51] 本实验数据统计采用t检验。
[0152] 7)评价结果
[0153] 表3. (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮⑷对小鼠 肿瘤体积增长的影响a
[0154]
[0155] a) η = 10 ;b)与生理盐水组比较，p < 0. 05.肿瘤体积计算公式：体积（mm3) = 1/2 长X宽X宽。
[0156] 表4. (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪_2,5_二酮⑷对小鼠 瘤重的影响
[0157]
[0158] η = 10 ;a)与生理盐水组比较，p < 0. 01。
[0159] 表5. (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮⑷对小鼠 肿瘤肺转移的影响
[0160]
[0161] a) η = 10 ;b)与生理盐水组比较，p < (λ 01。
[0162] 实验例5S180体内抗肿瘤活性评价
[0163] 1)实验材料
[0164] 受试化合物：（31?，61?)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2,5-二酮（4);
[0165] 阳性对照为阿霉素（Dox);阴性对照为生理盐水；
[0166] 实验动物：ICR雄性小鼠（清洁级），体重20±2g，由北京维通利华实验动物技术 有限公司提供，每12只小鼠一组，空白和阳性对照各一组；
[0167] 瘤源：小鼠 S180肉瘤，由北京大学医学部动物实验中心提供，自行传代维持。
[0168] 溶剂：生理盐水。
[0169] 2)药物配制
[0170] 按量称取（3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮（4)，依 次加入生理盐水至所需浓度即可；阿霉素为生理盐水溶液。
[0171] 3)给药剂量及给药设置
[0172] (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮（4)以口服给药方 式，按5 μ mol/kg的给药剂量，0. 2mL/20g，连续给药7天，共给药7次；
[0173] 阴性对照生理盐水以等体积的相应溶液，口服给药，0. 2mL/20g，连续给药7天，共 给药7次；
[0174] 阳性对照阿霉素以腹腔注射给药方式，按2 μπιο?/kg的给药剂量，0. 2mL/20g，连 续给药7天，共给药7次。
[0175] 4)动物模型的建立
[0176] 采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型：无菌条件下抽取接种生长旺盛的sl80腹水瘤 瘤液，用生理盐水稀释成（1 : 2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2%台 盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，并按如 下公式计算细胞浓度和细胞存活率。
[0177] 细胞浓度=4大方格内活细胞数/4X 104X稀释倍数=细胞数/mL
[0178] 细胞存活率=活细胞数八活细胞数+死细胞数）X 100%
[0179] 将存活率大于90%的瘤液用匀浆法制备成2. OX 107个/mL的细胞悬液，于鼠腋皮 下接种0.2mL/只，造成实体瘤动物模型。5)实体瘤抑瘤率的测定
[0180] 实验进行至第8天，称小鼠体重，脱颈椎处死小鼠，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤 生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率：抑瘤率％=(阴 性对照组平均瘤重-给药组平均瘤重）/阴性对照组平均瘤重X 100%
[0181] 6)统计方法
[0182] 本实验数据统计采用t检验，瘤重以? 土SD g:)表示。
[0183] 7)评价结果
[0184] 表6. (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮⑷的抗肿 瘤活性
[0185]
[0186] a)η = 12 ;b)与生理盐水组比，p < 0. 01。
[0187] 实验例 6 (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮（4)对二 甲苯诱导小鼠耳肿胀抑制活性评价
[0188] 1)实验材料
[0189] 受试化合物：（31?，61?)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2,5-二酮（4);
[0190] 阳性对照为阿司匹林，阴性对照为生理盐水；
[0191] 实验动物：ICR雄性小鼠（清洁级），体重18_22g，由北京维通利华实验物技术有 限公司提供。每10只小鼠一组，空白和阳性对照各一组。
[0192] 2)药物配制
[0193] 按量称取化合物4,依次加入生理盐水至所需浓度即可；阿司匹林为生理盐水溶 液。
[0194] 3)给药剂量及给药方式
[0195] 给药剂量：阿司匹林为1. llmmol/kg ; (3R，6R)-3-(4- 丁氨基）_6_(吲噪-3-乙 基）-哌嗪-2, 5-二酮（4)为0. 05 μ mol/kg ;按照小鼠体重，每10g给0. lmL药液或者生理 盐水；口服给药。
[0196] 4)动物模型的建立
[0197] ICR雄性小鼠30只，体重18-22g，随机分为（3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲 哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮（4)组、阿司匹林组和空白对照组，每组10只。各组按剂量 灌胃给药。给药30分钟后，在小鼠左耳朵耳廓内侧均匀涂抹30 μ L二甲苯，2小时后颈椎脱 臼处死小鼠，分别将左、右两耳外耳廓剪下并重合叠放在一起，用直径7_的打孔器在同一 位置打取圆形耳片，称重，记录并计算两耳重量差；鼠耳肿胀度=左耳片重-右耳片重。
[0198] 5)统计方法
[0199] 本实验数据统计采用t检验，鼠耳肿胀度以（[土SD mg)表示。
[0200] 6)评价结果
[0201] 表L (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪^-二酮⑷对扣尺 小鼠耳肿胀度的影响
[0202]
[0203] η = 10 ;b) a)与生理盐水组比，p < 0. 01。
【主权项】
1. 下式所示的U-PA抑制剂（3R，6R) -3- (4-下氨基）-6-(吗I噪-3-乙基）-赃嗦-2， 5-二酬2. 制备权利要求1的U-PA抑制剂（3R，6R)-3-(4-下氨基）-6-(吗I噪-3-乙基）-赃 嗦-2, 5-二酬的方法，该方法由W下步骤构成： (1)在DCC和册Bt存在下D-T巧-OBzl在无水四氨巧喃中与D-Boc-Lys狂）缩合为 D-Boc-Lys (Z)-D-T;rp-〇Bzl ; 似在氯化氨-乙酸乙醋溶液中D-Boc-Lys狂)-D-T巧-OBzl脱去Boc生成 D-Lys(幻-D-T巧-OBzl ; (3) 在乙酸乙醋和5 %胞肥〇3存在下D-Lys狂)-D-T巧-OBzl生成（3R，6R)-3-(4-下氨 基苄基）-6-(日引噪-3-乙基）-赃嗦-2,5-二酬； (4) 在Pd/C和&存在下，在甲醇中（3R，6R)-3-(4-下氨基苄基）-6-(吗I噪-3-乙 基）-赃嗦-2，5-二酬脱去苄基生成（3R，6R) -3- (4-下氨基）-6-(吗I噪-3-乙基）-赃嗦-2， 5-二酬。3. 权利要求1的U-PA抑制剂（3R，6R) -3- (4-下氨基）-6-(吗I噪-3-乙基）-赃嗦-2， 5-二酬在制备抗肿瘤转移和侵润抑制药物中的应用。4. 权利要求1的U-PA抑制剂（3R，6R) -3- (4-下氨基）-6-(吗I噪-3-乙基）-赃嗦-2， 5-二酬在制备抗肿瘤剂中的应用。5. 权利要求1的U-PA抑制剂（3R，6R) -3- (4-下氨基）-6-(吗I噪-3-乙基）-赃嗦-2， 5-二酬在制备抗炎剂中的应用。
【专利摘要】本发明公开了下式所示的u-PA抑制剂(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮。本发明进一步公开了它的制备方法和用途。本发明的化合物除具有优秀的抑制肿瘤细胞侵袭、迁移和抗肿瘤转移作用外，还具有抗肿瘤和抗炎作用。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/496, C07D403/06, A61P35/04, A61P29/00
【公开号】CN105503833
【申请号】CN201410562336
【发明人】彭师奇, 赵明, 王玉记, 吴建辉, 王枫
【申请人】首都医科大学
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2014年10月20日