2w后的生长良好无坏死的恶性肿瘤组织，用生理 盐水冲洗后剪碎，经0. 25%胰蛋白酶室温下消化5min，过300目尼龙网制成小鼠 Lewis肺 癌无菌单细胞悬液，用生理盐水调整细胞浓度至IX l〇VmL ;台盼蓝拒染实验示：活细胞比 例大于95% ;取36只实验小鼠，将上述细胞悬液接种于小鼠右腋窝皮下（0. 2mL/只）。分 为3组，雌雄各半，同时进行给药，每天1次，连续给药2w。
[0203] d)每4天称重1次，给药时按最新体重执行。接种后第14天起，游标卡尺测量移 植瘤最长径和最短径，计算体积。处死裸鼠，取皮下肿瘤，称瘤重。
[0204] e)测定指标：
[0205] 计算体积，测瘤重、计算抑瘤率。
[0206] f)结果：
[0207] 本实验所有裸鼠均存活，成瘤23只，成瘤率76. 7%。NS对照组和替加氟组移植瘤 生长明显快于其它组。本发明药物治疗组与NS对照组有显著差异，替加氟组与NS对照组 比较在瘤体积及瘤重上亦有差异。如下表13所示。
[0208] 表13凋亡指数在各组小鼠 Lewis肺癌细胞中的表达(1:土 S:):
[0210] 注明：与NS对照组比较* :Ρ〈0· 05。
[0211] 采用实施例2的药物，结果如下:
[0212] 本实验所有裸鼠均存活，成瘤20只，成瘤率66. 7%。NS对照组和替加氟组移植瘤 生长明显快于其它组。本发明药物治疗组与NS对照组有显著差异，替加氟组与NS对照组 比较在瘤体积及瘤重上亦有差异。如下表13-1所示。
[0213] 表13-1凋亡指数在各组小鼠 Lewis肺癌细胞中的表达（|土s)
[0215] 注明：与NS对照组比较* :P〈0. 05。
[0216] 实施例7
[0217] 体外实验：
[0218] 1.实验方法（采用实施例1的药物）
[0219] 1.1含药血清的制备
[0220] 取正常SD大鼠30只，雄鼠，体重300±20g，随机分为六组，分别为本发明药物低、 中、高剂量组、顺铂组、本发明药物联合顺铂组、〇. 9%氯化钠溶液对照组，每组5只。本发 明药物给药剂量低、中、高组分别灌胃含生药1. 125、2. 25、4. 5g/ml的药液2ml，每日2次； 顺铂组腹腔注射4mg/kg，每日1次；本发明药物联合顺铂组，灌胃2. 25g/ml生药2ml，每日 2次，腹腔注射顺铂4mg/kg，每日1次；NS组灌胃2ml，每日2次；各组均连续用药3天，末 次给药2h后丙戊酸钠腹腔注射麻醉，无菌条件下腹主动脉采血，静置3h，3000r/min，离心 20min，取上清液，同组血清混合，56°C灭活30min，0. 22 μ m过滤除菌，-20°C保存备用。
[0221] 1. 2含药血清对Lewis肺癌细胞、肝癌Η印G-2细胞、胃癌SGC-7901细胞增殖的影 响
[0222] 取对数期生长期的细胞以1. 0X105/ml接种于96孔培养板中，共6组，分别为本发 明药物高、中、低剂量组、顺铂组、本发明药物联合顺铂组、NS空白对照组，每组设5个复孔， 每孔100ul ;24h后弃培养液，每组分别加入本发明药物高、中、低剂量、顺铂组、本发明药物 联合顺铂组、NS空白对照含药血清的培养液，每孔lOOul，其中含药血清每孔10ul ;分别于 培养24h、48h和72h时，每孔加入20ul MTT (5mg/ml)，培养4h，弃上清液，每孔加入150ul DMS0,摇床振荡lOmin，待沉淀充分溶解后，上酶标仪测490nm波长下3个时间点每孔吸光度 值（0D值），并计算细胞增殖抑制率：增殖抑制率=(对照组0D值-实验组0D值）/对照 组0D值X 100%。实验在同一条件下重复3次。
[0223] 1. 3含药血清对Lewis肺癌细胞、肝癌Η印G-2细胞、胃癌SGC-7901细胞凋亡的影 响
[0224] 取对数生长期细胞，调整细胞密度至（1~2) X 105ml，以1ml接种于6孔板。37°C、 5% 0)2的培养箱内培养24h后，弃去培养液，分别加入本发明药物低、中、高剂量组、顺铂 组、本发明药物联合顺铂组、NS空白组含药血清的培养液，分别干预24、48和72h，用不含 EDTA的胰酶消化并用预冷的磷酸盐缓冲液（PBS)冲洗一次，离心收集细胞。按照Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒说明书进行操作：Binding Buffer (1:4) 250ul重悬细胞， 调整细胞密度为lXl〇6/ml。取100ul的细胞悬液于5ml流式管中，加入5ul Annexin V-FITC和10ul 20ug/ml的碘化丙啶（PI)，混匀后室温避光培养15min，然后在反应管中加 入400ul PBS，上流式细胞仪检测细胞凋亡率。
[0225] 1. 4统计方法
[0226] 应用SPSS 11. 5统计软件进行数据处理，所有数据采用t± S表示，组间差异比较 采用方差分析。以P< 0.05为差异有统计学意义。
[0227] 2.结果
[0228] 2. 1本发明药物含药血清对Lewis肺癌细胞增殖的影响
[0229] 本发明药物血清组0D值显著低于NS对照组（P〈0. 05)，本发明药物高、中、低剂量 组间比较，随浓度增高，0D值降低（P〈0. 05);本发明药物联合顺铂对细胞的增殖抑制作用 高于其他各组；本发明药物各剂量组对细胞的增殖抑制作用呈时间依赖性，作用72h时，抑 制作用最强。数据如下表14:
[0230] 表14各组含药血清对Lewis肺癌细胞增殖的影响（Y土 s η = 20)
[0233] 注明：与NS空白组比较* :P〈0. 05。增殖抑制率：IR。
[0234] 2. 2本发明药物含药血清对Lewis肺癌细胞凋亡的影响
[0235] 实验结果显示：本发明药物低、中、高组对Lewis肺癌细胞凋亡率高于NS对照组 (P < 0. 05)，并随剂量增加，凋亡率升高；本发明药物联合顺铂对细胞的凋亡率的影响高于 其他各组；本发明药物各剂量组对细胞的凋亡率呈时间依赖性，而顺铂组及本发明药物联 合顺铂组对细胞作用72h时，细胞凋亡率下降。数据如下表15 :
[0236] 表15各组含药血清对Lewis肺癌细胞凋亡率的影响（?土 S )
[0238] 注明：与NS空白组比较* :P〈0. 05。
[0239] 2. 3本发明药物含药血清对肝癌!fepG-2细胞增殖、凋亡的影响
[0240] 本发明药物含药血清对肝癌Η印G-2细胞增殖的抑制作用明显，也能促进细胞凋 亡，与NS组比较差异均有统计学意义（Ρ〈0. 05)。本发明药物联合顺铂对细胞的抑制增殖作 用和促进凋亡作用均高于其他各组。如表16。
[0241] 表16各组含药血清对肝癌Η印G-2细胞增殖的影响（?土 s , η = 15)
[0244] 注明：与NS空白组比较* :P〈0. 05。
[0245] 2. 4本发明药物含药血清对胃癌细胞SGC-7901的影响
[0246] 本发明药物含药血清处理胃癌细胞SGC-7901后，对细胞增殖有明显抑制作用，且 有明显的促凋亡作用。如表17。
[0247] 表17各组含药血清对胃癌细胞SGC-7901增殖与凋亡的影响?: ?土 S )
[0249] 注明：与NS空白组比较* :Ρ〈0· 05。
[0250] 3.小结
[0251] 体外实验结果表明，本发明药物对多种肿瘤细胞（Lewis肺癌细胞、肝癌Η印G-2细 胞、胃癌细胞SGC-7901)体外培养具有一定的抑制增殖作用和促进凋亡作用，说明本发明 药物具有抗恶性肿瘤作用。
【主权项】
1. 一种中药组合物，其特征在于，由如下重量份的原料制备的： 莪术5~30重量份、肿节风5~30重量份、紫草5~30重量份、赤芍5~30重量份、 土茯苓5~60重量份、乌梅5~30重量份、甘草3~25重量份、当归3~25重量份、川考 3~25重量份、生地5~60重量份。2. -种中药组合物，其特征在于，由如下重量份的原料制备的： 莪术10~20重量份、肿节风5~10重量份、紫草5~20重量份、赤苟15~30重量 份、土茯苓20~60重量份、乌梅20~30重量份、甘草10~25重量份、当归10~20重量 份、川考3~10重量份、生地20~60重量份。3. 中药组合物，其特征在于，由如下重量份的原料制备的： 莪术10重量份、肿节风20重量份、紫草20重量份、赤苟15重量份、土茯苳20重量份、 乌梅20重量份、甘草10重量份、当归10重量份、川；10重量份、生地20重量份。4. 中药制剂，其特征在于，包括治疗有效量的权利要求1、2或3所述的中药组合物和医 药学上可接受的载体。5. 根据权利要求4所述的中药制剂，其特征在于，包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、滴 丸剂、散剂、煎膏剂、糖衆剂、贴膏剂、合剂、酒剂、羾剂、锭剂、流浸膏剂与没膏剂、膏药、凝胶 剂、软膏剂、茶剂、洗剂、涂膜剂、搽剂、气雾剂或喷雾剂。6. 权利要求1、2或3所述的中药组合物在制备治疗银肩病药物中的应用。7. 权利要求1、2或3所述的中药组合物在制备治疗银肩病性关节炎药物中的应用。8. 权利要求1、2或3所述的中药组合物在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。9. 权利要求1、2或3所述的中药组合物在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用。10. 权利要求1、2或3所述的中药组合物的应用，其特征在于，通过口服给药、注射给 药、舌下给药、直肠给药、阴道给药、经皮给药、喷雾吸入途径施加于需要治疗的患者，剂量 为10~350克/天。
【专利摘要】本发明公开了一种中药组合物及其应用，所述的中药组合物，由如下重量份的原料制备的：莪术5～30重量份、肿节风5～30重量份、紫草5～30重量份、赤芍5～30重量份、土茯苓5～60重量份、乌梅5～30重量份、甘草3～25重量份、当归3～25重量份、川芎3～25重量份、生地5～60重量份。上述中药组合物，对银屑病、银屑病性关节炎、类风湿性关节炎或恶性肿瘤具有显著的治疗效果，而且毒性较小。本发明同时具有清热解毒、活血化瘀的作用，用于治疗银屑病，疗效确切；具有祛风清热、除湿消肿、活血通络，用于治疗银屑病性关节炎以及类风湿性关节炎，疗效确切；本发明还有利湿清热、活血化瘀、解毒散结的作用，用于治疗恶性肿瘤，疗效确切。
【IPC分类】A61P29/00, A61P19/02, A61P35/00, A61P17/06, A61K36/9066
【公开号】CN105233150
【申请号】CN201510641176
【发明人】禤国维, 卢传坚
【申请人】广东省中医院
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年9月29日