琼枝麒麟菜多糖用于制备抗呼吸道病毒药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，尤其涉及琼枝麒麟菜多糖用于制备抗呼吸道病毒药物 中的用途。
【背景技术】
[0002] 呼吸道病毒是一类能侵犯呼吸道或以呼吸道为侵入门户而引起呼吸道及呼吸道 外组织器官病变的病毒。呼吸道病毒包括正粘病毒科（Orthomyxoviridae)中的流感病毒； 副粘病毒科（Paramyxoviridae)中的副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻瘆病毒、聰腺炎病毒 以及其它病毒科中的一些病毒，如腺病毒、风瘆病毒、鼻病毒、冠状病毒和呼肠病毒等。据统 计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起。其中常见的呼吸道病毒是HlNl流感病毒、H3N2 流感病毒、H5N3流感病毒，呼吸道合胞病毒（respiratorysyncytialvirus，简称RSV)和 科萨奇病毒CVB3 (Coxsachievirus)等。
[0003] 流感病毒传染性极强且极易变异，危害性大，难以控制，目前广泛使用的抗流感病 毒的西药具有一定的毒副作用，并可引起流感病毒变异，或产生不同程度的耐药性。柯萨奇 病毒（Coxsachievirus)是一种肠病毒（enteroviruses)分为A和B两类，是一类常见的经 呼吸道和消化道感染人体的病毒，感染后人会出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状。妊娠期 感染可引起非麻痹性脊髓灰质炎性病变，并致胎儿宫内感染和致畸。其中柯萨奇病毒B3属 小核糖核酸病毒科，肠道病毒属，可经呼吸道和消化道传染，感染后人会出现发热、打喷嚏、 咳嗽等感冒症状，是非常严重的人类疾病致病病原。目前尚无有效治疗柯萨奇病毒感染的 药物。呼吸道合胞病毒（RSV)可引起婴幼儿严重呼吸道感染，目前只有病毒唑和RSV免疫 球蛋白2种药物。但病毒挫不良反应较严重，RSV免疫球蛋白治疗费用很高。
[0004]麒麟菜（Eucheumastriatum)属于红藻门（Rhodophyta)，麒麟菜属（ Eucheuma)。其中琼枝麒麟菜和异枝麒麟菜在我国海南岛有大规模的人工养殖，资源十分 丰富。麒麟菜中含有丰富的多糖，约占藻体干重的60%。
[0005] 琼枝麒麟菜多糖主要是由半乳糖和3,6-内醚半乳糖组成，此外还含有少量的葡 萄糖、木糖、塔罗糖和艾杜糖等，多糖硫酸酯是指糖羟基上带有硫酸基团的多糖，也称硫酸 多糖，可经天然提取或硫酸化的结构修饰得到。近年的研宄证明：多糖硫酸酯无论在体内还 是体外，都显示了不同程度的抗病毒活性，尤其与目前抗病毒药物相比，其细胞毒作用小， 因而，多糖硫酸酯的抗病毒活性得到了广泛的关注，尤其是多糖硫酸酯的抗病毒活性的药 用前景。迄今为止，发现硫酸酯多糖有抗单纯疱瘆病毒和细胞具病毒等，但是未见硫酸酯多 糖对呼吸道相关病毒抗性的报道。
[0006] 利巴韦林又名病毒唑、三氮唑核苷、_可等，是广谱强效的抗病毒药物，目前广 泛应用于病毒性疾病的防治。常用剂型有注射剂、片剂、口服液、气雾剂等。
[0007] 肝素类药物属粘多糖类药物，由己糖醛酸、氨基己糖及它们的硫酸化、乙酰化等衍 生物为结构单位构成的一类物质，包括肝素、低分子肝素和超低分子肝素。肝素是体内外 均能延长凝血时间的抗凝血药。其抗凝血作用极为复杂，对凝血过程的许多环节都有影响。 低分子量肝素的活性/抗凝血活性的比值为I. 5~4. 0,而普通的肝素为1，保持了肝素的 抗血栓作用而降低了出血的危险。具有半衰期长，生物利用度高等优点，正广泛应用于血栓 栓塞性疾病的预防及治疗，其有效性和安全性均优于普通肝素，量效关系明确。
【发明内容】
[0008] 为了解决现有技术呼吸道病毒尚无有效药物治疗的现状，本发明目的在于提供琼 枝麒麟菜多糖用于制备抗呼吸道病毒药物中的用途。
[0009] 本发明提供的琼枝麒麟菜多糖是平均分子质量范围为1000-100000的琼枝麒 麟菜多糖，琼枝麒麟菜多糖优选为a-D- (1-6)-葡萄糖硫酸酯琼枝麒麟菜多糖，所述的 a-D- (1-6)-葡萄糖硫酸酯琼枝麒麟菜多糖的平均分子质量是45000,单糖硫酸基取代度为 2. 13〇
[0010] 本发明人还将利巴韦林与枝麒麟菜多糖联合使用、肝素与枝麒麟菜多糖联合使用 用于抗呼吸道病毒，取得了预料不到的协同的治疗效果。
[0011] 本发明的琼枝麒麟菜多糖用于制备抗呼吸道病毒的病毒中，所述的呼吸道病毒包 括呼吸道合胞病毒、科萨奇病毒和流感病毒，其中所述的呼吸道合胞病毒为RSVlong株，所 述的科萨奇病毒为柯萨奇病毒B3,所述的流感病毒为HlNl流感病毒、H3N2流感病毒和H5N3 流感病毒。
[0012] 本发明的琼枝麒麟菜多糖的制备方法包括以下步骤： 称取一定量的琼枝麒麟菜，将洗净的琼枝麒麟菜，使琼枝麒麟菜的含水量不超过8% 时，用粉粹机粉碎，再将粉粹过后的琼枝麒麟菜浸泡〇. 5h，然后用加热回流装置进行热水 提取多糖3h，冷却至40-45°C后收集滤液，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至原滤液体积的 2/3，然后直接加入3倍体积的95%的乙醇，并不断搅拌，置4°C冰箱醇沉12h，四层纱布 过滤，收集过滤物，待残余酒精部分挥发后进行冷冻干燥，最终得到的白色纤维状物质即为 琼枝麒麟菜多糖。
[0013] 本发明提取得到的琼枝麒麟菜多糖可以单独制成药剂，可以制成片剂、胶囊剂、颗 粒剂或缓释片。
[0014] 将提取的琼枝麒麟菜多糖进行单独的细胞实验，分别选用MDCK(狗肾细胞)， Hep-2 (人喉癌上皮细胞)和Hela(宫颈癌细胞)。结果显示，琼枝麒麟菜多糖具有良好的抗 流感病毒、柯萨奇病毒和呼吸道合胞病毒的效果。将提取的琼枝麒麟菜多糖进行体外抗呼 吸道相关病毒机制研宄，实验结果显示，琼枝麒麟菜多糖主要作用于病毒感染早期阶段。
[0015] 本发明公开的琼枝麒麟菜多糖用于制备抗呼吸道病毒药物中的用途，与现有技术 相比，具有以下突出的优势：本发明的琼枝麒麟菜多糖具有很强的抗呼吸道病毒的活性，且 对宿主细胞的毒性小，而且琼枝麒麟菜多糖制备方法简单，资源丰富，是很高的推广价值。
[0016] 说明书附图： 图1是不同给药途径下琼枝麒麟菜多糖抗呼吸道合胞病毒的活性； 图2是不同给药途径下琼枝麒麟菜多糖抗柯萨奇病毒民的活性。
[0017] 具体实施案例 以下通过具体实施例进一步说明本发明，但本领域技术人员应当知晓本发明的具体实 施例并不以任何方式限制本发明，且在本发明基础上所作出的任何等同替换均落入本发明 的保护范围。
[0018] 第一部分本发明琼枝麒麟菜多糖的分子质量测定 实施例1、麒麟菜多糖分子量范围测定 a.精密称取麒麟菜多糖lmg，用0. 2MpH值4. 0的醋酸钠缓冲溶液溶解至终浓度为lmg/ml，经0. 45um的微孔滤膜过滤后备用。
[0019] b.右旋糖酐DextranMw800T、505T、170T、60T。精确称取不同分子量的右旋糖苷 标准品0. 100g，用流动相溶解并定容至IOmL,最终浓度为10mg/mL。
[0020] C.分别将标准品和麒麟菜多糖样品用高效液相进行检测，流动相为0.2M pH值 4.0的醋酸钠缓冲溶液，色谱条件为流速I.OmL/min,进样量10y1，进样时间15min。以不 同分子量标准右旋糖酐的分离保留时间（RT)与相应的分子量对数值（LogMw)绘制坐标曲 线并计算出麒麟菜多糖的分子量范围。
[0021] 第二部分本发明琼枝麒麟菜多糖的药效学研宄 实施例2、琼枝麒麟菜多糖的细胞毒性研宄试验 1、试验材料 将提取的琼枝麒麟菜多糖用纯水配置为10 mg/mL的水溶液，保存于-20°C备用。
[0022] 2、试验方法 将琼枝麒麟菜多糖倍比稀释成不同浓度(起始浓度为500|ag/mL)，其间置倒置显微镜下 观察，观察药物的最大无毒浓度TCtl，测定麒麟菜多糖的细胞毒性。
[0023] 3、试验结果 以正常细胞无死亡、不引起细胞病变的最高药物稀释浓度作为对各株细胞的最大无毒 浓度TCO，CPE观察结果如表1，可加麒麟菜粗多糖（CEGP)和大于500KDa麒麟菜多糖（LEGP) 组分在实验所用浓度中对MDCK，hela，h印-2细胞无毒。
[0024] 表ICEGP和LEGP的细胞毒性
【主权项】
1. 琼枝麒麟菜多糖用于制备抗呼吸道病毒药物中的用途。
2. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的琼枝麒麟菜多糖的平均分子质量范 围为 1000-100000。
3. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的琼枝麒麟菜多糖为a-D- (1-6)-葡 萄糖硫酸酯琼枝麒麟菜多糖。
4. 如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的a-D- (1-6)-葡萄糖硫酸酯琼枝麒 麟菜多糖的平均分子量为45000。
5. 如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的a-D- (1-6)-葡萄糖硫酸酯琼枝麒 麟菜多糖的单糖硫酸基取代度为2. 13。
6. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抗病毒药物还含有利巴韦林和/或肝 素。
7. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的呼吸道病毒包括呼吸道合胞病毒、 科萨奇病毒和流感病毒。
8. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的科萨奇病毒为柯萨奇病毒B 3。
9. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的流感病毒为H1N1、H3N2和H5N3。
10. 如权利要求1-6任一所述的用途，其特征在于，所述的琼枝麒麟菜多糖制成片剂、 胶囊剂、颗粒剂、缓释片或喷雾剂。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，尤其涉及琼枝麒麟菜多糖用于制备抗呼吸道病毒药物中的用途。本发明的琼枝麒麟菜多糖的平均分子质量范围为 1000-100000，经药效实验证实，该琼枝麒麟菜多糖具有单独抗呼吸道病毒的作用，呼吸道病毒主要包括呼吸道合胞病毒、科萨奇病毒及流感病毒。本发明人还将利巴韦林与枝麒麟菜多糖联合使用、肝素与枝麒麟菜多糖联合使用用于抗呼吸道病毒，取得了预料不到的协同的治疗效果。本发明的琼枝麒麟菜多糖制成抗病毒药物，如制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、缓释片或喷雾剂。本发明的琼枝麒麟菜多糖具有很强的抗呼吸道病毒活性，且对宿主细胞的毒性小，是抗病毒活性高效、低毒的药物，具有广阔的应用前景。
【IPC分类】A61K31-737, A61P31-12, A61P31-16
【公开号】CN104721221
【申请号】CN201510045655
【发明人】王一飞, 邹沐平, 董栋, 夏敏, 廖晓凤, 刘秋英
【申请人】广州暨南生物医药研究开发基地有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年1月29日