本发明涉及一类新的含手性噁唑啉的烟酰胺类化合物及作为农用杀菌剂的用途；特别是指该类化合物在植物真菌病害防治中的应用，属于农药技术领域。
背景技术：
从分子水平角度讲，农药分子在生物体内发挥药效是一个手性识别过程，配体和受体的匹配性将关系到活性大小和安全性，手性的重要性在现代农药开发中也越来越得到凸显，目前商品化手性农药在农药市场中已超过三分之一(Lamberth，C.，et al.，Science，2013，341，742-746.)。手性农药创制使化学品的精准高效使用成为可能，符合绿色新农药创制的要求。
酰胺类化合物在药物化学与农药化学领域中扮演着重要的角色，是农用杀菌剂开发领域经典且充满活力的一类。较具有代表性的酰胺杀菌剂就是琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHIs)，目前开发成功且商品化的已有18种，并且构建出这类杀菌剂的药效团模型(Sierotzki，H.and Scalliet，G.，.Phytopathology 2013，103(9)，880-887.；Xiong，L.；etal.ACS Symposium Series，2015，1204，Chapter 13，175-194.)。这类杀菌剂多为芳香化的平面结构，且均没有涉及到立体构型，典型的代表为2003年巴斯夫(BASF)开发的杀菌剂啶酰菌胺(Boscalid)；近期由先正达开发成功的琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHIs)类杀菌剂，如吡唑萘菌胺(isopyrazam)、氟唑环菌胺(sedaxane)和苯并烯氟菌唑(benzovindiflupyr)等，虽然在结构上均表现出部分去芳香化的特征，但仍没有涉及到立体构型对药效的影响。近期针对烟酰胺杀菌剂啶酰菌胺的结构优化取得了不错的进展，如引入芳醚单元(Wen，F.；etal..Pesticide Biochemistry and Physiology，2010，98(2)，248-253)或者多样的杂环单元(Du，S.；etal.Molecules，2015，20(5)，8395-8408.)。但目前针对琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHIs)类杀菌剂中的啶酰菌胺均没有涉及到手性问题，也没有噁唑啉单元的引入。
本发明设计合成了含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物，发现其对植物真菌病害有强烈的抑制作用，手性对抑菌活性有显著影响。这类化合物的比啶酰菌胺易于合成且成本低，这对新农药的创制有积极意义。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物的制备方法及其在防治植物真菌病害中的应用。本发明的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物表现出很好的抑制真菌病害的作用，并且噁唑啉环的手性(立体构型)对抑菌活性有显著的影响。
本发明提供的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物具有如下通式(I)所示结构。
通式(I)中噁唑啉环上手性碳的立体构型为R或者S。
取代基R1分别代表：氢、卤素、甲基，羟基，氨基，1-6碳烷氧基、1-6碳烷氨基、芳香氧基、芳香氨基、二氟甲基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基。以及同时含有2～3个R1所代表的取代基。
取代基R2分别代表：氢、甲基、羟亚甲基、1-4碳烷基、芳香基和芳香基亚甲基。
其中芳香基是指苯基类和杂环类取代基；
苯基类取代基包括苯基；和卤素、羟基、氨基、1-6碳烷氧基、1-6碳烷氨基取代的苯基；
杂环类取代基包括：吡啶基和卤素、羟基、氨基、1-6碳烷氧基、1-6碳烷氨基取代的吡啶基；吲哚基和有卤素、羟基、氨基、1-6碳烷氧基、1-6碳烷氨基取代的吲哚基；咪唑基和N原子上有1-16碳烃基取代的咪唑基、N原子上有苄基或者苯基取代的咪唑基。
本发明还包括如通式(I)所示的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物在农药化学上可以接受的盐。
本发明涉及的化合物可以根据如下合成路线来进行化学完成。
本发明所涉及的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物，以廉价易得的邻氨基苯腈为起始原料来进行合成，其特征在于包括以下两个步骤：
步骤(1)，将邻氨基苯腈和手性氨基醇溶于无水氯苯中，加入10mol％的无水氯化锌作催化剂，回流反应72小时，减压下蒸除溶剂，用氢氧化钠溶液淬灭反应后，乙酸乙酯或者二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析分离获得邻(4，5-二氢-2-噁唑-基)苯胺中间体A。
步骤(2)，方法一：在氮气保护下，将邻(4，5-二氢-2-噁唑-基)苯胺中间体A溶于无水二氯甲烷或者二氯乙烷中，加入1.4倍量的缚酸剂三乙胺(亦可以用二乙胺，二乙基异丙基胺代替)，冰浴条件下，向其中缓慢加入烟酰氯的二氯甲烷溶液(或者二氯乙烷溶液)，体系自然升至室温，饱和氯化铵溶液淬灭反应，水洗，脱溶，柱层析分离得目标物。
方法二：在氮气保护下，将邻(4，5-二氢-2-噁唑-基)苯胺中间体A和烟酸溶于无水二氯甲烷或者二氯乙烷中，加入1.1倍量的缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，随后加入1.5倍量的缚酸剂三乙胺(亦可以用二乙胺，二乙基异丙基胺代替)以及催化量(10mol％)的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，室温下搅拌反应，饱和氯化铵溶液淬灭反应，水洗，脱溶，柱层析分离得目标物。
本发明所提供的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物的合成具有原料廉价易得、合成步骤少及易于操作的特点。
本发明所涉及的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物，优选如下化合物：
本发明所涉及的化合物还包括由通式(I)所示的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物在农药学上可以接收的盐。
本发明所提供的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物对植物病原真菌的活性，包括水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)，小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)，油菜菌核病菌(Sclerotinia scleotiorum)，小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)，小麦全蚀病菌(Gaeumanomyce graminis)，番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)，马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)，辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)，番茄早疫病菌(Alternaria solani)，水稻恶苗病菌(Fusarium fujikuroi)，马铃薯干腐病菌(Fusarium sulphureum)，黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenarium)，水稻稻瘟病菌(Phyricularia cerealis)。
具体实施方式
通过下述实施例和生测实验结果，可进一步说明和理解本发明，但并不意味着限制本发明。
实施例一：(R)-2-氯-N-(2-(4-苯基-4，5-4，5-二氢-2-噁唑基)苯基)烟酰胺I-8a的合成
步骤(1)将邻氨基苯腈(1.18g，10mmol)和(R)-2-氨基-2-苯乙醇(1.65g，12mmol)溶于15mL无水氯苯中，加入10mol％的无水氯化锌(0.136g)作催化剂，回流反应72小时，减压下蒸除溶剂，向其中加入15％氢氧化钠溶液(15mL)淬灭反应，用二氯甲烷萃取(15mLX3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析(200～300目，石油醚/乙酸乙酯＝2∶1)分离，获得(R)-2-(4-苯基-4，5-二氢-2-噁唑基)苯胺A-I-8a，1.69g，产率71％。LC-MS(ESI+)m/z：Calcd.for[M+H：C15H15N2O]：239.12，Found：239.21。
步骤(2)称取邻(4，5-二氢-2-噁唑基)苯胺中间体A-I-8a(1mmol，0.238g)和2-氯烟酸(0.165g，1.05mmol)于干净干燥的schlenk反应瓶中，在氮气保护下，溶于加入10mL无水二氯甲烷溶解，加入缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI，0.211g，1.1mmol)，随后加入1.5倍量的缚酸剂三乙胺(0.21mL，1.5mmol)以及催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP，0.012g，0.1mmol)，室温下搅拌反应，反应完毕后，向体系中加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，分液，用二氯甲烷萃取(10mL X 2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析(200～300目，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1～2∶1)分离，得目标物(R)N-(2-(4-苯基-4，5-4，5-二氢-2-噁唑基)苯基)烟酰胺I-8a。白色固体，279mg，产率74％。熔点95.6～96.7℃。LC-MS(ESI+)m/z：Calcd.for[M+H：C21H17ClN3O2]：378.10 and 380.10，Found：378.17 and 380.17。
实施例二：(R)-N-(2-(4-甲基-4，5-4，5-二氢-2-噁唑基)苯基)烟酰胺的合成
步骤(1)制备方法同实施例一步骤(1)，用(R)-2-氨基-1-丙醇代替(R)-2-氨基-2-苯乙醇，产率74％。LC-MS(ESI+)m/z：Calcd.for[M+H：C10H13N2O]：177.10，Found：177.17。
步骤(2)制备方法同实施例一步骤(1)，用烟酸代替2-氯烟酸，用(R)-2-(4-甲基-4，5-二氢-2-噁唑基)苯胺代替邻(4，5-二氢-2-噁唑基)苯胺中间体A-I-8a；得(R)-N-(2-(4-甲基-4，5-二氢-2-噁唑基)苯基)烟酰胺，
白色固体，产率79％，熔点m.p.88.1～88.4℃，1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.47(d，J＝5.08Hz，3H，CH3)，3.97(dd，J1＝5.92Hz，J2＝5.76Hz，1H，1H in OCH2)，4.52～4.61(m，2H，1H in OCH2 and 1H in CHN-CH3)，7.17(ddd，1H，J1＝6.32Hz，J2＝5.88Hz，J3＝0.84Hz，1H，aromatic H in phenyl ring)7.53～7.57(m，2H，aromatic H in phenyl ring and Pyridyl ring)，7.92(dd，J1＝6.32Hz，J2＝1.24Hz，1H，aromatic H in phenyl ring)，8.53(m，1H，aromatic H in Pyridyl ring)，8.79(dd，J1＝3.88Hz，J2＝1.08Hz，1H，aromatic H in phenyl ring)，8.90(dd，J1＝6.20Hz，J2＝0.56Hz，1H，aromatic H in Pyridyl ring)，9.37(d，1H，J＝1.40Hz，aromatic H in Pyridyl ring)，13.41(s，1H，NH).13C-NMR and DEPT135(CDCl3，100MHz)δ：21.6(CH3)，61.9(CH)，72.9(OCH2)，113.8(C)，119.9(CH)，123.1(CH)，124.1(CH)，129.4(CH)，131.7(C)，132.8(CH)，137.2(CH)，139.7，147.5(CH)，150.6(CH)，163.2(C)，163.9(C).Elemental anal.calcd for C16H15N3O2：C，68.31；H，5.37；N，14.94；Found：C，68.42；H，5.41；N，14.96.ESI-MS，Calcd for[M+H，C16H16N3O2]282.12，found 282.19.
实施例三：含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物的抑菌活性测定
采用平板抑制菌丝生长速率法进行离体抑菌活性评价，选取测试菌株于PDA平板进行活化，包括水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)，小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)，油菜菌核病菌(Sclerotinia scleotiorum)，小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)，小麦全蚀病菌(Gaeumanomyce graminis)，番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)，马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)，辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)，番茄早疫病菌(Alternaria solani)，水稻恶苗病菌(Fusarium fujikuroi)，马铃薯干腐病菌(Fusarium sulphureum)，黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenarium)，水稻稻瘟病菌(Phyricularia cerealis)。将化合物配置成系列梯度浓度的PDA含药平板，将测试菌株制成5mm直径菌饼置于含药培养皿中央，25℃恒温培养至空白对照皿的测试菌株长至接近培养皿边缘时，用十字交叉法测量各含药平板的菌落直径，计算化合物对菌丝生长的抑制率，对病害的抑制率按照如下公式计算：
使用统计软件SPSS20.0计算抑制率为50％时化合物的浓度，即EC50值。重复3次取平均值。以多菌灵(carbendazim)为阳性对照，各化合物对植物病原菌的EC50值(mg/L)。
表1 含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物的抑菌活性
从表中可以看出，含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物对植物病害有较好的抑制作用。且噁唑啉环上4位取代基的体积和立体构型对抑菌活性有显著影响。有取代基对活性提高时必须的，但空间体积不宜过大。4位取代基的体积对抑菌活性的影响有如下趋势Ph＜Bu＜Pr＜Et。一般而言，噁唑啉环上4位的立体构型为R构型时，抑菌活性要好于S构型的对映异构体。
当噁唑啉环上4位为乙基取代基，且构型为R时，抑菌活性最为明显，对水稻纹枯病菌、番茄灰霉病菌和油菜菌核病菌的抑制中浓度分别低至0.58mg/L，0.43mg/L和2.07mg/L。其对水稻纹枯病菌、番茄灰霉病菌的活性明显高于阳性对照啶酰菌胺。有望作为一类新型的杀菌剂候选化合物或者直接作为杀菌剂使用，对新农药创制将有重要意义。
本发明所涉及的含有手性噁唑啉的烟酰胺类化合物作为农用杀菌剂的用途已经通过具体的实例进行了描述，本领域技术人员可借鉴本发明内容，适当改变原料、工艺条件等环节来实现相应的其它目的，其相关改变都没有脱离本发明的内容，所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，都被视为包括在本发明的范围之内。