Imm计2分；l-2mm计3分；2-3mm计4 分；> 3mm计5分，宽度> Imm时分值X 2〇
[0232] 3. 3. 2胃黏膜组织处理及形态学观察
[0233] 取损伤最明显处胃腺部组织lcmXlcm2块，一部分置入10%中性甲醛缓冲液固定， 常规石蜡包埋、切片，进行HE染色，光镜下观察病理形态学变化。
[0234] 组织学观察：
[0235] ① HE染色光镜下观察，黏膜损伤的程度判断标准：光镜下胃黏膜损伤的程度判断 标准，按照黏膜损伤的程度分为O-IV级。〇级，黏膜组织完好无缺损，偶见极少数上皮细胞 脱落。I级，黏膜上皮细胞损伤，胞质有空泡，肿胀，核固缩或细胞破碎，有部分上皮细胞脱 落，但胃小凹无损伤。11级，除了黏膜上皮细胞广泛损伤外，胃小凹也有破坏，损伤区附近 可有毛细血管充血，但胃腺细胞无损伤。111级，胃腺细胞损伤，可见腺细胞的胞质有空泡， 核固缩，或有整层的坏死上皮细胞脱落，使固有层和腺细胞直接暴露于胃腔，并可见轻微出 血。IV级，损伤深入腺体深部，并有部分腺体坏死脱落，整个胃黏膜广泛出血。
[0236] 中性粒细胞浸润：
[0237] 未见为（_)。偶见（+)，明显（+++)，介于后两者之间为（++)。
[0238] 4结果分析与判定
[0239] 用SPSSdL 0)软件进行数据转化和统计分析。分析时，先对数据进行方差齐性检 验，如方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现异常再用Dunnett法进行多剂量组 与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐，则对原始数据进行适当的数量转换，满足方 差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和 检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane 's T2检验进行两 两比较。
[0240] 5实验结果
[0241 ] 5. 1阿司匹林对胃黏膜损伤指数的变化
[0242] 表13阿司匹林对胃黏膜损伤指数的变化
[0243]
[0245] 5. 2对胃黏膜组织损伤程度比较
[0246] 表14各药物对胃黏膜组织损伤程度比较
[0247] CN 105012388 A 说明书 16/22 页
[0248] 6实验结论
[0249] 长期服用小剂量阿司匹林，会对胃黏膜造成明显的损伤，并且与空白对照组相比， 具有极显著的差异，而长期服用中药组合物，对胃黏膜没有明显损伤，与空白对照组相比， 无显著差异。
[0250] 效果例8 :中药组合物的急性毒性试验
[0251] 1试验目的：观察中药组合物对机体是否有急性毒性作用
[0252] 2实验材料
[0253] 2. 1药品与试剂
[0254] 中药组合物提取物
[0255] 2. 2仪器与设备
[0256] 金属灌胃针，注射器
[0257] 2. 3 动物
[0258] 昆明种小鼠，SPF级，体重18_22g，雌雄各半
[0259] 3实验方法
[0260] 动物购买后观察5天，给药前禁食（不限制饮水）16h，以中药组合物提取物的最大 浓度（6. 17g/ml)和最大给药体积（4. Oml/lOOg · BW)灌胃给药，空白对照组给予相应体积 的生理盐水，连续观察14天，对死亡的小鼠和观察期满的小鼠进行解剖，观察各组织脏器 的变化。4结果分析与判定
[0261] 连续观察14天，如果动物不出现死亡，则认为中药组合物提取物对昆明种小鼠经 口急性毒性剂量大于受试剂量。
[0262] 5实验结果
[0263] 连续观察14天，结果无一只动物出现死亡，给药组小鼠采食、饮水、精神状态和活 动状况与空白对照组相比，无明显变化。
[0264] 对观察14天后小鼠，剖检发现，各组织脏器，如心、肝、脾、胃和肾等与空白组小鼠 的脏器物明显差异。
[0265] 6实验结论：
[0266] 中药组合物提取物昆明种小鼠灌胃给药的最大耐受剂量大于250g/kg · BW(折合 为生药量），相当于人用量的80倍，可判断中药组合物属无毒级。
[0267] 效果例9 :中药组合物的遗传毒性试验
[0268] 1试验目的：观察中药组合物对机体是否有遗传毒性作用
[0269] 2实验材料
[0270] 2. 1药品与试剂
[0271] 中药组合物提取物
[0272] 1 %-2 %伊红染色液
[0273] 2. 2仪器与设备
[0274] 金属灌胃针，注射器
[0275] 生物显微镜
[0276] 2. 3 动物
[0277] 雄性昆明种小鼠，SPF级，体重18_22g
[0278] 3实验方法
[0279] 50只雄性昆明种小鼠，随机分为5组，中药组合物组设3个剂量组，以最大耐受量 为高剂量组，最大耐受量的1/2为中剂量组，最大耐受量的1/4为低剂量组，另设1个阳性 对照组和一个阴性（溶剂）对照组，每组10只。阳性对照组选用环磷酰胺，灌胃给药剂量 为40mg/kg · BW。小鼠灌胃体积为0. 2ml/10g · BW，每天1次，连续5天，每次间隔24h。在 首次灌胃给药后第35天以颈椎脱白法处死小鼠，摘取两侧附睾，放入有适量生理盐水（约 ImL)的小烧杯中或放入盛有2mL生理盐水的平皿中。用眼科剪将附睾纵向剪1-2刀，静止 3-5min，轻轻摇动。用四层擦镜纸或合成纤维血网袋过滤，吸滤液涂片。空气干燥后，用甲 醇固定5min以上干燥，用1% -2%伊红染色液lh，用水轻冲，干燥。
[0280] 4结果分析与判定
[0281] 精子畸形，主要表现在头部，其次为尾部。畸形的类型可分为无钩、香蕉形、胖头、 无定形、尾折叠、双头、双尾等。
[0282] 每个剂量组应分别于相应的阴性对照组进行比较，如用Wilcoson秩和检验法评 价精子畸形阳性标准是，畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量 反应关系。
[0283] 一般阴性对照组精子异常率为0· 8% -3. 4%。
[0284] 5实验结果
[0285] 表15中药组合物提取物小鼠精子畸形试验结果
[0286]
[0287] 注：表中表示与阴性对照组比较具有显著差异（P < 0. 05)林"表示与阴性 对照组比较具有显著差异（P < 0. 01)。
[0288] 6实验结论：
[0289] 中药组合物提取物在31. 25_125g/kg *BW剂量范围内小鼠精子畸形率与阴性对照 组比较无显著差异性，可判定中药组合物物遗传毒性。
[0290] 效果例10 :中药组合物的慢性毒性试验
[0291] 1试验目的：观察中药组合物对机体是否有慢性毒性作用
[0292] 2实验材料
[0293] 2. 1药品与试剂
[0294] 中药组合物提取物
[0295] 2. 2仪器与设备
[0296] 金属灌胃针，注射器
[0297] 2. 3 动物
[0298] SD大鼠，6-8周龄，SPF级，雌雄各半
[0299] 3实验方法
[0300] 3. 1动物分组及给药
[0301] 88只大鼠，经检疫观察后健康的试验动物随机分为4组，每组22只，雌雄各半。中 药组合物组设3个剂量组，以最大耐受量的1/4为高剂量组，最大耐受量的1/8为中剂量 组，最大耐受量的1/16为低剂量组，另设1 一个阴性（溶剂）对照组，每组10只。
[0302] 给药途径为经口，每天灌胃给药1次，连续90天。
[0303] 3. 2临床观察与检查
[0304] 3. 2. 1临床观察
[0305] 试验期间每天观察1次所有试验组和对照组动物的外观体征、行为活动及粪便形 状等，记录动物出现异常变化的时间和状况等，如发现动物有死亡或濒临死亡的及时作大 体解剖观察，并留取器官组织样本备作病理组织学检查。每天观察和记录动物的进食量，每 周末称量动物体重1次。
[0306] 3. 2. 2临床检查
[0307] 1)血液学指标检查：试验结束时每组采取12只大鼠（雌雄各半）血样，用Sysmex pocH-lOOi型多项目自动血球计数仪进行检测。检查指标有红细胞计数（RBC)、白细胞 (WBC)计数及分类、血红蛋白（HGB)、血小板计数（PET)、红细胞比积（HCT)等。
[0308] 2)血液生化（肝脏功能）检查：试验结束时每组分别采集和分离12只大鼠（雌雄 各半）血清，用Rx-daytona全自动生化分析仪进行检测。检测天冬氨酸氨基转移酶（AST)、 丙氨酸氨基转移酶（ALT)、碱性磷酸酶（ALP)、尿素氮（BUN)、总蛋白（TP)、白蛋白（ALB)、血 糖（GLU)、总胆红素（T.BIL)、总胆固醇（cHo)、胆碱酯酶（ChE)等指标。
[0309] 3)尿液（肾功能）检查：试验结束前2d每组取12只大鼠（雌雄各半）分别放人 代谢笼内饲养，收集24h尿液，用Clinitek Status全自动尿液分析仪进行检测。检测指标 有外观、酸碱度（pH)、隐血（BLD)、蛋白（PRo)、尿糖（U.GLU)及沉淀物镜检等。
[0310] 4)脏器重量测定：试验结束时处死所有试验组和对照组的动物，分别称量每只动 物的体重以及心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、子宫，睾丸等主要组织脏器。
[0311] 5)病理学检查：对试验期间死亡及试验结束时处死的所有动物，均进行解剖观察 并留取器官组织样本备作病理学检查。
[0312] 4结果分析与判定
[0313] 用SPSSdL 0)软件进行数据转化和统计分析。分析时，先对数据进行方差齐性检 验，如发差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现异常再用Dunnett法进行多剂量组 与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐，则对原始数据进行适当的数量转换，满足方 差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和 检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane' s T2检验进行两 两比较。
[0314] 5实验结果
[0315] 5. 1中药组合物对血液学指标的影响
[0316] 对RBC、WBC、L、M、N、HGB、PLT、HCT等血液学指标的观测结果见表1，雌雄大鼠各剂 量组的各项指标与对照组比较均无显著差异（P > 0. 05)。表明中药组合物剂量达62. 5g/ kg · BW时对所测各项血液学指标均未产生明显影响。
[0317] 表16中药组合物对大鼠血液学指标的影响
[0318]
[0319] 注：表中表示与阴性对照组比较具有显著差异（P < 0. 05)林"表示与阴性 对照组比较具有显著差异（P < 0. 01)。
[0320] 5. 2对肝脏功能的影响
[0321] 以血清AST、ALT、ALP、TP、ALB、GLU、T-BIL、CHO、ChE等项目为观察指标，检测结果 见表2,雄性大鼠 T-BIL和CH0、雌性大鼠 AST和ChE与空白对照组相比有差异，但是差异没 有统