一种飞机草-裸花紫珠联用止血抗炎的中药组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种飞机草?裸花紫珠联用止血抗炎的中药组合物，飞机草和裸花紫珠的质量比优选为1︰(0.25～4)。本发明还提供了采用该中药组合物制备而成的止血抗炎的药物制剂。飞机草与裸花紫珠配伍具有良好的缩短出血时间及促凝的作用，与飞机草、裸花紫珠单独使用相比，抗炎作用有增强的趋势。二者产生协同增效作用，为开发一种新型的天然药物来源的止血抗炎药奠定坚实基础。
【专利说明】
一种飞机草-裸花紫珠联用止血抗炎的中药组合物
技术领域
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种飞机草-裸花紫珠联用止血抗炎的中药组合 物，及采用该中药组合物制成的药物制剂等。
【背景技术】
[0002] 手术操作或创伤，特别是出血、渗血，有时很难控制，不但会增加患者失血量及手 术难度，甚至会危及患者生命，而外伤常常伴有炎症感染发生，因此往往希望药物在止血同 时能兼具消炎之功效。有关专家认为，任何外科操作几乎无一例外地涉及到出血与止血，良 好的止血是手术安全进行的前提和保障。在多种止血方法中使用止血药是最常见方法。而 止血天然药物的开发尚显缺乏，目前，同类药物中云南白药止血粉的应用较广且兼具消炎 功能，云南白药系中药制剂，为治内、外出血及瘀血肿痛著名中成药，通过缩短凝血时间而 发挥止血作用。虽然对于该类品种的关注度越来越高，但从国内总体市场及医院使用情况 来看，该类药物仍存在品种较少的特点，而由天然药物开发得来的制剂更是缺乏。
[0003] 飞机草又名香泽兰，为菊科泽兰属多年生草本植物，飞机草原产于中、南美洲。飞 机草的繁殖力极强，能抢夺其他植物生存空间和土壤营养，充分利用光能进行快速生长、扩 散和蔓延造成农作物大面积减产，生态系统受到破坏，飞机草已成为一种世界性的恶性杂 草。飞机草收载于《中华本草》、《中药大辞典》等中药典籍中。全草可入药，具有散瘀、消肿、 解毒和止血功效。目前飞机草鲜有被深入研究和利用开发，只有少数在民间应用，飞机草在 海南民间常被用于外用止血验方，具有良好的止血效果。
[0004] 裸花紫珠为马鞭草科紫珠属植物。研究发现裸花紫珠水煎液对金黄色葡萄球菌、 白色葡萄球菌极度敏感，对绿浓杆菌、伤寒杆菌、脑膜炎双球菌、痢疾杆菌、嗜氧菌、大肠杆 菌中度敏感，对链球菌、变形杆菌轻度敏感。研究发现，裸花紫珠还对实验烧伤小鼠具有降 低毛细血管通透性的作用、故用于烧伤创面可减少创面体液的渗出；又因富含鞣质，用药后 可形成薄层药膜，有收敛、干燥、保护肉芽组织、促进溃疡愈合的作用。
[0005] 但是目前还未出现飞机草和裸花紫珠联用的相关报道，也鲜有人对此进行研究。 为丰富天然止血抗炎药物的种类，积极开发药物资源，本申请发明人对飞机草和裸花紫珠 联用的可行性进行了大量的实验，优化配比，以期能将飞机草的体外止血功效及裸花紫珠 的抗炎药理作用互补，产生协同增效的作用，为开发一种新型的天然药物来源的止血抗炎 药奠定坚实基础。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种止血抗炎的中药组合物，及 采用该中药组合物制成的药物制剂等，实现飞机草的体外止血功效及裸花紫珠的抗炎药理 作用互补，产生协同增效的作用，为开发一种新型的天然药物来源的止血抗炎药奠定坚实 基础。
[0007] 本发明的第一个方面是提供一种止血抗炎的中药组合物，其组分包括飞机草和裸 花紫珠。
[0008] 优选地，所述飞机草和裸花紫珠的质量比为1: (0.25~4)。
[0009] 进一步优选地，所述飞机草和裸花紫珠的质量比为1: (2~4)。
[0010]进一步优选地，所述飞机草和裸花紫珠的质量比为1: (〇.5~4)，且不为1:1。
[0011] 最优选地，所述飞机草和裸花紫珠的质量比为1: 4。
[0012] 本发明的第二个方面是提供一种止血抗炎的中药活性成分的制备方法，其特征在 于，将本发明第一个方面提供的中药组合物的组分粉碎，即得;或者采用水提法对本发明第 一个方面提供的中药组合物进行提取，取水提物即得。
[0013] 本发明的第三个方面是提供一种止血抗炎的药物制剂，所述药物制剂的活性成分 包括本发明第一个方面提供的中药组合物和/或其水提取，或者包括采用本发明第二个方 面提供的制备方法制得的中药活性成分。
[0014] 本发明中，所述药物制剂可以根据实际需要为粉剂、膏剂、液体制剂等。
[0015] 根据具体剂型的需要，所述药物制剂还可以包括药学上可接受的辅料。
[0016] 本发明的第四个方面是提供如本发明的第一个方面提供的中药组合物、采用本发 明的第二个方面提供的制备方法制得的中药活性成分、或本发明的第三个方面提供的药物 制剂在制备止血和/或抗炎药物中的应用。
[0017] 本发明飞机草与裸花紫珠配伍具有良好的缩短出血时间及促凝的作用，与飞机 草、裸花紫珠单独使用相比，抗炎作用有增强的趋势。二者产生协同增效作用，为开发一种 新型的天然药物来源的止血抗炎药奠定坚实基础。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。本发明
【具体实施方式】中飞机草(采于海口）及裸花紫珠(采于白沙）由海南医学院曾念开教授鉴定。
[0019] 实施例1~5
[0020] 实施例1~5中飞机草与裸花紫珠的重量比为1:1、1:2、1:4、2:1和4:1。取飞机草地 上部分晾干，粉碎，过100目筛，得飞机草粉末，取裸花紫珠地上部分晾干，粉碎，过100目筛， 得裸花紫珠粉末。将飞机草粉末和裸花紫珠粉末混合均匀即得。
[0021] 实施例6~10
[0022] 实施例6~10中飞机草与裸花紫珠的重量比为1:1、1:2、1:4、2:1和4:1。与实施例1 ~5的不同之处在于，实施例6~10为水煎剂。
[0023]止血消炎效果的药理实验 [0024] 1动物、仪器和药液
[0025]电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；HWS26型电热恒温水浴锅，（上海一恒科 技有限公司）；PBS缓冲溶液(博士德生物工程有限公司）；云南白药(云南白药集团股份有限 公司）；8mm打孔器，721紫外分光光度计:上海分析仪器厂;LS55型荧光分光光度计:Perkins Elmer公司；LG-PABER-I半自动血小板聚集凝血因子分析仪:北京世帝科学仪器公司。
[0026]云南白药（云南白药集团股份有限公司），二甲苯(广州市番禺力强化工厂），昆明 种小鼠，雌雄对半，体重25~30g，均由长沙天勤生物技术有限公司提供。新西兰兔雌雄对 半，体重1.7~2.0kg，均由长沙天勤生物技术有限公司提供。
[0027] 药液的配制:飞机草水煎液(0.5g生药/ml)、裸花紫珠水煎液(0.5g生药/ml)、云南 白药水浸液(〇.5g生药/ml)、实施例6~10(0.5g生药(飞机草+裸花紫珠)/ml)。
[0028] 2方法和结果
[0029] 下述实验数据用元±5'（均值土标准差)表示，采用SPSS10.0统计软件，两组间比较 用t检验，多组间比较采用多因素方差分析。
[0030] 2.1对伤口出血时间的影响
[0031 ]将家兔随机分成9组，每组5只。将家兔放入兔盒，在耳缘动脉周围去毛，轻弹几下。 距耳尖部8cm处割断耳缘动脉，剥离皮肤，面积为创面但是不能划穿耳朵，防止血液 从耳内侧流出影响观察指标[8]。需在家兔耳缘动脉对应部位造成深度、长度及宽度相同的 创伤。待血液充满创面后立即涂覆下述各组药物:实施例1~5、裸花紫珠粉末、飞机草粉末、 云南白药粉末各〇. 3克。阴性对照组伤口不做任何处理，用纱布覆盖，用100g砝码进行加压 止血。同时设置有一个空白组:既不给药也不加压止血。每隔30s观察伤口的流血情况，用纱 布轻轻蘸吸直至血液不再渗出，即纱布上不再沾有血液为止，记录所需时间即出血时间。结 果见表1。
[0032]表1飞机草和裸花紫珠对家兔耳缘动脉出血时间的影响
[0034] 与空白组比较，#P<0.05;
[0035] 与飞机草组比较，*Ρ<0·05;
[0036] 与裸花紫珠比较，※Ρ<0·05。
[0037] 由表1可得，与空白组相比，云南白药、飞机草、裸花紫珠以及飞机草-裸花紫珠各 配伍出血时间均显著缩短(Ρ<0.05)。而且，实施例1~5组出血的时间小于单用飞机草和裸 花紫珠，即实施例1~5比单独给与家兔飞机草、裸花紫珠具有更强的止血作用。尤其是实施 例3组出血的时间小于单用云南白药、飞机草(Ρ<0.05)、裸花紫珠(Ρ<0.05)，即飞机草与 裸花紫珠1:4配伍比例联合使用比单独给与家兔飞机草、裸花紫珠、云南白药更能减少家兔 出血时间，具有较单独应用飞机草、裸花紫珠更强的止血作用。
[0038] 2.2对伤口凝血时间的影响
[0039]取实施例1~5、裸花紫珠粉末、飞机草粉末、云南白药粉末各0.3克。分别加入5mL PBS溶液中，震荡混匀，制备成混悬剂。取内径为8mm的玻璃洁净试管，每管分别加入上述各 药液0.1ml，另设空白对照。摇匀后各个试管同时加入兔血lml，设阴性对照，盖紧震荡摇匀3 次，立即计时，在37°C水浴箱中观察，每隔30秒轻轻倾斜试管，观察有无凝血。从加入兔血开 始计时，到倾斜试管血块凝固而不流动时为止，即为凝血时间，每药重复7次，记录凝血时 间。结果见表2。
[0040]表2飞机草与裸花紫珠对凝血的影响
[0043]与空白对照组比较，#P<0.05;
[0044] 与飞机草组比较，*P<0.05;
[0045] 与裸花紫珠比较严P<0.05。
[0046] 由表2可得，与空白组比较，云南白药、飞机草、以及飞机草与裸花紫珠各配伍出血 时间显著缩短(P<〇.05)，裸花紫珠也可缩短出血时间，但是差异并不明显。实施例1~5组 凝血的平均时间均小于云南白药，具有良好的促凝血效果。尤其是实施例3凝血的平均时间 小于单用云南白药、飞机草、裸花紫珠，即飞机草与裸花紫珠1:4配伍比例联合使用比单独 给予家兔裸花紫珠、云南白药更能减少家兔出血时间，具有更强的促凝血作用。
[0047] 2.3对二甲苯所致炎症效果的影响
[0048] 取健康成年昆明小白鼠90只，雌雄各半，随机分为10组，每个组10只（雌雄各半）， 分别是:空白对照组、飞机草水煎液组、裸花紫珠水煎液组、5组配伍溶液（即实施例6~10)、 云南白药水浸液、模型组。连续五天给小白鼠右耳涂抹药液，以药液涂抹整个右耳为标准， 末次涂抹后一小时给每只小白鼠的右耳朵涂抹二甲苯40ul致炎，以左耳朵不涂抹作为对 照。120min后处死小白鼠，在小鼠左右耳朵上相同位置处用直径为8mm的打孔器打下耳朵 片，然后分别称其重量。以左右两边耳朵的重量之差作为肿胀度，而药物组间的抗炎效果的 比较用下面的计算公式来计算出的肿胀度抑制率来表示。结果见表3。
[0049] 肿胀抑制率=(模型组肿胀度-给药组肿胀度)/模型组肿胀度X 100%。
[0050] 表3各组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度的影响
[0053] 与模型组比较，*P<0.01;
[0054] 与飞机草组比较，#P<0.05。
[0055] 如表3所示，与模型组比较，飞机草组、云南白药、裸花紫珠组、实施例6~10组均有 显著降低小鼠耳肿胀的作用(P<〇.01)。实施例6~10组的抑制作用均超过云南白药组及飞 机草单用组，尤其是实施例8(飞机草与裸花紫珠配伍1:4)抑制作用明显，肿胀度抑制率为 72.75%，不仅超过了云南白药组及单用裸花紫珠组，而且与机草单用组相比差异显著(P< 0.05)，表明实施例8组较单用飞机草、裸花紫珠及云南白药具有更好的抗炎作用。
[0056] 2·4角叉菜胶致小鼠耳肿胀组织中前列腺素 E2(prostaglandinE2，PGE2)含量的测 定
[0057]取健康成年昆明小白鼠100只，雌雄各半，随机分为10个组，每个组10只（雌雄各 半），分别是空白对照组、飞机草水煎液组、裸花紫珠水煎液组、5组配伍溶液（即实施例6~ 10)、云南白药水浸液、模型组。末次给药后lh，除正常对照组外其他所有小鼠后足跖皮内注 射1%角叉菜胶〇.〇3ml，4h后脱颈椎处死小鼠，沿踝关节上的标记线剪下左后足，称重，剪碎 后分别浸入盛有2.5ml生理盐水的试管中，振摇2h后取出，将浸泡液1000 Xg离心15min，取 上清液0.3ml于另一试管内，加入0.5mol · L-kOH甲醇溶液1.0m 1，50°C水浴20min异构化， 加甲醇2 · 5ml，测定A278nm值，用A278nm值表示PGE2含量。结果如表4所示。
[0058]表4小鼠肿胀组织中PGE2的含量测定
[0061 ]与模型组比较，林 P<0 · 01 ;*P<0 · 05;
[0062] 与飞机草组比较，#Ρ<0·05。
[0063] 如表4所示，与模型组相比较，云南白药及裸花紫珠可以显著降低小鼠炎症组织中 PGE2的含量，飞机草有降低PGE2含量的趋势;实施例7和实施例8(飞机草与裸花紫珠配伍组 1:2、1:4)组具有显著减少炎症组织中PGE2的作用(P<0.05，P<0.01)，尤其是实施例8组具 有最强的降低PGE 2含量的作用(P<0.01)，且与单用飞机草相比，有显著性差异(P<0.05)。 [0064] 2 · 5角叉菜胶致小鼠耳肿胀组织中5-轻色胺（5-hydroxy tryptamine，5-HT)含量 的测定
[0065] 取2.4处理各组小鼠，剪下致炎右后足，称重，剪碎后分别浸泡于4.0ml酸化正丁醇 中411，超声处理2〇11^11，弃足离心，取上清液2.51111，加入正庚烷31111和0.1111〇1.1/1的盐酸 1.2ml振荡5min，离心弃去有机相，取水相0.5ml，加入0. lml 0.5%半胱氨酸、0.04%邻苯二 甲醛3ml和0.02%NaI〇4 0. lml后沸水浴lOmin，用荧光分光光度计在激发波长365nm，荧光 波长480nm处，测定荧光强度，表示5-HT的含量。结果如表5所示。
[0066]表5小鼠肿胀组织中5-HT的含量测定
[0067]
[0068]
[0069] 与模型组比较，林Ρ<0·01;
[0070] 与飞机草组比较，#Ρ<0·05。
[0071] 如表5所示，与模型组比较，云南白药及裸花紫珠可以显著降低小鼠炎症组织中5-ΗΤ的含量(Ρ<0.01)，飞机草有降低5-ΗΤ含量的趋势，但并无显著性差异;实施例7、8和9(飞 机草与裸花紫珠配伍组1:2，1:4,2:1)具有显著减少炎症组织中5-!11'的作用(？<0.01)。尤 其是实施例8和9(飞机草与裸花紫珠1:4)组具有最强的降低5-ΗΤ含量的作用，且与飞机草 相比，有显著性差异(Ρ<〇. 05)。
[0072] 2.6家兔凝血四项(？1'，六?1'1'，1'1'^18)检查
[0073] 血凝四项是研究参与内源性与外源性凝血途径因子最常用的临床检验方法。广泛 用于各种凝血系统病变患者的條选或口服抗凝药治疗期间的监控、手术等。血凝四项包括 四项指标，分别是凝血酶时间（ΤΤ)、凝血酶原时间（ΡΤ)、活化部分凝血活酶时间(ΑΡΤΤ)、血 黎纤维蛋白原(FIB)。其中，ΤΤ值主要反映的是凝血共同途径中纤维蛋白原转化为纤维蛋白 的过程中，是否存在异常抗凝。PT值主要反映外源性凝血途径，能检测外源性凝血途径中各 种凝血因子，若外源凝血途後中因子缺乏，PT值延长，PT值若缩短，则反映药物可能增强外 源凝血途后各凝血因子活性。APTT可用于测定内源性途径中凝血因子的检测，能检测除VII 因子外的其他血浆凝血因子，如因子VIII、IX、XI、XII等。APTT值增加反映凝血因子VIII、 IX、XI、XII缺乏或活性降低，APTT值减少则暗示凝血因子活性增加或血液中可能存在促凝 血物质。FIB值反映体内纤维蛋白原水平，Fib对维持体内正常止血与凝血功能发挥重要作 用，它既能促使血液凝固而止血，又可阻碍纤维蛋白溶解酶原转变成纤维蛋白溶解酶，从而 阻止纤维蛋白溶解，而发挥止血作用。
[0074]取健康雄性家兔45只，分为分别是飞机草水煎液组、裸花紫珠水煎液组、5组配伍 溶液（即实施例6~10)、云南白药水浸液、模型组。口服给与以上各组药物，以0. lml/kg给 药，连续7天。由耳缘静脉注射戊巴比妥钠生理盐水溶液(30mg · kg<家兔体重)麻醉，颈总动 脉取血，收集于含有3.8%枸橼酸钠抗凝剂的塑料离心管中（取血量与抗凝剂体积比为9: 1)。以800r · min-S离心10min吸取上层血衆，制备富血小板血楽Xplatelet-rich plasma， PRP)，余下的血衆再以3000r · min-1离心10min，吸取上清液，即贫血小板血衆(platelet-poorplasma，PPP)。取PPP50μl，采用凝固法，按LG-PABER-I半自动血小板聚集凝血因子分 析仪操作规程，依次测定凝血酶原时间（PT)、活化部分凝血活酶时间（APTT)、凝血酶时间 (TT)、纤维蛋白原(FIB)，4项凝血指标。结果如表6所示。
[0075]表6飞机草-裸花紫珠联合用药对凝血四项的检查(i±s)
[0077] 与模型组比较，*Ρ<0·05;
[0078] 与飞机草组比较，#Ρ<0·05;
[0079] 与裸花紫珠比较严Ρ<0·05。
[0080] 如表6所示，与模型组相比较，飞机草、云南白药能显著降低ΑΡΤΤ(Ρ<0.05)，裸花 紫珠有降低ΑΡΤΤ表达的趋势，但并无显著性差异，而实施例8组能显著降低ΑΡΤΤ的表达，比 单用飞机草、裸花紫珠降低更加明显(Ρ<〇.05)，显示飞机草-裸花紫珠联合用药可能增加 内源性途径中的凝血因子VII、IX、XI或XII的活性。同时，阳性药组的云南白药、飞机草及裸 花紫珠能显著增加 FIB值，实施例8组使FIB值增加更加明显(P<0.05)，提示飞机草、裸花紫 珠能通过阻碍纤维蛋白溶解酶原转变成纤维蛋白溶解酶，从而阻止纤维蛋白溶解，而发挥 止血作用。
[0081] 以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限 制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和 替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和 修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1. 一种止血抗炎的中药组合物，其特征在于，其组分包括飞机草和裸花紫珠。2. 根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述飞机草和裸花紫珠的质量比为 1:(0.25 ~4)〇3. 根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，所述飞机草和裸花紫珠的质量比为 1:(2 ~4)〇4. 根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，所述飞机草和裸花紫珠的质量比为 1:(0.5 ~4)，且不为 1:1。5. 根据权利要求1~4中任意一项所述的中药组合物，其特征在于，所述飞机草和裸花 紫珠的质量比为1:4。6. -种止血抗炎的中药活性成分的制备方法，其特征在于，将权利要求1~5中任意一 项所述的中药组合物的组分粉碎，即得;或者采用水提法对权利要求1~5中任意一项所述 的中药组合物进行提取，取水提物即得。7. -种止血抗炎的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的活性成分包括权利要求1~ 5中任意一项所述的中药组合物和/或其水提取，或者包括采用权利要求6所述制备方法制 得的中药活性成分。8. 根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂还包括药学上可接受的 辅料。9. 如权利要求1~5中任意一项所述的中药组合物、采用权利要求6所述制备方法制得 的中药活性成分、或权利要求7或8所述的药物制剂在制备止血和/或抗炎药物中的应用。
【文档编号】A61P29/00GK105832897SQ201610354936
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月25日
【发明人】黄凌, 杨帆
【申请人】海南医学院