一种慢性高眼压动物模型的建立方法
【专利摘要】一种慢性高眼压动物模型的建立方法，通过手术放置材料堵塞其房水流出通道，造成眼压升高视神经损害的青光眼动物模型，使升高的眼压维持稳定，更加易于获得和操作，得到的模型眼压升高稳定、波动小，高眼压持续时间长，目标眼压可控等优点。通过这种方法制作出的慢性高眼压动物模型，其眼压可根据堵塞Schlemm的范围不同进行调控。并且可以根据不同动物种类Schlemm管径而选择不同规格尺寸的纤维导管，完成Schlemm管堵塞，从而产生多种动物类型的慢性高眼压模型。在慢性高眼压青光眼机制研究中更好地构建与临床相契合的造模动物及造模方法，为进行慢性青光眼视神经损伤机制提供基础。
【专利说明】
一种慢性高眼压动物模型的建立方法
技术领域
[0001]本发明涉及医用动物模型领域，具体涉及一种慢性高眼压动物模型的建立方法。
【背景技术】
[0002]青光眼是一种不可逆性视神经退行性病变，为全球第二位致盲眼病。其复杂的发病机制目前尚不十分明确，虽然高眼压并不是青光眼视损害的唯一因素，但高眼压却是青光眼视神经损害发生和发展机理中最危险的因素之一。在青光眼研究领域，动物模型已成为重要的研究工具。青光眼动物模型对于更好的理解青光眼性视神经病变的损伤机制及治疗措施有着重要的作用。高眼压是青光眼视神经损害最主要的危险因素，所以大多数青光眼研究的动物模型仍然是诱导动物高眼压，进而对青光眼的生理、病理、药理等方面进行研究。理想的实验动物模型要求:其构建方法简单，成本低廉，易于饲养和控制，升高的眼压维持稳定，发生视网膜视神经特征性的病理改变。
[0003]目前用于制作青光眼模型的动物为低等哺乳动物，主要有兔、鼠、猴。虽然鼠易于用转基因技术改造和繁殖，且鼠眼的构造在很多方面和人眼类似，如小梁、Schlemm管、睫状体、视网膜血管等，但是鼠眼相对较小，不利于进行手术操作。激光诱导的猴的高眼压模型是目前公认的最理想的高眼压动物模型，但因造价昂贵，操作较复杂，国内应用不多。虽然兔眼与人眼的房角结构有形态学差异，但房水外流通道相同，都有连续的内皮细胞内衬。并且家兔价格价廉、性格温顺、易于获得和操作，因此兔是最常用于制作青光眼模型的实验动物。
[0004]根据高眼压形成机制及药物作用部位分为作用于前房角(及小梁)型，如前房注射透明质酸、甲基纤维素、血细胞、复方卡波姆液，后房注射伍.糜蛋白酶，激光光凝小梁网，眼睛外用皮质醇激素等方法;作用于巩膜房水回流静脉型如常用的巩膜表面静脉注射高渗盐水法(Morre-Morr i son模型)、烧灼巩膜表层的房水引流静脉法(Shareef-Sharma模型)及改良方法;此外，亦有一些特殊种系的自发性小鼠及转基因技术构建青光眼模型，如DBA/2J和AKXD-28/Ty的纯系小鼠，利用基因打靶技术构建的自然青光眼模型等。同时分别对各种模型在视网膜神经节细胞(RGCs)、视神经、视网膜功能方面的病理性改变进行评价，评估各种模型的利与弊，在慢性高眼压青光眼机制研究中更好地构建与临床相契合的造模动物及造模方法提供依据，更加深入的研究慢性高眼压青光眼的机制，为其治疗提供新的思维。
[0005]虽然制作高眼压动物模型的方法有很多，但是目前的青光眼动物模型大多数都是急性高眼压模型，眼压虽然升高，但是其高眼压维持时间短，并且波动大，难以模拟出青光眼的特征性视神经损害。
【发明内容】
[0006]为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种慢性高眼压动物模型的建立方法。
[0007]本发明采用的技术解决方案是:一种慢性高眼压动物模型的建立方法，包括以下步骤:(I)将模型动物绑缚仰卧于手术台，术眼消毒铺巾，置开睑器，冲洗结膜囊，术眼结膜下局部润麻醉后，做上直肌牵引缝线固定；
(2)按钟表表盘方向计，于11点位至I点位边缘环球结膜切开，以12点位为中心处作以角膜缘为基底的大小4*4mm的1/3巩膜厚度的浅层巩膜瓣，在浅层巩膜瓣下方再做一个大小3*3mm，厚度2/3巩膜厚度的深层巩膜瓣，并向角膜方向剥离，找到Schlemm管并切开Schlemm管外壁；
(3)向Schlemm管两端内注入高分子透明质酸，将纤维导管导管通过开口，于9或3点钟方位角膜缘内1.0 mm处，平虹膜方向行前房穿刺，轻压穿刺口后缘，放出水降低眼压，前房减压穿刺后将纤维导管插入Schlemm管的断端，顺着Schlemm管绕行360度或270度或180度或90度，剪断导管，将其置于Schlemm中堵塞Schlemm管，阻止房水外流，缝合巩膜瓣，，前房穿刺口注入平衡盐溶液，缝合结膜瓣，给予抗炎药物，最终建立眼压升高的动物模型。
[0008]所述的步骤(I)中采用稀释碘伏溶液冲洗结膜囊。
[0009]所述的步骤(I)中采用0.4ml2%的利多卡因进行术眼结膜下局部润麻醉。
[00? O ] 所述的步骤(I)中采用30G针头向Schl emm管两端内注入高分子透明质酸。
[0011]所述的步骤(3)中纤维导管包括一个圆柱形的实心的导管，所述的导管一端为球形结构。
[0012]所述的纤维导管长10cm，直径200μπι，所述的导管一端的球形直径为250μπι。
[0013]所述的纤维导管采用聚丙烯材料制成。
[0014]本发明的有益效果是:本发明提供了一种慢性高眼压动物模型的建立方法，通过手术放置材料堵塞其房水流出通道，造成眼压升高视神经损害的慢性青光眼动物模型，通过这种方法制作出的慢性高眼压动物模型，其眼压可根据堵塞Schlemm的范围不同进行调控。并且可以根据不同动物种类Schlemm管径而选择不同规格尺寸的纤维导管，完成Schlemm管堵塞，从而产生多种动物类型的慢性高眼压模型。在慢性高眼压青光眼机制研究中更好地构建与临床相契合的造模动物及造模方法，为进行慢性青光眼视神经损伤机制提供基础。
【附图说明】
[0015]图1为本发明纤维导管结构示意图。
【具体实施方式】
[0016]现结合图1对本发明进行进一步说明:操作步骤:手术需要一根由聚丙烯材料制作而成的长1cm直径200μπι实心纤维导管，导管头端直径为250μπι局部膨大的球形，防止插管时损伤Schlemm管壁组织。
[0017]将模型动物四肢绑缚仰卧于手术台，术眼常规消毒铺巾，置开睑器，稀释碘伏溶液冲洗结膜囊，取0.4ml 2%利多卡因于术眼结膜下局部润麻醉后，做上直肌牵引缝线固定，按钟表表盘方向计，于11点位至I点位边缘环球结膜切开，以12点位为中心处作以角膜缘为基底的大小约4 * 4 mm的I / 3巩膜厚度的浅层巩膜瓣，在浅层巩膜瓣下方再做一个大小约3 *3mm，厚度约2/3巩膜厚度的深层巩膜瓣。并向角膜方向剥离，找到Schl emm管并切开Schl emm管外壁，用30G针头向Sch I emm管两端内注入高分子透明质酸(Healon GV)，使导管能够容易通过开口。于9或3点钟方位角膜缘内1.0 mm处，平虹膜方向行前房穿刺，轻压穿刺口后缘，放出适量房水降低眼压，前房减压穿刺后将微导管插入Schlemm管的断端，根据所需靶眼压的不同，分别顺着Schlemm管绕行360度或270度或180度或90度，剪断导管，将其置于Schlemm中堵塞Schlemm管，阻止房水外流，造成其眼压升高的模型。最后用10-0聚丙稀线紧密缝合巩膜瓣4-6针，前房穿刺口注入平衡盐溶液观察，以不渗漏视为水密缝合，再用10-0聚丙烯线缝合结膜瓣2针。术后给予抗炎药物，监测眼压，前节反应情况。
[0018]本发明通过手术放置材料堵塞其房水流出通道，造成眼压升高视神经损害的青光眼动物模型，通过这种方法制作出的慢性高眼压动物模型，其眼压可根据堵塞Schlemm的范围不同进行调控。并且可以根据不同动物种类Schlemm管径而选择不同规格尺寸的纤维导管，完成Schlemm管堵塞，从而产生多种动物类型的慢性高眼压模型。。兔眼、猴眼的动物模型使用的纤维导管规格可采用长1cm直径200μπι，导管头端球形直径为250μπι，其他动物可选择与其Schlemm管径相匹配的导管规格。在慢性高眼压青光眼机制研究中更好地构建与临床相契合的造模动物及造模方法，为进行慢性青光眼视神经损伤机制提供基础。
[0019]以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种慢性高眼压动物模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)将模型动物绑缚仰卧，术眼消毒铺巾，置开睑器，冲洗结膜囊，术眼结膜下局部润麻醉后，做上直肌牵引缝线固定； (2)按钟表表盘方向计，于11点位至I点位边缘环球结膜切开，以12点位为中心处作以角膜缘为基底的大小4*4mm的1/3巩膜厚度的浅层巩膜瓣，在浅层巩膜瓣下方再做一个大小3*3mm，厚度2/3巩膜厚度的深层巩膜瓣，并向角膜方向剥离，找到Schlemm管并切开Schlemm管外壁； (3)向Schlemm管两端内注入高分子透明质酸，将纤维导管导管通过开口，于9或3点钟方位角膜缘内1.0 mm处，平虹膜方向行前房穿刺，轻压穿刺口后缘，放出水降低眼压，前房减压穿刺后将纤维导管插入Schlemm管的断端，顺着Schlemm管绕行360度或270度或180度或90度，剪断导管，将其置于Schlemm中堵塞Schlemm管，阻止房水外流，缝合巩膜瓣，，前房穿刺口注入平衡盐溶液，缝合结膜瓣，给予抗炎药物，最终建立眼压升高的动物模型。2.根据权利要求1所述的一种慢性高眼压动物模型的建立方法，其特征在于，所述的步骤(I)中采用稀释碘伏溶液冲洗结膜囊。3.根据权利要求1所述的一种慢性高眼压动物模型的建立方法，其特征在于，所述的步骤(I)中采用0.4ml 2%的利多卡因进行术眼结膜下局部润麻醉。4.根据权利要求1所述的一种慢性高眼压动物模型的建立方法，其特征在于，所述的步骤(I)中采用30G针头向Schlemm管两端内注入高分子透明质酸。5.根据权利要求1所述的一种慢性高眼压动物模型的建立方法，其特征在于，所述的步骤(3)中纤维导管包括一个圆柱形的实心的导管，所述的导管一端为球形结构。6.根据权利要求5所述的一种慢性高眼压动物模型的建立方法，其特征在于，所述的纤维导管长10cm，直径200μπι，所述的导管一端的球形直径为250μπι。7.根据权利要求5所述的一种慢性高眼压动物模型的建立方法，其特征在于，所述的纤维导管采用聚丙烯材料制成。
【文档编号】A61D1/00GK105943186SQ201610249471
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年4月21日
【发明人】梁远波, 胡城, 廖娜, 徐晶
【申请人】温州眼视光发展有限公司