专利名称：纤溶酶原相关基因b多肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及细胞生物学，血管发生和肿瘤学。联邦资助研究的声明本发明是在国立卫生研究院颁发的AM16265号政府资助下完成的，美国政府在本发明中具有一定的权利。
背景技术：
由肝脏分泌的一种丝氨酸蛋白酶前体纤溶酶原在溶解血块中起一定作用。有活性的双链蛋白酶纤溶酶通过组织型或尿激酶型纤溶酶原激活物切割特异的Arg-Val肽键并自身催化除去N-末端活化前(preactivation)肽而从纤溶酶原产生。纤溶酶攻击血块的主要组分血纤蛋白，从而促进血块溶解。除了其已熟知的溶栓能力外，纤溶酶与其它蛋白酶一起在发育中的组织重建、骨关节炎中的软骨破坏、转移肿瘤细胞对基膜的侵袭中起介体作用。
纤溶酶原相关基因B多肽(PRG-B多肽；也称为plasmilar或纤溶酶原相关蛋白[PRP])已由Weissbach，美国专利5,545,717；Weissbach等，生物化学生物物理研究通讯186:1108(1992)；Ichinose等，生物化学31:3113-3118(1992)描述。信号肽裂解后，成熟PRG-B多肽长度为77个氨基酸，并与纤溶酶原的N-末端活化前肽高度同源。
发明概述已发现PRG-B多肽在体外禽类模型中抑制血管发生，并在体内哺乳动物模型中也抑制瘤生长。
因此，本发明的特征在于提供一种在鸟类或哺乳动物例如人中抑制血管发生的方法。所述方法涉及鉴别具有不希望的血管发生或处于不希望的血管发生风险中的鸟类或哺乳动物，给予所述动物足以抑制所述血管发生量的PRG-B多肽。涉及不希望的血管发生的状态包括非癌性生长、关节炎和糖尿病性视网膜病。
本发明还提供了用于降低或预防瘤生长如肺癌、乳腺癌或前列腺癌的方法。所述方法涉及鉴别具有瘤生长或处于瘤生长风险中的动物，给予所述动物足以抑制或防止瘤生长量的PRG-B多肽。
本发明还包括(1)用于治疗个体中与不希望的血管发生或瘤生长相关的状态的药物组合物，该组合物包括PRG-B多肽；(2)PRG-B多肽在制备该药物组合物中的应用；以及(3)编码PRG-B多肽的表达载体在制备该药物组合物中的应用。
用于本发明方法中的PRG-B多肽可以是全长成熟plasmilar，其氨基酸序列由Weissbach等，生物化学生物物理研究通讯186:1108(1992)公开(GenBank登录号M93143)。或者，PRG-B多肽可以是plasmilar的功能等价物，即基于plasmilar的肽模拟物，或者这样的一种多肽，其(1)展示抗血管发生或抗癌活性，并且(2)包括与全长、成熟plasmilar的氨基酸序列共享至少70％相同性的氨基酸序列。优选地，序列相同性为至少80％，更优选地至少90％。
用于本发明方法中的PRG-B多肽的一个具体例子由下述氨基酸序列组成MRGSHHHHHH TDPHASSVPR VDPLDDYVNTQGPSLFSVTK KQLGAGSREE CAAKCEEDKEFTCRAFQYHS KEQQCVIMAE NRKSSIIIRM RDAVLFEK(SEQ ID NO:4)在这一特定序列(SEQ ID NO:4)中，全长成熟plasmilar的氨基末端谷氨酸残基(E)(位置22)被天冬氨酸残基(D)置换。在这一序列(SEQ ID NO:4)中，六个连续的组氨酸残基(位置5-10)作为用于纯化重组多肽(通过其与镍-NTA琼脂糖相互作用)的“聚组氨酸标记”。多肽的氨基末端甲硫氨酸和全长成熟plasmilar的氨基末端之间的其余氨基酸残基是用于产生重组PRG-B多肽的DNA克隆程序的人为假象。
如本文所用，“序列相同性”是指当两个序列进行对比以使亚单位匹配最大化，即考虑到间隔和插入时，两个序列相应位置的相同亚单位的百分比。例如，如果在一个10个氨基酸的序列中有7个位置与第二个10个氨基酸序列的相应位置相同，那么这两个序列有70％序列相同性。序列相同性典型地用序列分析软件如威斯康辛大学生物技术中心(1710 University Avenue,Madison,WI 53705)的遗传学计算机小组的序列分析软件包进行测量，或由国立生物技术信息中心提供的BLAST程序可用于进行序列对比。该程序详见Karlin等，美国科学院院刊87:2264(1990)和90:5873(1993)，以及Altschul等，核酸研究25:3389(1997)，并且在互连网上的网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov得到。
用于序列对比的数学算法的另一个优选的非限制性实例是Myers和Miller,CABIOS(1989)的算法。这种算法掺入ALIGN程序(版本2.0)，后者是GCG序列对比软件包的一部分。当用ALIGN程序对比氨基酸序列时，可以使用PAM120重量残基表，间隔长度罚分为12，间隔罚分为4。
两个序列见的相同性百分比可用类似于上述的技术，允许或不允许间隔来确定。在计算相同性百分比时，仅计数精确配对。
当多肽序列与参照序列不是100％相同时，不相同的位置优选地但不是必需地是参照序列的保守取代。保守取代典型地包括如下各组的取代甘氨酸和丙氨酸；缬氨酸，异亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；丝氨酸和苏氨酸；赖氨酸和精氨酸；苯丙氨酸和酪氨酸。例如，如果10个氨基酸的多肽与参照多肽有不超过2个非保守取代的不同，则该多肽被描述为至少80％保守。
PRG-B多肽可以直接给药。PRG-B多肽的直接给药可以是系统地，例如静脉。或者，PRG-B多肽可以局部给药，例如，通过直接注射进肿瘤。也可以从移植物直接给药，其提供了PRG-B多肽的连续缓释。
另外，PRG-B多肽可以通过表达载体间接给药。表达载体是含有调节元件或报道基因用于在原核生物或真核生物或生物体中表达给定基因的任何核酸分子或病毒。这种载体可以通过分子生物学技术导入细胞。导入细胞后，这一核酸可染色体外存在或整合进宿主基因组中。这种细胞也可以给予动物。
在PRG-B多肽给药之前、同时或之后也可给予一或多种附加的化合物，包括其它血管发生抑制剂或抗有丝分裂药物。当这些化合物同时给药时，它们可存在于一个药物组合物中。
本发明的其它特征和优势将通过下面的详细描述和权利要求书而更加清楚。
附图的简要描述
图1是小鼠肿瘤体积对用盐水或PRG-B多肽处理天数的曲线。
详细描述血管在鸟类或哺乳动物的非软骨组织中的存在由血管发生的抑制剂和刺激剂之间的精确平衡来保持。这一平衡的改变可促进或抑制血管的发育。PRG-B多肽在血管发生的调节、因此肿瘤生长的调节中起作用这一发现导致了本发明方法。
适用于本发明的PRG-B多肽的量可以通过采用培养的宿主细胞的常规重组方法产生。例如，重组PRG-B多肽(rPRG-B)可以如下述实施例1所述产生。宿主细胞可以是原核生物，如大肠杆菌。或者，宿主细胞可以是真核生物，例如酵母，昆虫细胞或哺乳动物细胞。含有与合适的表达控制序列可操作连接的rPRG-B编码区的核酸载体可以通过病毒感染、受体介导的胞吞、脂质体融合或任何其它标准技术导入到宿主细胞。由培养的宿主细胞表达的rPRG-B的提取和纯化可用现有技术已知技术进行，包括，例如，实施例1所述的亲和纯化程序。
本发明的PRG-B多肽的给药可用各种标准方法进行，包括静脉内、皮下、动脉内、腹膜内、经粘膜、口服和肺内给药。另外，使得能缓释的移植物也可用于将PRG-B多肽给予患者。PRG-B多肽可以与一或多个附加的活性剂如化疗药物如紫杉醇联合给药。
PRG-B多肽的给药剂量可与其它治疗性给药的蛋白质的剂量相类似。典型地，所设计的剂量水平是当系统给药时产生约1-100ng/ml的血清浓度。或者，PRG-B多肽可直接注射进靶组织如肿瘤中。这可产生大于100ng/ml的PRG-B多肽的局部浓度，而系统血清浓度仍低于1ng/ml。局部输送技术以下将进一步讨论。对于给定患者的最适剂量取决于患者的体重、年龄、性别、治疗方案等因素，并可以由本领域技术人员确定。
从细胞培养物分析和动物研究获得的数据可以用于确定用于人类的PRG-B多肽剂量范围。例如，通过用可变浓度的rPRG-B重复以下实施例1的程序可以确定一滴定曲线。剂量优选处于包括极少或无毒的ED50的循环浓度范围。根据采用的剂型和给药途径剂量可以在这一范围内变化。血浆中的PRG-B多肽水平可通过常规分析方法，例如高效液相层析或放射免疫分析而测定。
确定剂量的方法的其它指南可参见标准参考书，例如，Spilker,临床研究和和开发方案指南，Raven Press Books,Ltd.,纽约，1984,pp.7-13和54-60；Spilker，临床试验指南，Raven Press,Ltd.,纽约，1991,pp.93-101；Craig等，现代药物学，2版，Little Brown and Co.,波士顿，1986,pp.127-133；Speight,Avery′s药物治疗临床药物学和治疗的理论和实践，3版，Williams and Wilkins,Baltimore,1987,pp.50-56；Tallarida等，普通药物学理论，Springer-Verlag，纽约，1998,pp.18-20；Olson,临床药物学神奇地简化，MedMaster,Inc.,迈阿密，1993,pp.1-5。
用于本发明方法中的含有PRG-B多肽的药物组合物可以常规方式用一或多种生理学可接受载体或赋形剂配制。
PRG-B多肽可配制用于经吸入或吹入法(经口腔或鼻)给药或口服、颊、肺、鼻、非肠道或直肠给药。
为口服给药，药物组合物可采取例如片剂或胶囊形式，其可用常规方法用药物学可接受赋形剂如粘合剂(例如，预胶凝化的玉米淀粉，聚乙烯基吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖，微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁，滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或湿润剂(例如，十二烷基硫酸钠)制备。片剂可用现有技术已知方法涂覆。用于口服给药的液体制剂可采取例如溶液、糖浆或悬液的形式，或者可以干品存在，在使用前用水或其它合适的载体配制。这种液体制剂可通过常规方法用药物学可接受添加剂制备，所述添加剂如悬浮剂(例如，山梨醇糖浆，纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂和金合欢)；非水性载体(例如，杏仁油，油酯，乙醇或分级植物油)；以及防腐剂(例如，甲基或丙基-p-羟基苯甲酸酯或山梨酸)。如果合适，制剂还可含有缓冲盐，风味剂，着色剂和甜味剂。用于口服给药的制剂可以合适地配制成控制释放活性化合物。为避免PRG-B多肽在胃肠道中的降解，可使用细菌毒素融合蛋白或脂质体等输送系统。这种输送系统见Mestecky等，BehringInst.Mitt.98:33-43(1997)；Storm等，杂交瘤16:119-125(1997)和Rowlinson-Busza等，Curr.Opin.Oncol.4:1142-1148(1992)所述。
为颊部给药，组合物可采取常规方法配制的片剂或锭剂。
为吸入给药，本发明方法所用的PRG-B多肽可方便地从加压包装或喷雾器使用合适的推进剂以气雾剂喷雾的形式输送。在加压气雾剂情况下，剂量单位可通过提供输送计量量的阀来确定。用于吸入器或吹入器的例如明胶的胶囊和药筒可配制成含有化合物和合适的粉末基如乳糖或淀粉的粉末混合物。
PRG-B多肽可配制成经注射而非肠道给药的形式，如药团注射或连续输注。用于注射的配制品可以单位剂型存在，例如装于安瓿或多剂容器中，加入防腐剂。组合物可采用在油性或水性载体中的悬液、溶液或乳液形式，并可含有配制剂如悬浮、稳定和/或分散剂。或者，活性成分可采用粉末形式，以在使用前用合适的载体配制，例如无菌无热原水。
PRG-B多肽也可配制成直肠组合物如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯。
除了前述配制品外，PRG-B多肽也可以配制成补给制剂(例如，移植物)。这种长期作用配制品可经移植(例如皮下或肌内)或肌内注射给药。因此，例如，PRG-B多肽可用合适的聚合或疏水材料(例如在可接受的油中的乳液)，或离子交换树脂配制，或者作为微溶的衍生物，例如，微溶的盐。
PRG-B多肽导向瘤细胞可通过将PRG-B多肽组合物直接局部注射入肿瘤而实现。为增强定向，组合物可含有特异结合瘤细胞的组分，例如特异于癌抗原、优选细胞表面癌抗原的抗体或多肽。或者，PRG-B多肽可通过在组合物中包括与血管发生部位相关的抗原结合的多肽，例如，抗体或其片段而被导向异常高度血管发生的部位。
PRG-B多肽也可通过在患者的细胞中表达含有可操作地与编码PRG-B多肽的序列连接的表达控制序列的核酸构建体而被导入患者。所述核酸构建体衍生自非复制的线性或环状DNA或RNA载体，或衍生自自我复制的质粒或病毒载体；或者该构建体整合进宿主基因组。任何可转染哺乳动物细胞的载体均可用于本发明方法。构建表达载体的方法是本领域已知的(参见，例如，分子克隆实验手册，Sambrook等编辑，冷泉港实验室，2版，冷泉港，纽约，1989)。
在这些载体中，启动子可操作地连接于编码PRG-B多肽的核酸序列。可以在靶细胞中指导高水平转录起始的任何启动子均可用于本发明。这种靶细胞包括癌细胞，环绕癌细胞的健康细胞和任何与受影响区域接近的其他细胞类型。非组织特异性启动子如巨细胞病毒(DeBernardi等，美国科学院院报88:9257-9261,1991及其中的参考文献)，小鼠金属硫蛋白I基因(Hammer等，分子应用遗传学1:273-288,1982)，HSV胸苷激酶(McKnight，细胞31:355-365,1982)，和SV40早期(Benoist等，自然290:304-310,1981)启动子可用于本发明方法，因为在本发明方法中PRG-B多肽的表达预期不会负面影响转染细胞。上述核酸构建体和载体可经任何标准方法导入靶细胞例如，作为裸DNA，或经脂质体融合，biolistic转移，电穿孔，红细胞空胞，或微球方法(微粒；参见例如美国专利4,789,734；美国专利4,925,673；美国专利3,625,214；Gregoriadis,生物学和药物中的药物载体，pp.287-341，学术出版社，1979)。
或者，可以采用基于病毒的载体以将核酸导入动物细胞。优选的病毒载体包括衍生自复制缺陷型肝炎病毒(例如，HBV和HCV)，逆转录病毒(参见，例如，WO89/07136；Rosenberg等，新英格兰医学杂志323(9):570-578,1990)，腺病毒(参见，例如，Morsey等，细胞生物化学杂志增刊17E,1993)，腺伴随病毒(Kotin等，美国科学院院报87:2211-2215,1990)，复制缺陷型单纯疱疹病毒(HSV:Lu等，摘要，第66页，基因治疗会议摘要，1992年9月22-26日，冷泉港实验室，冷泉港，纽约)，carnary痘病毒的载体和这些载体的任何修饰版本。
PRG-B多肽可以用编码PRG-B多肽的表达载体体外转染细胞(例如，患者的原始细胞)；培养细胞以产生稳定转化的均一的群体并将分泌PRG-B多肽的细胞群体移植进患者，而不是将裸载体导入患者可以实现PRG-B多肽的输送。
无论用何种方法将PRG-B多肽输送进患者，可以通过现有技术已知的各种合适方法测量对治疗的应答。例如，在PRG-B多肽给药后可用磁共振成象技术成象实体肿瘤以确定效率。或者，可测定患者样品如血样中的肿瘤生长的替代标记如癌胚抗原或前列腺特异抗原。在非癌状态下，可在PRG-B多肽给药之前和之后经直接检查受影响组织或用染料或放射活性追踪物成象血流来监控血管发生。PRG-B多肽给药的可能的副反应可包括对创伤愈合的抑制，其也可被监控。
PRG-B多肽给药的禁忌征候包括抑制血管发生对患者特别有害的情形。例如，当将PRG-B多肽给予婴儿、孕妇或经历创伤愈合困难的患者时应注意。
本领域技术人员基于上述描述和下述实施例可充分利用本发明。下述实施例应理解为仅举例描述本领域技术人员如何制备和使用PRG-B多肽，而不是对本发明的限制。本文中引述的任何出版物均引入本文做参考。实施例1 重组PRG-B多肽的产生构建由在N-末端与含六组氨酸的肽融合的PRG-B多肽组成的重组融合蛋白(SEQ ID NO:4)。六组氨酸特征使得能通过镍-NTA树脂(Qiagen)纯化重组产生的多肽。
用全长PRG-B cDNA(如Weissbach等；GenBank登录号M93143所述)作为模板，和携带促进亚克隆进pQE-31质粒载体(Qiagen)的内部限制位点的两个寡核苷酸引物进行PCR。pQE载体表达在大肠杆菌噬菌体T5启动子和lac操纵子控制下的插入基因。有义引物为5′-ACTTCACCCGGGCAAGTCGACCCTCTGGATGAC-3′(SEQ ID NO:1)，相应于所述cDNA的核苷酸107-139；反义引物为5′-TTCGGATCCCAGTCTAGAACTCTGAAAG-3′(SEQ ID NO:2)，相应于所述cDNA的核苷酸365-392。用BIOSCYCLER(IBI)采用下述循环参数进行PCR:94℃90秒，60℃60秒，72℃30秒，总共进行30个循环。用BamHⅠ和SalⅠ限制酶消化286bp PCR产物和pQE-31质粒，过Chromaspin-100预装旋转过滤柱(Clontech)以取出由酶消化释放的小DNA片段，并用T4 DNA连接酶连接在一起。
连接的DNA转化进含有pREP4质粒(Qiagen)的M15细胞，其表达高水平的lac阻遏蛋白，保证了对插入基因转录的紧密控制。转化子用BamHⅠ/SalⅠ消化分析，用得自Qiagen的引物(5′-CGGATAACAATTTCACACAG-3′)(SEQ ID NO:3)测序含有插入子的质粒克隆，该引物位于起始甲硫氨酸密码子上游27bp。含有与组氨酸标记同读框的正确序列的一个DNA分离物用于大规模纯化PRG-B重组融合蛋白。从DNA序列预计融合蛋白分子量为11221道尔顿，等电点为7.54。
在变性条件下融合蛋白的纯化如下完成将10ml携带重组质粒的M15细胞的过夜培养物加入到含有氨苄青霉素和卡那霉素的500mlLB培养基中，在37℃振荡直至OD600为0.8-0.9。加入IPTG至终浓度为1mM，再振荡培养物3-4小时。
离心收获细胞，将细胞沉淀每克湿重溶于5ml缓冲液A(8M尿素，0.1M NaH2PO4,0.01M咪唑，10mM β-巯基乙醇和0.01M TrispH8.0)。室温搅拌溶液1小时，然后20000×g离心15分钟。向上清液中加入预先用缓冲液A平衡的3毫升50％Ni-NTA树脂浆，再次室温搅拌溶液1小时。含有树脂和细菌提取物的混合物上样于空柱(14cm×3.5cm)，并依次用50ml缓冲液A和10柱体积的缓冲液B(8M尿素，0.1M NaH2PO4,0.01M咪唑，10mM β-巯基乙醇和0.01MTris pH6.25)洗柱。用6柱体积的缓冲液C(8M尿素，0.1M NaH2PO4,0.25M咪唑，10mM β-巯基乙醇和0.01M Tris pH6.25)洗脱与树脂结合的物质。收集3毫升组分，用十二烷基硫酸钠电泳(SDS-PAGE)分析10毫升每组分以检测PRG-B融合蛋白的存在。纯化的重组PRG-B多肽(rPRG-B)在其用于以下实施例之前对PBS透析。实施例2rPRG-B抑制恶性肿瘤的生长如O′Reilly等，细胞79:315-328(1994)所述将Lewis肺癌移植到同系C57B16/J小鼠中。将1×106个肿瘤细胞在100微升PBS中的悬液注射进小鼠的背部皮下。用测径器测量肿瘤，并用公式宽度2×长度×0.52确定体积。这一公式相应于计算椭球体积的通式，其中0.52约为π/6，并是估计肿瘤体积的标准计算公式。
当肿瘤体积达到约160mm3时，随机将小鼠分成2组。1组(n=3)以剂量35mg/kg体重每天接受悬浮于PBS中的rPRG-B(如实施例1所述)的腹膜内注射。对照组(n=3)接受PBS。如图1所示，rPRG-B处理导致在所观察期间平均肿瘤大小的大大降低。在rPRG-B处理11天后，平均肿瘤大小小于1500mm3。相反，当小鼠仅用盐水处理时，平均肿瘤大小大于4500mm3。图中的误差杆代表每个数据点的95％置信间隔。在任何处理的小鼠中均未见毒性或重量丧失。实施例3rPRG-B抑制血管发生用Folkman，血管发生及其抑制剂，《肿瘤学重要进展》，DeVila等编辑，B.Lippincott Co.，费城，第42-62页(1985)的标准鸡绒毛尿囊膜分析检查rPRG-B的血管发生抑制活性。
打碎3日龄受精白色莱昂鸡鸡蛋(Spafas,Norwich,CT)，将具有完整蛋黄的胚胎置于培养皿中。胚胎在37℃于3％二氧化碳中保温3天。保温后，将含有200微克rPRG-B或不含任何物质的甲基纤维素盘置于每个胚胎的绒毛尿囊膜上。48小时后，将膜在立体显微镜下检查在盘之下和周围的组织中新血管的存在与否。在200微克剂量下在给予rPRG-B至少3天后在盘之下或周围的组织中没有观察到新血管。相反，对照盘之下和周围的组织被新血管严重渗入。在任何鸡胚胎中均未观察到毒性。
序列表<110>通用医疗公司<120>纤溶酶原相关基因B多肽<130>08472/751WO1<150>US 60/077,889<151>1998-03-13<160>4<170>FastSEQ for Windows Version 3.0<210>1<211>33<212>PRT<213>人<400>1Ala Cys Thr Thr Cys Ala Cys Cys Cys Gly Gly Gly Cys Ala Ala Gly1 5 10 15Thr Cys Gly Ala Cys Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Gly Ala20 25 30Cys<210>2<211>28<212>PRT<213>人<400>2Thr Thr Cys Gly Gly Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Ala1 5 10 15Gly Ala Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Ala Gly20 25<210>3<211>20<212>PRT<213>人<400>3Cys Gly Gly Ala Thr Ala Ala Cys Ala Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys1 5 10 15Ala Cys Ala Gly20<210>4<211>98<212>PRT<213>人<400>4Met Arg Gly Ser His His His His His His Thr Asp Pro His Ala Ser1 5 10 15Ser Val Pro Arg Val Asp Pro Leu Asp Asp Tyr Val Asn Thr Gln Gly20 25 30Pro Ser Leu Phe Ser Val Thr Lys Lys Gln Leu Gly Ala Gly Ser Arg35 40 45Glu Glu Cys Ala Ala Lys Cys Glu Glu Asp Lys Glu Phe Thr Cys Arg50 55 60Ala Phe Gln Tyr His Ser Lys Glu Gln Gln Cys Val Ile Met Ala Glu65 70 75 80Asn Arg Lys Ser Ser Ile Ile Ile Arg Met Arg Asp Ala Val Leu Phe85 90 95Glu Lys
权利要求
1.用于治疗个体中与不希望的血管发生或瘤生长相关的状态的药物组合物，该组合物包括PRG-B多肽。
2.PRG-B多肽在制备用于治疗个体中与不希望的血管发生或瘤生长相关的状态的药物组合物中的应用。
3.编码PRG-B多肽的表达载体在制备用于治疗个体中与不希望的血管发生或瘤生长相关的状态的药物组合物中的应用。
4.直接施用于个体的权利要求1的组合物或权利要求2的应用。
5.权利要求4的组合物或应用，其中所述的直接施用是系统、静脉、局部或移植物方式。
6.间接施用于个体的权利要求1的组合物或权利要求2的应用。
7.权利要求1的组合物或权利要求2的应用，其中间接施用是通过编码PRG-B多肽的表达载体进行。
8.前述任一项权利要求的组合物或应用，其中PRG-B多肽的量足以在个体中抑制不希望的血管发生或瘤生长。
9.前述任一项权利要求的组合物或应用，其中所治疗的状态与肺癌、乳腺癌或前列腺癌相关。
10.权利要求1-9任一项所述的组合物或应用，其中所治疗的状态与非癌性生长、关节炎或糖尿病性视网膜病相关。
11.前述任一项权利要求的组合物或应用，其中PRG-B多肽包括SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
12.治疗具有与不希望的血管发生或瘤生长相关的状态的个体的方法，该方法包括给予个体足以抑制该不希望的血管发生或瘤生长量的PRG-B多肽。
13.权利要求12的方法，其中PRG-B多肽直接施用于个体。
14.权利要求13的方法，其中所述的直接施用通过系统、静脉、局部或移植物方式。
15.权利要求12的方法，其中PRG-B多肽间接施用于个体。
16.权利要求15的方法，其中所述的间接施用包括将编码PRG-B多肽的表达载体导入个体。
17.权利要求12-16任一项的方法，其中所治疗的状态涉及与肺癌、乳腺癌或前列腺癌相关的瘤生长。
18.权利要求12-16任一项的方法，其中所治疗的状态涉及与非癌性生长、关节炎或糖尿病性视网膜病相关的不希望的血管发生。
19.权利要求12-16任一项的方法，进一步包括鉴别具有不希望的血管发生或瘤生长或处于不希望的血管发生或瘤生长风险中的个体。
全文摘要
本发明公开了在鸟类或哺乳动物中抑制血管发生和/或瘤生长的方法。所述方法涉及鉴别具有不希望的血管发生和/或瘤生长或处于不希望的血管发生和/或瘤生长风险中的动物,给予所述动物足以抑制所述血管发生或瘤生长的量的纤溶酶原相关基因B多肽。
文档编号A61K48/00GK1299369SQ99803976
公开日2001年6月13日 申请日期1999年3月10日 优先权日1998年3月13日
发明者劳伦斯·韦斯巴赫, 瓦莱利·刘易斯, 迈克尔·奥赖利 申请人:通用医疗公司