发生磷酸化。
[0018] 图2是基于Lck荧光极化的高通量筛选流程图。
[0019] 图3是本发明的FL-250对原代培养的T细胞络氨酸激酶的抑制作用。（A)FL-2501 抑制0KT3介导的络氨酸激酶磷酸化；（B)FL-2501抑制0KT3介导的Lck的下游蛋白激酶 ERK的磷酸化。
[0020] 图4是本发明的FL-2501对TCR-介导的T细胞内Ca2+的移动的抑制作用。FL-2501 对T细胞与孵育后向细胞培养液中加anti-CD3,然后用FLIPR?CalciumAssayKits检测 Ca2+的移动。FL-2501显著抑制TCR-介导的T细胞内Ca2+的移动。
[0021] 图5是本发明的FL-2501对TCR-介导的IL-2产生的抑制作用。FL-2501对T细 胞与孵育后向细胞培养液中加anti-⑶3，然后用ELISAs检测IL-2的水平。FL-2501显著 抑制TCR-介导的IL-2的表达。
[0022] 图6是本发明的FL-2501对自体或异体CAR-T的排斥反应(体外GVHD)的抑制作 用。自体或异体的CAR-T细胞经FL-2501孵育后进行混合淋巴反应实验。我们发现，FL-2501 对异体CAR-T引起的排斥反应有显著的抑制作用。
[0023] 图7是本发明的FL-2501对CAR-T抗肿瘤功能的影响。FL-2501对CAR-T的抗肿 瘤功能无显著影响，提示FL-2501抑制GVHD但不抑制CAR-T的肿瘤杀伤功能。
【具体实施方式】
[0024] 下面将参考附图并结合实施例，来详细说明本发明。
[0025] 参照图2所示，鉴于Lck在TCR的信号转导以及TCR介导的GVHD过程中的关键作 用，我们建立了基于Lck荧光极化的高通量筛选平台，通过筛选，获得了Lck选择性抑制 剂。将所得的化合物经TCR信号转导实验进一步筛选，所获得的Lck选择性抑制剂能显著 抑制TCR介导的GVHD。
[0026] 通过这一系列筛选，我们发现了一系列PKC0的选择性抑制剂。其中包括 FL-2501。
[0027] 进一步的，所述的PKC抑制剂为FL-2501的衍生物。
[0028] 优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2502,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2503,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2504,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2505,
其分子结构如下： 优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2506,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2507,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2508,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2509,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2510,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2511，其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2512,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2513,其分子结构如下： ..:，獄'....
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2514,其分子结构如下：
、、、、、、、、、、、、' 优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2515,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2516,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2517,其分子结构如下：
优选的，所沭FL-2501的衍牛物为FL-2518,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2519,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2520,其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2521，其分子结构如下：
优选的，所述FL-2501的衍生物为FL-2522,其分子结构如下：
进一步的，所述的Lck选择性抑制剂用于制备预防或治疗GVHD的药物。
[0029] 进一步的，所述的Lck选择性抑制剂用于预防同种异体CAR-T所引起的GVHD，也可 用于同种异体骨髓移植所引起的GVHD。
[0030] 实施例1 :参见图6,FL-2501对异体T细胞所引起的混合淋巴反应(体外排斥反 应）具有显著的抑制作用。究其原理，我们发现FL-2501显著抑制络氨酸激酶Lck，进而抑 制TCR介导的细胞信号转导，导致IL-2等基因的表达下调。显著抑制⑶3/28激活TCR所 引起的转录因子RelA以及细胞因子IL-2表达，参照图3至图5。
[0031] 值得注意的是，FL-2501并不影响CAR-T的肿瘤杀伤功能，参照图7所示。因此， 通过抑制TCR的信号转导，FL-1507对异体T细胞移植所致的GVHD有优良的抑制作用，对 于同种异体CAR-T治疗以及骨髓抑制具有潜在的应用价值。
[0032] 以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技 术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修 改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种新型Lck小分子抑制剂，其特征在于：所述的Lck小分子抑制剂为FL-2501，其 分子式为：2. 根据权利要求1所述的新型Lck小分子抑制剂，用于抑制同种异体CAR-T治疗过程 中所引起的移植物抗宿主病。
【专利摘要】本发明公开了一种新型蛋白激酶Lck的小分子抑制剂，用于抑制同种异体嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）所引起的移植物抗宿主病（GVHD）。所述的Lck激酶小分子抑制剂为FL-2501，其分子式为：本发明用高通量筛选法从化合物库中筛选到对TCR信号具有高强度选择性抑制作用的小分子化合物，包括其药学上可接受的盐和前体药。该化合物是蛋白激酶Lck的选择性抑制剂，在体外试验中能抑制CAR-T细胞内TCR的信号传递，但不影响CAR-T的增殖和肿瘤杀伤功能。此类化合物可以有效地抑制同种异体CAR-T治疗过程中所产生的GVHD，促进同种异体CAR-T的临床应用。
【IPC分类】A61P37/06, A61K31/495
【公开号】CN105106214
【申请号】CN201510471992
【发明人】范国煌
【申请人】范国煌
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年8月5日