酰胺化合物在降低嗜水气单胞菌的毒力中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及酰胺化合物在降低嗜水气单胞菌的毒力中的 应用。
【背景技术】
[0002] 嗜水气单胞菌（Aeromonashydrophila)属于弧菌科气单胞菌属，是一种革兰氏阴 性的短杆菌，广泛存在于水环境、土壤和水生动物中。在某些特定条件下，该菌可以引起鱼 类、蛙类、鳖类及多种哺乳动物暴发性感染，常给水产养殖业造成严重的经济损失。此外该 菌也是人腹泻的病原菌，属于一种比较典型的人-兽-鱼共染的条件性致病菌。因嗜水气 单胞菌血清型多，对异种血清型菌株的免疫预防效果都不太理想，难以大范围推广使用，嗜 水气单胞菌的抗原多样性已成为开发有效疫苗的主要障碍。在我国，药物滥用现象严重，调 查结果表明，嗜水气单胞菌对内酰胺类药物已产生严重的耐药性。这与水产养殖长期和大 量使用抗菌药物有关，尤其四环素、甲砜霉素等做为饲料添加剂长期低浓度使用，给细菌造 成长期的药物压力，最终导致细菌产生耐药性。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供酰胺化合物在降低嗜水气单胞菌的毒力中的应用。
[0004] 本发明要求保护酰胺化合物的第一种应用，为酰胺化合物在降低嗜水气单胞菌的 毒力中的应用。酰胺化合物降低嗜水气单胞菌的毒力体现为如下（a)和/或（b)和/或 (c)和/或⑷和/或（e)和/或（f)和/或（g) : (a)抑制嗜水气单胞菌的溶血活性；(b) 抑制嗜水气单胞菌合成弹性蛋白酶的能力；（c)抑制嗜水气单胞菌形成生物膜；（d)抑制嗜 水气单胞菌鞭毛的游动性；（e)抑制嗜水气单胞菌对宿主动物的致死作用；（f)抑制嗜水气 单胞菌在宿主动物的组织中的定植能力；（g)抑制嗜水气单胞菌引起的宿主动物肠道碱性 磷酸酶活性上升。
[0005] 本发明要求保护酰胺化合物的第二种应用，为如下（a)和/或（b)和/或（c)和/ 或⑷和/或（e)和/或（f)和/或（g) : (a)抑制嗜水气单胞菌的溶血活性；(b)抑制嗜 水气单胞菌合成弹性蛋白酶的能力；（c)抑制嗜水气单胞菌形成生物膜；（d)抑制嗜水气单 胞菌鞭毛的游动性；（e)抑制嗜水气单胞菌对宿主动物的致死作用；（f)抑制嗜水气单胞菌 在宿主动物的组织中的定植能力；(g)抑制嗜水气单胞菌引起的宿主动物肠道碱性磷酸酶 活性上升。
[0006] 本发明要求保护的第一种产品，其活性成分为酰胺化合物；所述产品的功能为降 低嗜水气单胞菌的毒力。酰胺化合物降低嗜水气单胞菌的毒力体现为如下（a)和/或（b) 和/或（c)和/或⑷和/或（e)和/或（f)和/或（g) : (a)抑制嗜水气单胞菌的溶血活 性；(b)抑制嗜水气单胞菌合成弹性蛋白酶的能力；（c)抑制嗜水气单胞菌形成生物膜；（d) 抑制嗜水气单胞菌鞭毛的游动性；（e)抑制嗜水气单胞菌对宿主动物的致死作用；（f)抑制 嗜水气单胞菌在宿主动物的组织中的定植能力；（g)抑制嗜水气单胞菌引起的宿主动物肠 道碱性磷酸酶活性上升。
[0007] 本发明要求保护的第二种产品，其活性成分为酰胺化合物；所述产品的功能为如 下（a)和/或（b)和/或（c)和/或（d)和/或（e)和/或（f)和/或（g) : (a)抑制嗜水 气单胞菌的溶血活性；(b)抑制嗜水气单胞菌合成弹性蛋白酶的能力；（c)抑制嗜水气单胞 菌形成生物膜；（d)抑制嗜水气单胞菌鞭毛的游动性；（e)抑制嗜水气单胞菌对宿主动物的 致死作用；（f)抑制嗜水气单胞菌在宿主动物的组织中的定植能力；（g)抑制嗜水气单胞菌 引起的宿主动物肠道碱性磷酸酶活性上升。
[0008] 本发明要求保护酰胺化合物的第三种应用，即酰胺化合物在制备降低嗜水气单胞 菌的毒力的产品中的应用。酰胺化合物降低嗜水气单胞菌的毒力体现为如下（a)和/或（b) 和/或（c)和/或⑷和/或（e)和/或（f)和/或（g) : (a)抑制嗜水气单胞菌的溶血活 性；(b)抑制嗜水气单胞菌合成弹性蛋白酶的能力；（c)抑制嗜水气单胞菌形成生物膜；（d) 抑制嗜水气单胞菌鞭毛的游动性；（e)抑制嗜水气单胞菌对宿主动物的致死作用；（f)抑制 嗜水气单胞菌在宿主动物的组织中的定植能力；（g)抑制嗜水气单胞菌引起的宿主动物肠 道碱性磷酸酶活性上升。
[0009] 本发明要求保护酰胺化合物的第四种应用，即酰胺化合物在制备产品中的应用； 所述产品的功能为如下（a)和/或（b)和/或（c)和/或（d)和/或（e)和/或（f)和/ 或（g) : (a)抑制嗜水气单胞菌的溶血活性；(b)抑制嗜水气单胞菌合成弹性蛋白酶的能力； (c)抑制嗜水气单胞菌形成生物膜；（d)抑制嗜水气单胞菌鞭毛的游动性；（e)抑制嗜水气 单胞菌对宿主动物的致死作用；（f)抑制嗜水气单胞菌在宿主动物的组织中的定植能力； (g)抑制嗜水气单胞菌引起的宿主动物肠道碱性磷酸酶活性上升。
[0010] 以上任一所述嗜水气单胞具体可为嗜水气单胞菌NJ-I。
[0011] 以上任一所述宿主动物具体可为斑马鱼，例如斑马鱼AB系。
[0012] 以上任一所述酰胺化合物如式（I)所示。
[0013]
[0014] 本发明发现，酰胺化合物可以影响嗜水气单胞菌的相应毒力因子的表达，降低其 在肠道中的定植数量，减少病原菌对宿主的过炎症反应从而有利于宿主将其快速消除，酰 胺化合物可以做为病原菌的预防佐剂来使用。本发明发现，酰胺化合物可以降低嗜水气单 胞菌的毒力，抑制嗜水气单胞菌侵染宿主。本发明对于嗜水气单胞菌引起的相关疾病的生 物防治意义重大。
【附图说明】
[0015] 图1为实施例1中的生长曲线。
[0016] 图2为实施例2中的血平板溶血活性检测结果。
[0017] 图3为实施例2中的弹性蛋白酶活性检测结果。
[0018] 图4为实施例2中的生物膜检测结果。
[0019] 图5为实施例2中的游动性检测结果。
[0020] 图6为实施例3中的致死率结果。
[0021] 图7为实施例3中的肠道中细菌的计数结果。
[0022] 图8为实施例3中的肝脏中细菌的计数结果。
[0023] 图9为实施例3中的头肾中细菌的计数结果。
[0024] 图10为实施例3中的肠道碱性磷酸酶活结果。
【具体实施方式】
[0025] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自 常规生化试剂商店购买得到的。实施例中所用的PBS缓冲液，如无特殊说明，均为pH7. 4、 IOmM的PBS缓冲液。
[0026]4-[(苯胺基）硫代甲基]氨基-N-苯基苯磺酰胺（简称酰胺化合物或Fonamide)， 购自sigma，产品目录号为245342-14-7,结构式如下：
[0027]
[0028] 嗜水气单胞菌NJ-I:水产学报，2013, 37 (I) :94-100.何夙旭，张美超，徐俐，杨 雅麟，李青，周志刚.高丝氨酸内酯酶AI-96对嗜水气单胞菌NJ-I浸浴攻毒斑马鱼保护 效应的研宄[J]。
[0029] 无菌脱纤维羊血：北京宝特医疗器械有限公司，货号为H0011。实施例中所用的斑 马鱼为斑马鱼AB系：中国农业科学院饲料研宄水产动物营养研宄室。弹性蛋白一刚果红： 西化仪（北京）科技有限公司，BS32-E0502。
[0030] 实施例1、Fonamide对嗜水气单胞菌毒性验证
[0031] 1、将嗜水气单胞菌NJ-I单克隆接种于20mLLB液体培养基，28°C、180r/min振荡 培养至对数生长期，然后用TSB培养基稀释，得到菌浓度为IXIO9CFUAiL的菌液。
[0032] 2、称取式（I)所示的酰胺化合物，用DMSO配制浓度为20mM的Fonamide母液。
[0033] 3、分组处理
[0034] 第一组（三个平行处理）：取步骤1得到的菌液，加入Fonamide母液，使Fonamide 在体系中的浓度为5yM，28°C、180r/min振荡培养，间隔时间取样，通过平板稀释法（LB平 板）测定菌体数量；
[0035] 第二组（三个平行处理）：取步骤1得到的菌液，加入Fonamide母液，使Fonamide 在体系中的浓度为50yM，28°C、180r/min振荡培养，间隔时间取样，通过平板稀释法（LB平 板）测定菌体数量；
[0036] 第三组（三个平行处理）：取步骤1得到的菌液，加入Fonamide