专利名称：钠通道阻滞剂在制备用于防止与青光眼有关的视神经变性的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及通过将能够阻滞哺乳动物视网膜神经节细胞假设的非失活性钠离子通道的化合物施予所述细胞，来防止与青光眼有关的视网膜神经节细胞死亡的方法。
现有技术简述青光眼是与眼内压升高(对于眼睛的正常功能，眼内压太高)有关的视神经病，并且会导致视觉功能的不可逆丧失(参见，例如Dreyer等人的“患青光眼的人和猴玻璃体内谷氨酸盐水平升高”，《眼科学文献》(Arch.0phthal-mology)114299-305，1996)。在医学科学内，据估计，40岁以上的人群中约有2％患有青光眼，因此青光眼是一个严重的健康问题。据信，还没有引起不可逆损伤的眼高压，即眼内压升高状态，代表青光眼的最早期。在现有技术中，已经设计和开发了多种用于治疗或改善青光眼和青光眼之前的眼内压升高状态的治疗剂。
原发性开角型青光眼(POAG)与眼内压(IOP)升高有关。据信，IOP的升高导致视神经功能损失，而视神经功能损失最终导致失明。因此，在POAG的治疗中，降低IOP是决定性因素。然而，在许多个体中，降低IOP不足以或不能有效地防止与POAG有关的视觉功能损失。
据认为，位于大鼠视神经内的一新类型钠通道是引起缺氧或低氧之后大鼠视神经损伤的原因。然而，在青光眼中，导致视神经功能损失的病理过程尚未知道。
目前治疗青光眼的药物包括缩瞳剂(例如，毛果芸香碱、卡巴胆碱和乙酰胆碱酯酶抑制剂)，拟交感神经药(例如，肾上腺素和双特戊酰肾上腺素)，β-阻滞剂(例如，倍他洛尔、左布诺洛尔和噻吗洛尔)，α-2激动剂(例如对氨基可乐定)和碳酸酐酶抑制剂(例如，乙酰唑胺、甲醋唑胺和乙氧苯酰胺)。据信，缩瞳剂和拟交感神经药能通过增加眼房水的流出量来降低眼内压，而β-阻滞剂、α-2激动剂以及碳酸酐酶抑制剂能通过减少房水形成来降低眼内压。所有这5种药物都有潜在的副作用。缩瞳剂，例如毛果芸香碱，会引起视觉模糊和其它视觉副作用，这些副作用要么降低病人的配合性，要么需要中止缩瞳药物治疗。碳酸酐酶抑制剂也会引起严重的副作用，这些副作用会影响病人的配合性和/或需要取消此类药物治疗。至少有一种β-阻滞剂，噻吗洛尔，已经愈加被认为与肺部副作用有关，这是由于其作用于肺组织中的β-2受体所致。
出于上述原因，现在正在研制其它抗青光眼药物，例如，前列腺素衍生物，毒蕈碱拮抗剂等。然而，上述药物没有一种是设计成与视网膜神经节细胞和其相关轴突进行作用的药物。
因此，需要通过不是调节房水动力学并且因而不是调节眼内压的生物学机制，来防止可能与青光眼有关的神经节细胞体和轴突功能的损失。此外，需要直接治疗哺乳动物的视网膜神经节细胞体和轴突来防止由青光眼状态对它们的破坏。
发明概述令人惊奇的是，依据本发明已经发现，当将能够阻滞哺乳动物视神经非失活性钠离子通道的钠通道阻滞剂给药并且以药物组合物形成应用时，这些钠通道阻滞剂可以有效地防止视网膜神经节细胞的损失。相应地，本发明涉及通过将眼用组合物全身或直接给药到哺乳动物眼睛中以防止与青光眼有关的视网膜神经节细胞和其相关轴突(视神经)功能丧失的方法，其中所述组合物含有一定量的能阻滞所述哺乳动物神经节细胞的非失活性钠离子通道的钠通道阻滞剂。
更具体而言，本发明涉及改变可能与青光眼视神经病有关的视网膜神经节细胞可能的病理过程。此病理过程包括视网膜神经节细胞的病理性去极化，毫摩尔量的钠通过非失活性钠通道内流，以及随后的钠/钙逆交换。由膜的去极化和细胞内钠的增加所介导的钠/钙逆交换引起细胞内钙中毒性蓄积。改变此病理过程的方法包括阻滞视网膜神经节细胞中相关的非失活性钠通道，以阻止钠/钙离子逆交换以及随后的钙离子在视网膜神经节细胞中蓄积到致死水平的步骤。
具体地说，此阻滞是通过将含有具有非失活通道阻滞活性的活性成份的药物组合物施予视网膜神经节细胞来实现的。此组合物可含有抗心律失常剂或化合物如苯并噻唑利鲁唑，芦贝鲁唑，RS6685，联苯乙酰胺如PD85、689，利法利嗪(RS-87476)和二苯基哌嗪抗惊厥剂如苯妥英和卡马西平。拉莫三嗪及其衍生物。
组合物可以含有适于以眼房内注射液的形式施予哺乳动物眼睛的眼用溶液，并且活性成份如抗心率失常剂能以0.001％-约1％(重量体积比)的含量存在于组合物中。
依据本发明的方法，对视网膜神经节细胞的直接作用是一项重要发现。然而，对视觉起决定性作用的神经节细胞的正常电兴奋性则不会受到损害。
此外，依据本发明的药物组合物能用于防止与青光眼有关的视网膜神经节细胞的死亡，其中所述组合物含有一种或多种具有非失活性钠通道阻滞活性的化合物作为其活性成份。
更具体而言，本发明提供在包括人在内的哺乳类动物中防止与青光眼有关的视网膜神经节细胞死亡的方法，包括将药物组合物施予哺乳动物视网膜神经节细胞的步骤，其中所述组合物含有一种或多种具有非失活性钠通道阻滞活性的化合物作为其活性成份。
附图的简要说明当与附图一起考虑时，通过下面的
可以更好地理解本发明的优点和特征。
图1是正常条件下，假定的视网膜神经节细胞的相关转运机制图；和图2是局部缺血条件下，视网膜神经节细胞的构图。
发明详述虽然不希望受理论的束缚，但是据信，轴突和含有视神经的相关细胞体的死亡或损失是细胞内钙离子浓度(Ca+2)致死性增加的结果，而钙离子浓度增加是由于钠离子(Na+)通过非失活性钠离子通道内流入所致。虽然已经用大鼠的视神经片断进行了一些研究(Stys等，1995；Waxman，1995)，但是没有用于神经节细胞。基于早期的大鼠视神经实验，没有提出任何改变视网膜细胞的类似病理过程以阻止缺氧后细胞死亡的预期展望，这是因为在下述方面还是不清楚的(1)在青光眼期间是否有类似的病理过程发生，或(2)在哺乳动物视网膜神经节细胞中是否存在非失活性钠通道，并且，如果存在的话，这些钠通道在伴随与青光眼有关的视觉损失的视网膜神经节细胞破坏过程中所起的作用是什么。
大鼠视网膜神经节细胞中的生理过程如下所述伴随去极化兴奋性电压-依赖性Na通道开放约1毫秒，然后关闭。倘若细胞膜保持去极化状态，钠通道将不会再开放，直到细胞膜朝着其静息状态复极化为止。与正常兴奋性Na通道相反，非失活性Na通道在正常静息膜电位时可以开放，并在去极化电位时仍可以保持开放。在病理生理状态如三磷酸腺苷(ATP)耗尽或持续去极化时，通过非失活性Na通道的Na内流可基本上增加细胞内Na的浓度。细胞内Na的增加引起生电Na/Ca2+交换(Ransom等人，1993；Stys，1995；Waxman等人，1992)，这种交换使正常的促使Ca2+由细胞中的外流变成逆向运动，结果导致细胞内Ca2+浓度有很大增加。细胞内Ca2+浓度可以从纳摩尔水平增加到微摩尔水平，结果导致所述神经元细胞死亡。(细胞内Ca2+浓度的大量增加与神经元细胞的死亡有关，并且已经表明，防止细胞内Ca2+浓度的增加能保护中枢神经系统的神经元细胞和大鼠视神经。)在视神经标本中，没有测到细胞内的Ca2+，然而，在包括神经元在内的大多数细胞类型中，正常细胞Ca2+浓度约为100-200纳摩尔。当细胞内Ca2+浓度升至微摩尔水平时，它就变得具有毒性。在视神经中，恰好能触发细胞破坏的确切Ca2+水平尚不清楚，或至少还没有报道。
因此，依据本发明方法而使用并且用于本发明组合物的化合物是能阻滞视网膜神经节细胞的非失活性钠通道的钠通道阻滞剂。本发明的钠通道阻滞剂能阻止钠离子通过非失活性钠通道内流进入神经元细胞。本发明的钠通道阻滞剂优选能够选择性地阻滞所述的非失活性钠通道，其中所述的非失活性钠通道与能迅速失活的电压控通的钠离子通道截然相反。
依据本发明，还可以使用钠通道阻滞剂的可药用盐。可药用盐可以是能保持母化合物的活性并且不给其施予者带来任何有害或不利作用，并且在上下文中以此形式给药的盐。
所述可药用盐可以用有机或无极酸或碱来形成。盐可以是单价或多价离子。当考虑酸的功能时，令人特别感兴趣的是无机离子，例如碱离子如钠离子、钾离子等。有机胺盐可以用胺来形成，尤其是铵盐如一烷基胺、二烷基胺和三烷基胺，例如其中每一烷基可包含高达6个碳原子的烷基胺，或乙醇胺。盐还可以用咖啡因、氨基三丁醇和类似分子来形成。唯一重要的是，用于本发明组合物或方法所用的钠通道阻滞剂的任何盐的阳离子应当能够阻滞视网膜神经节细胞的非失活性钠通道。
为了保护哺乳动物眼睛的视网膜神经节细胞免遭损害，尤其为了在患有能引起视神经元损失的疾病的人中防止视网膜神经节细胞损失，将混合有可眼用载体的活性化合物(或混合物或其盐)依据本发明施予眼睛。可以使用任何适宜的例如常规的可眼用载体。如果载体对用其所施予的眼睛基本上没有长期或持久的有害作用的话，那么此载体就是可眼用的。可眼用载体的实例包括水(蒸馏水或去离子水)、盐水和其它水介质。依据本发明，活性化合物优选溶在用于将其给药的载体中，以使活性化合物能以溶液形式施予眼睛。或，也可以使用活性化合物的悬浮液或在适当载体中的化合物(或其盐)。
依据本发明，活性化合物(或混合物或其盐)是以足以使有效量的活性化合物扩散到眼睛视神经位点的浓度在可眼用载体中给药的。眼用治疗溶液优选含有浓度约为0.0001％-约1％(重量体积比)，更优选为约0.0005％-约0.1％(重量体积比)的一种或多种活性化合物。
依据本发明，可以采用将药物施予哺乳动物眼睛视网膜神经节细胞位点的任何方法，从而将活性化合物给到欲治疗的眼睛中。术语“施予(adminstration)”包括常用的全身给药方式，例如直接注射到病人的血管中、口服给药以及能使活性化合物全身利用的给药方法。也可以采用眼房内注射的方法将钠通道阻滞剂释放到视网膜神经节细胞位点。将活性化合物直接施予哺乳动物眼睛中对哺乳动物所产生的主要作用是防止视神经损失。优选地，将有效的活性化合物局部施用于眼睛或直接注射到眼睛中。
可以使用眼用制剂的注射剂，例如滴眼剂、眼用凝胶或眼药膏，因为它们施用方便，剂量释放方便并且全身性副作用如心血管性低血压较小。局部施用的眼用制剂的实例呈现在下面的表I中。q.s.(适量)缩写表示足以能影响结果或达到所需体积的量。
表I成份 含量(％重量体积比)本发明的活性组分约0.0001-约1防腐剂0-0.10载体 0-40张力调节剂 1-10缓冲剂0.01-10pH调节剂 适量，pH4.5-7.5抗氧化剂 按照需要加纯化水 按照需要加至100％在上述表I中所述的眼用制剂中，可以使用多种防腐剂。优选的防腐剂包括但不限于，苯甲烃铵钾、氯丁醇、硫汞撒、乙酸苯汞和硝酸苯汞。同样，在此眼用制剂中也可以使用多种优选的载体。这些载体包括但不限于，聚乙烯醇、聚维酮、羟丙基甲基纤维素、泊咯沙姆、羧甲基纤维素和羟乙基纤维素。
张力调节剂可按照需要量或适当量加入。张力调节剂包括但不限于，盐，尤其是氯化钠、氯化钾等，甘露糖醇和甘油，或其它合适的可眼用张力调节剂。
只要制得的制剂可眼用，可以使用多种用来调节pH值的缓冲剂和手段。相应地，缓冲剂包括但不限于，醋酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和硼酸盐缓冲剂。按照需要，可用酸或碱来调节这些制剂的pH值。
以类似叶脉，可眼用抗氧化剂包括但不限于，焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、叔丁对甲氧酚、和丁化羟基甲苯。
本领域技术人员会认识到，给药频率取决于活性化合物的确实性质和其在眼用制剂中的浓度。作为非失活性钠通道阻滞剂的化合物是I类抗心律失常药，例如苯妥英、利多卡因、拉莫三嗪、美西律、丙缓脉灵、妥卡胺、QX-314、QX-222和其它功能上相关的化合物。与正常的电压控通的Na通道相比，这些活性剂能优先阻滞非失活性Na通道。
在本发明眼用组合物中，用作有效的活性组分的具体实例有奎尼丁、缓脉灵、丙缓脉灵、普鲁卡因胺、丙吡胺、普罗帕酮、利多卡因、妥卡胺、美西律、苯妥英、氟卡胺、氯卡胺、茚丙胺、恩卡胺、QX-314、普鲁卡因、QX-222、丁卡因、苯佐卡因、GEA-968、天青A、泮库铵(pancuronium)、N-甲基士的宁、磷苯妥英、CNS 1237、BW1003C87、BW619C89、U54494A、PD85639、雷利托林、C1953、利法利嗪、唑尼沙胺和利鲁唑。
依据本发明的钠通道阻滞剂可以通过在下述文献中公开的方法来确定“细胞外膜片钳解决经过生物膜中单个开放通道的电流的方法”，Neher等人，Pflugers Archiv V375第219-228页(1978)；和“为以高分辨率记录细胞和无细胞膜片之间电流的改进的膜片钳技术”，Hamill等人，Pflugers Archiv V391第85-100页(1981)。这些文献全部列入本发明的参考文献，以提供确定能依据本发明而使用的钠通道阻滞剂的方法。
实施例图1表示在正常条件下的视网膜神经节细胞10，和假设的有关转运机制12、14、16、18，它们分别负责维持钠(Na+)、钾(K+)和钙(Ca2+)的梯度和细胞的电活性。如图所示，在正常条件下，ATP水平是适当的，并且提供驱动Na+/K+泵14所需的能量，其中Na+/K+泵14维持着K+和Na+的梯度，使细胞内K+浓度比其在细胞外的浓度要高，细胞内Na+浓度比其在细胞外的浓度要低。电压控通的Na+和K+通道12、16提供构建动作电位的电流。生电Na+/Ca2+交换器18使细胞的Ca2+水平维持在生理范围(纳摩尔)内。
然而，如果由于一些病生理因素导致ATP水平下降，如图2中处于局部缺血条件下的细胞20所示，轴突就会去极化，并且由于Na+/K+泵14被抑制，会使Na+/K+梯度长时间被破坏。细胞中Na+的增加由不会长时间失活的电压控通的Na+通道所介导。这些Na+通道称为“非失活性”通道。膜的去极化和细胞内Na+浓度增加足以驱动Na+/Ca2+交换器18起反向交换作用(参见图2)，由此神经节细胞就负荷有致死水平的Ca2+。假定此变化过程发生在青光眼患者的视网膜神经节细胞中。
相应地，依据本发明，当存在治疗浓度的能选择性地阻滞非失活型Na+通道的Na+通道阻滞剂时，希望发生下述过程。首先，Na+通道阻滞剂对正常动作电位影响很小或没有影响。这对于维护正常神经节细胞的功能至关重要。其次，Na+通道阻滞剂能阻滞细胞内Na+的有害性增加以及随后细胞内Ca2+的致死性增加。由此，将正常神经节细胞的机能障碍降至最小，因而有助于防止与青光眼有关的视野损失。此外，非失活性Na+通道阻滞剂可以产生其它有益作用。这是因为，据认为Na+通道在局部缺血、低氧和其它病理状态期间会阻止神经元组织中致毒性谷氨酸盐的释放。细胞外过高的谷氨酸盐水平具有神经破坏性并且可能也是导致青光视眼神经病的原因。因此，依据本发明，一种药物，即非失活性Na+通道阻滞剂在治疗浓度下，能防止Na+超负荷和细胞外谷氨酸盐的致毒性增加。
综上所述，很明显本发明的保护范围只能由后面的权利要求确定，这些权利要求是根据本发明的公开来阅读和理解的。
权利要求
1.使缺氧后的神经节细胞维持正常的细胞内Na+和Ca2+水平的方法，所述方法包括所述神经节神经元细胞与用于阻滞视网膜神经节细胞非失活性钠通道活性的组合物进行接触。
2.根据权利要求1的方法，其中用于阻滞非失活性钠通道的组合物选自苯并噻唑利鲁唑、芦贝鲁唑、苯基苯并噻唑和利法利嗪。
3.根据权利要求2的方法，其中具有非失活性钠通道阻滞活性的组合物含有抗心律失常剂。
4.根据权利要求1的方法，其中组合物包括适于以眼房内注射液形式施予哺乳动物眼睛的眼用溶液。
5.用于防止哺乳动物眼中与青光眼有关的视网膜神经节细胞死亡的药物组合物，其中所述组合物含有一种或多种具有非失活性钠通道阻滞活性的化合物作为活性组分。
6.根据权利要求5的组合物，其中具有非失活性钠通道阻滞活性的化合物选自苯并噻唑利鲁唑、芦贝鲁唑、苯基苯并噻唑和利法利嗪。
7.根据权利要求5的组合物，其中组合物是适于以眼房内注射液形式施予哺乳动物眼睛的眼用溶液。
8.防止包括人在内的哺乳类动物的与青光眼有关的视网膜神经节细胞死亡的方法，包括将药物组合物施予所述哺乳动物的神经节视神经的步骤，其中所述组合物含有一种或多种具有非失活性钠通道阻滞活性的化合物作为其活性成份。
9.对人眼视网膜神经节细胞提供神经保护作用的方法，包括将含有一种或多种具有非失活性钠通道阻滞活性的化合物作为活性成份的药物组合物施予人。
10.根据权利要求9的方法，其中具有非失活性钠通道阻滞活性的化合物选自苯并噻唑利鲁唑、芦贝鲁唑、苯基苯并噻唑和利法利嗪。
全文摘要
改变与青光眼有关的视网膜神经节细胞可能的病理过程的方法和组合物。此病理过程包括膜的去极化、毫摩尔量的钠经非失活性钠通道内流、由于Na
文档编号A61K31/428GK1251520SQ98803734
公开日2000年4月26日 申请日期1998年3月26日 优先权日1997年3月27日
发明者J·S·阿多尔安特 申请人:阿勒根销售公司