专利名称：建立血管性勃起功能障碍动物模型的方法
技术领域：
本发明属于医学和动物行为学领域，涉及一种动物模型的建立方法，进一步地，本发明涉及一种建立血管性勃起功能障碍动物模型的方法。
背景技术：
勃起功能障碍(ED)一直是泌尿男科关注的热点。很长一段时间内，人们曾认为ED的原因主要是心理性的。随着研究手段的进步和各种临床资料的汇总，人们发现绝大部分ED存在各种器质性原因。由于引起ED的病因复杂，目前为止，人们对ED的发病机理还是不甚明了，因此寻找合适的ED动物模型对ED的发生、发展、临床的防治及新药研制都很必要。
高脂血症是中、老年人常见的疾病之一。目前的研究发现，随着生活水平的提高，饮食结构的变化，高脂(胆固醇)血症已不仅仅是严重影响中、老年人心血管系统及身心健康的危险因子，而且发病人数有逐渐增加并低龄化趋势。高脂血症引起ED发生、发展的机理一直是人们关注的热点以前认为高脂血症引起ED的原因主要是因为阴茎局部动脉粥样硬化斑块，导致阴茎供血不足而致。随着研究的深入，人们发现阴茎海绵体在阴茎的勃起及维持勃起中起了关键性的作用，阴茎的勃起及勃起的维持不仅仅需要动脉充裕的供血，还需要海绵体及静脉系统完整的阻断机制发挥作用。众所周知，随着年龄增长，发生ED的可能性也逐渐增加，但ED也并不是老龄化过程中不可避免的事件。本发明人曾经调查了382例ED患者，发现动脉硬化本身的危险因子如高血脂也是ED的危险因子[陈斌，王益鑫，韩银发等，《382例勃起功能障碍患者动脉硬化危险因子调查》，中国男科学杂志2002；16(3)209]。Eardley等[Eardley I等，Erectile dysfunctioncurrent investigation and management.LondonMosby-Wolf，19982]认为，勃起功能障碍的改变很可能是全身动脉粥样硬化最初的临床表现，故开始治疗ED前应注意评价患者的心血管状态。
基于对阴茎勃起生理的认识，我们知道，阴茎要获得并维持足够硬度的勃起，充足的动脉血供和完善的静脉阻断机制是必不可少的。那么任何可能破坏这两种机制的危险因子就可能最终导致ED的发生。临床上高血脂的常见性和其本身既可以引起ED也是心血管疾病的基础等事实，使本发明人想到通过高血脂研究建立ED模型的原因。正是基于上述事实和思路，本发明人考虑设计制造高脂血症引起ED的动物模型来研究其发生的机理，试图为临床防治高脂血症性ED和研究血管性ED的发病机理及ED的临床药理试验提供理论依据。
对于ED模型的建立，人们也进行过不少的探索。人们曾试图对狗用简单机械性损伤的方法来制成高血脂性ED动物模型，但结果却不太满意，这是因为采用部分结扎或使用缩窄环之类的机械性阻断血供的方法，事实上并不能使动物出现阴茎局部血管或勃起组织的异常。随后研究又发现，如果只采用手术结扎狗的左、右侧髂内动脉或同时结扎其两侧阴部动脉，只能使动物的阴茎海绵体血流量在结扎即刻减少50％[Takagane H等，Hemdynamic studies of penile erectionin dogsblood flow changes in the corpus cavernosum caused byarterial ligation.Proceedings of the 6th Biennial InternationalSymposium on Corpus Cavernosum Revascularization and 3rdBiennial World Meeting on Impotence，Boston，Massachusetts，1998]；还有人发现，如果阻断狗的双侧阴茎动脉血供，再用电刺激诱导勃起时可使动物模型阴茎海绵体内压一过性降低60％[AboseifSR等，Erectile response to acute and chronic occlusion of the internalpudendal and penile arteries.J Urol，1989；141398]；如果采用慢性机械性损伤的方法逐渐阻断阴茎动脉的血供，尽管最后可以完全阻断阴茎的血供，但由于形成了很多侧枝循环，事实上对动物的阴茎勃起并没有很大的影响。
以前的研究还发现，如单纯喂胆固醇饲料，动物并未发生动脉粥样硬化。此外，对有些鼠类只能出现明显的高胆固醇血症，也不发生动脉硬化。以家兔为实验动物，如果同时喂以高胆固醇、高脂肪的饲料，则能发生动脉粥样硬化，但问题是这种病变主要是在家兔的主动脉形成粥样硬化斑块，而主要供应阴茎血液的血管--髂动脉难以形成粥样硬化。因此迄今为止还没有一个令人满意的血管性ED动物模型。
基于以上现有技术，本发明通过对新西兰家兔喂以高脂、高胆固醇饮食，并用经皮冠状动脉成形(percutaneous transluminal coronaryangioplasty，PTCA)球囊导管过度扩张损伤其双侧髂内动脉内皮，让病变固定于髂内动脉，继而对阴茎及其血管系统产生影响，以建立血管性勃起功能障碍的动物模型，为探讨ED的病理机制、研究治疗方法奠定基础、提供依据。
发明内容
本发明的目的在于提供一种建立血管性勃起功能障碍动物模型的方法，它包括a)选择正常家兔，在饲料中，加入高脂、高胆固醇食品；b)投药喂食5-10天后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术，损伤髂内动脉内皮。
进一步的，本发明所述的正常兔为新西兰大白兔。
进一步的，也可选择高脂血症兔为模型兔。
本发明所述的高脂、高胆固醇食品为按照家兔每天进食量计算的有效量的胆固醇和猪油。
进一步的，有效量的胆固醇和猪油是按照每天进食量的1％-1.5％比例加胆固醇，按4％-6％比例加入猪油，每天早、晚喂食，自由饮水。
本发明在首次投药喂食足够时间后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术。优选的，在首次投药喂食5-7天后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术。再进一步的，在术后第25-30天、第50-60天观察并检测各项指标，优选的，在术后第50-60天观察并检测各项指标，更优选的，在术后第56天观察并检测各项指标。
本发明的目的还在于提供一种筛选血管性勃起功能障碍的动物模型的方法，采用血管活性药物如盐酸罂粟碱诱导阴茎勃起，然后用双核素技术进一步进行检测。作为本发明的实施方式，采用99m锝-113m铟双核素技术，观察动脉显像指数(PIA)及静脉显像指数(PIV)。
本发明对新西兰家兔喂高脂、高胆固醇饲料的同时，我们还采用球囊导管选择性地损伤髂内动脉内皮的方法制作模型。选择家兔作为实验对象，一方面还是基于家兔的阴茎海绵体生理特性和人类的最为相似，另外，由于家兔属于素食性动物，它对高脂、高胆固醇饲料比较敏感，加上PTCA球囊导管损伤血管内皮，因此只需要25天以后就可以形成高脂血症并可以逐渐造成定位于髂内动脉的动脉粥样硬化样病变，而狗、猴子或猪至少需要一至五年的时间[Wissler RW等，Evaluation of animal models for the study of the pathogenesis ofatherosclerosis.InInternational Symposium on the State ofPrevention and Therapy in Human Atherosclerosis in AnimalModels.1992.]，这对实验进度的时限性有所不利。从本实验的结果看，在喂食高脂、高胆固醇并PTCA球囊导管髂内动脉去内皮处理后25-30天，有71％(5/7)动物诱发为ED，第50-60天时86％(6/7)出现ED，事实证明模型制作达到了目标要求。
血中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)升高是高脂血症的主要特征和生化物质基础。本发明的实验结果显示，与同期对照组相比，高脂、高胆固醇饮食的家兔血中TG、TC及LDL随着进食时间的延长明显升高(p＜0.01)，但第4周以后，这三项指标有趋向饱和的趋势。在动脉粥样硬化发生发展的机制中，LDL的过氧化已被肯定。LDL的氧化产物与造影所显示的冠状动脉粥样硬化的严重程度明显相关。研究表明，LDL氧化修饰后加速血管粥样硬化的机制是1.化学趋化作用，加速单核细胞向粥样硬化部位趋化。2.抑制单核巨噬细胞从血管壁返回血液中。3.增强巨噬细胞对脂质的吞噬。4.损伤血管内皮，加速血管内皮剥落。血浆高密度脂蛋白(HDL)是将外周组织(包括粥样硬化病变中的)的胆固醇逆转运至肝脏清除代谢的主要接受体，升高HDL水平有助于促进粥样硬化病变消退[蔡海江等编著，动脉粥样硬化与冠心病(第一版)，北京人民卫生出版社；1982，246-85]。从本实验也可以看到这样的趋势第4周时，实验组的HDL几乎是同期对照组的10倍，两者相比统计学上差异非常显著(p＜0.01)，这是由于机体出现代偿性变化的结果。随着时间的延长，第8周的动物模型血浆中HDL反而出现了下降，虽然和同期对照组相比HDL仍然有差异(p＜0.05)，但却只有对照组的2倍左右，而与第4周时模型组的HDL相比，差异也无显著性，这都说明模型的粥样硬化病变在加重。
ED动物模型的诊断目前尚无统一的标准。这主要是由于缺少理想的评价阴茎勃起功能的指标，使ED动物模型难以建立，从而限制了其发展。发明人在实验中发现，临床常用的盐酸罂粟碱同样可以诱发新西兰家兔阴茎勃起，且副作用很少，因此，我们认为在动物模型的基础上注射盐酸罂粟碱，然后筛选ED病例作为ED动物模型，可以作为评价模型阴茎勃起功能的理想生物指标之一。
99mTc-113mIn双核素技术作为一种安全、无创/微创、客观和比较准确的筛选血管性ED、了解血管性ED的可能病因的方法，用来对动物模型的阴茎血流动力学进行研究是一种新的尝试。本发明的实验结果表明，它完全适合对新西兰家兔的阴茎血流动力学的检查。从本发明的双核素结果发现，模型组的PIA值明显小于同时期正常对照组(p＜0.01)，说明高脂引起的粥样硬化病变损害了家兔阴茎的动脉血供系统；而第4周时模型组的PIV与对照组相比统计学上没有差异，我们认为的原因是(1)高脂、高胆固醇饮食引起阴茎海绵体静脉阻断系统是一个长期的过程，第4周时的动物虽然已经形成高脂血症，但由于机体的代偿机制，此时对阴茎静脉阻断系统的损伤可能还比较轻微；(2)第4周模型组中动物的ED可能以动脉性的为主；(3)第4周时模型组形成ED的比例尚小，组内存在正常勃起功能的家兔。上述这些原因也可以从其与第8周模型组的PIV之间有显著差异(p＜0.05)得到证实，另外第8周模型组的PIV值明显高于正常对照组(P＜0.01)也说明第8周模型的阴茎静脉阻断系统出现了功能障碍。从实验结果结合动物交配试验及阴茎海绵体注射盐酸罂粟碱结果，我们认为高脂加PTCA球囊导管损伤内皮术造成的高脂血症动物模型不仅仅损伤了模型的阴茎动脉血供，也影响了模型的静脉阻断功能，即不仅有“动脉性ED”，也能造成所谓“静脉性ED”和“混合血管性ED”。
本发明采用PTCA球囊导管对家兔双侧髂内动脉进行过度扩张，动脉造影显示扩张后即刻血管管径明显增大，以后在高脂、高胆固醇饮食的刺激下，形成血管狭窄并引起动脉粥样硬化病变(组织病理切片证实)，与PTCA血管损伤变化相似。这些变化从客观上加速并将模型的动脉粥样硬化病变定位到了双侧髂内动脉，为后续实验奠定了基础。由于本发明中PTCA球囊导管髂内动脉去内皮主要是为了帮助在髂内动脉形成动脉粥样硬化病变并加速动物动脉粥样硬化的形成，并将粥样硬化病变定位在髂内动脉，并非为研究PTCA球囊导管损伤对家兔勃起能力的影响。
目前，人们也接受了通过性功能影响的研究，从功能上探讨ED的发病机理。交配实验作为评价性功能的指标之一已经有报道，而且也建立了各种各样的参数。其中，评价勃起功能的参数主要是爬高次数(MF)、插入次数(IF)及命中率(HR)，而爬高潜伏期(ML)是评价性欲的最好指标之一。从本发明的实验结果看，模型组MF及IF数值比对照组明显增加，而HR却明显下降(p＜0.01)说明高脂饮食引起模型粥样硬化样病变后可以降低家兔的性欲，并可以使家兔交配时阴茎勃起的质量明显受到影响，HR也是直接评价勃起功能的良好指标。本研究结果显示，模型组的HR明显比对照组小(p＜0.01)，结合观察爬高次数及插入次数，说明高脂饮食确实可以造成家兔阴茎勃起能力的下降，并可能影响阴茎海绵体对勃起神经的反应能力。通过对4周和8周高脂性家兔模型的研究，发现随着病程的延长，MF、IF明显降低，但第4周时，模型组仍有2只勃起功能良好，虽然结果与同期对照组相比有统计学意义(p＜0.01)，相对而言，第8周模型与第4周模型之间相比，结果也有非常显著性差异(p＜0.01)，这说明随着病程的延长，模型组的阴茎勃起功能受到明显损伤，加上第8周的模型血浆中HDL明显下降，与高脂血症引起的动脉粥样硬化临床特征完全相符，因此从研究角度看，我们认为选择第8周模型动物作为进一步研究对象似乎更能反应高脂对模型动物病理影响的特征。
综上所述，高脂、高胆固醇饮食可以严重影响新西兰家兔的阴茎勃起功能及性功能，且与病程直接相关。随着病程的延长，ED家兔的比例增加。在给予高脂、高胆固醇饲料的同时，采用PTCA球囊导管扩张动物髂内动脉，可以加速模型的形成，并可使模型的粥样硬化病变定位于双侧髂内动脉。在动脉粥样硬化模型的基础上，结合采用海绵体注射盐酸罂粟碱等血管活性药物和双核素技术研究模型的阴茎血流动力学情况，可以筛选ED病例。我们建立的动脉粥样硬化性ED动物模型，对进一步研究血管性ED的发生、发展和其机理，对于临床研究对高脂血症引起的血管性ED的防治及有关ED治疗的临床药理试验都有一定的理论意义。
图1显示了PTCA球囊导管扩张前正常兔双侧髂内动脉造影，其中箭头所示为正常内径的兔髂内动脉。
图2显示了PTCA球囊导管扩张后兔双侧髂内动脉造影，其中箭头所示处动脉发生明显扩张。
图3显示了第4周时(A组)兔双侧髂内动脉造影，其中箭头所示处显示髂内动脉僵硬、狭窄。
图4显示了第8周时(A组)兔双侧髂内动脉造影，其中箭头所示处显示髂内动脉僵硬、狭窄。
图5显示了血管性勃起功能障碍的双核素检测结果。其中A、B图为静脉性勃起功能障碍A图为动脉、静脉联合显像血流图，其中兰色曲线为动脉血流显像，为正常的曲线，红色为存在静脉漏的静脉血流曲线。B图为上左图静脉曲线的放大，显示存在明显的静脉漏现象。
C、D图为动脉性勃起功能障碍C图为动脉、静脉联合显像血流图，其中兰色曲线为动脉血流显像，明显为动脉供血不足曲线，红色为静脉血流曲线，D图是左侧静脉曲线放大，为正常的静脉血流曲线图。
图6显示了模型组血管扩张前后及术后4周、8周平均血管腔直径的变化。
图7显示了模型组家兔髂内动脉呈现动脉粥样硬化病变(HE，10×20)。
具体实施例方式
1.在以下实施例中使用的研究材料(1)动物性成熟雄性新西兰家兔36只，体重3～3.5千克；性成熟雌性新西兰家兔5只。雄兔均有正常勃起功能。
(2)主要试剂及设备猪油、胆固醇、盐酸罂粟碱、胆固醇测定单一试剂、甘油三酯测定试剂盒、高密度脂蛋白测试试剂、PTCA球囊导管(球囊直径1.5mm，长20mm)、ADAC-GENESYS单光子发射电子计算机断层仪(SPECT)。
2.在以下实施例中采用的数据分析及统计方法(1)血清甘油三酯、胆固醇、高、低密度脂蛋白数据采用“x±s”表示，显著性差异用“t”检验。
(2)核素参数采用平均数(x)、标准差(s)和范围(range)表示，正常参考值范围以全部对照组的PIA及PIV平均数的95％参数范围(1.96σ)估计，取区间的下限为正常参考值，显著性差异用“t”检验。
(3)ML、MF、IF的数“据采用x±s”表示，显著性差异用“t”检验。
(4)HR采用“％”表示，显著性差异用“t”检验。
(5)血管造影分析采用DSA造影机中自动血管分析系统测量软件(AVA系统)，对双侧髂内动脉造影结果进行计算机自动边界判断测出扩张前后及术后第4、8周时双侧髂内动脉最小直径及平均直径(以髂内动脉近端、远端及中段的直径计算平均值)。处理组髂内动脉的狭窄程度以“％”表示，其计算公式为(处理组每只动物的实际测得髂内动脉最小直径/对照组动物髂内动脉平均直径)×100％。把处理组数据和正常对照组数据进行“t”检验。
实验组与对照组之间比较的所有统计结果，以p＜0.05表示差异有显著性，p＜0.01表示差异有高度显著性。
实施例1实验动物的准备以及动物模型的制备所有新西兰家兔室内15-25℃环境分笼饲养，每天喂以家兔专用常规颗粒饲料，早、晚各喂食一次，自由饮水。
所有36只雄性新西兰家兔随机分为A，B二组，各18只，A、B两组随机分为高脂模型组(A1和B1)、对照组(A2和B2)。对照组始终用常规颗粒饲料喂养；模型组每天喂料按1％-1.5％比例加胆固醇，按4％-6％比例加入猪油，胆固醇及猪油溶解后充分混匀，均匀喷洒在常规颗粒饲料中。首次投药喂养5-7天后，模型组施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术，损伤髂内动脉内皮。所有动物分别在术后第25-30天、第50-60天进行检测、鉴定。
髂血管成形术以3％戊巴比妥钠经耳缘静脉注入全麻后仰面固定于自制手术台上，颈前正中皮肤去毛、消毒、铺巾；沿颈部正中线切开皮肤，逐层分离并游离右颈总动脉2.5cm，动脉远端0号丝线结扎，近端用动脉夹阻断血流；于颈总动结扎端与动脉夹之间剪一小口，插入导丝、5F长扩张管及动脉导管鞘，放开动脉夹；透视下将导管、导丝经主动脉弓上方插至降主动脉，撤出导丝和扩张管，5F导管鞘留置于主动脉；换5F造影导管经导管鞘插入至髂动脉分叉上方，以约1ml/s速度注入碘必乐(lopamiro)非离子型造影剂，以2幅/秒的速度进行数字减影血管造影。造影结束撤出造影导管，换PTCA球囊导管，透视下在导丝引导下分别插入双侧髂总动脉，继而进入髂内动脉，球囊内灌注肝素生理盐水，导管接压力泵加压扩张血管，扩张期间将球囊导管沿髂内动脉轻轻来回拉动数次，以破坏髂内动脉内皮。每次扩张间隔15~60秒，共三次。扩张后按上述方法再造影一次，撤出5F造影导管及导管鞘，结扎右侧颈总动脉近端，小心止血后逐层缝合切口及皮肤，将家兔送回标准动物房，按上述饲养方法继续饲养。术后三天每天庆大霉素4万单位肌注预防感染。假手术组在将导管插入降主动脉造影后，将PTCA球囊导管在导丝引导下分别进入双侧髂内动脉，随后即退出，造影后缝合皮肤，术后处理同上。各组髂内动脉扩张前后及术后随访血管造影结果见表1。
表1.各组髂内动脉扩张前后及术后随访血管造影结果[x±s]
表1注*扩张前后比较及扩张后与术后4周、8周的随访比较p＜0.01#扩张前与术后4周、8周随访比较p＜0.01在PTCA球囊导管扩张前正常兔双侧髂内动脉造影见图1，扩张后兔双侧髂内动脉造影见图2，比较发现，动脉发生明显扩张。
血标本采集A，B二组分别于术后第4、第8周，经16小时空腹，耳缘静脉抽取静脉血，血液经低速离心、分离出血清，-20℃保存，测定甘油三酯、胆固醇及高、低密度脂蛋白。
髂内动脉血管造影及阴茎、血管标本采集术后第4、8周，双核素测定后，在同一麻醉下，用上述血管成形术同样方法切开左侧颈总动脉，插入5F造影导管进行双髂动脉造影，造影结束后处死动物，切取阴茎组织以备后续实验用。
双侧髂内动脉病理检查结果与对照组相比，模型组髂内动脉血管横切面增大，而管腔面积缩小，血管狭窄；血管内膜增生，内膜下平滑肌细胞排列混乱，并由管壁中膜向内膜浸润；血管腔内可见有粥样斑块形成，粥样斑块下脂质沉积，并可见大量“泡沫细胞”。呈现典型动脉粥样硬化样病变(图7)。
血管造影结果与扩张前比较，扩张后即刻家兔的髂内动脉直径明显扩大(p＜0.01)，平均管腔扩张程度[(扩张后管腔直径-扩张前管腔直径)/扩张后管腔直径]最大为35％，平均为27％±5％；第4、第8周后动脉造影显示双侧髂内动脉管腔直径明显缩小，见图3(第4周)和图4(第8周)。第4周及第8周时，平均管腔狭窄程度[(扩张后管腔直径-4周(或8周)后管腔直径)/扩张后管腔直径]分别为44％±6％和47％±8％，扩张后即刻与扩张前比较差异均有显著性(p＜0.01)。
所有36只新西兰家兔最后有28只完成全部实验，其中A组13只(A1组7只，A2组6只)，B组15只(其中B1组7只，B2组8只)。全部实验家兔中有8只在实验过程中或实验刚开始时意外死亡，其中A组死亡5只(处理组2只，对照组3只)，B组死亡3只(处理组2只，对照组1只)。所有死亡的8只家兔中，4只由于在手术或检查的麻醉过程中因麻醉过度死亡，1只因麻醉过程中低血压死亡，1只因造影过程中导管脱落而死亡，1只于首次造影术后因感染不愈而死亡，1只于喂养的第3日死于腹泻。所有死亡的动物资料不列入统计。
实施例2交配实验交配实验分别于术后第4、8周进行。实验动物放在自制观察笼内，室内保持安静，灯光稍微调暗。适应环境数分钟后，轻轻将发情雌兔放入观察笼。每只雄兔观察30分钟或至第一次射精为止。观察的参数包括(1)爬高潜伏期(mount latency，ML)与雌兔同笼至第一次爬高所需要的时间；(2)爬高次数(mount Frequency，MF)射精前爬高的次数，不管有无插入；(3)插入次数(intromissionfrequency，IF)射精前所插入次数；(4)命中率(hit rate，HR)插入次数与爬高次数的比率。
各组家兔与发情雌兔的交配情况见表2。从表中可见，模型组与同期对照组相比，各参数均有显著改变。即ML明显延长，IF和MF均明显增加，而HR明显下降(p＜0.01)。对照组之间相比，差异无显著性。随着病程的延长，模型组MF比同期对照组明显延长，模型组的HR明显比对照组低(p＜0.01)。通过对4周和8周高脂性家兔模型的研究，发现第8周时的模型组比第4周模型ML、MF、IF也明显延长(增加)，两者之间的数据差异也有显著性(p＜0.01)，但HR差异无显著性(p＞0.05)。
表2.各组交配实验结果[x±s]
模型组与同期对照组相比*p＜0.05，**p＜0.01；模型组之间相比(A1与B1)#p＜0.05##p＜0.01
实施例3兔阴茎血流99m锝-113m铟双核素检测双核素检测于术后第4或(A组)第8周(B组)交配实验后进行(图5)。麻醉方法同上。根据预实验发现，一般新西兰大白兔采用2-4mg盐酸罂粟碱即可以诱发正常阴茎勃起，因此对处理组及对照组家兔均采用盐酸罂粟碱5mg诱导阴茎勃起，所有实验动物阴茎海绵体注射血管活性药物体积为0.17ml。双核素测定方法及所用仪器详见[陈斌等，99mTc-113mIn双核素技术在血管性勃起功能障碍诊断中的应用，中国男科学杂志2000；14(4)297]。主要观察指标是动脉显像指数(PIA)及静脉显像指数(PIV)。
在第4周，双核素检测开始时，对阴茎海绵体注射罂粟碱后观察动物的阴茎勃起情况，结果发现A1组中2只勃起良好，5只(71.43％，5/7)勃起不佳，其中1只为注射药物后仅勃起1分钟即软缩；第8周时B1组1只勃起良好，6只(85.71％，6/7)勃起不佳，其中有2只勃起后仅维持约40秒。所有正常对照组均勃起良好。
对照组及模型组在第4、第8周的双核素测定时间-效应曲线图与人的测定图像类似，正常对照组99mTc-RBC阴茎海绵体动脉系统显像曲线形态为注射药物后曲线由近似直线上升迅速变为呈对数型上升，然后基本保持为一水平延长线。所有对照组(包括第4周及第8周时)99mTc阴茎动脉显像指数(PIA)最低为76.29，最高为116.94，总PIA平均值为97.20±13.25，其95％可信区间范围为89.54-104.85。根据总PIA估算的正常值为大于或等于71。113mIn阴茎海绵体静脉系统显像曲线形态为由诱发勃起前及用药初期的曲线陡然下降，变为用药后2-4分钟曲线下降略减慢，随着时间的推移，在动脉曲线呈水平延长线时，清除曲线基本呈低水平线。全部对照组113mIn阴茎静脉总平均显像指数(PIV)为-27.95±3.55，最低为-33.63，最高为-22.24，其95％可信区间范围为-30.00-25.90。根据总PIV估算的正常值为大于或等于-35。
模型组的双核素曲线形态分别或同时出现动脉系统显像曲线呈现缓慢上升或呈低平上升、静脉系统显像曲线呈现陡然持续下降，并很快维持在低水平上。各组双核素测定结果见表4。从表3可见，模型组的PIA及PIV均比同期对照组明显降低，模型组PIA与对照组相比，结果差异均有显著性(p＜0.01)，第8周的PIV与同期对照组相比(B1与B2)差异也有显著性(p＜0.01)，但第4周的模型组与对照组(A1与A2)PIV结果没有统计学差异(p＝0.108，＞0.05)，进一步比较发现，A1组与B1组之间的PIV在统计学上也有差异(p＝0.039，p＜0.05)。
表3.各组双核素测定结果(x±s)
模型组与同期对照组相比*p＜0.01；模型组之间相比(A1与B1)#p＜0.05，##p＜0.01实施例4血脂测定1.胆固醇(TC)测定分别向空白管、测定管及标准管中加入10μl生理盐水、10μl血清及10μl标准液，然后往所有试管中加入1.5ml胆固醇试剂，混匀，37℃水浴10分钟，在500nm波长，10mm光径，试剂空白液校零位，生化分析仪上分别读取A值。胆固醇计算公式为(测定管A值/标准管A值)×5.17＝胆固醇mmol/L。结果超过15.6mmol/L时，用生理盐水将样品稀释，重新测定所得结果乘以稀释倍数。
2.甘油三酯(TG)测定分别向标记有空白管、测定管和标准管的试管中加入1.0ml甘油三酯试剂，37℃水浴4分钟，然后分别向空白管、测定管及标准管中加入10μl生理盐水、10μl血清及10μl标准液，充分混匀，再37℃水浴10分钟，空白管在520nm波长校零位，最后在生化分析仪上读取吸光度A值。甘油三酯计算公式(测定管A值/标准管A值)×2.26＝甘油三酯mmol/L。结果超过18.65mmol/L时，生理盐水稀释样品，重新测定所得结果乘以稀释倍数。
3.高、低密度脂蛋白测定(HDL、LDL)由BM/HITACHI脂蛋白自动测定仪完成。高密度脂蛋白结果超过0.08-3.90mmol/L时，用生理盐水将样品稀释，重新测定所得结果乘以稀释倍数。低密度脂蛋白由仪器计算系统根据高密度脂蛋白测试结果，再根据Friedwald[5]方程式计算后自动输出。
血清甘油三酯、胆固醇、高、低密度脂蛋白数据采用“x±s”表示，显著性差异用“t”检验。
各组动物血脂测定结果表明高脂、高胆固醇饮食加PTCA成形术的动物血清中血脂含量明显高于同期对照组(见表4)。从表中可见随着病程的进展，TG、TC及LDL均逐渐升高，但第4周以后，TG、TC及LDL有趋向饱和的趋势，而HDL在第4周时显著升高，以后又逐渐下降，但与同期对照组相比，仍属于偏高；模型组与同期对照组相比，各项血浆血脂指标与同期对照组相比，差异均有显著性(p＜0.05或p＜0.01)。而A1组与B1组相比，HDL之间差异也有显著性(p＜0.05)，TG、TC及LDL差异则无显著性(p＞0.05)。
表4.各组血脂测定结果[x±s(mmol/L)]
模型组与同期对照组相比*p＜0.05，**p＜0.01；模型组之间相比(A1与B1)#p＜0.0权利要求
1.一种建立血管性勃起功能障碍动物模型的方法，其特征在于，它包括a)选择正常兔，在饲料中，加入高脂、高胆固醇食品；或高脂血症兔；b)正常兔投药喂食5-10天后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术，损伤髂内动脉内皮。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的正常兔为新西兰大白兔。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，选择高脂血症兔进行喂养。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高脂、高胆固醇食品为有效量的胆固醇和猪油。
5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，按每天进食量的1％-1.5％比例加胆固醇，按4％-6％比例加入猪油，每天早、晚喂食，自由饮水。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在首次投药喂食5-7天后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术。
7.一种筛选血管性勃起功能障碍的动物模型的方法，其特征在于，在术后第25-60天观察并检测各项指标，进行模型筛选。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，采用血管活性药物诱导阴茎勃起，用核素技术及动物交配试验进行检测。
9.根据权利要求8所述的筛选血管性勃起功能障碍的动物模型的方法，其特征在于，所述的血管活性药物为盐酸罂粟碱。
10.根据权利要求8所述的筛选血管性勃起功能障碍的动物模型的方法，其特征在于，所述的核素技术为双核素技术。
11.根据权利要求10所述的筛选血管性勃起功能障碍的动物模型的方法，其特征在于，所述的双核素技术为99m锝-113m铟双核素技术。
全文摘要
本发明属于医学和动物行为学领域，公开了一种建立血管性勃起功能障碍动物模型的方法，包括选择正常新西兰家兔，在常规饲料中，加入有效量的胆固醇和猪油；投药喂食一段时间后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术，损伤髂内动脉内皮；术后通过交配试验、双核素或海绵体注射血管活性药物进行检测、鉴定。本发明建立的血管性勃起功能障碍的动物模型，为探讨勃起功能障碍的病理机制、研究治疗方法及临床新药开发及药物验证提供了必要依据。
文档编号G09B23/00GK1713245SQ200410025298
公开日2005年12月28日 申请日期2004年6月21日 优先权日2004年6月21日
发明者陈斌 申请人:上海第二医科大学附属仁济医院, 陈斌