富含碳取代香叶烯基黄酮类成分的总提取物及制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然活性产物的发现与制备技术领域，尤其涉及一种从泡桐果中得到 富含碳取代香叶烯基黄酮类成分的总提取物及的制备方法和以其为原料在保健食品、化妆 品与医药方面的应用。
【背景技术】
[0002] 玄参科泡桐属（Paulownia)植物，全属共有7种，分别是白花泡桐（P. fortunei (Seem. )Hemsl ·)，毛泡桐（P· tomentosa(Thunb· )Steud·)，兰考泡桐（Ρ· elongate S.Y.Hu)， 揪叶泡桐（P.catalpifolia Gong Tong)，台湾泡桐（P.kawakamii Ito)，川泡桐 (P.fargesii Franch.)和南方泡桐（P.australis Gong Tong)，光泡桐（P.tomentosa var. tsinlingensis(Pai)Gong Tong)是毛泡桐的变种。它们的果实统称为泡桐果。除东北 北部、内蒙古、新疆北部、西藏等地区外全国均有分布，栽培或野生。
[0003] 泡桐作为一种优质木材，它不仅在工农业方面有广泛用途，同时它还是一种常用 的中草药，其花、叶、皮、根、果古时就有其药用记载。如《本草纲目》记述："桐叶主恶蚀疮著 阴，皮主五痔，杀三虫。花主傅猪疮，消肿生发。"《药性论》也言："治五淋，沐发去头风，生发 滋润"。《全国中草药汇编》载泡桐果(Fructus Paulowniae)有祛痰止咳平喘作用，中医用于 治疗慢性气管炎、气喘等。上世纪70年代，河南省防治慢性气管炎泡桐协作组曾先后在郑 州、开封、新乡和商丘等地临床观察泡桐果(煎剂、片剂、注射液)治疗哮喘和慢性支气管炎 患者950例，并对部分病例进行通宵同住观察，结果发现泡桐果可显著改善气管炎患者的 咳、痰、喘及肺部体征，总有效率为85%~95%，显效以上为45%~72% ;通过治疗前后监测 病人的心、肝、肾功能，发现泡桐果无明显的毒副作用。动物实验研究表明，泡桐花与果实的 提取物对治疗哮喘等支气管炎症具有比较好的效果，并明确植物提取物的总黄酮为活性有 效部位。
[0004] 泡桐属植物，尤其是泡桐果中富含碳取代香叶烯基黄酮类化合物，该类成分表现 出多种显著的生物活性，它们具有显著的细胞毒，抗氧化，抗病毒，抗菌，抗炎和抑制乙酰与 丁酰胆碱酯酶等生物活性。研究表明，碳取代的香叶烯基基团在以细胞为研究对象的活性 中起着决定性的作用，这可能是因为香叶烯基是一个亲脂性基团，能够提高该类化合物的 跨膜转运能力而容易进入细胞膜内部，显示其比较显著的生物活性。我们陆续开展了泡桐 果的化学成分与生理活性研究，从中发现三个新成分，并且具有比较好的抗氧化与抑制癌 细胞增殖的作用，说明这一类化合物具有比较好的利用价值。
[0005] 有关泡桐植物的利用可检索到多份专利申请，但有关从泡桐果中制备富含碳取代 香叶烯基黄酮类成分的总提取物的制备方法及其在药品、保健品或化妆品领域的应用文献 或专利申请未见报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供从泡桐果中得到的一种富含碳取代香叶烯基黄酮类成分 的植物提取物与其制备方法及在药品、保健品或化妆品领域的应用，旨在解决关于对泡桐 果提取物的文献或专利申请未见报道的问题。
[0007] 本发明的技术方案是按以下方式实现的，包括1)总提取物中的碳取代香叶烯基黄 酮类化合物的结构表征;2)泡桐果中富含碳取代香叶烯基黄酮类成分的总提取物的制备方 法;3)总提取物中碳取代香叶烯基黄酮类成分的识别;4)部分化合物的活性筛选。
[0008] 总提取物中的碳取代香叶烯基黄酮类化合物的结构表征：
[0009] 黄酮结构母核为二氢黄酮与二氢黄酮醇，香叶烯基包括多种氧化形态，碳取代香 叶烯基黄酮的结构骨架如下所示：
[0011]多种氧化形式的香叶烯基通过碳碳键取代于母核结构骨架A环的C-6或C-8位，香 叶烯基取代基团的主要结构变化如下所示，但不仅限于以下结构：
[0013] -种泡桐果中富含碳取代香叶烯基黄酮类成分的总提取物制备方法，其特征在 于，该方法利用不同有机溶剂提取与聚酰胺树脂吸附与分离纯化，该方法包括如下步骤：
[0014] 步骤一、泡桐果破碎，留取果皮;泡桐果是指采摘于泡桐属植物的成熟果实；
[0015]步骤二、粉碎果皮，过40目筛，以10倍量有机溶剂进行提取，得到有机溶剂提取物； 有机溶剂包括常用的甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷；
[0016] 用甲醇或乙醇提取，醇提取液浓缩，然后加入蒸馏水至醇浓度为60-70%，放置，待 沉淀沉降后，上清液以氯仿或二氯甲烷进行萃取，得萃取物备用；
[0017] 以乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷进行提取，提取液浓缩，得提取物备用；
[0018] 步骤三、步骤二中所得的萃取物或提取物以适量乙醇溶解，以聚酰胺树脂进行吸 附，然后分别再以20-30%与70-80%的醇溶液洗脱，收集70-80%的盐酸镁粉反应显示阳性 的醇溶液洗脱液，浓缩、干燥、得到富含碳取代香叶烯基黄酮类成分的总提取物;醇溶液是 指甲醇或乙醇的水溶液。
[0019] 总提取物中碳取代香叶烯基黄酮类成分的识别：
[0020] 对总提取物中碳取代香叶烯基黄酮类成分的识别利用了紫外图谱对照与高相液 相-质谱联用技术(HPLC-DAD-ESI-MS/MS)识别等技术。
[0021] 本发明的另一目的在于提供一种包含所述泡桐果中碳取代香叶烯基黄酮类化合 物的制备方法制备泡桐果中碳取代香叶烯基黄酮类化合物的抗氧化产品。
[0022] 本发明的另一目的在于提供一种包含所述泡桐果中碳取代香叶烯基黄酮类化合 物的制备方法制备泡桐果中碳取代香叶烯基黄酮类化合物的抗炎产品。
[0023] 本发明的另一目的在于提供一种包含所述泡桐果中碳取代香叶烯基黄酮类化合 物的制备方法制备泡桐果中碳取代香叶烯基黄酮类化合物的抗肿瘤产品。
[0024] 本发明的另一目的在于提供一种包含所述泡桐果中碳取代香叶烯基黄酮类化合 物的制备方法制备泡桐果中碳取代香叶烯基黄酮类化合物的治疗心脑血管疾病产品。
【附图说明】
[0025] 图1是本发明实施例提供的泡桐果中富含碳取代香叶烯基黄酮类成分的总提取物 制备方法流程图；
[0026]图2是本发明实施例提供的对照品diplacone(左图）与总提取物的紫外图谱（右 图）；横坐标为波长(nm)，纵坐标为吸光度(A)。
[0027]二者的紫外光谱基本一致，吸收峰都出现于235与290nm。
[0028] 图3是本发明实施例提供的总提取物的HPLC-DAD-ESI-MS/MS图谱；
[0029] 图4是本发明实施例提供的从泡桐果中分离得到的代表性化合物的分子结构图， 图中37，47，5，7-tetrahydroxy-6-[7_hydroxy-3，7-dimethyl_2(E)-0ctenyl ]flavanone (2)，diplacone(3)，paucatalinone B(4)，paucatalinone A(5)，isopaucatalinone B(6)〇
【具体实施方式】
[0030] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于 限定本发明。
[0031] 本发明的技术方案是按以下方式实现的，包括1)总提取物中的碳取代香叶烯基黄 酮类化合物的结构表征;2)泡桐果中富含碳取代香叶烯基黄酮类成分的总提取物的制备方 法;3)总提取物中碳取代香叶烯基黄酮类成分的识别;4)部分化合物的活性筛选。
[0032] 总提取物中的碳取代香叶烯基黄酮类化合物的结构表征：
[0033] 黄酮结构母核为二氢黄酮与二氢黄酮醇，香叶烯基包括多种氧化形态，碳取代香 叶烯基黄酮的结构骨架如下所示：
[0035]多种氧化形式的香叶烯基通过碳碳键取代于母核结构骨架A环的C-6或C-8位，香 叶烯基取代基团的主要结构变化如下所示，但不仅限于以下结构：
[0037] -种泡桐果中富含碳取代香叶烯基黄酮类成分的总提取物制备方法，其特征在 于，该方法利用不同有机溶剂提取与聚酰胺树脂吸附与分离纯化，该方法包括如下步骤：
[0038] S101、泡桐果破碎，留取果皮;泡桐果是指采摘于泡桐属植物的成熟果实；
[0039] S102、粉碎果皮，过40