ο A原液中，EPL-HPA浓度为1wt%, HRP浓度为0.lmg/mL。B原液中EPL-HPA浓度为10wt%，H2O2浓度为0.12wt%。将AB原液分别加入双头注射器的AB管中，等体积缓慢推出得到均匀透明的可注射型EPL-HPA抗菌水凝胶。水凝胶的弹性模量为1634Pa。如图5所示。由图5结果可得，在EPL-HPA共聚物和HRP浓度固定的前提下，水凝胶的弹性模量与过氧化氢的浓度成正相关。
[0085]实施例19
[0086]用0.01mol/L PBS缓冲液在常温条件下分别配制水凝胶的A、B原液，A溶质为:EPL-HPA共聚物(实施例4制得)、辣根过氧化物酶(HRP)，B溶质为:EPL_HPA共聚物、过氧化氢(H2O2) ο A原液中，EPL-HPA浓度为1wt%, HRP浓度为0.lmg/mL。B原液中EPL-HPA浓度为10wt%，H2O2浓度为0.08wt%。将AB原液分别加入双头注射器的AB管中，等体积缓慢推出得到均匀透明的可注射型EPL-HPA抗菌水凝胶。水凝胶的弹性模量为1385Pa。如图5所示。
[0087]实施例20
[0088]用0.01mol/L PBS缓冲液在常温条件下分别配制水凝胶的A、B原液，A溶质为:EPL-HPA共聚物(实施例4制得)、辣根过氧化物酶(HRP)，B溶质为:EPL_HPA共聚物、过氧化氢(H202)。A原液中，EPL-HPA浓度为1wt %，HRP浓度为0.lmg/mL。B原液中EPL-HPA浓度为1wt %，H202浓度为0.04wt %。将AB原液分别加入双头注射器的AB管中，等体积缓慢推出得到均匀透明的可注射型EPL-HPA抗菌水凝胶。水凝胶的弹性模量为772Pa。如图5所示。
[0089]实施例21:水凝胶的抗菌性能测试
[0090]定性实验:制备LB固体培养皿，分别在固体培养皿的中间挖出直径2cm的圆柱型凝胶，在圆柱形空心位置填充本专利制备的聚赖氨酸水凝胶，在固体培养基表面涂布一定量大肠杆菌或者金黄色葡萄球菌，然后将培养基置于37°C培养箱培养24h，取出后观察抑菌圈的大小。
[0091]定量实验:分别制备不同浓度的EPL-HPA水凝胶(按照实施例4制得)，并将其置于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液中，定期测试菌液的OD值，计算水凝胶的抗菌效率。
[0092]结果如图6所示，横坐标A，B，C分别代表水凝胶中聚合物EPL-HPA的浓度分别为2.wt %，5.wt %，10.wt %，有图可知，水凝胶对革兰氏阴性菌(大肠杆菌)和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)均具有明显的抑菌效果，且抑菌效果随着水凝胶EPL-HPA材料浓度的增大(A到C为EPL-HPA浓度依次增大)而增大，对照组TCTP为空白对照，细菌存活率为100%，为抑菌效果。
[0093]试验结果表明:本发明的ε -聚赖氨酸水凝胶敷料具有可控的成胶时间和三维网状结构，且具有良好的抗菌效果，在医用抗感染材料领域应用前景广阔。
[0094]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改和改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改和改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1.一种ε -聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤: (1)ε -聚赖氨酸-对羟基苯丙酸共聚物的制备: (Ia)将对羟基苯丙酸溶解于有机溶剂和去离子水的共混溶剂中，搅拌混合均匀； (Ib)向步骤(Ia)得到的混合体系中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，在冰浴条件下活化2?8h ; (Ic)将去离子水溶解的ε -聚赖氨酸加入到步骤(Ib)活化后的体系中，室温条件下反应10?20h ； (Id)将步骤(Ic)得到的体系转移至透析袋中，置于去离子水中透析3?7天； (Ie)将步骤(Id)透析后的纯化溶液冷冻干燥得到聚赖氨酸-对羟基苯丙酸共聚物； (2)以PBS缓冲液作为溶剂，在常温下分别配制A原液和B原液: A原液溶质为ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸共聚物和辣根过氧化物酶； B原液溶质为ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸共聚物和过氧化氢； (3)将步骤(2)得到的A原液和B原液分别加入双头注射器的AB管中，缓慢推出得到均匀透明的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料。
2.根据权利要求1所述的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(Ia)中，所述的有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或乙酸乙酯，有机溶剂和去离子水的体积比为1:1?5。
3.根据权利要求1所述的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(Ia)中，对羟基苯丙酸的用量为lg/100mL共混溶剂。
4.根据权利要求1所述的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(Ib)中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为3.5?1:1 ;1-(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与对羟基苯丙酸的摩尔比为5?1:1。
5.根据权利要求1所述的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(Ic)中，所述的ε-聚赖氨酸由微生物发酵法制备得到；分子量为2000?5500道尔顿。
6.根据权利要求1所述的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(Ic)中，ε -聚赖氨酸中的氨基与对羟基苯丙酸的摩尔比为1:1?5。
7.根据权利要求1所述的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的PBS缓冲液为0.01?0.05mol/L的PBS缓冲液。
8.根据权利要求1所述的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，A原液中，溶质ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸共聚物的浓度为4?20被％;溶质辣根过氧化物酶的浓度为0.02?0.lmg/mL ；B原液中，溶质ε -聚赖氨酸-对羟基苯丙酸共聚物的浓度为4?20wt% ;溶质过氧化氢浓度为0.04?0.12wt%。
9.根据权利要求1所述的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，A原液和B原液等体积推出混合。
10.权利要求1?9中任意一项制备方法制备得到的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料。
【专利摘要】一种ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料的制备方法，将对羟基苯丙酸溶解于有机溶剂和去离子水的共混溶剂中，搅拌混合均匀；向得到的混合体系中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，在冰浴条件下活化；将去离子水溶解的ε-聚赖氨酸加入到活化后的体系中，室温条件下反应；将得到的体系转移至透析袋中透析；将透析后的纯化溶液冷冻干燥得到ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸共聚物；以PBS缓冲液作为溶剂，在常温下分别配制A原液和B原液，再分别加入双头注射器的AB管中，缓慢推出得到均匀透明的ε-聚赖氨酸-对羟基苯丙酸抗菌水凝胶敷料。
【IPC分类】A61L15-44, A61L15-26, A61L15-42
【公开号】CN104857550
【申请号】CN201510289971
【发明人】徐虹, 王瑞, 徐得磊, 迟波, 冯小海, 梁金丰
【申请人】南京工业大学
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年5月29日