析。使用下列梯度溶剂系统梯度溶剂系统(效能)时间(分钟) A(％)B(％)070 3012 70 3014 25 7516 70 3025 70 30A75mM KH2PO4缓冲液(pH2.0)B乙腈样本中6-羟基-2-(4-羟苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩盐酸盐的百分率用校准曲线的峰面积、斜率(m)。和截矩(b)，通过下列方程来计算
结晶物质中存在的溶剂，如甲醇、乙醇、或1，2-二氯乙烷的量(百分率)通过气相色谱来测定。称得结晶固体样品(50mg)置于10ml容量瓶中，将其溶于2-丁醇(0.025mg/ml)的二甲亚砜溶液中。将该溶液的样本在气相色谱上用DB Wax柱(30m×0.53mm ID，1m粒子)，用10ml/分钟流速过柱及火焰离子检测器来分析。柱温在12分钟内由35℃加热至230℃。通过与内标(2-丁醇)对比，用下列公式测定溶剂量
其中C＝样本中溶剂比D＝专一溶剂的标准平均比E＝标准平均重量F＝样本重量(mg)G＝样本体积(10ml)H＝标准体积(10000ml)I＝内标纯度(％)制备16-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)苯并[b]噻吩将3-甲氧基苯硫酚(100g)和氢氧化钾(39.1g)的水(300ml)溶液加入到变性乙醇(750ml)中，将生成的混合液冷却至0℃。分几小部分用4’-甲氧基苯甲酰甲基溴(164g)来处理该冷却的混合液。加完后，将混合液再冷却10分钟，然后升至室温。3小时后，真空浓缩混合液，再将残留物用水(200ml)处理。将得到的混合液用乙酸乙酯处理，分离各相。将有机相用水(2次)、碳酸氢钠溶液(2次)、和氯化钠溶液(2次)洗涤。然后将有机相用硫酸镁干燥、过滤、真空蒸发至干得202g a-(3-甲氧基苯基硫代)-4-甲氧基苯乙酮。粗品用甲醇重结晶、己烷洗涤得到158g。熔点53℃。
将多聚磷酸(930g)加热至85℃，再用上面得到的中间产物(124g)分小部分在30分钟内处理。加完后，将得到的混合液在90℃下搅拌。再经45分钟后，将反应混合液冷却至室温。将该混合液用碎冰处理，同时将混合物用冰浴冷却。将得到的混合液用水(100ml)处理得到浅粉红色沉淀。过滤分离沉淀物，用水和甲醇洗涤，在40℃下真空干燥得到119g 6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)苯并[b]噻吩。将粗品在热甲醇中成浆，过滤，再用冷甲醇洗涤。将得到的固体物质用乙酸乙酯(4升)重结晶，过滤，用己烷冲洗，真空干燥68g标题化合物。熔点187-190.5℃。
制备24-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酸乙酯将4-羟基苯甲酸乙酯(8.31g)、1-(2-氯乙基)哌啶一盐酸盐(10.13g)、碳酸钾(16.59g)和甲乙酮(60ml)的混合物加热至80℃。1小时后，将混合物冷却至约55℃，再用1-(2-氯乙基)哌啶一盐酸盐(0.92g)来处理。将得到的混合物加热至80℃。该反应通过薄层色谱(TLC)，用硅胶板和乙酸乙酯/乙腈/三乙胺(10∶6∶1，v/v)来监测。再另外加入1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐直至消耗完起始原料4-羟基苯甲酸酯。加完后，将反应混合液用水(60ml)处理，再冷却至室温。弃去水层，有机层在40℃及40mmHg下真空浓缩。得到的油状物可不经进一步纯化直接用于下一步骤。
制备34-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酸盐酸盐用5N氢氧化钠(15ml)处理按制备2中制得的化合物(约13.87g)的甲醇(30ml)溶液，然后加热至40℃。4.5小时后，加入水(40ml)。将得到的混合液冷却至5-10℃，慢慢加入浓盐酸(18ml)。酸化中结晶出标题化合物。过滤收集结晶产物，在40-50℃下真空干燥得83％收率的标题化合物。熔点270-271℃。
制备46-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]-苯并[b]噻吩盐酸盐将按制备1中所述制得的化合物(8.46g)和按制备3中所述制得的该酸的盐酸盐(10.0g)的二氯甲烷(350ml)混合液冷却至20-25℃。将冷却的混合液用三氯化硼(2.6ml)处理，将得到的混合液机械搅拌。该反应通过HPLC用上述说明的试验来监测。85分钟后，以6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩标准物为基准的HPLC处的收率为88％。
制备56-羟基-2-(4-羟基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]-苯并[b]噻吩盐酸盐1，2-二氯乙烷溶剂化物(晶形I)用三氯化硼(2.0ml)处理6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]-苯并[b]噻吩盐酸盐(2.0g)的1，2-二氯乙烷(20ml)溶液。将得到的溶液在35℃下搅拌18小时。将乙醇和甲醇的混合液(10ml，95∶5，3A)用上面的反应混合液处理，使醇性混合液回流。加完后，将得到的晶体浆液在25℃下搅拌。1小时后，过滤结晶产物，用冷乙醇(10ml)洗涤，在40℃下真空干燥得1.78g标题化合物。X-射线粉末衍射图样与表1中报道相同。
效能80.2％1，2-二氯乙烷7.5％(气相色谱)表1.晶形I的X-射线衍射图样d-线间距 I/I0(埃)(×100)16.12653.8010.37448.638.37465.297.988336.717.27015.066.556770.776.25316.795.561624.055.3879100.005.047189.644.739185.964.677739.364.633262.604.519177.564.286736.824.236541.664.181649.604.090011.283.949611.853.786936.253.757756.163.650940.623.575115.653.518121.523.496418.533.436133.603.36106.213.31154.953.25647.363.20023.80
3.119915.773.034714.842.87449.672.814710.822.736311.51用以下所述的高效液相色谱(HPLC)试验测定，晶体物质中存在的6-羟基-2-(4-羟基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩盐酸盐的量约为87.1％。按质子核磁共振光谱测定，晶体物质中存在的1，2-二氯乙烷的量约为0.55摩尔量。
制备66-羟基-2-(4-羟基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩盐酸盐1，2-二氯乙烷溶剂化物(晶形I)将按制备2中所述制备的化合物(15g)与二甲基甲酰胺(0.2ml)的1，2-二氯乙烷(250ml)的混合物冷却至0℃。将光气(8.25ml)冷凝于冷却的包上夹套的加料漏斗中(-10℃)，再用2分钟加入到冷却的混合物中。将得到的混合物加热至约47℃。约2.5小时后，通过HPLC试验反应是否完成。可再加入光气以促使反应完成。在30-32℃及105-110mmHg下真空蒸馏除去过量的光气。
约3-4小时后，将反应混合液用按制备1中所述制备的化合物(13.52g)处理。将得到的溶液冷却至0℃。将三氯化硼(12.8ml)冷凝于量筒中，再加入到冷却的反应混合液中。在0℃下8小时后，将反应溶液再用三氯化硼(12.8ml)处理。将所得溶液加热至30℃。15小时后，通过HPLC监测反应是否完成。
将乙醇和甲醇的混合液(125ml，95∶5，3A)加热回流，用60分钟的时间，用以上所得的反应溶液处理。加入完毕后，将酰化/去甲基化反应瓶再用乙醇(30ml)冲洗。搅拌下将得到的浆状液冷却至室温。室温下1小时后，过滤结晶产物，用乙醇(75ml)冲洗，在40℃下真空干燥得25.9g标题化合物。表1中报告了X-射线粉末衍射图样。熔点261℃。
效能87.1％1，2-二氯乙烷0.55摩尔当量(1H NMR)制备76-羟基-2-(4-羟苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩盐酸盐氯苯溶剂化物(晶形3)将按制备1中所述制得的化合物(2.92g)及按制备4中所述制得的该酸的盐酸盐(3.45g)的氯苯(52ml)溶液冷却至约0℃。将冷却的溶液用三氯化硼(2.8ml)处理。将所得混合液在约0℃下机械搅拌。3小时后，再加入另外的三氯化硼(2.8ml)，将反应混合液升温至室温。约16-20小时后，将反应混合液冷却至0℃。在30分钟内慢慢滴加乙醇(26ml)终止冷却的反应。在加入乙醇期间，结晶固体形成。完全加完乙醇后，将所得混合液在室温下搅拌1小时。过滤除去结晶固体，冷乙醇(25ml)冲洗，在40℃下真空干燥得5.94g标题化合物，为黄色固体。X-射线粉末衍射图样与表2中报道的相同。熔点247℃。
效能78.6％氯苯12.3％(HPLC)表2.晶形III X-射线衍射图样d-线间距 I/I0(埃)(×100)14.35187.2410.33356.178.8305 4.297.947 38.166.590464.256.28486.525.604828.065.4107100.005.154411.265.049353.265.022446.114.833076.944.769434.234.646150.224.575438.614.495372.654.353149.154.294041.644.242535.754.185621.634.13389.474.079312.693.996018.503.90379.033.785440.393.752154.163.678728.603.650917.963.544431.723.467941.553.38997.693.31015.72
3.25617.423.178415.193.044511.173.01468.942.916011.892.821718.232.750012.062.64369.652.61566.97晶体物质中存在的6-羟基-2-(4-羟基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩盐酸盐的量为约78.6％。晶体物质中存在的氯苯的量按HPLC测定约为12.3％。
制备86-羟基-2-(4-羟基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩盐酸盐将氢氧化钠(0.313g)的甲醇(10ml)溶液用另外的甲醇(40ml)和水(10ml)稀释。将该溶液用按实施例5中所述制备的化合物(4.0g)来处理。用己烷(2×50ml)提取所得溶液以除去氯苯。将甲醇相用2N盐酸(4ml)处理，产生结晶浆状物。1小时后，过滤晶体产物，用甲醇(5ml)洗涤，在60℃下真空干燥得2.23g标题化合物。X-射线粉末衍射图样与表3中报道的相同。
表3.非溶剂化晶形的X-射线衍射图样d-线间距 I/I0(埃) (×100)13.3864 71.319.359833.168.46252.087.38887.576.99075.806.636451.046.171729.575.99755.675.91359.875.646738.475.477310.545.29944.744.86804.034.79105.984.661457.504.50525.754.37019.034.251669.994.205957.644.174065.074.081912.443.967322.533.9318100.003.87759.073.709633.383.656121.653.55763.363.50377.973.452218.02
3.41384.653.273810.233.18578.903.13336.243.08319.433.002512.132.94374.962.86427.702.790411.952.72463.052.66523.322.58827.30结晶物质中存在的6-羟基-2-(4-羟基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩盐酸盐的量至少为95％。
特别优选使用该种非-溶剂化结晶形式来制备药用组合物。
实施例1非晶体形式的制备本发明的非晶形物质是通过将晶体雷洛昔芬盐酸盐5g溶解于300ml甲醇和22.5ml水中而制备。该非晶形物质通过使用Buchi 190型微型喷雾干燥器在下列条件下喷雾干燥溶液而重新获得平衡入口温度84℃；平衡出口温度60℃；大约喷雾速率2.5毫升/分钟；吸入器设置20；空气流量指示器500-600；雾化压力35psi。该过程在2小时10分钟内完成。
将喷雾干燥后重新获得的物质在偏振光显微镜下观察来确定该物质是否是双折射。若观察不到双折射，该物质即被认为是非晶形的。
表4给出了晶体和非晶体物质之间在水中的对比溶解度数据
表4形式 溶解度(mg/ml) 温度℃晶体 0.08 室温非晶体42.2 室温非晶体12037℃**在近距离声波定位器中也可将非晶形物质制成与聚乙烯吡咯酮的配合物，雷洛昔芬盐酸盐与PVP的比率如下9∶1，3∶1，和1∶1(w/w)。也可制备与羟丙基-b-环糊精(HPBCD)的配合物，雷洛昔芬盐酸盐与HPBCD的比率从1∶1至1∶4(w/w)。加入这些物质来增加溶解度及预防任何可能的物质的结晶，例如，其可能在从非晶体形式制备超饱和溶液中出现或不出现。一些批以晶体物质重新获得，或者在制备后约一周或10天内将该物质转化成一晶体形式。
观察重新获得的不结晶的非结晶物质的批次是否在10天内仍保持非晶形。
实施例2生物利用度的研究测定雷洛昔芬盐酸盐的晶形及非晶形形式的吸收程度和速率。按以下来制备以PEG为介质的两种形式的化合物的制剂组分重量比％聚乙二醇145070喷雾干燥过的乳糖1.5胶化的二氧化硅 1.5多乙氧基醚 2.0雷洛昔芬盐酸盐 25按以下对六只狗给药三只狗接受非晶形形式，同时给另三只狗接受晶体形式，两者剂量均为4mg/kg。然后在10小时内测定两种化合物形式的血浆水平。该研究的结果在图示1中提供。该研究表明非晶形形式具有更大的生物利用度。
下列讨论说明在实验模型或在临床研究中应用式I化合物的方法。这些实施例是用于说明的目的而并没有任何限制的意义。
A.骨质疏松绝经后骨质疏松的试验模型是本领域已知的。在本发明中最恰当的是在美国5393763中提供的大鼠卵巢切除模型。式I化合物对于该模型有效，因此证明其可以有效治疗或预防由于雌激素缺乏导致的骨丢失。
另外证明治疗或预防由于雌激素缺乏导致的骨质疏松的方法如下选择100个患者，她们为健康的绝经后妇女，年龄为45-60，并被认为是雌激素替代疗法的候选者。这些患者包括具有完整的子宫的妇女，她们有最后一次月经已超过6个月，但是不到6年。将在进行该研究前6个月服用过雌激素、孕激素或皮质类固醇的患者或曾经服用过双-膦酸酯药物的患者排除在该研究外。
将50名妇女(试验组)每天给予式I化合物15-80mg，例如制剂1(上述)。另外50名妇女(对照组)每天接受安慰剂治疗。两组均每天接受碳酸钙片剂(648mg)。该研究为双盲设计。研究者和患者均不知道每个患者属于哪一组。
对每位患者的基础检查包括尿钙、肌酸酐、羟基脯氨酸和吡啶啉交联物的定量检测。测定血样的血清骨钙素和骨特异性碱性磷酸酯酶的水平。基础测定也包括尿检查和骨无机物密度测定(用光子吸收仪)。
该研究持续6个月，检查每个患者的上述参数的变化。在治疗过程中，与对照组相比，治疗组患者骨再吸收的生化指标改变降低。而且，与对照组相比，治疗组骨无机物密度显示很小的降低或无降低。两组具有相似的子宫组织学，该结果表明式I化合物很少或无utrotrophic作用。
B.高脂血症绝经后高血脂症的实验模型是本领域熟悉的模型。本发明最恰当的是美国专利5464845中提供的卵巢切除术的大鼠模型。雌激素特性(Estrogenicity)可通过评估嗜曙红细胞渗入子宫中的应答来进一步评价。按如下进行治疗由于雌激素缺乏而引起的高脂血症的方法的试验选择100名绝经后健康妇女、年龄45-60，正常认为需进行雌激素替换治疗的患者。其包括具有完整子宫，没有月经周期在六个月以上但在六年以下的妇女。该研究排除那些服用过雌激素、孕甾酮或皮质激素的患者。
每日给五十名妇女(实验组)服用15-80mg式I化合物，如，剂型1(见上)。另外五十名妇女(对照组)每日接受相匹配的安慰剂。该研究为双盲设计。研究者和患者都不知道分配给每个患者的组别。
每个患者的基线考察包括测定血浆中的胆固醇和三甘油酯水平。在该研究期间(六个月)结束时，测定每个患者的血清类脂分布。对该数据进行分析，确定实验组与空白组相比降低了血浆类脂水平，如胆固醇和三甘油酯水平。
从上所述可以看出本发明很适于用以获得上面所提出的所有结果和获得本发明的固有优势。要知道某些特征和亚组合物是有效的，其可在不参考其它特征和亚组合物情况下被应用。它通过及在权利要求书的范围内考虑到。由于本发明由许多不违反其范围的可能的内容所组成，要知道在此所提出的所有问题只作为说明而不作任何限制。
权利要求
1.无晶形形式的式I化合物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物
其中R1和R3独立为氢、-CH3、-CO(C1-C6烷基)、或-COAr，其中Ar为任选取代的苯基；R2选自吡咯烷基、六亚甲基亚氨基、及哌啶基。
2.根据权利要求1的化合物及其盐酸盐，其中R1和R3各自为氢，R2为哌啶基。
3.根据权利要求1的化合物，其为6-羟基-2-(4-羟基苯基)-3-[4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩。
4.制备无晶形形式的式I化合物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物的方法
其中R1和R3独立为氢、-CH3、-CO(C1-C6烷基)、或-COAr，其中Ar为任选取代的苯基；R2选自吡咯烷基、六亚甲基亚氨基、及哌啶基；其方法包括在适当的溶剂中制备晶体形式的I化合物的溶液，然后喷雾干燥所述溶液而重新获得非晶形的式I化合物。
5.根据权利要求4的方法，其中所述适当的溶剂为甲醇和水的混合液。
6.根据权利要求4的方法，其中所述喷雾干燥在惰性气体存在下可有效进行。
7.药物制剂，其包括根据权利要求1的化合物与药学上可接受的载体、稀释剂、或赋形剂组合。
8.抑制骨丢失或骨再吸收的方法，其包括给予需要此治疗的患者根据权利要求1的化合物。
9.根据权利要求8的方法，其中所述骨丢失或骨再吸收是由于停经或卵巢切除的结果所导致的。
10.抑制血清胆固醇水平的方法，其包括给予需要此治疗的患者根据权利要求1的化合物。
11.缓解绝经后综合征的方法，其包括给予需要此治疗的患者根据权利要求1的化合物。
12.根据权利要求11的方法，其中所述绝经后综合征的病理学状况的症状为骨质疏松症。
13.根据权利要求11的方法，其中所述绝经后综合征的病理学状况的症状为心血管疾病。
14.根据权利要求13的方法，其中所述心血管疾病为高脂血症。
15.根据权利要求11的方法，其中所述绝经后综合征的病理学状况的症状为雌激素依赖的癌症。
16.根据权利要求15的方法，其中所述雌激素依赖的癌症为乳腺癌和子宫癌。
17.减缓子宫纤维化疾病症状的方法，其包括给予需要此治疗的患者根据权利要求1的化合物。
18.减缓子宫内膜组织异位症状的方法，其包括给予需要此治疗的患者根据权利要求1的化合物。
19.减缓主动脉血管平滑肌细胞增生症状的方法，其包括给给予需要此治疗的患者根据权利要求1的化合物。
20.减缓再狭窄症状的方法，其包括给予需要此治疗的患者根据权利要求1的化合物。
全文摘要
本发明提供无晶形形式的式Ⅰ化合物。还提供制备该物质及其使用该物质的方法。
文档编号A61K31/4535GK1244124SQ97197434
公开日2000年2月9日 申请日期1997年8月22日 优先权日1996年8月28日
发明者G·W·库夫, A·L·塔克卡 申请人:伊莱利利公司