组合物29080301030518及其在抗病毒药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物29080301030518、制备方 法及其用途。
【背景技术】
[0002] 单纯疱疼病毒1型（Herpessimplexvirus，HSV-1)和单纯疱疼病毒2型（Herpes simplexvirus，HSV-2)属于疱疹科病毒，HSV-1和HSV-2不仅引起口唇或生殖粘膜疱疹，同 时也是引起脑炎、肝炎、全身严重感染甚至宫内感染的重要病原。
[0003] 呼吸道合胞病毒（RespiratorySyncytialVirus，RSV)主要引起呼吸系统感染， 在婴幼儿、老年以及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。
[0004] 甲型流感病毒（InfluenzaAvirus，Flu_A)属于正粘科病毒，在人类和其他生物 每年都有小范围的流行，引起上呼吸系统感染。大流行时，可引起严重呼吸系统感染，甚者 引起肺炎、脑炎甚至死亡。
[0005] 上述三种病毒的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物 中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物 最有重要价值。
[0006] 本发明涉及的化合物I是一个2010年发表（MengShaoetal.，2010.Psiguadials AandB,TwoNovelMeroterpenoidswithUnusualSkeletonsfromtheLeavesof Psidiumguajava.OrganicLetters12(2010)5040 - 5043)的化合物，我们对化合物I进行 了结构修饰，获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物 IV制备了组合物29080301030518,并对该组合物抗病毒活性进行了评价，其具有抗病毒活 性。
【发明内容】
[0007] 本发明公开了一个新的组合物29080301030518,该组合物由化合物III和化合物 IV组成，该组合物中化合物III和化合物IV的质量百分数分别为40%和60%。
[0008]
[0009] 本发明公开的组合物可以制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
[0010] 药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗病毒作用。本发明的药学上可接 受的盐具有同样的药效。
[0011] 组合物的体外实验表明，组合物具有很强的抗HSV-1、HSV-2、RSV和fluA的活性， 因此本发明的组合物有望被用于制备新型抗病毒药物。
[0012] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1化合物PsiguadialA的制备
[0014] 化合物PsiguadialA(I)的制备方法参照MengShao等人发表的文献（MengShao etal. , 2010.PsiguadialsAandB,TwoNovelMeroterpenoidswithUnusualSkeletons fromtheLeavesofPsidiumguajava.OrganicLetters12(2010)5040 - 5043)的方法〇
[0015]
[0016] 实施例2PsiguadialA的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0017] 将化合物I(474mg，1.OOmmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化铵（TBAB) (0. 16g)，1，2-二溴乙烷（7. 520g，40.OOmmol)和12mL的50 %氢氧化钠溶液。混合物在35摄 氏度搅拌8h。8h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液。然 后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤3次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去 除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:0. 5， v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的棕色粉末（502mg，73% )。
[0018] 4NMR(500MHz，DMS0-d6)S10. 44 (s，2H)，7. 24 (s，2H)，7. 20 (d，J= 10. 0Hz，3H)，4 .31 (s, 4H), 3. 89 (s, 1H), 3. 74 (s, 4H), 2. 30 (s, 1H), 2. 12 (s, 1H), 2. 02 (s, 1H), 1. 92 (s, 1H), 1 .79 (s, 1H), 1. 73 (s, 1H),L51 (d,J= 19. 8Hz, 3H), 0. 99 (s, 3H), 0. 95 (d,J= 4. 7Hz, 7H), 0. 8 5 (s, 3H), 0. 53 (s, 1H), 0. 43 (s, 1H).
[0019] 13CNMR(125MHz，DMS0-d6)S188. 69(s), 170. 54(s), 165. 42(s), 163. 38(s), 142. 7 2 (s), 129. 71 (s), 127. 96 (s), 127. 08 (s), 118. 00 (s), 116. 82 (s), 114. 82 (s), 72. 73 (s), 40. 19 (s), 34. 75 (s), 34. 32 (s), 31. 75 (s), 30. 93 (s), 28. 09 (s), 26. 43 (s), 24. 48 (s), 23. 74 (s) ,21. 18 (s), 20. 77 (s), 19. 99 (s), 14. 39 (s).
[0020] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforC34H41Br205：689. 1300；found689. 1303.
[0021]
[0022] 实施例3PsiguadialA的0_(二乙胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0023] 将化合物II(344mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (690mg，5.0mmol)，碘化钾（168mg，1.0mmol)和二乙胺（2920mg，40mmol)，混合物加热回流 9h。反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取4次，合并有机相。依次用水和 饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗 品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:1. 5,v/v)，收集黄色集 中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物III的黄色粉末（231. 8mg，69% )。
[0024] 4 匪R(500MHz，DMS0-d6)S10. 40(s，2H)，7. 20(s，2H)，7. 16(d，J= 10. 0Hz ,3H), 4. 01 (s, 4H), 3. 92 (s, 1H), 2. 80 (s, 8H), 2. 58 (s, 4H), 2. 07 (s, 1H), 1. 87 (d,J= 8. 4Hz, 2H), 1. 77 (s, 1H), 1. 63 (d,J= 16. 8Hz, 2H), 1. 46 (s, 1H), 1. 40 (s, 2H), 1. 21 (s, 1 H), 1. 09 (s, 12H), 0. 92 (s, 3H), 0. 86 (s, 6H), 0. 83 (s, 3H), 0. 48 (s, 1H), 0. 22 (s, 1H).13C NMR(125MHz,DMS0-d6) 8 188. 13 (s), 170. 24 (s), 165. 66 (s), 163. 19 (s), 142. 21 (s), 129. 74 (s), 127. 81 (s), 127. 13 (s), 117. 32 (s), 116. 78 (s), 114. 65 (s), 69. 32 (s), 52. 18 (s), 47. 25 (s), 40. 16 (s), 34. 49 (s), 34. 15 (s), 30. 26 (s), 28. 31 (s), 26. 33 (s), 24. 11 (s), 23. 47 (s), 2 1. 56 (s),20. 83 (s),19. 14 (s),14. 25 (s),12. 17 (s).
[0025] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC42H61N205:673. 4580 ;found:673. 4576。
[0026]
[0027] 实施例4PsiguadialA的0_(哌啶基）乙基衍生物（IV)的合成
[0028] 将化合物II(344mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (690mg，5.0mmol)，碘化钾（168mg，1.0mmol)和哌啶（1704mg，20mmol)，混合物加热回流 l〇h。反应结束后将反应液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取4次，合并有机相。依 次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得 到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:1. 〇,v/v)，收 集黄色集中洗脱带即得到Cleistanone的0-(哌啶基）乙基衍生物（IV)的黄色胶状固体 (212. 3mg, 61% ) 〇
[0029] :HNMR(500MHz,DMS〇-d6) 8 10. 58 (s, 2H) , 7. 36 (s, 2H) , 7. 30 (d,J= 10. 0Hz, 3H), 4. 20 (s, 1H) , 4. 12 (s, 4H) , 2. 68 (s, 4H) , 2. 51 (s, 8H) , 2. 34 (s, 1H) ,2.06(d,J= 9. 1Hz, 2H), 1. 99 (d,J= 5. 5Hz, 2H) , 1. 75 (s, 1H), 1. 57 (d,J= 8. 5Hz, 10H) ,1-51 (s, 1H), 1. 45 (d,J= 8. 0Hz, 5H), 1. 07 (s, 3H),L〇l(s, 6H), 0. 99 (s, 3H), 0 .65 (s, 1H), 0. 35 (s, 1H).
[0030] 13CNMR(125MHz,DMS0-d6)S188. 11 (s)，170. 25 (s)，165. 46 (s)，163. 73 (s)，142. 8 4(s), 129. 97 (s), 127. 32 (s), 127. 54 (s), 117. 68 (s), 116. 17 (s), 114. 32(s), 69. 59 (s), 54. 43 (d,J= 16. 3Hz)，40. 76 (s)，34. 92 (s)，34. 84 (s)，30. 65 (s)，28. 33 (s)，26. 21 (s)，24. 37 ( d,J= 10. 4Hz), 23. 88 (s), 23. 41 (s), 21. 97 (s), 20. 48 (s), 19. 26 (s), 14. 11 (s).
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC44H61N205:697. 4580 ;found:697. 4576。
[0032]
[0033] 实施例5组合物抗病毒活性
[0034] (一）实验例：组合物对疱疹病毒的作用研究：
[0035] (1)细胞株与病毒株：
[0036] 人胚肾细胞（HEK293,为HSV-1、HSV-2病毒敏感细胞）购自美国Clontech公司； 单纯疱疹病毒1型（HSV-1)Sm44株、单纯疱症病毒2型（HSV-2) 333株引自中国⑶C病毒病 研究所。
[0037] (2)细胞毒性测定：
[0038] 组合物29080301030518的制备：将40mg化合物III的粉末和60mg化合物IV的 粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到l〇〇mg组合物29080301030518。
[0039] 参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺□服液含药血清对病毒抑制作用的实验研 究，南京中医药大学学报，2008 ;24(1) :25~27)的方法，将各样品以2倍比做系列稀释 (2°~5)，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀释度纵向重 复3孔（A、B、C行），平行设微孔板D的1~6孔为细胞对照，7~12孔不接种细胞为空白 对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7d，中性红染色，在540nm波长测定0D值，将实验组 与细胞对照组0D值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度 (TD5〇) 〇
[0040] (4)抑毒试验：
[0041] 参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研 究，南京中医药大学学报，2008 ;24(1) :25~27)的方法，将样品按稀释顺序（2 14)横向 接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100uL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行 加含100个TCID5。的病毒100uL作为试验组，D行补充等容量