加入生理盐水，进行勾楽，每次勾楽4min，共4次，每次间隔5min，温度控制在23。。；
[0036](3)将步骤⑵得到的匀浆经4次数反复冻融，冷冻温度_25°C，融化温度20°C，并在第4次融化时用氢氧化钾溶液调节pH值至7，木瓜蛋白酶加入量占匀浆质量的0.6 %，反应时间4h，恒温23°C进行反应一段时间后，经离心机离心17min，转速为2800r/min，取上清液；
[0037](4)将步骤(3)得到的上清液用盐酸调pH值至5，冷冻离心机的转速在2800r/min，离心27min。弃去残渣，取上清液；
[0038](5)将步骤(4)得到的上清液以氢氧化钾溶液将pH值调至为7，先用澄清滤板抽滤，将得到的滤液经截留分子量为8000d的超滤膜超滤，，超滤后的转移因子提取液在无菌环境下，用0.22 μ m的微孔滤膜过滤除菌后，分装入灭菌好的器具中速冻，同时取10ml的转移因子溶液经蛋白定性反应无沉淀产生，符合标准。取1ml转移因子溶液稀释后经紫外光谱分析A26Q/A2S。值为3.69，符合国家标准(A 260/A280^ 1.8)。经HPLC检测杂质含量少。用T细胞活性测定法测其活性，活性为24.8 %。无菌试验、安全试验、过敏试验按照《中国生物制品规程》检测均符合要求；
[0039](6)将步骤(5)检测合格的转移因子提取液取出，装盘送入冻干箱中进行冻干，得到转移因子冻干粉，称重2.5g;
[0040](7)将步骤(6)得到的转移因子冻干粉与78.5g的淀粉，15g的微晶纤维素，4g的二氧化硅辅料混合，其中二氧化硅和微晶纤维素过80目筛，过筛后外观无异物后按等量递增法与冻干粉在洁净盘内用手工混匀，每次混合时间5min。当混合物总重彡10kg时，直接加入多向运动混合机中混匀，混合2h ;
[0041](8)将步骤(7)得到混匀物加入料斗中，将空心胶囊盛入容器内，打开送囊开关，进行填充即可，将所制得的胶囊按照国家食品药品监督管理局颁发的转移因子胶囊国家药品标准WS1-XG-039-2 000进行检测，结果均符合规定。
[0042]实施例3
[0043](1)取新鲜的脾脏，用纯化水冲洗三次，去脂肪、筋膜等杂质，沥干，用绞肉机绞碎成肉糜状，称重为5.66kg ；
[0044](2)将步骤(1)中的肉糜放入匀浆机内，按肉糜匀浆的质量与生理盐水体积比为1:1.8kg/L的比例加入生理盐水，进行勾楽，每次勾楽3min，共5次，每次间隔4min，温度控制在25 °C ；
[0045](3)将步骤⑵得到的匀浆经5次数反复冻融，冷冻温度_20°C，融化温度15°C，并在第5次融化时以氢氧化钙溶液调节pH值至7.5，木瓜蛋白酶加入量占匀浆质量的0.8%，反应时间5h，恒温25°C进行反应一段时间后，经离心机离心15min，转速为3000r/min，取上清液；
[0046](4)将步骤(3)得到的上清液用盐酸调pH值至5.5，冷冻离心机的转速在3000r/min，离心25min。弃去残渣，取上清液；
[0047](5)将步骤(4)得到的上清液以氢氧化钙溶液将pH值调至为7.5，先用澄清滤板抽滤，将得到的滤液经截留分子量为8000d的超滤膜超滤，，超滤后的转移因子提取液在无菌环境下，用0.24 μ m的微孔滤膜过滤除菌后，分装入灭菌好的器具中速冻，同时取10ml的转移因子溶液经蛋白定性反应无沉淀产生，符合标准。取1ml转移因子溶液稀释后经紫外光谱分析A26Q/A2S。值为3.62，符合国家标准(A26Q/A2S。彡1.8)。经HPLC检测杂质含量少。用T细胞活性测定法测其活性，活性为23.5%。无菌试验、安全试验、过敏试验按照《中国生物制品规程》检测均符合要求；
[0048](6)将步骤(5)检测合格的转移因子提取液取出，装盘送入冻干箱中进行冻干，得到转移因子冻干粉，称重2.8g;
[0049](7)将步骤(6)得到的转移因子冻干粉与72.2g的淀粉，20g的微晶纤维素，5g的二氧化硅辅料混合，其中二氧化硅和微晶纤维素分别过80目筛，过筛后外观无异物后按等量递增法与冻干粉在洁净盘内用手工混匀，每次混合时间6min。当混合物总重彡10kg时，直接加入多向运动混合机中混匀，混合2.5h。
[0050](8)将步骤(7)得到混匀物加入料斗中，将空心胶囊盛入容器内，打开送囊开关，进行填充即可，将所制得的胶囊按照国家食品药品监督管理局颁发的转移因子胶囊国家药品标准WS1-XG-039-2 000进行检测，结果均符合规定。
【主权项】
1.一种制备转移因子胶囊的工艺，其具体步骤如下: (1)取新鲜的脾脏，冲洗干净，沥干，绞碎成肉糜状，称重； (2)将步骤(1)中的肉糜放入匀浆机内，加入生理盐水，进行匀浆； (3)将步骤(2)得到的匀浆冻融后，用碱调节pH值至6.5?7.5，加入木瓜蛋白酶，恒温进行反应后，离心取上清液； (4)将步骤(3)得到的上清液用酸调节pH值至4.5?5.5，然后在冷冻离心机内离心，弃去残渣，取上清液； (5)将步骤(4)得到的上清液用碱调节pH值调至6.5?7.5，先用澄清滤板抽滤，将得到的滤液经超滤膜进行超滤，在无菌环境下，用微孔滤膜过滤除菌后，分装入灭菌好的器具中速冻； (6)将步骤(5)速冻后的溶液送入冻干箱中进行冻干，得到转移因子冻干粉，称重； (7)将步骤(6)得到的转移因子冻干粉与辅料淀粉、微晶纤维素和二氧化硅混合均匀； (8)将步骤(7)得到混匀物加入料斗中，将空心胶囊盛入容器内，打开送囊开关，进行填充可。2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(2)中按照脾脏肉糜的质量与生理盐水的体积比为1: (1.4?1.8) kg/L ;匀浆次数为3?5次；每次匀浆3?5min ;每次间隔4?6min ;匀浆温度控制在20?25°C。3.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(3)中冻融的次数为3?5次；冷冻温度为-20?-30°C ;融化温度15?25°C ;木瓜蛋白酶的加入量占匀浆质量的0.4%?0.8% ;恒温反应温度控制在20?25°C ;反应时间3?5h ;离心时离心机的转速在2500?3000r/min，离心时间 15 ?20min。4.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(4)中所述的酸味盐酸或醋酸；冷冻离心机的转速在2500?3000r/min ;离心时间25?30min。5.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(3)和(5)所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙。6.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(5)所述的超滤膜的截留分子量为10000?8000d ;所述的微孔滤膜的孔径为0.20?0.24 μ m。7.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(7)中所述的辅料二氧化硅和微晶纤维素均过70?80目筛。8.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(7)中按转移因子冻干粉、辅料淀粉、微晶纤维素和二氧化硅的混合物每100重量份计，其中转移因子冻干粉2.2?2.8重量份，淀粉72.2?84.8重量份，微晶纤维素10?20重量份，二氧化娃3?5重量份。
【专利摘要】本发明涉及一种制备转移因子胶囊的工艺，其具体步骤为：将脾脏绞碎、低温匀浆、冻融、加酶反应、pH调节-超滤、过滤除菌冻干后得到转移因子冻干粉，以淀粉和微晶纤维素以及微量的二氧化硅作为辅料混合均匀，填充胶囊。虽然目前有许多分离提取转移因子的方法，但此工艺极大简化了转移因子的分离提取过程，所制得的转移因子生物活性高、产量多，其胶囊制剂性质稳定，缩短了生产周期、节约了成本、操作简单、适合工业化生产。
【IPC分类】A61K35/26, A61K35/17, A61K47/04, A61K38/00, A61P37/04, A61K9/48, A61K47/36, A61K47/38
【公开号】CN105362250
【申请号】CN201510782710
【发明人】李栋芸, 沈飞, 陈健, 郭倩, 颜正, 窦文轩, 朱小龙
【申请人】南京新百药业有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年11月16日