新型非甾体抗炎药的制作方法

专利名称：新型非甾体抗炎药的制作方法
技术领域：
本发明涉及以β-1，3-葡聚糖为有效成分的新型非甾体抗炎药的应用。具体说是把以β-1，3-葡聚糖作为有效成分的新型非甾体抗炎药用于消除各种原因引起的组织肿胀、炎性渗出、炎性损伤、组织增生和HP感染等相关疾病的治疗，这些疾病均以炎性细胞浸润到机体受损组织区域为特征。
“炎症”(inflammation)是指具有血管的活体组织对局部损伤的一种反应。任何能引起组织损伤的物理、化学、微生物感染、免疫和病理等因素都可能诱发炎症。炎症性疾病是一种常见病和多发病，其病理过程主要包括组织损伤、血管反应和组织增生等，其中由血管反应所致的“炎性浸出”是该过程的关键环节，炎性浸出的增加可导致组织肿胀、疼痛、损伤加剧、增生乃至纤维化等一系列并发症。根据病程的长短炎症性疾病又可分为急性和慢性两种。可以毫不夸张地说几乎每个人都或多或少地遇到过炎症的困扰。
炎症反应作为人体最基本的生理和病理过程之一，其生物学意义也具有两面性一方面作为一种生理机制，炎症反应是机体对抗损伤和感染的一种保护性反应，当症状不严重或危害不大时一般无须治疗，多可自行恢复；另一方面也可作为一种病理机制，当炎症反应过度和(或)紊乱时就会加重损伤并引发一系列并发症，如手术性脑水肿、中风、心肌梗塞、烧(烫)伤、肺炎、哮喘、类风湿性关节炎、骨性关节炎和其它风湿性疾病等，就需要进行抗炎等针对性治疗。实际上，胃炎、胃和十二指肠溃疡、溃疡性结肠炎等胃肠疾病也与炎症反应过度有一定关系，诱因包括病原菌感染[如幽门螺杆菌(Helicobacter Phylori，HP)]、自身免疫性疾病等，在治疗时通常也应考虑抗炎和止痛等问题。遗憾的是目前常用的非甾体抗炎药(nonsteroridalantiinflammatory drugs，NSAIDs)由于本身就有明显的胃肠损伤等副作用，尚难以用于这些胃肠疾病的治疗。
现代治疗炎症性疾病的药物主要有NSAIDs和免疫抑制剂两大类。免疫抑制剂主要包括糖皮质激素(Glucocorticoids，GC)、抗代谢物、烷化剂、抗体制剂、环孢菌素等，此类免疫抑制药物可用于抗炎，作用强大，但毒副作用也较多，临床主要适用于器官移植、新生儿溶血症、自身免疫性疾病的治疗。以应用较多的GC类药物为例，其作用机制十分复杂，长期使用不但可造成机体物质代谢和水钠代谢的紊乱，也会造成机体免疫防御机能的下降，有可能产生严重并发症。NSAIDs是另一类重要的抗炎药物，历史悠久但发展也很快，其传统概念是指那些具有“解热镇痛”作用的药物，如阿司匹林(aspirin)等，后来发现多数还兼有抗炎、抗风湿等作用。目前临床常用的NSAIDs主要包括阿司匹林、扑热息痛、扶它林、布洛芬、引哚美辛、萘普生、甲氯灭酸、双氯芬酸、依托度酸等，广泛用于解热镇痛、抗炎、抗风湿、抗痛风等病症的治疗，使广大患者的生活质量得以明显提高。
据保守估计，全球每天有三千万人使用NSAIDs，其中我国就有约600万人。遗憾的是NSAIDs也有不少副作用，最常见的副作用主要是胃肠道反应，如食欲不振、出血、溃疡甚至于穿孔，另外还有急性肾功能衰竭、慢性间质性肾炎等，发生率平均高达约20％。为了减少NSAIDs的胃肠副作用，服用NSAIDs的患者还常需加服抗溃疡药，这无疑给患者增加了额外负担并带来新的潜在副作用。有鉴于此，研发具有强大抗炎能力而又没有GC和NSAIDs类副作用的新药，早已成为全球医药工作者不懈努力的重要目标之一。此类新药的研发具有非常重要的临床、社会和市场意义。
已知β-1，3-葡聚糖(β-1，3-glucan)是一种重要的免疫活性分子，其天然提取物的分子量通常为几万至几百万，已往的研究和应用主要集中于一些大分子β-1，3-葡聚糖，较有代表性的如香菇多糖(Lentinan)，平均分子量为约40-80万，有较强的抗肿瘤、抗病毒和抗菌等医药应用价值；而有关β-1，3-葡聚糖较小分子的研究和应用则很少。
总之，β-1，3-葡聚糖在作为NSAIDs类抗炎药物方面尚无应用报道。
本发明旨在提供一种没有常规NSAIDs胃肠副作用的新型NSAIDs抗炎药。
以本发明所述β-1，3-葡聚糖作为有效成分制备新型非甾体抗炎药物，用于消除各种原因引起的组织肿胀、炎性渗出、炎性损伤、组织增生和HP感染等相关疾病的治疗。这些疾病均以炎性细胞浸润到机体受损组织区域为特征。
本发明所述β-1，3-葡聚糖，是指以β-1，3-葡萄糖苷键为分子主链结构的多(寡)糖的概括性统称。实际上，该β-1，3-葡聚糖是一个大家族，许多分子在分子量、枝链的键型(连接)和枝链丰度等方面可能有一定差异。β-1，3-葡聚糖作为分子的主链结构，是分子活性和性质的主要决定因素，分子的枝链状况或修饰基团对分子主链活性的影响一般是有限的。因此，本发明涉及的β-1，3-葡聚糖包括以β-1，3-葡聚糖为主链结构的所有组分，当然也包括以此为母体经物理、化学和生物降解，以及引入其它化学基团修饰而得到的衍生物及其生理上能够接受的盐类。
本发明所述组织肿胀、炎性渗出和炎性损伤相关性疾病主要包括手术性(脑)水肿、瘀血、中风、心肌梗塞、烧(烫)伤、扭挫伤、创伤、骨折、肺炎、支气管炎、咳嗽、哮喘、消化道损伤和炎症、骨质增生、类风湿性关节炎、骨性关节炎和其它风湿性疾病等，还可用于提高毛细血管和静脉张力、恢复毛细血管正常通透性、改善微循环。其中的消化道损伤包括其它非甾体抗炎药、严重应激反应、休克所致的胃肠损伤。
本发明所述HP感染相关性疾病主要包括慢性(活动性)胃炎、胃溃疡(GU)、十二指肠溃疡(DU)、胃癌、胃粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤(MALT)等。
有效剂量的β-1，3-葡聚糖还可以与药学上可以接受的其它药物组成复方药物，用于减少该药物的相关副作用，或增强其抗炎和抗损伤药效。
本发明所述β-1，3-葡聚糖的应用可以是其含量较高的纯品，也可以是含有有效量的β-1，3-葡聚糖的混合物。
本发明涉及的新型非甾体抗炎药在组成上包括有效剂量的β-1，3-葡聚糖和药学上可以接受的载体、辅料和(或)药物。药物的给药途径包括口服、注射和外用等多种。剂型包括口服液、片剂、胶囊、丸剂、散剂，注射液、注射粉针，外用液、膏、膜等常规剂型，其中外用剂型主要用于体表局部组织炎症和损伤的治疗。
关于本发明所述新型非甾体抗炎药物的应用，应当在有关损伤和炎症发生后尽早使用，也可根据需要在可能发生有关损伤和炎症之前(如手术等)预防使用，效果将会更好。
制备口服液的例子，包括将有效剂量的β-1，3-葡聚糖和所需量的液体基质混合制作而成，该基质的例子包括水或生理盐水，其中还可添加其它有益成分或辅料。
制备注射剂的例子，包括将符合注射剂质量要求的高纯度、无热源的β-1，3-葡聚糖按有效剂量和所需量的液体基质混合制作而成，该基质的例子包括水、生理盐水或其它缓冲液，其中还可添加其它有益成分或辅料，但均应符合注射剂的有关质量要求。注射剂的剂型包括注射液、粉针等。
制备口服胶囊、片剂、粉剂等固体剂型的例子，包括将有效剂量的β-1，3-葡聚糖干粉和所需量的药用辅料混合制作而成。
制备涂液、软膏等外用剂型组合物的例子，包括将有效剂量的β-1，3-葡聚糖和所需量的添加剂混合而成。这些添加剂通常选自外用药物或化妆品的常用基质或辅料，例如包括凡士林、液体石蜡、羊毛脂、硬脂酸单甘油脂、聚乙二醇、十六醇、甘油、乙醇和水等。作为有效成分用于制备创伤修复材料的例子，包括将有效剂量的β-1，3-葡聚糖和所需量的生物敷料或复合人工皮复合制作而成。本发明所述β-1，3-葡聚糖在外用药剂或敷料中的有效浓度为0．1-5mg／ml(g)，较好的为0．4-2mg／ml(g)。
制备复方药物组合物的例子，包括将有效剂量的β-1，3-葡聚糖和其它药物成分混合制成某些剂型。
制备这些剂型的方法是在药剂学中是常规和已知的，该领域的普通技术人员根据需要可以有效实施。
本发明的主要特征和特点1．本发明的主要特征在于以β-1，3-葡聚糖为有效成分的新型非甾体抗炎药用于炎症性疾病的治疗，且无胃肠损伤性副作用；这些疾病具有炎性细胞浸润到机体受损组织区域的特征。
2．本发明涉及的β-1，3-葡聚糖分子量一般应介于0．5-3000KD(KiloDalton，KD)之间，较好的选择为1-50KD，更优的选择为3-20KD。
3．本发明所述β-1，3-葡聚糖不但有显著的抗炎作用，还具有显著的抗胃肠溃疡、抗损伤和抗幽门螺杆菌(HP)定植与感染作用，克服了其它非甾体抗炎药常有的胃肠损伤等副作用问题，具有高效安全的特点。
本发明涉及的β-1，3-葡聚糖的来源非常丰富。β-1，3-葡聚糖在自然界的分布相当广泛，通常是作为植物和微生物的细胞壁结构成分大量存在，其中最主要的来源通常还是真菌的子实体、菌丝体或其培养液。根据枝链键接方式的不同，β-1，3-葡聚糖主要有如下类型(1)不含枝链的线性β-1，3-葡聚耱，如凝胶多糖(Curdlan)，加热冷却后可形成凝胶，提取自产碱杆菌属(Alealigenes)和土壤杆菌属(Agrobacterium)微生物；(2)富含β-1，6-葡萄糖枝链的β-1，3-葡聚糖，如在香菇(Lentinus edodes)的子实体或菌丝体中提取的香菇多糖(Lentinan)，在裂裥菌(SchizophyllanCommune)的培养液中提取的裂裥菌多耱(Schizophyllan)，在茯苓(PachymaCocos Fr．)中提取的茯苓多糖(Pachyman)，在猪苓(Grifola frondosa)中提取的猪苓多糖(Grifolan)，在昆布(Laminaria japonica)中提取的昆布多糖(Laminaran)，以及在Sclerotinia sclerotiorum(IFO9395)中提取的SSG[Chem．Pharm．Bull．，1986b，341362]等均属此类；(3)富含β-1，4-葡萄糖枝链的β-1，3-葡聚糖，如从地衣(Lichen)和异地衣(Isolichen)中提取的地衣多糖(Lichenan)和异地衣多糖(Isolichenan)等。这些多糖的制备和分析方法是已知的，可参见有关文献。
分子量是决定β-1，3-葡聚糖结构与活性的重要因素[Chem．Pharm．Bull．1990，38(2)477]。一般而言，β-1，3-葡聚糖的分子量越大水溶性越差、粘度越大，免疫刺激(致炎)作用也越强。大分子β-1，3-葡聚糖若用于体内注射，可引发单核吞噬细胞的吞噬和呼吸爆发，激活补体(旁路)系统，增强机体细胞毒活性，可用于杀伤肿瘤和病原微生物。β-1，3-葡聚糖的抗肿瘤活性与其对补体(旁路)或LAL(Limulus amebocyte lysate)凝集系统G因子的激活作用平行相关，而这种激活作用在一定范围内又与分子量的大小正相关。20-50KD左右通常为β-1，3-葡聚糖抗肿瘤和激活补体旁路活性的下限分子量，低于此限活性显著下降[Chem．Pharm．Bull．1990，38(2)477；Carbohydr．Res．1991，218167]。
已知补体(旁路)的激活对于组织来说是一种重要的破坏性反应，因此抗炎药物应当尽可能避免由此活性。如果大分子β-1，3-葡聚糖用于口服，则其上述抗肿瘤等作用显著下降，但在一定剂量可表现出抗炎和抗损伤作用，而且副作用很少。相比之下，较小分子量的β-1，3-葡聚糖水溶性更好，性质更温和，更适合用作抗炎和抗损伤。例如，分子量在两万以下的β-1，3-葡聚糖分子，补体旁路激活作用已无或很弱，用于抗炎既可口服也可注射使用，副作用也更低。
有研究表明，单核吞噬细胞含有β-1，3-葡聚糖受体。MΦ最小可识别聚合度(DP)为3～7的β-1，3-葡聚糖(DP=3～7)，即其对MΦ的免疫调节作用所要求的分子量最小可降至约0．5～1．1KD[J．Immunol 1989，142959；Dev．Comp．Immunol，1994，18(5)397]。因此，较低分子量的β-1，3-葡聚糖对MΦ既有良好而温和的调节作用，同时又可以避免过度激活MΦ。
因此，本发明涉及的β-1，3-葡聚糖对分子量大小是有限定的，分子量一般应介于0．5-3000KD之间，较好的选择为1-50KD，更优的选择为3-20KD。
不同来源提取的天然β-1，3-葡聚糖的分子量差别较大，分布范围主要从几万到几百万不等，其中较大的分子水溶性一般也较差，具有成胶性；如果使用分子量较小的β-1，3-葡聚糖，可对其进行适度降解，以达到所需的分子量和性质要求。
降解β-1，3-葡聚糖的方法很多，常用的有酸(如HCL，HCOOH)、碱(如NaOH)、酶(如β-葡萄糖苷水解酶)水解、热降解(如150℃)和机械破碎(如超生波)等，通过控制反应物的浓度、温度和时间等条件可获得适宜大小的反应混合物。由于分子量越大的多糖在乙醇溶液中的溶解度越小，因此通过控制乙醇的浓度即可将所需大小的多糖组分从该反应混合物中分级分离出来，再配合适当的超滤或层析等方法进一步纯化，即可获取高纯度所需大小的β-1，3-葡聚糖组分；用于注射剂的β-1，3-葡聚糖组分还应达到注射剂的有关质量要求。该组分经定性和定量分析后，可制成浓液或干粉待用。β-1，3-葡聚糖的质控等分析可参照已知常规方法进行。
β-1，3-葡聚糖衍生物的制备也是改进分子性能的重要手段。常用的衍生化方法包括水解、甲基化、羧基化、羧甲基化、胺基化、N-乙酰化、羟乙基化、硫酸化、磷酸化等。由于这些衍生化修饰的是β-1，3-葡聚糖的旁侧基团，对分子的主链结构的影响通常是有限的，但也可能会改善分子的某些性质。例如，羧甲基化的β-1，3-葡聚糖水溶性增强，抗癌活性和补体(旁路)激活作用减弱等。因此，β-1，3-葡聚糖的衍生物也包含在本发明的精神之中。
药理研究表明，β-1，3-葡聚糖是一种优良的炎性(渗出)抑制剂，对炎症组织中渗出细胞和渗出液的数量、组织增生均有显著抑制作用。以平均分子量约10KD的小分子β-1，3-葡聚糖(sβGLN)为例，sβGLN对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，鸡蛋清、海藻多糖所致小鼠和大鼠足跖肿胀，棉球所致大鼠肉芽组织增生等常规急、慢性炎症(模型)均有非常显著的抑制作用(p＜0．001)，而且抗炎作用强于地塞米松，并有显著的镇痛作用。SβGLN抗炎的有效剂量为2-40mg／Kg(大鼠)，最适剂量约为10mg／Kg(大鼠)和20mg／Kg(小鼠)，按体表面积推算两者有良好的一致性。由此按体表面积推算，人用的抗炎适宜剂量为0．4-8mg／Kg，最适剂量在约2mg／Kg左右。SβGLN口服给药与腹腔给药相比抗炎作用无显著差异，提示两种给药途径有良好的等效性。
β-1，3-葡聚糖大分子用于体内注射使用时，主要分布于肝、肺等组织，代谢和排出缓慢，因此不宜长期和大剂量注射使用；相比之下小分子的代谢和安全性质要好得多。β-1，3-葡聚糖用于口服给药时，吸收不畅，又不易被消化酶所降解，主要以粪便的形式排出体外，无明显副作用，但同样能产生抗炎药理作用，因此口服给药途径更安全方便。
SβGLN口服抗炎的作用机理与其对粘膜免疫系统中单核吞噬细胞的调节作用密切相关。已知粘膜免疫系统是人体的一个庞大而重要的免疫防御系统；sβGLN的受体(CR3)主要分布于中性粒细胞(PMN)、巨噬细胞(MΦ)的细胞膜上，其它如自然杀伤细胞(NK)、CTL细胞、B细胞也含有该受体，但PMN、MΦ是sβGLN的主要效应细胞。CR3在炎症反应中的重要作用是介导PMN粘附于内皮细胞，促进炎性细胞的趋化、游走和渗出。sβGLN可抑制粘膜免疫系统中的单核吞噬细胞的吞噬和呼吸爆发等作用，降低PGE2等炎性介质的合成与分泌，从而抑制补体的活化和内皮细胞粘附受体(如CR3)的表达，降低毛细血管的通透性，抑制炎性细胞的趋化、粘附和游走等活性，使炎性细胞和组织液的渗出与浸润显著减少，从而发挥相应的抗炎效应。
另外，由于在粘膜免疫系统中分布有丰富的神经及内分泌组织，而且有证据表明免疫信息对神经及内分泌的状态有重要的(相互)影响，因此SβGLN的全身性抗炎效应也可能与“免疫-神经-内分泌网络”的作用密切相关。
SβGLN对小鼠和大鼠的实验性胃溃疡有非常显著的预防和治疗作用，对大鼠皮肤伤口的愈合也有非常显著的加速(促进)作用。该分子抗溃疡作用的有效剂量范围较宽，在5-100mg／Kg范围内均有良好的剂量效应关系(小鼠)，其中小鼠和大鼠的高效经济剂量分别在20-30mg／Kg和10-15mg／Kg附近[中国发明专利申请号98110182．8]，与SβGLN的抗炎剂量高度相关并基本吻合。大分子β-1，3-葡聚糖也有一定的抗溃疡作用，但效果不及SβGLN。
β-1，3-葡聚糖的抗溃疡作用口服给药显著优于腹腔给药，提示β-1，3-葡聚糖与损伤组织的直接接触为抗胃肠溃疡的最佳途径。在一定剂量范围内，β-1，3-葡聚糖对大鼠胃液、胃酸的分泌及胃蛋白酶活性的影响是有限的，提示β-1，3-葡聚糖抗溃疡作用的主要机制不是通过影响胃液及胃酸分泌作用进行的，而可能是通过对胃肠粘膜免疫细胞的调节，增强组织的免疫防御、新陈代谢和修复机能等机制进行的。
β-1，3-葡聚糖的抗炎和抗溃疡作用还突出表现在抗HP方面。
现已确认，HP感染是慢性活动性胃炎(或B型胃炎)、胃溃疡(GU)、十二指肠溃疡(DU)、胃癌、胃粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤(MALT)的主要或重要病因。如许多资料显示，慢性活动性胃炎患者的HP检出率高达90％以上，DU患者几乎100％胃内有HP感染，并几乎总伴有慢性胃窦炎，根除HP后可彻底治愈溃疡病。不仅如此，功能性消化不良、恶性贫血、溃疡性食管炎等也与HP感染有一定相关性。因此抗HP已成为治疗上述HP相关病症的重要内容或指标。sβGLN能非常显著地抑制大剂量HP在胃粘膜上的定植与感染，从而使其随粪便排出体外，HP得以清除或根除。
SβGLN的作用机制不同于抗生素及化学药物的直接杀伤作用，而主要是间接性的--通过调节机体(免疫)防御机制发挥作用一方面，SβGLN作用于胃肠粘膜免疫系统产生上述“抗炎效应”，降低HP毒素等致炎物质诱发胃炎等病变的能力；另一方面，SβGLN还能增强粘膜组织的防御、保护、再生和修复能力，降低粘膜组织对HP的粘附和营养作用，增强机体对致病菌的自然清除能力。
SβGLN的毒性很低，具有高度的安全性。如SβGLN对小鼠的LD50≥1500mg／Kg(IP)，口服给药(PO)测不出LD50，最大耐受剂量(MTD)≥2000mg／Kg(PO)。另外，SβGLN还具有良好的组织相容性，无刺激、过敏等不良反应，也无致畸、致突变等毒性。
以下是本发明的实施例，该叙述的目的是为了更好地说明本发明。即只用于说明的目的，并且不以任何形式限制本发明。。
实施例1sβGLN及其抗炎药剂的制备取市售香菇子实体(干)，用水浸泡软化并洗净，粉碎后加水匀浆(1∶20，W／W)，搅拌下加热煮沸两小时，趁热过滤，滤液经超滤(截留分子量为100KD)或减压浓缩后，加热至160℃水解3-4小时，冷却后搅拌下加入50％乙醇，离心(6000rpm x15min)取上清液，加水稀释5倍，超滤法(截留分子量为5KD)浓缩并充分纯化之，然后取浓缩液同上离心，取上清液，弃沉淀物。该上清液可喷雾干燥制成干粉，sβGLN含量(纯度)一般不低于95％，平均分子量约10KD左右，水溶性良好。可以按需要将sβGLN干粉定量分装制成胶囊剂，或加辅料制成片剂，每粒(片)含sβGLN30-50mg；也可与适宜的溶剂混合，定量分装成口服液，如30-50mg／10ml／支，封口，(高压)灭菌，检验合格后即可作为成品。
实施例2sβGLN对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制将昆明种小鼠(18～22g)随机分组，每组5只，依次灌胃(PO)和腹腔注射(IP)给药，1小时后用二甲苯(致炎剂)涂于小鼠左耳廓后面(每鼠25μl)，右耳廓作对照。致炎1小时后将小鼠脱颈处死，分别剪去左右两耳，用9mm打孔器在同一部位分别打下两圆片，用分析天平称重，以每鼠左耳片重量减去右耳片重的差值为肿胀程度(指数)。[方法参见吴保杰，动物生化药物药理学，中国商业出版社，1993年第1版，P537]。结果参见表1。
表1sβGLN对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制作用 结果显示1、sβGLN对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有非常显著的抑制作用(p＜0．01)，最适剂量为25mg／Kg，最大抑制率为42．9％；PO给药与IP给药差别不大。2、sβGLN对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制作用明显强于地塞米松。
实施例3sβGLN对大鼠足跖肿胀的抑制将雄性SD大鼠(200～240g)随机分组，每组5只，实验前先给大鼠灌胃10ml水，1小时后分别给药，于给药1小时后向大鼠左右足跖中部皮下分别注射1％海藻多糖(致炎剂)50μl(向上和向下各注射一半)，然后测定第5min、30min、2h、4h、6h时的足跖体积，与致炎前的正常足跖体积之差值即为足跖肿胀指数(程度)。足跖体积的测定方法采用“毛细管放大法”[吴保杰，动物生化药物药理学，中国商业出版社，1993年第1版，P535]。结果参见表2。
结果显示1、sβGLN对大鼠足跖肿胀有非常显著的抑制作用(p＜0．01)，其中中剂量(10mg／Kg)为最适剂量，最大和最小肿胀时的抑制率分别为52．0％和75．3％，与对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的最适剂量(25mg／Kg)有良好的(体表)对应关系；其中PO给药与IP给药差别不大。2、sβGLN的抑制作用不亚于地塞米松。
表2sβGLN对大鼠足跖肿胀的抑制作用(N=5)实施例4sβGLN对大鼠棉球肉芽组织增生的抑制将雄性SD大鼠(200～240g)随机分组，每组5只，在氨基甲酸乙酯的浅麻醉下剪去背毛并消毒，然后沿背中线两侧各埋入一个重量30mg脱脂棉球(直径6．5-8．5mm)，每个棉球含青、链霉素各0．1mg(溶于0．2ml生理盐水中)，以防感染。术后当天开始给药，每天一次，于第10天脱颈处死大鼠，分离出已包裹肉芽组织的棉球，置于60℃烘箱中12小时，冷至室温后称重，减去棉球原重即为肉芽肿的净重(肿胀指数)。结果参见表3。[方法参见吴保杰，动物生化药物药理学，中国商业出版社，1993年第1版，P540]结果显示1、sβGLN对大鼠棉球肉芽组织增生有非常显著的抑制作用(p＜0．001)，且有良好的剂量-效应关系；其中PO给药略强于IP给药。2、sβGLN对大鼠棉球肉芽组织增的抑制作用明显强于地塞米松。由于非甾体抗炎药(NSAIDs)对此模型不敏感，因此sβGLN的作用显然也强于NSAIDs。
表3sβGLN对大鼠棉球肉芽组织增生的抑制作用(N=5)实施例5抗水浸应激型胃溃疡作用昆明种小白鼠(18±2g)先禁食(但供水)24小时，然后灌胃(PO)给药，尔后将动物装入特制的铁丝笼内，垂直浸入23±0．5℃水中，浸入深度平小鼠剑突水平，24h后取出，脱颈处死小鼠，打开腹腔，结扎胃幽门和喷门，先向胃内注入1ml1％甲醛溶液，然后再浸入1％甲醛溶液固定30分钟，取出沿大弯剪开胃体，参照卫生部新药临床前研究的有关要求测定溃疡程度(指数)等，并进行评价。结果参见表4。
表4sβGLN、βGLN抗水浸应激型胃溃疡作用(N=5)
结果显示1、sβGLN、βGLN均有非常显著的抗溃疡作用，并呈剂量-效应关系；2、sβGLN的抗溃疡作用优于βGLN。
实施例6sβGLN抗Aspirin损伤性胃溃疡实验35只昆明种小白鼠(20±2g)先禁食(但供水)24小时，然后每只小鼠灌胃0．50ml Aspirin液(100mg／Kg)，1h后随机分组，每组5只，给予sβGLN或βGLN水溶液0．30ml(PO)，对照组给予同体积水，然后继续禁食(但供水)48小时，脱颈处死小鼠，解剖取胃，按上述方法固定和评价。
结果显示sβGLN抗Aspirin损伤和溃疡作用明显高于βGLN；两者在5～100mg／Kg剂量范围内都有良好的剂量-效应关系，其中25mg／Kg可认为是sβGLN的高效经济剂量。(结果参见表5)表5．SβGLN／βGLN抗Aspirin损伤性胃溃疡作用(N=5)实施例7sβGLN抗乙酸烧灼性胃溃疡实验SD大鼠(体重230±20g)，实验前先禁食(但供水)24小时，乙醚麻醉下打开腹腔，将内径5mm，长约30mm的玻璃管垂直放置于胃体部将膜面上，向管腔中加入200μl冰乙酸，90秒后吸出酸液，缝合手术切口，正常喂养。第二天选状态基本正常的大鼠随机分组，每天给药一次(1ml／PO)，连续给药十五天，次日脱颈处死，取胃固定和评价。(结果参见表6)。
表6．SβGLN对乙酸腐蚀性胃溃疡的治疗作用(15DAYS)(N=5) 结果显示1、sβGLN对乙酸烧灼型胃溃疡有非常显著的治疗作用，其中15mg／Kg剂量组的溃疡抑制率高达89．9％，明显优于Ranitidine对照组的67．9％；2、sβGLN在2．5-15mg／Kg剂量均有显著抗溃疡作用，并有良好的剂量-效应关系。
实施例8sβGLN抗HP定植与感染实验昆明种健康小白鼠(体重20±2g)禁食(但供水)24小时，然后随机分组，每组10只，先给予受试药物(PO)，1小时后给予新鲜培养的对数生长期的HP2×107(0．20ml／PO)，继续禁食3小时后正常饲养；第2、3天在分别禁食6小时后再同上分别给药和种植HP，共连续三次，然后正常饲养2周，次日再次禁食24小时，尔后处死小鼠，解剖取胃，沿大弯剪开洗净，取胃窦组织进行尿素酶实验和镜检。由于HP定植和感染的程度可特异性地以尿素酶反应(颜色)的强弱来判断，故如下主要以尿素酶反应指数情况进行评价。反应指数设定4(菊红色)；3(粉红色)；2(橙红色)；1(微橙红色)；0(橙黄色)。实验结果如表7。
表7、sβGLN抗HP定植与感染作用(18days) 结果显示sβGLN有非常显著的抗HP胃粘膜定植和感染的能力，可使HP接种小鼠胃粘膜组织的尿素酶反应、HP镜检数量和组织损伤程度显著下降，而且具有良好的剂量依赖性，其中20mg／kg为最适剂量，可完全抑制HP在胃粘膜上的定植和感染，疗效显著优于抗HP抗生素-Amoxycillin，提示sβGLN可望成抗HP感染、慢性萎缩性胃炎、胃和十二指肠溃疡等的重要药物。由于该剂量恰为sβGLN的抗炎和抗溃疡剂量，故sβGLN的抗HP胃粘膜定植与感染作用可能与其抗炎和抗溃疡作用密切相关。
以上尽管我们描述了本发明的实施方案，显然并不意味着仅限于此。实际上，本发明的实施方案可以进行许多改变以充分利用本发明的用途而不超出本发明的范围和精神。因此应该理解，本发明的保护范围应当由所附权利要求书来限定，而不是由以实施例方式表示的特定实施方案来限定。
权利要求
1．以β-1，3-葡聚糖为有效成分的新型非甾体抗炎药。其特征在于将有效剂量的β-1，3-葡聚糖用于炎症性疾病的治疗，且无胃肠损伤性副作用；这些疾病均以炎性细胞浸润到机体受损组织区域为特征。
2．根据权利要求1的应用，本发明所述β-1，3-葡聚糖可用于各种原因引起的组织肿胀、炎性损伤、组织增生相关疾病的治疗，其中包括手术性(脑)水肿、瘀血、中风、心肌梗塞、烧(烫)伤、扭挫伤、创伤、骨折、肺炎、支气管炎、咳嗽、哮喘、消化道损伤和炎症、骨质增生、类风湿性关节炎、骨性关节炎和其它风湿性疾病，也可用于提高毛细血管和静脉张力、恢复毛细血管正常通透性、改善微循环。
3．根据权利要求1的应用，本发明所述β-1，3-葡聚糖可以用于治疗胃肠炎症及损伤性疾病的治疗，其中包括胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌、胃粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤(MALT)、胃肠损伤和HP感染。
4．根据权利要求1、3的应用，本发明所述β-1，3-葡聚糖可以用于预防和治疗其它非甾体抗炎药、应激和休克所致的胃肠损伤。
5．根据权利要求1、2、3、4的应用，其中所述的β-1，3-葡聚糖的分子量大小一般应介于0．5-3000KD之间，较好的选择为1-50KD，更优的选择为3-20KD。
6．根据权利要求1、5的应用，其中所述β-1，3-葡聚糖包括以β-1，3-葡萄糖苷键为主链结构的所有多糖组分，其中包括以此为母体经物理、化学和生物降解，或经修饰引入其它化学基团而得到的衍生物，以及这些分子在生理上能够接受的盐。
7．根据权利要求1、2的应用，人体使用β-1，3-葡聚糖的有效剂量为每人每天每公斤(Kg)体重0．4mg至约8mg(口服或注射)，其中较好的剂量范围约为每公斤体重0．8mg至约4mg，根据具体情况可作适当调整。
8．根据权利要求1、2的应用，其中所述新型非甾体抗炎药在组成上包括有效剂量的β-1，3-葡聚糖和药学上可以接受的载体、辅料和(或)药物。
9．根据权利要求1、2、8的应用，其中包括将有效剂量的β-1，3-葡聚糖与药学上可以接受的其它药物组成复方药物。
全文摘要
本发明涉及以β－1,3－葡聚糖为有效成分的新型非甾体抗炎药的应用。具体说是以β－1,3－葡聚糖作为有效成分,用于炎症性疾病的治疗,这些疾病具有炎性细胞浸润到机体受损组织区域的特征。本发明所述β－1,3－葡聚糖不但有显著的抗炎作用,还具有显著的抗胃肠溃疡、抗损伤和抗幽门螺杆菌在胃粘膜上定植与感染的特性,具有高效安全的作用特点,克服了其它非甾体抗炎药通常具有的胃肠损伤等副作用问题,具有重要的医药应用价值。
文档编号A61P29/00GK1293957SQ9911250
公开日2001年5月9日 申请日期1999年10月25日 优先权日1999年10月25日
发明者王京杭 申请人:王京杭