[0013] 图1为BMSCs的原代及传代培养（XlOO)中的原代细胞； 图2为BMSCs的原代及传代培养（X 100)中的第2代细胞； 图3为BMSCs的原代及传代培养（X 100)中的第3代细胞； 图4为流式细胞术检测大鼠 BMSCs细胞空白对照细胞图； 图5为流式细胞术检测大鼠 BMSCs细胞FITC标记CD90阳性表达的BMSCs图； 图6为流式细胞术检测大鼠 BMSCs细胞FITC标记CDll阳性表达的BMSCs图； 图7为流式细胞术检测大鼠 BMSCs细胞FITC标记CD45阳性表达的BMSCs图； 图8为Western-Blots检测的BMSCs经补阳还五汤诱导后的p-E服蛋白表达电泳图谱（1 空白对照细胞，2阴性对照组，3 apr-BYHWD组）； 图9为Western-Blots检测的BMSCs经补阳还五汤诱导后的p-p38蛋白表达电泳图谱（1 空白对照细胞，2阴性对照组，3 apr-BYHWD组）； 图10为RT-PCR检测MAPK通路阻断后诱导的BMSCs NSE mRNA表达凝胶电泳图谱（1: apr-BYHWD对照组；2: apr-BYHWD+SB203580组；3: apr-BYHWD+PD98059组；M: Marker); 图11为Western-Blots检测的MPK通路阻断后诱导的BMSCs NSE蛋白表达凝胶电泳图 谱（1: apr-BYHWD对照组；2: apr-BYHWD+SB203580组；3: apr-BYHWD+PD98059组）； 图12为RT-PCR检测MAPK通路阻断后诱导的BMSCs化Stin mRNA表达凝胶电泳图谱（1: apr-BYHWD对照组；2: apr-BYHWD+SB203580组；3: apr-BYHWD+PD98059组；M: Marker); 图13为Western-Blots检测的MAPK通路阻断后诱导的BMSCs化Stin蛋白表达凝胶电 泳图谱（1: apr-BYHWD 对照组；2: apr-BYHWD+SB203580组；3: apr-BYHWD+PD98059组）。
【具体实施方式】
[0014]本发明通过实施例研究表明，运种补阳还五汤有效部位组合可W促进骨髓间充质 干细胞在体外定向分化为神经元样细胞。本发明结合说明书附图和实施例作进一步说明。 [001引实施例1 一种补阳还五汤有效部位群在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应用，所述 的补阳还五汤有效部位群为:巧类化合物、总生物碱、当归多糖、红花黄色素和抽皮素;补阳 还五汤有效部位群的制备方法步骤如下： (1) 巧类化合物和抽皮素有效部位的分离纯化:取黄巧60g、赤巧6g、地龙9g，加5-15倍 40%-70%乙醇，回流提取1-3次，每次1-化，滤过，得到药渣A，备用；滤液回收乙醇，调整至每 Iml相当于0.5-3g药材的浓缩液，浓缩液过大孔树脂柱吸附后，用水水洗，之后用40-50%乙 醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，挥去乙醇，浓缩，干燥，即得巧类化合物和抽皮素有效部位； (2) 红花黄色素有效部位的分离提取:取桃仁9g、红花9g，加5-20倍水，煎煮1-3次，每次 1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，浓缩液过大孔树脂柱 吸附后，用水水洗，之后用20-30%乙醇洗脱，收集洗脱液，挥去乙醇，浓缩，干燥，即得红花黄 色素有效部位； (3 )当归多糖和总生物碱有效部位的提取:取药渣A和当归9g、川号6g，加5-20倍水，煎 煮1-3次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至在40-60°C下相对密度为1.02-1.10的清膏， 加乙醇使含醇量达到45-60%，揽拌，静置12-24小时，过滤，得沉淀B，同时滤液挥去乙醇，浓 缩至在40-60°C下相对密度为1.02-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达到80-85%，揽拌，静置 12-24小时，收集沉淀物，真空干燥得当归多糖有效部位，分取醇沉液，挥去乙醇，加入沉淀B 溶解，加水调整至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，浓缩液过DlOl大孔树脂柱吸附后，用 水水洗，之后用60-70%乙醇洗脱大孔树脂柱，收集洗脱液，挥去乙醇，浓缩干燥，即得总生物 碱有效部位。
[0016] 实施例2 一种补阳还五汤有效部位群在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应用，所述 的补阳还五汤有效部位群为:巧类化合物、总生物碱、当归多糖、红花黄色素和抽皮素;补阳 还五汤有效部位群的制备方法步骤如下： (1) 巧类化合物和抽皮素有效部位的分离纯化:取黄巧60g、赤巧6g、地龙9g，加5-15倍 40%-70%乙醇，经渗漉提取，收集渗滤液，药渣A备用；渗滤液回收乙醇，调整至每1ml相当于 0.5-20g药材的浓缩液，浓缩液加于聚酷胺柱顶端，依次用纯水、20%、40%、60%、80%和95%乙 醇洗脱，洗脱液100mL作为一个馈分，高效液相法监控洗脱馈分成份的动态变化，成分相似 的馈分合并作为一个组分，收集黄巧甲巧、巧药巧、抽皮素有效部位的馈分，浓缩干燥，即得 巧类化合物和抽皮素有效部位； (2) 红花黄色素和抽皮素有效部位的分离提取:取桃仁9g、红花9g，加水约5-20倍，煎煮 1-3次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，取浓缩液 加于聚酷胺柱顶端，依次用纯水、20%、40%、60%、80%和95%乙醇洗脱，洗脱液1001111作为一个 馈分，高效液相法监控洗脱馈分成份的动态变化，收集黄色素、抽皮素的馈分，浓缩干燥，即 得红花黄色素和抽皮素有效部位； (3 )当归多糖和总生物碱有效部位的提取:取药渣A和当归9g、川号6g，加水约5-20倍， 煎煮1-3次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至40-60°C下相对密度为1.02-1.10的清膏， 加乙醇使含醇量达到45-60%，揽拌，静置12-24小时，过滤，得沉淀B，同时滤液挥去乙醇，浓 缩至40-60°C下相对密度为1.02-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达到80-85%，揽拌，静置12-24小时，收集沉淀物，干燥得当归多糖有效部位;另取上述醇沉液，挥去乙醇，加入沉淀B溶 解，加水调整至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，取缩液加于聚酷胺柱顶端，依次用纯水、 20%、40%、60%、80%和95%乙醇洗脱，洗脱液1001111作为一个馈分，高效液相法监控洗脱馈分成 份的动态变化，成分相似的馈分合并作为一个组分，收集川号嗦、阿魏酸有效部位的馈分， 挥去乙醇，浓缩干燥，即得总生物碱有效部位。
[0017]实施例3 运种补阳还五汤有效部位群在促进骨髓间充质干细胞在体外定向分化为神经元样细 胞的诱导分化实验研究及MPK在其中的作用分析。
[001引材料； 动物:6~8周龄清洁级雄性SD大鼠10只，体质量(130 ± 20 )g，购自上海斯莱克实验动物 有限责任公司，动物许可证号:SCXK(沪)2009-0004。动物房溫度25°C，湿度60%。大鼠实验中 对动物的操作严格参照中华人民共和国科学技术部颁布的《关于善待实验动物指导性意 见》的中有关规定进行。
[0019] 药物：黄巧（拉下学名：Leguminosae)60g，赤巧（拉下学名：Paeonia IactifIora Pali.)6g，川号（拉下学名：Rhizoma 畑uanxiong)6g，当归（学名=Angelica sinensis) 9g，地龙[拉下学名Pheretima aspergillum化.Pe;r;rie;r))9g，桃仁[拉下学名：Prunus persica 化.）Batsch) ]9g，红花（拉下名：Carthamus tinctorius L.)9g。按其组成比例， 采用实施例1或实施例2中的方法制备有效部位群（用水煎醇沉法制备原方提取液，再对原 方提取液采用酸碱沉淀、离子交换树脂层析方法提取有效部位，各有效部位分离完全，相互 之间无混杂，纯度在70%W上，W高压液相色谱和化学分析方法按W下标准测定其质控物的 含量，其中生物碱中川号嗦含量为9.76mg/g生物碱)W无血清L-DMEM培养基配成所需浓度。
[0020] 方法： (I)BMSCs的分离、培养及鉴定:雄性SD大鼠颈椎脱白法处死，75%乙醇中浸泡lOmin。无 菌条件下快速取腔骨和股骨，切除两端。用8号针头抽吸DMEM液反复冲洗骨髓腔，收集细胞。 加入含10%胎牛血清化yclone公司，美国）DMEM培养基(GIBC0公司，美国），反复吹打，细胞计 数后Wl X lOV