1)来分离上述获得的粗生成物，从而获得0. 39g的21-0-当归酰 茶皂醇E3。
[0054][实施例3]通过碱水解方法来制备21-0-当归酰茶皂醇E3
[0055] [3-1]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于无水吡啶 (500ml)中，在此加入甲醇钠（sodiummethoxide)(粉末，10g)，并在油浴中回流反应8小 时，使结合于绿茶种子粗皂苷上的糖水解。将反应液减压浓缩去除溶剂，用精制水洗涤3次 后过滤，从而获得过滤物，在残渣中加入乙醇（200ml)并搅拌3次，然后通过过滤来去除沉 淀的盐。将过滤的滤液减压浓缩获得粗生成物，然后利用硅胶柱层析法（氯仿：甲醇=8 : 1~3 :1)来分离上述获得的粗生成物，从而获得0. 35g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0056] [3-2]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于20倍（v/w)的 1MNa0H-20%水溶液（v/v)中，并在80°C下回流反应8小时，使结合于绿茶种子粗皂苷上的 糖水解。将反应液减压浓缩去除溶剂，用精制水洗涤3次后过滤，从而获得过滤物，在残渣 中加入乙醇（200ml)并搅拌3次，然后通过过滤来去除沉淀的盐。将过滤的滤液减压浓缩 获得粗生成物，然后利用硅胶柱层析（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成 物，从而获得0. 31g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0057] [3-3]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于20倍（v/w)的 1MK0H-20%水溶液（v/v)中，并在80°C下回流反应8小时，使结合于绿茶种子粗皂苷上的 糖水解。将反应液减压浓缩去除溶剂，用精制水洗涤3次后过滤，从而获得过滤物，在残渣 中加入乙醇（200ml)搅拌3次，然后通过过滤来去除沉淀的盐。将过滤的滤液减压浓缩获 得粗生成物，然后利用硅胶柱层析法（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成 物，从而获得0. 25g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0058] [实施例4]通过酶分解方法来制备21-0-当归酰茶皂醇E3
[0059] [4-1]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于100ml的0·1M醋 酸缓冲溶液（pH4. 5)，在此加入2. 5g酶（0. 5g橘皮苷酶、0. 5g柚皮苷酶、0. 5g纤维素酶、 〇. 2g的β-葡糖醛酸糖苷酶、0. 5g的β-半乳糖苷酶、0. 3g淀粉葡糖苷酶，西格玛公司制 造），并在37°C水浴中搅拌48小时，同时通过薄层色谱法来周期性地进行确认，待绿茶皂苷 消失，在热水（80~100°C)中加热10分钟并终止反应。将反应液减压浓缩去除溶剂，在 残渣中加入乙醇（200ml)并搅拌3次后，通过过滤来去除沉淀物。将过滤的滤液减压浓缩 获得粗生成物之后，利用硅胶柱层析（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成 物，从而获得1. 02g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0060] [4-2]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于100ml的0.1M醋 酸缓冲溶液（pH6. 5)，在此加入3. 5g酶（lg葡糖苷酶、0. 5g阿拉伯糖苷酶、lg鼠李糖苷酶、 〇. 5g木糖苷酶、0. 5g果胶酶），并在27°C水浴中搅拌48小时，同时通过薄层色谱法来周期 性地进行确认，待绿茶皂苷消失，在热水（80~100°C)中加热10分钟并终止反应。将反应 液减压浓缩去除溶剂，在残渣中加入乙醇（200ml)并搅拌3次后，通过过滤来去除沉淀物。 将过滤的滤液减压浓缩获得粗生成物之后，利用硅胶柱层析（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来 分离上述获得的粗生成物，从而获得1. 53g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0061][实施例5]通过微生物来制备21-0-当归酰茶皂醇E3
[0062] [5-1]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于100ml的离子水 中，并在121°C下灭菌30分钟，冷却到30°C后，以相对于液体量为5~10%的量来接种预培 养的黑曲霉（Aspergillusniger)KCCM11885,并在30°C下培养5天后，利用薄层色谱法来 确认底物的消除率，待确认底物完全消失后，以5, 000~10,OOOrpm的转速来离心分离培养 液而回收的沉淀物利用蒸馏水洗涤3次，然后进行离心分离获得沉淀物。在该沉淀物中加 入乙醇（200ml)并搅拌3次后，通过过滤来去除沉淀物。将过滤的滤液减压浓缩获得粗生 成物，利用硅胶柱层析（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成物，从而获得 0. 72g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0063] [5-2]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于100ml的离子水 中，并在121°C下灭菌30分钟，冷却到27°C后，以相对于液体量为5~10%的量来接种预 培养的米根霉（Rhizopusoryzae)，并在27°C下培养5天后，利用薄层色谱法来确认底物的 消除率，待确认底物完全消失后，以5, 000~10,OOOrpm的转速来进行离心分离培养液而回 收的沉淀物利用蒸馏水洗涤3次，然后进行离心分离获得沉淀物。在该沉淀物中加入乙醇 (200ml)并搅拌3次后，通过过滤来去除沉淀物。将过滤的滤液减压浓缩获得粗生成物，利 用硅胶柱层析法（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成物，从而获得0. 92g 的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0064] [5-3]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于100ml的离子水 中，并在121°C下灭菌30分钟，冷却到27°C后，以相对于液体量为5~10%的量来接种预 培养的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis)，并在27°C下培养2天后，利用薄层色谱法来确 认底物的消除率，待确认底物完全消失后，以5, 000~10,OOOrpm的转速来离心分离培养液 而回收的沉淀物利用蒸馏水洗涤3次，然后进行离心分离获得沉淀物。在该沉淀物中加入 乙醇（200ml)并搅拌3次后，通过过滤来去除沉淀物。将过滤的滤液减压浓缩获得粗生成 物，利用硅胶柱层析法（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成物，从而获得 0. 72g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0065] [5-4]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于100ml的离子水 中，并在121°C下灭菌30分钟，冷却到27°C后，以相对于液体量为5~10 %的量来接种预培 养的肠膜明串珠菌（Leuconostocmesenteroides)，并在27°C下培养2天后，利用薄层色谱 法来确认底物的消除率，待确认底物完全消失后，以5, 000~10,OOOrpm的转速来离心分离 培养液而回收的沉淀物利用蒸馏水洗涤3次，然后进行离心分离获得沉淀物。在该沉淀物 中加入乙醇（200ml)并搅拌3次后，通过过滤来去除沉淀物。将过滤的滤液减压浓缩获得 粗生成物后，利用硅胶柱层析法（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成物， 从而获得〇. 52g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0066] [5-5]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于100ml的离子水 中，并在121°C下灭菌30分钟，冷却到27°C后，以相对于液体量为5~10 %的量来接种预培 养的长双岐杆菌（Bifidobacteriumlongum)，并在27°C下培养2天后，利用薄层色谱法来 确认底物的消除率，待确认底物完全消失后，以5, 000~10,OOOrpm的转速来离心分离培养 液而回收的沉淀物利用蒸馏水洗涤3次，然后进行离心分离获得沉淀物。在该沉淀物中加 入乙醇（200ml)并搅拌3次后，通过过滤来去除沉淀物。将过滤的滤液减压浓缩获得粗生 成物，利用硅胶柱层析法（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成物，从而获 得0. 52g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0067] [5-6]将10g的从上述实施例1中获得的绿茶种子提取物溶解于100ml的离子水 中，并在121°C下灭菌30分钟，冷却到27°C后，以相对于液体量为5~10 %的量来接种预培 养的植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum)，并在27°C下培养2天后，利用薄层色谱法来 确认底物的消除率，待确认底物完全消失后，以5, 000~10,OOOrpm的转速来离心分离培养 液而回收的沉淀物利用蒸馏水洗涤3次，然后进行离心分离获得沉淀物。在该沉淀物中加 入乙醇（200ml)并搅拌3次后，通过过滤来去除沉淀物。将过滤的滤液减压浓缩获得粗生 成物，利用硅胶柱层析法（氯仿：甲醇=8 :1~4 :1)来分离上述获得的粗生成物，从而获 得0. 42g的21-0-当归酰茶皂醇E3。
[0068] [实验例1]DPPH生成抑制试验（DPPH实验）
[0069] 使用通过