吲哚哌嗪-二酮,其制备及治疗作用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及了 U-PA抑制剂（3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2， 5_二酮，涉及它的制备方法和作为u-PA抑制剂在抑制肿瘤侵袭和迀移、抗肿瘤和抗炎方面 的应用。本发明属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 纤溶酶原激活系统由纤溶酶原激活剂（PAs)、纤溶酶原激活抑制剂（PAI s)和细胞 外纤溶酶原激活剂受体（PAR)组成。纤溶酶原激活系统涉及到细胞迀移、血管生成、伤口愈 合、胚胎发育、肿瘤细胞扩散和转移等一系列过程。在哺乳动物体内主要有两种纤溶酶原激 活剂：组织型纤溶酶原激活剂（t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活剂（u-PA)。
[0003] 尿激酶型纤溶酶原激活剂（U-PA)是从人尿或肾细胞组织培养液中提取的一种丝 氨酸蛋白酶，属双链尿激酶型纤溶酶原活化剂（tcu-PA)，其分子量为55000或33000,是外 源性纤维溶解系统的激活剂。u-PA可以直接裂解纤溶酶原的精氨酸（560)-缬氨酸（561) 肽键，使无活性的单链纤溶酶原转变为有活性的双链纤溶酶。
[0004] 在肿瘤组织中，U-PA激活纤溶酶原转化为纤溶酶，纤溶酶直接或间接的造成细胞 外基质降解，进一步导致肿瘤细胞的浸润、转移和血管生成，促进肿瘤的增殖。
[0005] 在炎症应答过程中，u-PA通过与炎症细胞表面的u-PAR结合，参与调节炎症细胞 对血管和组织的渗透能力，促进炎症细胞向炎症部位迀移，促进炎症反应以及炎症因子的 释放，而炎症因子的释放又会诱导u-PA表达上升。
[0006] 由于u-PA的酶活性贯穿在肿瘤-纤溶-炎症复杂的交叉联系中，所以影响u-PA 的活性会影响复杂的交叉联系。也就是说，发明优秀活性的u-PA抑制剂对于抑制u-PA在 肿瘤-血栓-炎症交叉联系有重要意义。这种意义体现在70%以上癌症病人死于癌转移； 有大约10%的癌症晚期病人出现出血症状，例如出现几乎无法预测鼻，咽，肺或胃肠道大 出血；摘除肿瘤手术发生的出血，也恶化病人的预后。针对这种状况，本发明提出了（3R， 6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮，其制备及治疗作用。
[0007] 此前，发明人曾报道下面结构的二酮哌嗪包括CIPPC是u-PA抑制剂（结构见图 1)，有优秀的止血活性。lnmol/kg剂量下，CIPPC能显著降低小鼠鼠尾出血时间[33,34]。 不幸的是，在10nm〇l/kg剂量下CIPPC能促进血栓生成。血栓是肿瘤本人重要的并合症， 是造成肿瘤本人死亡的重要因素。CIPPC能促进血栓生成的作用为肿瘤病人带来了新的威 胁。对比之下，（3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮的意想不到 的优势是，除了与CIPPC-样有优秀的止血活性外，还有抑制肿瘤细胞浸润和转移，抑制肿 瘤本人并发炎症作用，同时不会引起血栓形成。
【发明内容】
[0008] 本发明的第一个内容是提供结构式4代表的u-PA抑制剂；
[0009]
[0010] 本发明的第二个内容是提供结构式4代表的U-PA抑制剂的制备方法，该方法包 括：
[0011] (1)在DCC和HOBt存在下D-Trp-〇Bzl在无水四氢呋喃中与D-Boc-Lys(z)缩合为 D-Boc-Lys(Z)-D-Trp-〇Bzl ；
[0012] (2)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中D-Boc-Lys (Z) -D-Trp-OBzl脱去Boc生成 D-Lys(Z)-D-Trp-〇Bzl ；
[0013] (3)在乙酸乙酯和 5 % NaHC03存在下 D-Lys(Z)-D-Trp-〇Bzl 生成（3R， 6R)-3-(4-丁氨基苄基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮；
[0014] (4)在Pd/C和H2存在下，在甲醇中（3R，6R) -3- (4- 丁氨基苄基）-6-(吲哚-3-乙 基）-哌嗪-2, 5-二酮脱去苄基生成（3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2， 5-二酮。
[0015] 本发明的第三个内容是评价结构式4代表的u-PA抑制剂在抑制肿瘤细胞侵袭、转 移和抗肿瘤转移方面，以及在制作抗肿瘤和抗炎药物方面的作用。
【附图说明】
[0016] 图 1.合成路线 1. i)DCC，HOBt，NMM，THF ;ii)HCl/EA(4N) ;iii)EA，TEA，8(TC ;iv) CH30H，Pd/C，H2。
[0017] 图2. (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮体外对UK激 活纤溶酶原活力的影响。其中为单组分的人纤溶酶原（PLG) ;2为UK与PLG的共孵育组 分；3 为 200 μ g (3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮、UK 与 PLG 的共孵育组分；4为100 μ g (3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2，5-二 酮、通与？1^的共孵育组分；5为5(^8(31?，61?)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌 嗪-2, 5-二酮、UK与PLG的共孵育组分；6为500 μ g的EACA、UK与PLG的共孵育组分；7为 250 μ g的EACA、UK与PLG的共孵育组分。
【具体实施方式】
[0018] 为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0019] 实施例 1 制备 D-Boc-Lys (Z) -D-Trp-〇Bzl (1)
[0020] 将1. 9g(5. Ommol)D-Boc-Lys(Z)混悬于20mL无水四氢咲喃，室温搅拌下向溶液中 加入0. 675g(5. 0mmol)H0Bt，冰浴搅拌下加入1. 133g(5. 5mmol)DCC，得到反应液I，冰浴下 搅拌30分钟。将1. 47g(5. 0mmol)D-Trp-0Bzl混悬于20mL无水四氢咲喃中，然后逐渐加入 NMM，调节pH至8-9,得到反应液II。将反应液II加入反应液I中，先在冰浴下搅拌lh，再在 室温搅拌，TLC监测至原料点消失。后处理：减压过滤除去DCU，将滤液减压浓缩除去四氢呋 喃，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，将得到的溶液置于250mL分液漏斗中，依次用5% KHS04 水溶液洗和饱和NaCl水溶液各洗3次，乙酸乙酯层用无水Na2S04干燥30min，减压过滤， 滤液减压浓缩至干，得到的黄色泡状物，经硅胶柱层析纯化（CH 2C12 : CH30H = 100 : 1~ 20 : 1)，得到 2.919g(89%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e) :657[M+H] +。
[0021] 实施例 2 制备 D-Lys (Z) -D-Trp-〇Bzl (2)
[0022] 将纯品 2. 62g(4. Ommol)D-Boc-Lys(Z)-D_Trp-〇Bzl (1)置于 50mg 前瓶中，冰浴搅 拌下缓慢向反应瓶中滴加30mL 4N氯化氢-乙酸乙酯溶液，加干燥管，冰浴搅拌下反应4小 时后TLC监测原料点消失，终止反应。后处理：搅拌下用水栗将反应液减压抽干，加乙酸乙 酯溶解后再次用水栗减压抽干，重复三次；加无水乙醚充分混悬后静置，倾倒出乙醚，抽干 产物，重复三次，得2.046g(93%)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e) :557[M+H] +。
[0023] 实施例3制备（3R，6R)-3-(4-丁氨基苄基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二 酮⑶
[0024] 将 1. 83g(3. 29mmol)化合物 D-Lys(Z)-D-Trp-〇Bzl ⑵以 80mL 乙酸乙酯溶解，用 三乙胺调pH至9,油浴80°C反应6小时，TLC显示原料点基本消失。后处理：将反应液直 接用硅胶拌样，硅胶柱层析纯化（CH 2C12: CH30H= 100 : 1-20 : 1)，得到1.3g(88. 3%) 标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e) :449[M+H]VH NMR(300MHz，DMS0-d6) :δ/ρρπι = 10. 89(s，1Η)，8· 03(s，1Η)，7· 85(s，1Η)，7· 56(d，J = 9· 0Hz，1Η)，7· 35(m，6H)，7· 19(t，J = 6. 0Hz，1H)，7. 05(m，2H)，6. 95(t，J = 6. 0Hz，1H)，4. 99(s，2H)，4. 07(s，1H)，3. 25(dd，J = 3. 0Hz，J = 15. 0Hz，1H)，3. 09 (dd，J = 3. 0Hz，J = 15.