专利名称：用于泌尿生殖系统感染的阴道栓剂菌苗的制作方法
技术领域：
本发明领域本发明总体上涉及治疗人体疾病的系统和方法，特别是预防人体泌尿生殖系统感染。更特殊的是，本发明涉及预防人体尿路感染的基于栓剂的、阴道内菌苗释放系统，其中该栓剂包含来源于完整致病微生物或其碎片的菌苗。尤其特殊的是，本发明涉及预防人体尿路复发性感染的基于栓剂的释放系统，其中栓剂包含来源于4-20种从尿路感染患者尿中分离的尿路致病菌株的完整的、灭活的细菌菌苗，并且含有聚乙二醇栓剂基质。
本发明背景尿路感染是医学中的重大问题。尿路的各个部位均可能被感染。该疾病最常见的形式是膀胱炎、尿路综合征、肾盂炎、和肾盂肾炎。复发性感染和慢性加重倾向是尿路感染的特征。女性的这种疾病比男性多10倍。这种差别的主要原因是女性特殊的尿路解剖学事实使之更容易受到自身肠道菌丛的感染。尿路感染的主要诊断标准是细菌尿，即在适当收集的尿样(中段尿)中有细菌存在。在诊断上被认为具有显著意义的细菌尿，其每毫升尿中的细菌数量必须超过105个。
细菌到达尿路并形成感染，或者是通过血流或者是由尿道攀升至膀胱再经输尿管到达肾脏。攀升感染是最常见的方式而且解释了女性发生感染次数更多的原因。尿道口的位置和较短的尿道使女性更容易感染。来源于粪便菌丛的多种细菌经常在女性尿道口和尿道末段定居。当一种来源于粪便菌丛的肠杆菌(Enterobacteriaceae)在阴道前庭定居时即可导致女性尿路感染。
最常见和最大量的粪便菌丛是大肠杆菌(Escherichia coli)，尿路感染时，它也是尿中常见的病原生物体。在尿道周的地方通常也发现大肠杆菌。这种细菌有粘附尿道口周围细胞的能力。细菌粘附是其定居和尿路感染的前提。许多体外实验研究表明粘附现象的原因是感染尿路的大肠杆菌具有菌毛。大肠杆菌是尿路感染最常见的致病因子。
其它肠细菌(Enterobacteria)，例如，变形杆菌(Proteus)和克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella)，和革兰氏阳性球菌例如葡萄球菌(Staphylococcus)和粪链球菌(Streptoccus faecalis)[肠球菌(Enterococuus)]也能在尿路定居(colonized)。其它细菌例如绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginesa)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)也能侵入尿路。任何定居于肠道并从粪便排出的细菌均可能在尿路中定居(populate)。此外，支原体、L-型细菌、衣原体、真菌、病毒、和原生动物可定居于人体尿路。
复发和慢性是尿路感染的特征。复发是由于反复发病或再感染引起。尽管治疗其它的细菌感染取得了巨大进步，但在过去的20-25年里，尿路感染的发病率和死亡率没有改变。其原因很多并取决于宿主有机体以及微生物因素。
先前感染过的菌株的感染复发是少见的，并且可能由药物选择不当、抗药性菌株出现、疗程不够、抗菌剂浓度不够、存在L-型细菌、以及微生物体在尿路结石中存活所引起。女性尿路感染复发基本上全部是不同微生物体的再感染，并且通常是对阴道和尿道周围细胞有更强粘附力的菌株。这些再感染的细菌来源于肠道菌丛。用于治疗或预防的抗生素或其它用于治疗或预防尿路感染的抗菌物质可以改变肠道菌丛的组成。肠道菌丛对抗生素的抗药性不断增加，然后抗药菌可能导致尿路再感染或原发性机会感染。正常、无害菌丛，如乳酸菌，被抗生素清除后产生的机会菌可能导致这样的原发性感染。此时，其它对抗生素有抗药性的微生物能够大量繁殖并变成病原体。由R-质粒产生的细菌对抗生素的抗药性不仅在同种细菌间传递，还可在几乎所有肠杆菌科细菌(Enterobacteriaceae)间传递。
女性尿路感染复发的主要原因是免疫缺陷使得尿路病原体更容易粘附到尿道周区域。研究揭示尿中低水平的尿分泌型IgA(sIgA)表明尿路的局部免疫应答缺损和更容易发生攀升性(ascending)尿路感染复发。sIgA最重要的性质是防止菌毛和在尿路上皮细胞上发现的特异性受体的相互作用。菌毛介导的粘附是与细菌有关的重要的毒力因子。减少病原体对尿路上皮细胞的粘附或阻止细菌相互接触对于防御感染具有重要意义。
通常，宿主有机体产生对抗入侵细菌的局部特异性抗体并分泌sIgA这样的抗体。对持久或经常复发尿路感染的患者，这种防止感染的局部免疫学上的天然机制显然紊乱了。因此，促进免疫防御是清除尿路复发性感染病因的合理方法。刺激产生针对数种大肠杆菌(Escherichia coli)和其它尿路常见菌中存在的抗原谱的抗体的菌苗是尤其合理的。
此前，胃肠外或口服给予尿路感染菌苗，结果促进了对尿路感染的抵抗能力。胃肠外给予
瑞士巴塞尔的索尔科。巴塞尔公司(Solco Basel AG)生产的并且述于美国专利No．4606919的尿路感染菌苗(其内容完整地结合于本说明书中)能减少子宫切除术后尿路感染，减少易感女性的感染次数，并增加sIgA。然而，部分患者遭受副作用例如不适、发热、及肌肉痛的影响。含有从大肠杆菌菌株中提取的免疫刺激片段的口服菌苗能减少细菌尿、脓毒发生、脊索损伤患者对抗生素的需求、以及成年女性复发性尿路感染的发病率。至于胃肠外给药，许多患者受到有害反应的影响。
为了克服尿路感染菌苗口服和胃肠外给药的有关缺点，提出抗尿路感染的阴道内菌苗。尿路感染菌苗阴道内给药的理论基础是存在粘膜免疫系统，其中抗原通过粘膜表面吸收并由特殊的局部淋巴组织加工，此后抗体被分泌到局部粘膜表面。如前所述，在部分女性中，生殖泌尿道暂时或部分缺乏阴道或尿道局部抗体是对尿路感染易感性增加的重要因素。通过生殖泌尿道中的粘膜表面进行免疫优于胃肠外或口服途径免疫，因为已经发现在泌尿生殖道中菌苗通过阴道内表面建立起分泌型免疫应答。
过去，尿路感染菌苗以液体形式进行阴道内给药。几个问题与液体尿路感染菌苗的阴道内给药有关。遇到的主要问题是液体菌苗在注入后不久即从阴道中流出。这严重限制了液体抗原与阴道粘膜表面接触的时间，降低了菌苗的效能。抗原需要与阴道粘膜充分接触以诱导分泌型免疫球蛋白应答。接受菌苗的患者在接受菌苗后须长时间仰卧平躺以防止菌苗很快流出阴道。然而，仰卧位时段后，通常仍有菌苗漏出阴道，从而限制了菌苗的有效性。
此外，要求患者在接受菌苗后长时间仰卧平躺，对于患者是一种负担。一个疗程中患者可能数次接种菌苗，并且每次接种时患者都必须花费相当长的时间。因此，对预防泌尿生殖道感染性疾病，如尿道感染，以及尿路感染菌苗进行改进显然是必要的。
本发明克服了上述局限，此外解说了用于预防泌尿生殖道感染疾病，如尿路感染的基于栓剂的菌苗释放系统。
本发明概述根据本发明，本文提供阴道内用药的基于栓剂的菌苗释放系统以预防泌尿生殖道感染性疾病，如尿路感染。
根据本发明，本文还提供基于栓剂的菌苗释放系统以预防泌尿生殖道感染性疾病，如尿路感染，其中菌苗与阴道粘膜有足够长的接触时间以增强免疫应答。
根据本发明，本文还进一步提供基于栓剂的菌苗释放系统以预防泌尿生殖道感染性疾病，如尿路感染，其中菌苗用药容易，患者在接受菌苗接种后不需要长时间仰卧平躺，并且适于初次或有常规加强需求的患者用药。
根据本发明，本文还进一步提供基于栓剂的菌苗释放系统以预防人的泌尿生殖道感染性疾病，如尿路感染，所述栓剂含有灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于8-14种从尿路感染患者尿中分离培养的尿路病原菌菌株大肠杆菌(Escherichia coli)、克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)、奇异变形杆菌(Proteus mirablis)、摩根氏变形杆菌(Proteus morganii)和粪链球菌(Streptoccus faecalis)，且每粒栓剂中含有约5千万-约50亿个每种菌株的病菌，其中所采用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌(Escherichia coli)菌种；以及聚乙二醇栓剂基质；其中栓剂适于塞入阴道内以便栓剂与阴道粘膜接触而使栓剂物质易于转运。
本发明的优点是提供基于栓剂的菌苗释放系统以预防泌尿生殖道感染疾病，如尿路感染，其中菌苗与阴道粘膜有足够长的接触时间以增强免疫应答。
本发明的另一优点是提供基于栓剂的菌苗释放系统以预防泌尿生殖道感染疾病，如尿路感染，其中菌苗用药容易，患者在接受菌苗后不需要长时间仰卧平躺。
本发明的又一优点是提供基于栓剂的菌苗释放系统，其中菌苗适于患者用药。
本发明的又一优点是提供基于栓剂的菌苗释放系统，其中菌苗用药相对无痛。
本发明的又一优点是提供基于栓剂的菌苗释放系统，其中粘膜菌苗刺激产生的特异性-sIgA使特异性免疫应答能够防止细菌定居的发生，代之以消灭已经发生的感染。
本发明的又一优点是提供基于栓剂的菌苗释放系统，其中患者可以自行用药而周期性地加强菌苗接种。
在阅读和理解后文中的详细叙述、附图和后附的权利要求书后，本领域技术人员将清楚地了解本发明的其它优点。
图示简述本发明在某些部分和准备部分采用物理形式，其优选实例和方法本说明书将详细叙述并以
，其中图1以图示说明实验期间保持不受感染的患者的百分比。
优选实例祥述本发明涉及在人中免疫预防感染性疾病的基于栓剂的菌苗释放系统以及治疗这些疾病的方法。更具体地说，本发明涉及预防泌尿生殖道感染性疾病，如尿路感染的基于栓剂的菌苗释放系统。基于栓剂的菌苗释放系统含有灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种下列菌种的尿路病原菌菌株大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌，和粪链球菌；以及聚乙二醇基质；其中栓剂适于塞入人体腔道内以便栓剂与腔道组织接触从而使栓剂物质易于转运。
该栓剂含有灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种下列菌种的尿路病原菌菌株大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌，和粪链球菌。每粒栓剂中含有约5千万-约50亿个每种菌株的灭活细菌，并且所用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌菌种。灭活细菌优选来源于6株大肠杆菌菌种和分别来源于克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌，和粪链球菌的菌种的各1株。优选实例中，灭活细菌的存在总量为约1×109约1×1010个细菌。
栓剂中含有按照美国专利No．4606919所述方法制备的菌苗，该专利作为参考完整地结合于本说明书中。通过将8-14种从尿路感染患者尿中分离的尿路病原菌菌株分别在其适当的营养型培养基培养制备菌苗，培养结束后，转移形成的特殊生物学物质，并按已知方法灭活，将一定量的从各自菌株中得到的灭活细菌相互混合，并以一定量的无菌等渗溶液稀释该混合物，以使每粒栓剂中含有5千万-50亿个每种菌株的细菌。
首先分离尿路感染患者的尿样(中段尿)，并立即接种到MacConkey琼脂上；接种后，琼脂培养皿在37℃下孵育16-18小时，之后分离形成的菌落并通过测定其生物化学和生物学特性进行鉴定。
以这种方法鉴定的菌落，任其在琼脂培养皿中在37℃下继续生长24小时，然后悬浮于生理盐水，以革兰氏染色法检测纯度并冷冻干燥。
为制备菌苗，将菌株各自在固体或液体营养型培养基中培养；优选采用固体营养型培养基，例如营养型琼脂如Nutrient Agar Difco。培养基经过15分钟121℃的灭菌，而其pH值约为7．2。
鲁氏瓶(Roux bottle)用于大规模制备，而培养皿用于实验室制备。以适当的接种物质进行接种，几毫升的物质均匀分布于整个表面。鲁氏瓶以棉花塞塞紧，而有接种表面的培养基存于瓶底。已接种的培养基在37℃下孵育24小时。
以需要量(取决于培养瓶中的生长密度)的磷酸缓冲液／盐水溶液轻轻转动洗下细菌层(lawns)，而不破坏琼脂表面。
从每个培养瓶或每个培养皿制得一张涂片，以革兰氏法染色并测定纯度。弃去出现污染的鲁氏瓶或培养皿。来源于一种菌株和一批采集的悬液通过无菌尼龙纱网倒到一起。
与其培养一样，对各菌株分别进行灭活。可在约55℃-约60℃下加热约1小时，以甲醛溶液处理或以γ-光照射进行灭活。优选加热灭活因为这样较简单。培养所得的总量合并，再以60℃水浴灭活1小时，灭活后加入酚。
贮存罐中的物质(来源于一种菌株的灭活悬液)在冷冻离心机中于3000rpm下离心1小时，去上清液并以含0．01％硫柳汞的盐水溶液悬浮细菌沉淀。
本发明的栓剂可含有本领域所知的任何适当的聚乙二醇栓剂基质。更特殊地，聚乙二醇栓剂基质由聚乙二醇和聚山梨醇酯组成。优选的聚乙二醇栓剂基质由约98％(重量)的聚乙二醇和约2％(重量)的聚山梨醇酯组成。优选的聚乙二醇具有约3000-5000的平均分子量。在更优选的实施方案中，聚乙二醇栓剂基质含有约39％(重量)的分子量为8000的聚乙二醇和约59％(重量)的分子量为400的聚乙二醇。可从商业途径购得的合适的聚乙二醇栓剂基质是PaddockLaboratories，Inc．制造的POLYBASE。
这种聚乙二醇栓剂基质以任何合适的量存在于基于栓剂的菌苗释放系统中，以使菌苗与阴道粘膜有充足的接触时间而增强免疫应答。这种聚乙二醇栓剂基质优选占栓剂的约80％-95％(重量)。此聚乙二醇栓剂基质与阴道粘膜表面有一定程度的混合性，其中悬浮的菌苗颗粒与此粘膜表面有充足的接触时间而引发分泌免疫球蛋白反应。作为储库缓慢释放抗原，并向免疫活性细胞局部释放抗原的聚乙二醇栓剂基质，通过增加菌苗与阴道粘膜的接触时间而具有增强免疫应答的佐剂作用。聚乙二醇栓剂基质的又一功能是作为必需的结构物而使栓剂保持其模型形状。
栓剂被填入使之形成模型形状的层状栓剂外壳中。栓剂贮存于此外壳中直至使用。该层状栓剂外壳是任何本领域所知的适合用于栓剂包装的外壳。该层状栓剂外壳必须能够耐受在栓剂制造中采用的60℃温度和长期贮存时的4℃温度，而不会损害模型的完整性或以不利的方式与栓剂反应。优选的层状栓剂外壳是聚氯乙烯-聚乙烯层状栓剂外壳。可由商业途径购得的合适的层状栓剂外壳是由Paddock Laboratories，Inc．制造的聚氯乙烯-聚乙烯层状栓剂外壳。
这种基于栓剂的菌苗释放系统还适当地含有去极化明胶。该去极化明胶是本领域所知的任何适宜的去极化明胶。合适的去极化明胶的实例包括，但不限于，来自牛或猪胶原的A或B型明胶。优选的去极化明胶是A型明胶。该去极化明胶在冻干过程中用于保护药物成分。
该去极化明胶以合适的量存在于栓剂中。更具体地，去极化明胶占栓剂的约0．01％-约0．02％(重量)。
这种基于栓剂的菌苗释放系统还适当地含有硫柳汞。该硫柳汞是抗微生物的防腐剂。商业购得的合适硫柳汞可从Sigma Chemical Co．得到。该硫柳汞以合适的量存在于栓剂中。更具体地，硫柳汞占栓剂的约0．0005％-约0．005％(重量)。
本发明的这种基于栓剂的菌苗释放系统在无菌层流条件下制备。聚乙二醇栓剂基质被加热到约80℃以使聚乙二醇转变为液态。该聚乙二醇栓剂基质被加热约1小时。将由8-14种灭活冻干的尿道病原菌组成的菌苗放入烧瓶中。部分液态栓剂基质冷却到60℃并倒入含有菌苗的各个烧瓶中。将菌苗和液态栓剂基质在约60℃下搅拌约10分钟形成包括栓剂基质和菌苗的均匀悬液。由栓剂基质和菌苗组成的悬液倒入各层状栓剂外壳中。添加量的液态栓剂基质加入含有残留菌苗的烧瓶中。将栓剂基质和菌苗在60℃下搅拌约1分钟形成均匀悬液。该悬液加到各层状栓剂外壳中。将纯的液态栓剂基质加到层状栓剂外壳顶部直至填满外壳。该栓剂被冷却到约24℃的温度下以使栓剂基质硬化。保证活性菌苗物质位于栓剂底部67％位置的方法是在使用打开外壳时防止栓剂尖部发生裂缝或射出。
本发明还以下列实施例作为范例。这些实施例说明本发明中的基于栓剂的菌苗释放系统的功效。应当理解这些实施例仅仅说明根据本发明的优选实施方案，而本发明的范围以其权利要求书作阐述。
实施例制备基于栓剂的菌苗释放系统，其包括灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种下列从尿路感染患者尿中分离的尿路病原菌菌株大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌、和粪链球菌，且每粒栓剂中含有约5千万-约50亿个每种菌株的病菌，其中所采用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌菌种；以及聚乙二醇基质。
将POLYBASE，一种由Paddock Laboratories，Inc．生产的聚乙二醇栓剂基质，在800C下加热约1小时成为液化栓剂基质。以无菌操作将足够制备50粒栓剂的Soco Basel AG生产的冻干 菌苗放入灭菌锥形烧瓶中。每粒栓剂中将含有约1×109－约1×1010个细菌。将液态栓剂基质冷却至约60℃并将约100ml的液态栓剂基质倒入含有菌苗的各个烧瓶中。将一个无菌磁性搅拌棒放入烧瓶中，将菌苗和栓剂基质在水浴控制的约60℃温度下搅拌约10分钟以形成均匀悬液。采用无菌吸管将含有栓剂基质和菌苗的悬液填入聚氯乙烯-聚乙烯层状栓剂外壳中。每个外壳中填入约2．0ml的悬液。
约25ml的液态栓剂基质加入到含有残留菌苗的烧瓶中。将栓剂基质和菌苗在约600℃下搅拌约1分钟以形成均匀悬液。每个外壳中加入这种悬液约0．5ml。每个外壳中加入纯的液态栓剂基质以填满外壳。该栓剂基质被冷却到约240℃的温度下保持约30分钟以使栓剂基质硬化。然后将栓剂在4℃下保存。
91名女性患者，年龄18-82岁，参加该栓剂实验。在过去的一年中所有患者均有两次以上的尿路感染，而且所有患者均用排泄尿路造影术(excretory urography)或肾脏超声波检查及膀胱镜检查评价。在栓剂实验前对患者进行全血细胞计数、血液生化检查、尿分析和培养、和阴道镜栓。这些患者被告之在实验期间不要怀孕，并且实验前的尿妊娠试验需呈阴性。这91名患者被分为3个治疗组。组1接受每粒含有约1×109个细菌的栓剂治疗。组2接受每粒含有约2×109个细菌的栓剂治疗。组3接受不含菌苗的栓剂治疗。这3组患者在平均年龄、子宫切除状态、性活动、或在0-4周期间的抗生素预防方面没有差异。
各位患者隔周以栓剂用药3次。栓剂以阴道内途径用药。对于放置阴道栓剂，患者仰卧平躺而该栓剂被置入高位阴道。患者保持仰卧约15分钟。所有患者在首次治疗后均观察4周，此后的20周里每隔4周进行观察。每次随访时收集血清、尿、和阴道灌洗液。实验期间当阴道分泌异常或症状发展时，进行阴道培养。
91名患者中，在实验开始时正在进行抗生素预防用药的44位患者继续使用抗生素直至第3次栓剂置入后2周。其余47位在整个实验过程中没有采用这种预防方案。
这些患者的参数以Fisher的双尾检验(two-tailed exact test)和Kruskal-Wallis一阶方差分析(ANVOA)进行统计学比较。以对数级数检验比较首次再感染的时间。这些检验全部以软件(SAS／STATSoftware，Changes and Enhancement，Ed．6．07，Cary，SAS Institute，Inc．，p．620,1993)进行解释。多数感染经过尿培养和敏感性证明，并且以全剂量的常规抗生素治疗3天。膀胱局部刺激症状发作是对抗生素到达的快速反应，而没有尿培养验证，这也被计作再发生感染并以相同的方法分析。此间抗体水平的变化以不平衡数据重复测定ANOVA进行比较。
没有患者因为副作用而中断过治疗。一位患者主诉在首次使用菌苗返家后出现头晕，但第二次和第三次接受接种时没有出现事故并继续执行治疗计划。另外三位患者主诉塞入栓剂后有轻微阴道刺激但仍然完成了三次栓剂的治疗方案而没有中断。没有关于严重的阴道排泄、妨碍性交、或细菌性阴道炎征兆和症状的其它报告。
全部91名患者的初步分析没有发现安慰剂和治疗组临床过程之间的差异。这种缺乏治疗效果的原因是，在研究开始的4周里进行抗生素预防的所有安慰剂-和菌苗-治疗的患者均极少发生尿路感染。检查0周即不再进行抗生素预防的47名女性的再感染时间，在首次再感染的时间方面，治疗组有显著意义的初发延迟。在首次感染时间方面，低剂量组和高剂量组没有显著差别，因此将这些数据合并进行菌苗功效分析。结果表明菌苗治疗组中8周内没有发生感染的患者数明显多于安慰剂治疗组。此外，免疫患者首次发生感染的平均时间从8．7周延迟到13周。图1以图解表示实验过程中仍没有发生感染的患者百分数。组1中的患者以虚线表示。组2和组3中的患者以实线表示。
根据本发明的基于栓剂的菌苗释放系统使菌苗与阴道粘膜有足够长的接触时间而增强免疫应答。而且，根据本发明的基于栓剂的菌苗释放系统用药容易，患者在接受菌苗后不需要长时间仰卧平躺，适于患者使用，用药无痛，可用于常规尿路感染的菌苗接种加强，并提供了通过粘膜向免疫活性细胞传递抗原的优化方法。
在公开了治疗尿路感染的基于栓剂的菌苗释放系统的多种实例以及人体尿路感染的治疗方法时，本领域技术人员可对其进行修改和改进是可以理解的。通过阅读和理解本文的公开内容，本领域技术人员将会理解本发明的其它特点和方面。所报告的结果和实施例的这些特点、方面、以及预期的变化和修改显然在本发明的范围之内，本发明仅受后附的权利要求书的范围限制。
权利要求
1．用于预防人体泌尿生殖道感染的基于栓剂的菌苗释放系统，所述栓剂含有(a)由灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种下列尿路病原菌菌株大肠杆菌(Escherichia coli)、克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、摩根氏变形杆菌(Proteus morganii)和粪链球菌(Streptoccus faecalis)，且每毫升中各含有约5千万-约50亿个每种菌株的细菌，其中所采用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌菌种；和(b)聚乙二醇栓剂基质，其中所述栓剂适合于塞入人体腔道以使该栓剂与身体腔道组织接触以促进栓剂物质的转运。
2．用于预防人体尿路感染的基于栓剂的菌苗释放系统，所述栓剂含有(a)灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种从尿路感染患者尿中分离的下列尿路病原菌菌株大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌和粪链球菌，且每粒栓剂中含有约5千万-约50亿个每种菌株的细菌，其中所采用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌菌种；和(b)聚乙二醇栓剂基质，其中该栓剂适合于塞入阴道内以使该栓剂与阴道粘膜接触以促进栓剂物质的转运。
3．权利要求2的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述灭活细菌来源于6种大肠杆菌菌株和1种分别为克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌，和粪链球菌的菌株。
4．权利要求2的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述灭活细菌的存在总量为约1×109-约1×1010个细菌。
5．权利要求2的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述聚乙二醇栓剂基质由聚乙二醇和聚山梨醇酯组成。
6．权利要求5的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述聚乙二醇栓剂基质由约98％(重量)的聚乙二醇和约2％(重量)的聚山梨醇酯组成。
7．权利要求5的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述聚乙二醇的平均分子量为约3000-约5000。
8．权利要求2的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述聚乙二醇栓剂基质占栓剂的约80％-约95％(重量)。
9．权利要求2的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述栓剂进一步由去极化明胶组成。
10．权利要求9的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述去极化明胶选自来源于牛胶原的A型明胶、来源于猪胶原的A型明胶、来源于牛胶原的B型明胶、来源于猪胶原的B型明胶。
11．权利要求9的基于栓剂的菌苗释放系统，其中去极化明胶占栓剂的约0．01％-约0．02％(重量)。
12．权利要求2的基于栓剂的菌苗释放系统，其中所述栓剂进一步含有硫柳汞。
13．权利要求12的基于栓剂的菌苗释放系统，其中硫柳汞占所述栓剂的约0．0005％-约0．005％(重量)。
14．用于预防人体尿路感染的基于栓剂的菌苗释放系统，所述栓剂含有(a)灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种从尿路感染患者尿中分离的下列尿路病原菌菌株大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌和粪链球菌，且每粒栓剂中含有约5千万-约50亿个每种菌株的细菌，其中所采用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌菌种，其中所述灭活细菌来源于6种大肠杆菌菌株和1种分别为克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌，和粪链球菌的菌株，并且其中所述灭活细菌的存在总量为约1×109-约1×1010个细菌；和(b)聚乙二醇栓剂基质，其中所述聚乙二醇栓剂基质由约98％(重量)的聚乙二醇和约2％(重量)的聚山梨醇酯组成，其中聚乙二醇的平均分子量为约3000-约5000，其中聚乙二醇栓剂基质占栓剂的约80％-约95％(重量)，其中该栓剂适合于塞入阴道内以使该栓剂与阴道粘膜接触以促进栓剂物质的转运。
15．权利要求14的基于栓剂的菌苗释放系统，其中栓剂中进一步含有去极化明胶和硫柳汞，其中去极化明胶选自来源于牛胶原的A型明胶、来源于猪胶原的A型明胶、来源于牛胶原的B型明胶、来源于猪胶原的B型明胶，其中的去极化明胶占栓剂的约0．01％-约0．02％(重量)，而且其中的硫柳汞占栓剂的约0．0005％-约0．005％(重量)。
16．用于预防人体尿路感染的基于栓剂的菌苗释放系统，所述栓剂由下列物质混合形成(a)由灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种从尿路感染患者尿中分离的下列尿路病原菌菌株大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌和粪链球菌，且每粒栓剂中含有约5千万-约50亿个每种菌株的细菌，其中所采用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌菌种，其中灭活细菌来源于6种大肠杆菌菌株和1种分别为克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌和粪链球菌的菌株，并且其中灭活细菌的存在总量为约1×109-约1×1010个细菌；和(b)聚乙二醇栓剂基质，其中聚乙二醇栓剂基质由98％(重量)的聚乙二醇和2％(重量)的聚山梨醇酯组成，其中的聚乙二醇的平均分子量为约3000-约5000，其中聚乙二醇栓剂基质占栓剂的约80％-约90％(重量)；其中该栓剂适合于塞入阴道内以使该栓剂与阴道粘膜接触以促进栓剂物质的转运。
17．预防人体泌尿生殖道疾病的方法，所述方法包括下列步骤(a)将基于栓剂的菌苗释放系统塞入人体腔道，其中所述栓剂包括灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种下列尿路病原菌菌株大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌和粪链球菌，且每粒栓剂中含有约5千万-约50亿个每种菌株的病菌，其中所采用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌菌种；及聚乙二醇栓剂基质；和(b)使该栓剂与腔道组织接触以促进栓剂物质的转运，并诱导人体免疫应答。
18．预防人体尿路感染的方法，所述方法包括下列步骤(a)将基于栓剂的菌苗释放系统塞入人体阴道，其中所述栓剂包括灭活细菌组成的菌苗，其细菌来源于培养的8-14种下列尿路病原菌菌株大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌，和粪链球菌，且每粒栓剂中含有约5千万-约50亿个每种菌株的细菌，其中所采用菌株的1／2-3／4属于大肠杆菌菌种；及聚乙二醇栓剂基质；和(b)使该栓剂与阴道粘膜接触以促进栓剂物质的转运，并诱导人体免疫应答。
19．权利要求18的方法，其中灭活细菌来源于6种大肠杆菌菌株和1种分别为克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌，和粪链球菌的菌株。
20．权利要求18的方法，其中灭活细菌的存在总量为约1×109-约1×1010个细菌。
21．权利要求18的方法，其中聚乙二醇栓剂基质由聚乙二醇和聚山梨醇酯组成。
22．权利要求21的方法，其中聚乙二醇栓剂基质由98％(重量)的聚乙二醇和2％(重量)的聚山梨醇酯组成。
23．权利要求21的方法，其中聚乙二醇的平均分子量为约3000-约5000。
24．权利要求18的方法，其中聚乙二醇栓剂基质占栓剂的约80％-约95％(重量)。
25．权利要求18的方法，其中栓剂还含有去极化明胶。
26．权利要求25的方法，其中去极化明胶选自来源于牛胶原的A型明胶、来源于猪胶原的A型明胶、来源于牛胶原的B型明胶、和来源于猪胶原的B型明胶。
27．权利要求25的方法，其中去极化明胶占栓剂的约0．01％-约0．02％(重量)。
28．权利要求18的方法，其中栓剂还含有硫柳汞。
29．权利要求28的方法，其中硫柳汞占栓剂的约0．0005％-约0．005％(重量)。
全文摘要
本发明涉及免疫预防人体泌尿生殖道感染性疾病的基于栓剂的菌苗释放系统,以及用该菌苗进行治疗的方法。更具体的说,本发明涉及预防泌尿生殖道感染性疾病,如尿路感染的基于栓剂的菌苗释放系统。基于栓剂的菌苗释放系统含有灭活细菌组成的菌苗,其细菌来源于培养的8—14种尿路病原菌菌株:大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌和粪链球菌;以及聚乙二醇基质;其中栓剂适于塞入人体腔道内以使栓剂与腔道组织接触从而使栓剂物质易于转运。
文档编号A61P13/00GK1278735SQ98810890
公开日2001年1月3日 申请日期1998年9月3日 优先权日1997年9月4日
发明者Z·I·赫尔特伦戴, M·维纳 申请人:蛋白表达公司