05bar、810bar、1020bar、1350bar 每个压力 2min，在最大压力 1350bar 时均质 8min，均质后 将空白脂质体通过挤出器挤出，挤出10次，频率20Hz，挤出器所用滤膜孔径为0. 1 y m，得到 空白脂质体b5;
[0113] (5)制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法，用9%蔗糖溶液70L置换空白脂质体 b 4外水相的硫酸铵溶液，蔗糖溶液用氢氧化钠调节pH至6. 98,超滤7次，得到8. 94L空白 脂质体c5;
[0114] (6)载药、孵化、定容：取空白脂质体c58. 9L，加入0? 27mol/L组氨酸缓冲液0? 89L， 测定混合液PH6. 50,称取28. 93g盐酸表柔比星溶于上述混合液中，加热溶解，测定pH6. 38， 通入氮气，在65°C水浴中孵化lh，孵化后pH6. 48,用9%蔗糖溶液定容至14. 47L，pH6. 45， 得到盐酸表柔比星脂质体注射液d6;
[0115] (7)除菌、分装、保存：将(15用0. 22 ym微孔滤膜过滤除菌分装，批号为 1404080101，4°C 保存。
[0116] 实施例6:
[0117] 盐酸表柔比星 200 g 氢化大豆卵磷脂（HSPC) 960 g 胆固醇(CHO) 320 g 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 320 g (DSPE-PEG2000) 组氨酸缓冲液 6. 15L 蔗糖溶液 93. 07L 硫酸铵水溶液 0. 78L;
[0118]制备：
[0119] (1)油相：称取1^(：，〇10，？￡6-05?￡2000，溶于无水乙醇中，加热溶解后，于65°〇水 浴保温30min;
[0120] (2)水相：配制0. 2mol/L硫酸铵水溶液，于65°C水浴保温30min ;
[0121] (3)乳化：在65条件1：下，将油相注入到水相中，用磁力搅拌器搅拌，转速600r/ min，并通入氮气，直到乙醇完全挥发，得到空白脂质体a ;
[0122] (4)整粒：空白脂质体a用高压均质机在不同压力下高压均质，均质压力分别为 405bar、810bar、1020bar、1350bar 每个压力 2min，在最大压力 1350bar 时均质 8min，均质后 将空白脂质体通过挤出器挤出，挤出10次，频率20Hz，挤出器所用滤膜孔径为0. 1 y m，得到 空白脂质体b ;
[0123] (5)制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法，用8%蔗糖溶液置换空白脂质体b外 水相的硫酸铵溶液，蔗糖溶液用氢氧化钠调节pH至6. 98,超滤7次，得到空白脂质体c ;
[0124] (6)载药、孵化、定容：取空白脂质体c，加入0.27mol/L组氨酸缓冲液，测定混合 液pH6. 50,盐酸表柔比星溶于上述混合液中，加热溶解，测定pH6. 38,通入氮气，在65°C水 浴中孵化1^1，孵化后？册.48，用8%蔗糖溶液定容至10(^4册.45，得到盐酸表柔比星脂质 体注射液d。
[0125] (7)除菌、分装、保存：将d用0.22 ym微孔滤膜过滤除菌分装。
[0126] 实施例7
[0127] 盐酸表柔比星 160g 氢化大豆卵磷脂（HSPC) 2000 g 胆固醇(CHO) 55 g 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇200Q 900 g (DSPE-PEG2000) 组氨酸缓冲液 4L 蔗糖溶液 200 L 硫酸铵水溶液 0. 1 L;
[0128] 制备：
[0129] (1)油相：称取批?(：，〇10，？￡6-05?￡2000，溶于无水乙醇中，加热溶解后，于65°〇水 浴保温30min;
[0130] (2)水相：配制0.2mol/L硫酸铵水溶液，于65°C水浴保温30min;
[0131] (3)乳化：在65条件1：下，将油相注入到水相中，用磁力搅拌器搅拌，转速600r/ min，并通入氮气，直到乙醇完全挥发，得到空白脂质体a ;
[0132] (4)整粒：空白脂质体a用高压均质机在不同压力下高压均质，均质压力分别为 405bar、810bar、1020bar、1350bar 每个压力 2min，在最大压力 1350bar 时均质 8min，均质后 将空白脂质体通过挤出器挤出，挤出10次，频率20Hz，挤出器所用滤膜孔径为0. 1 y m，得到 空白脂质体b ;
[0133] (5)制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法，用9%蔗糖溶液置换空白脂质体b外 水相的硫酸铵溶液，蔗糖溶液用氢氧化钠调节pH至6. 98,超滤7次，得到空白脂质体c ;
[0134] (6)载药、孵化、定容：取空白脂质体c，加入0.27mol/L组氨酸缓冲液，测定混合 液pH6. 50,盐酸表柔比星溶于上述混合液中，加热溶解，测定pH6. 38,通入氮气，在65°C水 浴中孵化1^1，孵化后？册.48，用9%蔗糖溶液定容至8(^4册.45，得到盐酸表柔比星脂质体 注射液d。
[0135] (7)除菌、分装、保存：将d用0.22ym微孔滤膜过滤除菌分装。
[0136] 本发明所述重量份与体积份的关系均为g/L或mg/ml的关系。
【主权项】
1. 一种盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于该注射液由按脂质体注射液每100体 积份计的如下原料制成：2. -种如权利要求1所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于该注射液由按脂 质体注射液每100体积份计的如下原料制成：3. -种如权利要求1所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于该注射液由按脂 质体注射液每100体积份计的如下原料制成：4. 一种如权利要求1所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于该注射液由按脂 质体注射液每100体积份计的如下原料制成：5. -种如权利要求1所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于该注射液由按脂 质体注射液每100体积份计的如下原料制成：6. 如权利要求1-5任一所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于其中： 硫酸铵溶液的浓度为〇? 1~〇? 3mol/L;组氨酸缓冲液浓度为0? 05mol/L~0? 4mol/L， pH为6. 2~6. 8 ;蔗糖溶液浓度为7~10%，pH为6. 50~7. 50 ;或者，硫酸铵溶液的浓度 为0? 15mol/L~0? 25mol/L;组氨酸缓冲液浓度为0?lmol/L~0? 3mol/L;蔗糖溶液浓度为 8% ;或者，硫酸铵溶液的浓度为0. 2mol/L;组氨酸缓冲液浓度为0. 2mol/L;蔗糖溶液浓度 为9% 〇7. 如权利要求6所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于其中： 所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其中HSPC:CH0:DSPE-PEG2000的最佳比例为 3:1:1〇8. 如权利要求1-5, 7任一所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于其中： 所述的盐酸表柔比星脂质体注射液终产品中磷脂的最佳浓度16mg/mL;终产品中磷脂 与药物盐酸表柔比星的最佳比例为8:1，药物盐酸表柔比星的浓度为2mg/mL。9. 如权利要求1-5, 7任一所述的盐酸表柔比星脂质体注射液的制备方法，其特征在于 该方法包含以下步骤： (1)油相：称取氢化大豆卵磷脂/胆固醇/二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000， 溶于无水乙醇，加热溶解后，于55~65°C保温； (2) 水相：配制硫酸铵水溶液，于55~65 °C保温； (3) 乳化：在55~65°C条件下，将油相注入到水相中，不断加热搅拌，并通入氮气，直到 无水乙醇完全挥发，得到空白脂质体a; (4) 整粒：将空白脂质体a高压均质减小粒径，最大均质压力在1400bar以下；挤出器 挤出，挤出器中采用孔径为0. 05~0. 5nm的滤膜，得到空白脂质体b; (5) 制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法或采用凝胶柱层析法，用蔗糖溶液置换外 水相的硫酸铵溶液，得到空白脂质体c; (6) 载药、孵化：空白脂质体c中加入组氨酸缓冲液，将盐酸表柔比星溶于上述混合液 中，55~65°C保温，蔗糖溶液定容，得到盐酸表柔比星脂质体注射液d; (7) 除菌、分装：将d用0. 22ym微孔滤膜除菌、分装。10.如权利要求6所述的盐酸表柔比星脂质体注射液的制备方法，其特征在于该方法 包含以下步骤： (1) 油相：称取氢化大豆卵磷脂/胆固醇/二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000， 溶于无水乙醇，加热溶解后，于55~65°C保温； (2) 水相：配制硫酸铵水溶液，于55~65 °C保温； (3) 乳化：在55~65°C条件下，将油相注入到水相中，不断加热搅拌，并通入氮气，直到 无水乙醇完全挥发，得到空白脂质体a; (4) 整粒：将空白脂质体a高压均质减小粒径，最大均质压力在1400bar以下；挤出器 挤出，挤出器中采用孔径为0. 05~0. 5nm的滤膜，得到空白脂质体b; (5) 制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法或采用凝胶柱层析法，用蔗糖溶液置换外 水相的硫酸铵溶液，得到空白脂质体c; (6) 载药、孵化：空白脂质体c中加入组氨酸缓冲液，将盐酸表柔比星溶于上述混合液 中，55~65°C保温，蔗糖溶液定容，得到盐酸表柔比星脂质体注射液d; (7) 除菌、分装：将d用0. 22ym微孔滤膜除菌、分装。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，涉及盐酸表柔比星脂质体注射液的制备及抗肿瘤活性应用。采用硫酸铵梯度法制备盐酸表柔比星脂质体注射液。本发明的抗肿瘤活性结果表明盐酸表柔比星脂质体注射液对乳腺癌有显著抑制作用，且抗肿瘤活性优于盐酸多柔比星脂质体注射液(楷莱)、盐酸表柔比星注射液。
【IPC分类】A61K31/704, A61K9/127, A61P35/00, A61K47/34
【公开号】CN104958259
【申请号】CN201510406550
【发明人】郭光明, 佟志远, 刘清飞, 王海燕, 麻晓雪
【申请人】北京博恩特药业有限公司
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年7月10日