重楼皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于化工领域及医药领域，涉及重楼皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对 其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。我国的肿瘤病例数相当庞 大，有资料显示占全世界病例数的55%。
[0003]良性肿瘤对机体的影响较小，主要表现为局部压迫和阻塞症状。恶性肿瘤由于分 化不成熟、生长较快，浸润破坏器官的结构和功能，并可发生转移，因而对机体影响严重。恶 性肿瘤除可引起与上述良性肿瘤相似的局部压迫和阻塞症状外，还可有发热、顽固性疼痛， 晚期可出现严重消瘦、乏力、贫血和全身衰竭的状态。
[0004] 中医认为，癌症的起因首先是人体内阴阳平衡，组织细胞在不同的致癌因素长期 作用下，细胞突变而引起的。其实癌组织也是人体的一部分，只有在人本阴阳平衡失调，五 行生克乘侮发生变化的前提下，人体的免疫监控系统才会对其失去监控，任其发展。中草药 能够以调理气血、调整阴阳平衡、维持正常生命体征而保命；以培补正气、产生抗体，清理〃 毒源〃而治本。因而，中草药提取物成为治疗肿瘤一个重要方向。
[0005] 中药重楼（Rh i zomaPar i di s )为百合科植物云南重楼或七叶一枝花的干燥根莖，具 有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效，主治疔疮痈肿、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌扑伤痛、惊 风抽搐等症。实验室前期研究表明，重楼复方及重楼醇提物对肿瘤生长有良好的抑制作用。 有效部位是中药研究的一种新的思路，其既去除了中药及其复方的杂质，又保留了化学成 分相近、功效类似的药效成分群，符合中药多成分、多靶点、多效应的作用特点，且提取分离 工艺相对单体化合物简单，便于研发和临床应用。
[0006] 重楼皂苷是中草药重楼的提取物，属于天然产物，生物利用度高、性质比较稳定， 具有临床使用价值。随着人们对其的化学和生物学研究的深入，其分子作用机制将逐步明 确，这将进一步推动此类化合物的化学结构修饰和构效关系研究，并有助于提高佩兰的药 用价值。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供重楼皂苷的新的药物用途。
[0008] -方面，本发明提供了重楼皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用。其中，重楼皂苷的英 文全称为Progenin，其结构如式1所示；
[0009]
[0010] 所述的抗肿瘤药物可以是抗肝癌药物，抗前列腺癌药物、抗宫颈癌药物，也可以是 抗血癌药物。
[0011] 实验结果表明，重楼皂苷能够抑制多种癌细胞生长。其中部分的IC5tl达到了微摩 (limol/L或者iiM)级。
[0012] 该抗肿瘤药物可以为针剂或者片剂。
[0013] 重楼皂苷能够诱导肿瘤细胞发生凋亡，尤其是肝癌细胞的发生凋亡。
[0014] 在本发明的一个优选例中，重楼皂苷能够诱导QGY细胞的发生凋亡。
[0015] 另一方面，本发明提供了一种抑制体外肿瘤细胞增殖的方法，即将重楼皂苷加入 肿瘤细胞的培养液中。
[0016] 所述的肿瘤细胞可以是肝癌细胞、血癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞或者胰腺癌 细胞。在本发明的优选例中，上述方法中，所述的肿瘤细胞可以是肝癌细胞、胃癌细胞、宫颈 癌细胞或者血癌细胞。
[0017] 更好的，所述的肿瘤细胞是SK、QGY、pc-3、HGC或者Hela。
[0018]加入重楼皂苷的终浓度为 1-100iiM。例如，1-5iiM，I-IOiiM，2-12iiM，2-20iiM， 2-30iiM，2-60iiM，14-28iiM，15-30iiM，10-50iiM，5-60iiM，等等。
[0019] 另一方面，本发明提供了一种抗肿瘤药物，所述的抗肿瘤药物的活性成分是重楼 皂苷。
[0020] 在本发明的优选例中，上述抗肿瘤药针对的肿瘤是肝癌细胞、胃癌细胞、宫颈癌细 胞或者白血病细胞。
[0021] 本发明提供了重楼皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用。重楼皂苷是天然产物，能够 明显抑制肿瘤细胞的增殖。本发明的小分子化合物作为新的抗肿瘤药物或者其辅助成分进 行开发，抑瘤效果明显，绿色环保，将为治疗和治愈肿瘤提供了一种新的途径和手段。
【附图说明】
[0022] 图1 :0微摩浓度的重楼皂苷（阴性对照）对QGY细胞的影响。
[0023] 图2 :10微摩浓度的重楼皂苷对QGY细胞的影响。
[0024] 图3 :20微摩浓度的重楼皂苷对QGY细胞的影响。
[0025] 图1-图3的对比表明，20微摩浓度的重楼皂苷能促使细胞发生凋亡。
【具体实施方式】
[0026] 实验方法：
[0027] 1?细胞复苏
[0028] 1)从液氮罐中取出冻存管，直接投入37°C温水中，并不时摇动令其尽快融化。
[0029] 2)从37°C水浴中取出冻存管，用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并加入10倍以上 培养液，混合后低速离心，弃上清，再重复用培养液洗一次。
[0030] 3)用培养液适当稀释后，接种培养瓶，放在37°C培养箱静置培养，次日更换培养 液，继续培养。培养至一定浓度时进行传代。PANC-I细胞培养在含10%Gibico胎牛血清的 DMEM高糖培养基中，SW620人结肠癌细胞培养在Leibovitz'sL-15培液，添加10%胎牛血 清；1(562、邪(：、06￥、]\〇7-7、？(：-3等细胞培养在含10%胎牛血清的1640培养基中，51(-11印1、 HeLa、H印G2、等细胞培养在含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中，培养基中含lOOU/ml青 霉素和IOOyg/ml链霉素。
[0031] 2.细胞传代培养
[0032] 每天观察细胞生长的情况，当细胞在培养瓶中长至约90%汇合时传代，约每隔2-4 天传代一次。一瓶传代成三瓶，或一个25cm2传代于一个75cm2的培养瓶中。方法：
[0033]1)用IX磷酸缓冲液洗涤细胞一次。
[0034] 2)加入2_3ml胰酶消化液消化，置于37°C培养箱中数分钟。用手拍打细胞培养瓶， 使细胞分离。
[0035] 3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合适培养基终止胰酶消化。将细胞分装于新 的培养瓶中，继续培养。
[0036] 悬浮细胞传代时，直接收集于离心管中离心，弃旧培养基。一般一瓶传代成三瓶的 比例分装于新的培养瓶中，加入新鲜培养基继续培养。
[0037] 3?细胞冻存
[0038]1)取培养至对数生长期的细胞胰蛋白酶消化，收集于离心管中并计数，离心。
[0039] 2)弃除胰蛋白酶及旧的培养液，加入配置好的冻存培养液（含10%DMS0,40%DMEM 和50%Gibico胎牛血清），冻存液中细胞的最终浓度为0. 5-1X107/ml。用吸管轻轻吹打使 细胞均匀，然后分装入无菌冻存管中，每管加1-1. 5ml。
[0040] 3)将冻存管放入冻存盒置-80°c速冻，5小时后移入液氮罐中保存。
[0041] 4?药物准备：
[0042] 重楼皂苷溶于DMSO(二甲基亚砜），配制成IOOmM或50mM的母液备用。
[0043] 重楼皂苷可从上海纯优生物科技有限公司购买，其具体性质参数如下：
[0044] 产品名称：重楼皂苷
[0045] 产品英文名称：Progenin
[0046]重楼皂苷的结构如上述所示。
[0047]本发明提供了一种抗肿瘤药物，所述的抗肿瘤药物的活性成分是重楼皂苷。