一种组合物及其在抗病毒药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及有机合成和药物化学领域，具体设及组合物、制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 单纯瘤疹病毒1型化erpessimplexvirus，HSV-l)和单纯瘤疹病毒2型化erpes simplexvirus，HSV-2)属于瘤疹科病毒，HSV-1和HSV-2不仅引起口唇或生殖粘膜瘤疹，同 时也是引起脑炎、肝炎、全身严重感染甚至宫内感染的重要病原。
[0003] 呼吸道合胞病毒（Respirato巧Syn巧tialVirus，RSV)主要引起呼吸系统感染， 在婴幼儿、老年W及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。
[0004] 甲型流感病毒（InfluenzaAvirus,Flu-A)属于正粘科病毒，在人类和其他生物 每年都有小范围的流行，引起上呼吸系统感染。大流行时，可引起严重呼吸系统感染，甚者 引起肺炎、脑炎甚至死亡。
[0005]上述Ξ种病毒的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物 中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物 最有重要价值。
[0006] 本发明设及的化合物I是一个20 11年发表（Antone1laMaggioetal.， 2011.Artalbicacid,asesquiterpenewithanunusualskeletonfromArtemisia a化a(Asteraceae)fromSicily.Tetr址e化onLetters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 们对化合物I进行了结构修饰，获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物III和化合物IV制备了组合物，并对该组合物抗病毒活性进行了评价，其具有抗病毒活 性。
【发明内容】
[0007]本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物ΙΠ和化合物IV组成，该组合物 中化合物ΠI和化合物IV的质量百分数分别为30%和70 %。
[000引
[0009]本发明公开的组合物可W制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
[0010] 药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗病毒作用。本发明的药学上可接 受的盐具有同样的药效。
[00川组合物的体外实验表明，组合物具有很强的抗HSV-1、HSV-2、RSV和fluA的活性， 因此本发明的组合物有望被用于制备新型抗病毒药物。
[0012] W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加W限定。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1化合物Arta化icacid的制备
[0014] 化合物Arta化icacid(I)的制备方法参照AntonellaMaggio等人发表的文献(AntonellaMaggioetal.,2011.Artalbicacid,asesquiterpenewithanunusual skeletonfromArtemisiaalba(Asteraceae)fromSicily.TetrahedronLetters,52 (2011)4543-4545)的方法。
[0015]
[0016] 实施例2Arta化icacid的ο-漠乙基衍生物（II)的合成
[0017] 将化合物I(266mg，1 .OOmmol)溶于lOmL苯，向溶液中加入四下基漠化锭（ΤΒΑΒ) (0.08邑），1，2-二漠乙烧(3.760邑，20.00111111〇1)和61^的50%氨氧化钢溶液。混合物在40摄氏 度揽拌16h"l加之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烧萃取两次，合并有机相溶液。然 后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涂5次，再用无水硫酸钢干燥，最后减压浓缩去除 溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬= 100:l.〇，v/v)， 收集栋色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的栋色粉末(272mg，73%)。
[001引 1hNMR(500MHz，DMS0-d6)Sll.41(s，lH)，6.06(s，lH)，5.76(s，lH)，4.99(s，lH), 4.71(s,lH),4.56(s,lH),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,lH),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s，lH)，1.64(s，3H)，1.54(s，lH)，1.44(s，2H)，0.95(s，3H).
[0019]"CNMR(125MHz，DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s)，109.43(s)，81.86(s)，70.27(s)，57.68(s)，41.26(s)，39.07(s)，38.86(s)，35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0020]HRMS(ESI)m/z[M+扣+calcdforCl讯26化04:373.1014;found373.1017.
[0021]
[0022] 实施例3Arta化icacid的0-(赃晚基）乙基衍生物（III)的合成
[0023] 将化合物II(187mg，0.5mmo1)溶于20mL乙腊当中，向其中加入无水碳酸钟(345mg， 2.5mmo1)，舰化钟（84mg，0.5mmo1)和赃晚（852mg，1Ommo1)，混合物加热回流1Oh。反应结束 后将反应液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烧萃取Ξ次，合并有机相。依次用水和饱和食盐 水洗涂合并之后的有机相，再用无水硫酸钢干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗 品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬= 100:0.5，v/v)，收集栋色集中洗脱带并挥 去溶剂即得到化合物ΠI的栋色粉末(118.76mg，63 % )。
[0024] 1hNMR(500MHz，DMS0-d6)Sl3.93(s，lH)，S6.13(s，lH)，5.83(s，lH)，4.74(s，lH), 4.64(s,lH),3.97(s,lH),3.56(s,2H),2.71(s,lH),2.61(s,2H),2.51(dJ= 4.4Hz,4H), 2.46(s，4H)，2.16(s，lH)，1.69(s，3H)，1.55(d，J=13.5Hz，6H)，1.44(d，J=12.0Hz，3H)， 1.03(s，3H).
[002引"C NMR(125MHz，DMS0-d6)S201.95(s),175.95(s),149.17(s),148.18(s),117.10 (s)，109.45(s)，81.87(s)，67.09(s)，57.73(s)，54.60(d，J=12.4Hz)，41.31(s)，39.09 (s),38.87(s),35.72(s),30.78(s),24.60(s),23.47(s),20.46(s),18.45(s).
[0026] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22出6N〇4:378.2644;found:378.2639。
[0027]
[0028] 实施例4Arta化icacid的0-(吗嘟基）乙基衍生物（IV)的合成
[0029] 将化合物II(187mg，0.5mmo1)溶于20mL乙腊当中，向其中加入无水碳酸钟(345mg， 2.5mmo1)，舰化钟（84mg，0.5mmo1)和吗嘟（1742mg，20mmo1)，混合物加热回流化。反应结束 后将反应液倒入30mL冰水中，用等量二氯甲烧萃取Ξ次，合并有机相。依次用水和饱和食盐 水洗涂合并之后的有机相，再用无水硫酸钢干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗 品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬= 100:0.5，v/v)，收集栋色集中洗脱带并挥 去溶剂即得到化合物IV的栋色粉末(108.Omg，57% )。
[0030] 1hNMR(500MHz，DMS0-d6)Sl6.75(s，lH)，S6.13(dt，J=4.0，1.9Hz，lH)，5.83(dt, J= 3.9，1.8Hz，lH)，4.79-4.68(m，2H)，4.68-4.59(m，lH)，3.58(dt，J=15.2,8.1Hz，6H), 2.79-2.38(m，llH)，2.03(ddJ= 24.7，17.細z，lH)，1.70(tJ= 2.0Hz，3H)，1.50(dddJ= 20.4，17.8,4.5Hz，3H)，1.02(s，3H).
[003。"CNMR(125MHz，DMS0-d6)S201.95(s),175.95(s),149.18(s),148.19(s),117.12 (s)，109.45(s)，81.88(s)，67.10(s)，66.88(s)，57.72(s)，54.57(s)，53.02(s)，41.31(s), 39.09(s),38.90(s),35.72(s),30.78(s),20.47(s),18.46(s).
[0032]HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21出4N〇5:380.2437;found:380.2431。
[0034]实施例5组合物抗病毒活性
[0035]( - )实验例:组合物对瘤疹病毒的作用研究：
[0036] (1)细胞株与病毒株：
[0037] 人胚肾细胞化EK293，为HSV-1、HSV-2病毒敏感细胞)购自美国Clontech公司；单纯 瘤疹病毒1型化SV-1)Sm44株、单纯瘤症病毒2型化SV-2) 333株引自中国CDC病毒病研究所。 [003引（2)细胞毒性测定：
[0039] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的30mg化合物III的粉末和研磨之后过200 目网的70mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用满轮揽拌仪混合即得到lOOmg组合物， 使用时用水溶解运lOOmg的组合物即得到组合物的溶液。
[0040]参照文献(汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研 究，南京中医药大学学报，2008;24(1):25~27)的方法，将各样品^2倍比做系列稀释（2° ~5)，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的肥K293上，每孔lOOuL，每稀释度纵向重复3孔 (A、B、C行），平行设微孔板D的1~6孔为细胞对照，7~12孔不接种细胞为空白对照，显微镜 下每日观察CPE，连续观察7d，中性红染色，在540nm波长测定0D值，将实验组与细胞对照组 0D值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度(TDso)。
[0041] (3)抑毒试验：
[0042]参照文献(汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研 究，南京中医药大学学报，2008;24(1):25~27)的方法，将样品按稀释顺序化3^4)横向接 种于96板孔中的单层细胞上，每孔lOOuL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100 个TCIDso的病毒lOOuL作为试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设 F行作为病毒对照，E行的1~12作为细胞对照。37°C、5 %C〇2培养，每日观察CPE，连续观察 4d。病毒对照出现90%W上WE时，加1 %中性红染色，用酶标仪在波长54化m波长读取A值， 各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用Ree