补阳还五汤有效部位群及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，设及多种中药混合化合物的用途，具体设及一种补阳 还五汤有效部位群及其在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应用。
【背景技术】
[0002] 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)是来源于骨 髓组织中的非造血细胞，具有来源容易获取、不受伦理限制，广泛的增殖分化能力，易于 分离、培养、扩增、纯化，免疫原性弱，免疫耐受性强，体外基因转染率高，并能稳定高效的 表达外源基因等优点。因此，MSCs成为一种比较理想的种子细胞。近年来研究报道MSCs在体 内可分化成神经元样细胞，在体外，应用碱性成纤维因子(bFGF )、二琉基乙醇(BME )、二甲 基亚讽(DMSO )、下径茵酸(BHA )或表皮细胞生长因子化GF)、维甲酸(RA )等为诱导剂， 可W将大鼠和人的BMSCs诱导为神经元样细胞。MSCs取材方便，易从自体获得，回植后不 会发生免疫排斥反应;易于在体外分离、培养和扩增;体外转染率高并能稳定高效的表达外 源基因，因此是理想的种子细胞。运为神经系统损伤和退行性疾病的治疗提供了新的思路。 由于DMSO、B-琉基乙醇等化学合成品对MSCs有很强的向神经细胞诱导作用，但明显的毒 性、致崎性和致癌性限制了应用。而中药有几千年的临床经验为基础，其毒副作用相对较 小。
[0003] 中药方剂补阳还五汤临床上用于治疗缺血性卒中后遗症，现代药理学研究发现其 有调节免疫、抗炎调节脂质代谢、扩张脑血管，改善微循环、改善血流变学指标，抗凝血及抑 制血栓形成、抗自由基、神经保护等作用。在动物体内移植MSCs的同时给与补阳还五汤干预 能提高MSCs的存活率、归巢率及分化率。但中药方剂成分复杂，其发挥作用具有"多因、多 效、多祀点'的特点。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种补阳还五汤有效部位群及其在诱导骨髓间充质干细 胞向神经细胞分化中的应用，该补阳还五汤有效部位群可应用于治疗神经系统疾病药物 中。该有效部位群可促进骨髓间充质干细胞分化和诱导骨髓间充质干细胞分化成神经元样 细胞。
[0005] 既然我们在【背景技术】描述了中药方剂补阳还五汤临床上用于治疗缺血性卒中后 遗症，现代药理学研究发现其有调节免疫、抗炎调节脂质代谢、扩张脑血管，改善微循环、改 善血流变学指标，抗凝血及抑制血栓形成、抗自由基、神经保护等作用。经过发明人多年的 研究，进一步试验，发现在前期研究利用序贯法寻找补阳还五汤中各成分的LD50,使用正交 设计方法测得其最佳配伍剂量，已由补阳还五汤方中提取到各有效部位群研制成补阳还五 汤有效部位群（active principle re邑ion of Buyan邑 Huanwu decoction apr-BYHWD)，并 进一步研究发现apr-BYHWD可W在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞， 且其诱导效果优于补阳还五汤原方，于是发明人推测该有效部位群可应用于治疗神经系统 疾病药物中。
[0006] 本发明提供的一种补阳还五汤有效部位群在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞 分化中的应用，所述的补阳还五汤有效部位群为:巧类化合物、总生物碱、当归多糖、红花黄 色素和抽皮素;补阳还五汤有效部位群的制备方法步骤如下： (1) 巧类化合物和抽皮素有效部位的分离纯化:取黄巧、赤巧和地龙，加乙醇，回流提 取，过滤，得到药渣A，备用；滤液回收乙醇，调整至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，浓缩 液过大孔树脂柱吸附后，用水水洗，之后用乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得 巧类化合物和抽皮素有效部位； (2) 红花黄色素有效部位的分离提取:取桃仁和红花，加水煎煮后过滤，合并滤液，浓缩 至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，浓缩液过大孔树脂柱吸附后，用水水洗，之后用乙醇 洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，即得红花黄色素有效部位； (3) 当归多糖和总生物碱有效部位的提取:取药渣A、当归W及川号，加水煎煮过滤，得 滤液，浓缩至40-60°C下相对密度为1.02-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达到45-60%，揽拌后 静置，过滤，得沉淀B，同时滤液挥去乙醇，浓缩至40-60°C下相对密度为1.02-1.10的清膏， 加乙醇使含醇量达到80-85%，揽拌，后静置，收集沉淀物，干燥得当归多糖有效部位，分取醇 沉液，挥去乙醇，加入沉淀B溶解，加水调整至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，浓缩液过 DlOl大孔树脂柱吸附后，用水水洗，之后用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，即得总生物碱 的有效部位。
[0007] -种补阳还五汤有效部位群在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应用， 所述的补阳还五汤有效部位群为:巧类化合物、总生物碱、当归多糖、红花黄色素和抽皮素； 所述的补阳还五汤有效部位群的制备方法是： (1) 巧类化合物和抽皮素有效部位的分离纯化:取黄巧、赤巧和地龙，加乙醇渗漉提取， 收集渗滤液，药渣A备用;渗滤液回收乙醇，调整至每1ml相当于0.5-20g药材的浓缩液，浓缩 液加于聚酷胺柱顶端，依次用纯水、20%、40%、60%、80%和95%乙醇洗脱，洗脱液1001111作为一 个馈分，高效液相法监控洗脱馈分成份的动态变化，成分相似的馈分合并作为一个组分，收 集黄巧甲巧、巧药巧、抽皮素有效部位的馈分，浓缩干燥，即得巧类化合物和抽皮素有效部 位； (2) 红花黄色素和抽皮素有效部位的分离提取:取桃仁和红花，加水煎煮后过滤，合并 滤液，浓缩至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，取浓缩液加于聚酷胺柱顶端，依次用纯水、 20%、40%、60%、80%和95%乙醇洗脱，洗脱液1001111作为一个馈分，高效液相法监控洗脱馈分成 份的动态变化，收集红花黄色素、抽皮素的馈分，浓缩干燥，即得红花黄色素和抽皮素有效 部位； (3) 当归多糖和总生物碱有效部位的提取:取药渣A、当归W及川号，加水煎煮后过滤， 合并滤液，浓缩至40-60°C下相对密度为1.02-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达到45-60%，揽 拌静置后过滤，得沉淀B，同时滤液挥去乙醇，浓缩至40-60°C下相对密度为1.02-1.10的清 膏，加乙醇使含醇量达到80-85%，揽拌静置，收集沉淀物，干燥得当归多糖有效部位;另取上 述醇沉液，挥去乙醇，加入沉淀B溶解，加水调整至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，取缩 液加于聚酷胺柱顶端，依次用纯水、20%、40%、60%、80%和95%乙醇洗脱，洗脱液1001111作为一 个馈分，高效液相法监控洗脱馈分成份的动态变化，成分相似的馈分合并作为一个组分，收 集川号嗦、阿魏酸有效部位的馈分，浓缩干燥，即得总生物碱有效部位。
[0008] 上述的补阳还五汤有效部位群在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应 用，所述的补阳还五汤有效部位群的制备所用的药材的种类及含量为:黄巧23-66g，赤巧 6-17g、川号6-lOg、当归9-19g、地龙9-17克、红花6-16gW及桃仁9-20邑。
[0009] 本发明所述的补阳还五汤有效部位群在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化 中的应用，其特征在于，所述的补阳还五汤有效部位群在治疗神经系统疾病药物中的应用， 包括该补阳还五汤有效部位群在制备促进骨髓间充质干细胞体外向神经元样细胞方向转 化的药物用途，所述的骨髓间充质干细胞定向分化为神经元样细胞。
[0010] 补阳还五汤有效部位群治疗神经系统疾病药物中的应用，所述的骨髓间充质干细 胞定向分化为神经元样细胞的过程中，MEK-E服和p38 MAPK信号通路参与运种补阳还五汤 有效部位诱导BMSCs向神经细胞定向分化的过程，MEK-E服和p38 MPK信号通路的阻断能抑 制运种中药有效部位方组合诱导BMSCs的神经分化。
[0011] 本发明再一个所要解决的技术问题是提供一种能促进骨髓间充质干细胞体外定 向转化为神经元样细胞的中药有效部位群。为此，本发明采用的技术方案是：它采用补阳 还五汤有效部位群作为促细胞分化剂，诱导骨髓间充质干细胞定向分化为神经元样细胞。
[0012] 本发明提供的补阳还五汤有效部位群可促进骨髓间充质干细胞分化W及诱导骨 髓间充质干细胞分化成神经元样细胞，制备成神经系统疾病的药物，为神经系统的多种难 治疾病开辟一条新的细胞替代疗法。
【附图说明】