计柱状图；其中，服为心脏质量， BW为体重，LW为肺脏总量，TL为胫骨长度（*:p< 0.05 vs野生型Sham组，#:p< 0.05 vs 野生型AB组)。
[0017] 图2是野生型小鼠（WT)和ABINl基因敲除小鼠（ABINl-KO)AB手术4周后心室横 截面以及心脏组织HE染色、WGA染色和心肌细胞横截面积统计柱状图（* :p < 0. 05 vs野 生型Sham组，# :p < 0. 05 vs野生型AB组）。
[0018] 图3是野生型小鼠（WT)和ABINl基因敲除小鼠（ABINl-KO)AB手术4周后心脏组 织天狼星红染色图。
[0019] 图4是野生型小鼠（WT)和ABINl基因敲除小鼠（ABINl-KO)AB手术4周后心功能 检测结果的统计柱状图；FS为短轴缩短率，EF为射血分数，LVEDd为左室舒张末期内径（* : p < 0. 05 vs 野生型 Sham 组，# :p < 0. 05 vs 野生型 AB 组）。
[0020] 图5是NTG和TG小鼠 AB手术4周后Hff/BW、LW/BW及HW/TL的统计柱状图；其中， Hff为心脏质量，BW为体重，LW为肺脏总量，TL为胫骨长度（* :p < 0. 05 vs NTG Sham组， # :p < 0· 05 vs NTG AB 组）。
[0021] 图6是NTG和TG小鼠 AB手术4周后心室横截面以及心脏组织HE染色、WGA染 色和心肌细胞横截面积统计柱状图（* Φ < 0. 05 vs NTG Sham组，# :p < 0. 05 vs NTG AB 组)。
[0022] 图7是NTG和TG小鼠 AB手术4周后心脏组织天狼星红染色图。
[0023] 图8是NTG和TG小鼠 AB手术4周后心功能检测结果的统计柱状图；FS为短轴缩短 率，EF为射血分数，LVEDd为左室舒张末期内径（* :p < 0. 05 vs NTG Sham组，# :p < 0. 05 vs NTG AB 组）。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0025] 实验用动物及饲养 实验动物：选用8-10周龄、体重在23. 5-27. 5g，背景为雄性C57BL/6的野生型小鼠 (WT)、全身性ABINl基因敲除小鼠（ABIN1-K0)、心脏特异性ABINl转基因小鼠（TG)及非转 基因小鼠（NTG，同窝对照非转基因小鼠）为实验对象。
[0026] (1)全身性ABINl基因敲除小鼠的构建： 利用CRISPR-Cas9技术构建全身性ABINl基因敲除小鼠。首先，通过在线CRISPR设计 工具（http://crispr. mit. edu)预测小鼠 ABINl的引导序列，设计2条单链oligo : 〇Ii goI : TAGGCAGTGCTGGTAGCAGGATGTACC， 〇1igo2 ：AAACGGTACATCCTGCTACCAGCACTG〇
[0027] oligol和oligo2退火形成双链DNA，将双链DNA连入经BsaI酶切的pUC57-sgRNA (Addgene 51132)构建 sgRNA 表达载体。
[0028] 以上述构建的表达载体为模板，使用如下引物通过PCR扩增含有T7启动子及引导 序列的DNA片段： Forward primer ：GATCCCTAATACGACTCACTATAG, Reverse primer ：AAAAAAAGCACCGACTCGGT〇
[0029] 以所扩增的PCR产物为模板使用MEGAshortscript Kit (Ambion，AM1354)进行体 外转录；Cas9 质粒（Addgene 44758)通过 T7 Ultra kit (Ambion，Aml345)进行转录。将转 录得到的 Cas9 和 sgRNA 的 mRNA 使用 miRNeasy Micro Kit (Qiaen，217084)纯化后，通过 FemtoJet 5247显微注射系统注射入野生型C57BL/6小鼠的单细胞受精卵内。选取经显微 注射后存活的受精卵，将其移植到健康雌鼠输卵管中，经过21天妊娠之后得到FO代小鼠。
[0030] Fl代及F2代小鼠通过PCR鉴定，野生型小鼠包含一段长139bp的DNA序列，而突 变小鼠（ABIN1基因敲除小鼠)含有122bp的DNA序列，最终蛋白产物通过western blot进 行检测鉴定。其中，PCR鉴定引物如下： ABINl-F :5' -CAGGACAGGATACAAAGGTCCA-3'， ABINl-R :5' -ATTGGACGGAGATTTGGAGGC-3'。
[0031] 实验所用小鼠为突变体纯合子。
[0032] (2)心脏特异性ABINl转基因小鼠的构建： 以小鼠 ABINl基因 cDNA(复能基因，MFL01306)为模板，用如下引物PCR扩增小鼠 ABINl 全长基因（NCBI，ABINl mus，GENE ID :57783): 上游引物：TGCTCTAGAGCCACCATGGAAGGGAGAGGACCCTAC， 下游引物：TGCTCTAGATCACTGGGGCCCATCAC。
[0033] 扩增的 ABINl 全长基因与 pCAG-loxP-CAT-loxP 质粒（pCAG-loxP-CAT-loxP 质粒 由北京协和医学院基础学院杨青林老师提供，制备过程参见文献：Kim T，Zhelyabovska 0, Liu J, et al. Generation of an Inducible, Cardiomyocyte-Specific Transgenic Mouse Model with PPAR b/d Overexpression[J]. Peroxisome Proliferator-Activated Receptors (PPARs), 57.)经 XbaI(NEB，# R0145L)酶切并连接， 形成 pCAG-loxP-CAT-loxP-ABINl-hGHpA 载体（CAG (chicken beta-actin)-CAT (chloramph enicol acetyltransferase)-ABINl-hGHpA)，将构建的质粒通过显微注射系统注射入野生 型C57BL/6小鼠的单细胞受精卵内，该受精卵移植入健康雌鼠中，发育得到FO代小鼠。将 得到的FO代小鼠与a -MHC-Cre小鼠杂交，并通过他莫昔芬诱导（他莫昔芬80mg/kg/天， 腹腔注射，连续刺激5天）得到心脏特异性ABINl转基因老鼠（上述的转基因小鼠参照下 述文献制备：Jiang DS, Bian ZY, Zhang Y, Zhang SM, Liu Y, Zhang R et al. Role of interferon regulatory factor 4 in the regulation of pathological cardiac hypertrophy. Hypertension 2013; 61:1193-1202. )〇
[0034] 饲养环境：SPF级实验动物中心，SPF级大小鼠饲料购自北京华阜康生物科技有限 公司。饲养条件：室温在22-24°C之间，湿度在40-70%之间，明暗交替照明时间为12h，自由 饮水摄食。
[0035] 实施例1小鼠心肌肥厚模型的建立 采用主动脉弓缩窄手术（AB)建立小鼠心肌肥厚模型，模型操作流程如下： 1. 1动物选择 选用8-10周龄、体重在23. 5-27. 5g的野生型小鼠（WT)、ABINl基因敲除小鼠 (ABIN1-K0)、心脏特异性ABINl转基因小鼠（ABINl-TG)及非转基因小鼠（NTG)各分成假手 术组（sham)和AB术心肌肥厚模型组，即WT sham组、WT AB组，ABIN1-K0 sham组、ABIN1-K0 AB 组，ABINl-TG sham 组、ABINl-TG AB 组，NTG sham 组、NTG AB 组，每组 10 只小鼠。
[0036] 1. 2术前准备 (1)麻醉：先给小鼠称重，按照90mg/kg体重计算所需麻药（3%戊巴比妥钠）量，通过腹 腔注射，并记录注射时间点。夹尾、夹趾无明显反应且小鼠状态良好为麻醉成功标准(一般 注射后约IOmin无明显反应，以麻醉后约50min小鼠夹趾有反应，麻醉后30min左右为最佳 手术时间)。
[0037] (2)术区准备：将小鼠左胸部、左侧胸部及左前肢腋下的皮肤去毛。剃毛后用湿纱 布擦拭术区去除鼠毛，以不影响手术视野为宜。
[0038] (3)气管插管：用橡皮筋将小鼠上门齿固定于V形板斜面上，并迅速将气管插管经 声门准确插入气管内，随后右侧卧位置于加热垫上(加热垫需提前预热)，然后将气管插管 与呼吸机连接，固定小鼠。若小鼠的胸廓起伏与呼吸机频率一致，说明气管插管成功。
[0039] 1. 3主动脉弓缩窄术（AB) AB术心肌肥厚模型组：取右侧卧位，小鼠左前肢置于右前肢上方，并用医用胶带将两 前肢固定。右胸部下方垫入棉签，抬高胸廓，依次用碘酒及体积分数为75%酒精对手术区域 皮肤消毒。左手持眼科镊将左胸部皮肤捏起，右手持眼科剪剪开皮肤约lcm，依次分离肌肉 及软组织，于第2-3肋水平打开胸腔，用棉签稍拨开左肺，游离主动脉弓降支，将7-0手术缝 线穿过血管，并在血管上方平行放置一段26G (25. 0-27. 5g小鼠）或者27G (23. 5-25. Og) 注射器针头，将血管及针头一起结扎好，再抽出针头即可达到相应程度的血管缩窄。结扎完 毕后依次缝合，关闭胸腔，用注射器从缝口处插入胸腔并抽出Icc气体以恢复胸腔内负压， 拔出注射器后迅速缝合皮肤切口。
[0040] 假手术组（Sham)在游离出主动脉降支后只穿线不结扎，其余步骤同AB术心肌肥 厚模型组。
[0041] 1.4术后护理 手术中主动脉弓降支结扎后，待小鼠出现自主呼吸、夹趾出现强烈反应，拔出气管插 管，并将小鼠放入装有高压灭菌过的垫料、饲料和饮用水的饲养笼内，于饲养室继续饲养观 察。术后4周分别进行各项指标(心肌肥厚及纤维化，心功能）的检测。
[0042] 实施例2心肌肥厚模型小鼠心肌肥厚及纤维化检测 1. 取材 (1)前期工作：预先准备装有20mL的体积分数10%甲醛的尿杯，并贴好标签(小鼠编号、 组别、手术类型及取材日期)。将倒满质量分数10% KCl溶液的培养皿置于取材处。打开分 析天平，调零备用。再称重