专利名称：使用来自胎儿细胞和组织的化合物改善皮肤状况的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有胎儿细胞和组织表达的改善皮肤状况的化合物的化妆品护肤组合物。本发明还涉及鉴定和制备胎儿细胞和组织表达的化合物的方法。本发明还涉及使用蛋白多糖改善皮肤状况的方法和化合物，所述蛋白多糖包括纤调蛋白聚糖，和任何功能等价化合物。
背景技术：
皮肤，除了别的之外，由表皮和真皮层组成。真皮层为表皮提供支持和供血。真皮层在维持皮肤的弹性和外观中也是重要的。真皮主要由细胞和胞外基质(“ECM”)组成。ECM的组成主要由成纤维细胞决定，成纤维细胞产生各种成分，象胶原，弹性蛋白和蛋白多糖。随着年龄的增长，以及暴露于太阳和环境污染物，支持真皮进行性变薄和破坏。这直接导致表皮的下垂而产生皱纹，即形成皱纹。(参见，例如，Oikarinen A.皮肤的老化时间老化对光老化，Photodermatol Photoimmunol Photomed，73-4，1990)。
本领域十分明确的是胎儿皮肤与成年人皮肤根本不同。例如受伤之后，成年人皮肤通过形成疤痕而修复，这个过程特征在于用胶原和各种ECM成分的混乱沉积替代受伤组织，总称为“疤痕”。相反，胎儿皮肤通过细胞再生和正常皮肤结构通过胶原和各种ECM成分的有序沉积而修复来发生修复，以实现无疤痕修复。研究表明无疤痕皮肤修复的能力是胎儿皮肤的一个品质，不需要胎儿免疫系统，胎儿血清，或羊膜液(Bleacher JC，Adolph VR，Dillon PW，Krummel TM，分离的小鼠胎儿四肢妊娠对没有灌注的系统中组织修复的影响，JPediatr Surg281312-4；讨论 1314-5，1993；IharaS，Morobayashi Y.，大鼠胎儿皮肤伤口愈合，Development114573-82，1992)。例如，分离的人胎儿皮肤移植到无胸腺小鼠中痊愈而不产生典型的疤痕组织(Adzick NS，Lorenz HP.，细胞，基质，生长因子，和外科医师，无疤痕胎儿伤口修复生物学，Ann Surg22010-8，1994)。
因此，显然，在非-胎儿皮肤(例如成年皮肤)中存在很少或者根本不存在的胎儿皮肤再生中的特异分子或成分在皮肤再生和促进皮肤外观中是重要的。
现有技术中将很多种化合物和技术描述为对于促进皮肤特别是“老化”或有皱纹皮肤的状况是有用的。典型的化合物包括刺激表皮细胞生长的视黄酸。维生素类(retinoids)公认为是抗皱纹活性物质，其有助于减小老化的皮下作用，象起皱纹，皮革化，松弛，粗糙，干燥，和有色斑(高色素沉着)(参见美国专利No.4603146和4877805)。假设维生素类通过产生炎症而起作用，其引起表皮增厚(棘皮症)，和局部细胞间水肿，导致表皮脱落并且改善皮肤纹理和外观。也有人描述过使用L-抗坏血酸刺激成纤维细胞生长和胶原的产生(Hata R Senoo H.，L-抗坏血酸2-磷酸酯刺激皮肤成纤维细胞的胶原积累，细胞增殖，和三维组织样物质的生成，J Cell Physiol1388-16，1989)。促进皮肤状况的技术包括诱导皮肤刺激/通过化学品(例如苯酚脱屑)，机械(例如擦皮法)，或热(例如激光)方法的损伤的慎重方法。对表皮和/或真皮的损伤最后导致新细胞生长和胞外基质分解，这可以改善总的皮肤外观。然而，所有这些技术的主要不想要的副作用是不期望的皮肤刺激或损伤。
因此本领域对于开发促进皮肤状况但是必须不引起皮肤刺激或损伤的护肤产品有需要。此外，现有技术没有提到过模范护肤组合物的理想模式。当前有效的护肤组合物通过试验发现很多错误。我们发现具有其固有自我再生和无疤痕修复性质的胎儿皮肤是化妆品护肤组合物模式的一个理想模式。当前，本领域现状没有涉及使用胎儿皮肤作为模型在护肤组合物配方中使用。此外，我们发现向护肤组合物中加入胎儿组织表达的成分对于促进皮肤状况是有用的，特别是对于已经丧失再生能力的“老化”或环境伤害的皮肤。
本发明的一个实施例和新的方面是我们发现胎儿组织表达的几种成分之一纤调蛋白聚糖出人意料地改善皮肤中真皮胶原的结构而没有皮肤刺激现象。当局部施用纯化的纤调蛋白聚糖或富集纤调蛋白聚糖的细胞提取物时改善皮肤状况而没有刺激作用。虽然本领域曾有人描述过使用纤调蛋白聚糖减轻与急性皮肤损伤有关的真皮疤痕(参见美国专利No.5654270和5510328)，但是本领域现有状况是没有描述用于促进没有伤的皮肤状况的纤调蛋白聚糖或功能等价分子的新的化妆品皮肤护理应用。
发明概述本发明描述的是含有胎儿组织表达的促进皮肤状况的化合物的新的化妆品护肤组合物。将化合物送递给皮肤的途径包括但不限于溶液，洗液，软膏，霜剂，凝胶，或皮肤去屑带。
虽然胎儿组织表达的化合物的各自鉴定或纯化可能是有用的，但是本发明的应用不需要化合物的各自鉴定或纯化。本发明还涉及鉴定胎儿组织表达的化合物的方法或者鉴定促进这些化合物表达的状况的方法。本发明还涉及通过改变外部细胞环境或者通过重组表达而促进胎儿组织表达的化合物的表达的方法。
本发明还涉及应用含有胎儿组织表达的化合物改善皮肤状况的方法。所述方法一般包括对需要处理的哺乳动物的皮肤施用组合物的步骤，并且使用安全而有效量的组合物。
此外，本发明描述含有安全而有效量的纯化形式或富集提取物形式的纤调蛋白聚糖或功能等价分子的新的化妆品护肤组合物。
根据配方含有胎儿组织表达的化合物或纤调蛋白聚糖的组合物中可以含有的其它成分是安全而有效量的透明质酸，一种另外的皮肤护理活性成分，和皮肤可接受的载体。
组合物的优选实施方案包括但不限于透明质酸，ECM肽或多肽，生长因子，和L-抗坏血酸。
本发明的这些和其它特征，方面，和优点通过阅读本发明说明书对于本领域技术人员是明显的。
详细描述一般来说，本发明描述的是促进皮肤再生的方法，包括对哺乳动物皮肤施用胎儿组织表达的化合物。该方法可以进一步包括分离胎儿组织表达的化合物，鉴定该化合物，重组表达该化合物，然后对哺乳动物皮肤施用该化合物。
在本发明的另一个实施方案中，促进皮肤再生的方法包括将成年人组织表达的化合物与胎儿组织表达的化合物相比较。选择只在成年人组织中表达的化合物并且选择阻断只在成年人组织中表达的化合物的表达的其它化合物。然后对哺乳动物皮肤施用该阻断化合物。
还提供化妆品护肤组合物，其可以包括一种胎儿组织表达的化合物。提供其它护肤组合物，其可以包括一种蛋白多糖例如纤调蛋白聚糖。
这里使用的所有的百分比和比例是以总组合物的重量计，并且除非另有说明所有的测量都在25℃下进行。
这里使用的术语“局部施用”意思是将本发明的组合物施用或涂抹在皮肤表面上。
这里使用的术语“皮肤可接受的”意思是描述的组合物或者其成分适合与人皮肤接触使用而没有不适当的毒性，不兼容性，不稳定性，过敏反应等等。
这里使用的术语“安全而有效量”意思是足以显著诱导正面效果，优选皮肤外观的正面效果或感觉效果，包括这里公开的各种好处，但是足够低以避免严重的副作用，即提供合理的利益风险比，在技术人员可靠判断范围内的化合物或组合物的量。
这里使用的术语“纤调蛋白聚糖”意思不只是纤调蛋白聚糖，还有有或没有基因修饰的任何功能等价分子。
这里使用的术语“野生型纤调蛋白聚糖蛋白质”意思是没有基因修饰的组织中天然存在的纤调蛋白聚糖。
这里使用的术语“重组纤调蛋白聚糖cDNA”意思是克隆到合适的表达载体(例如质粒，腺病毒)中的纤调蛋白聚糖cDNA(有或没有基因修饰)。
这里使用的术语“重组表达的”意思是为了从cDNA获得蛋白质表达的目的胎儿组织产生的克隆到合适的表达载体(例如质粒，腺病毒)中的cDNA(有或没有基因修饰)。
这里使用的术语“溶胞产物”意思是通过使用合适的洗涤剂溶解细胞获得的成分。
这里使用的术语“提取物”意思是进一步纯化或浓缩细胞溶胞产物物质获得的成分。
这里使用的术语“培养基”意思是从没有修饰的或基因修饰的胎儿细胞或组织的外部环境分离的成分。
这里使用的术语“化合物”可以认为等价于“分子”，但是术语“分子”在当描述单一整体时是更优选的。
本发明的组合物用于局部施用和促进皮肤状况，包括改善皮肤的视观和/或触觉间断性(特别是皮肤表面；这样的间断性一般是不期望的)。内部和/或外部因素可以诱导或引起这样的间断性，并且包括这里描述的皮肤老化信号。术语“促进皮肤状况”包括预防性促进和/或治疗性促进皮肤状况，包括皮肤的视观和/或触觉间断性。如这里使用的，预防性促进皮肤状况包括延迟，最小化和/或防止皮肤的视观和/或触觉间断性。如这里使用的，治疗性促进皮肤状况包括减轻(例如减小，最小化和/或消除皮肤的间断性)。促进皮肤状况包括改善皮肤外观和/或感觉。
本发明的一个实施方案中，可以直接通过组织培养基或细胞溶胞产物分离胎儿细胞或组织表达的化合物，并且进一步浓缩或纯化。虽然胎儿组织表达的化合物的各自鉴定或纯化可能是有用的，但是本发明的应用不需要化合物的各自鉴定或纯化。然后可以将可以或可以不进一步浓缩或纯化的组织培养基或细胞溶胞产物配制成改善皮肤状况的化妆品组合物。请参照最后章节对具体的组合物的更详细描述的实施例。下面是为了阐述而不是限制本发明的范围。
胎儿组织表达的化合物从胎儿组织培养物系统直接获得如上文所述，胎儿皮肤具有无疤痕皮肤修复和组织再生的能力。因此，可以从胎儿皮肤器官培养物，二维或三维胎儿细胞培养物，和来自培养的胎儿细胞/组织的培养基获得胎儿组织表达的没有基因修饰的化合物。这些化合物可以是溶胞产物，提取物，或培养基形式。细胞和组织培养方法，以及获得细胞溶胞产物或提取物的方法，是本领域公知的(参见Pollard JW，Walker JM(1987)，基础细胞培养方法，第二版，Humana Press，Totowa，N.J，对细胞培养有更具体的描述)。可以分离细胞培养物培养基并且处理得到的上清液，细胞培养物上清液处理是本领域技术人员公知的并且可以包括但不限于上清液的浓缩，从上清液纯化特异化合物，和上清液的灭菌。细胞培养上清液处理方法应该确保胎儿组织表达的化合物的生物学活性的最佳保留。也期望和需要促进灭菌的无菌处理和其它努力。
下面的实施例是为了阐明而不是限制本发明的范围。
胎儿细胞培养物的实施例通过将胎儿皮肤小条(真皮面朝下)放到细胞培养板上，从胎儿皮肤样品可以分离胎儿皮肤成纤维细胞。胎儿皮肤成纤维细胞从皮肤片迁移并附着到培养板上，在成纤维细胞附着于培养板上之后，弃除皮肤片。使胎儿皮肤成纤维细胞生长至期望的汇合度并且根据标准技术分离。
胎儿细胞培养基制备的实施例通过从胎儿组织或细胞培养物倒出或吸出液体可以获得胎儿细胞培养基(或上清液)。取出之后，可以进一步处理得到的上清液。这样的处理的例子包括但不限于通过水流动吸滤装置或defiltration浓缩(关于进一步处理的更多信息参见下面“从胎儿细胞培养基或溶胞产物纯化蛋白质的实施例”章节)。
胎儿细胞溶胞产物制备的实施例细胞培养板中胎儿皮肤成纤维细胞生长至70-80％汇合之后，如下进行细胞溶胞产物制备(1)为了去除血清，在磷酸缓冲液(PBS)中充分洗涤含有胎儿成纤维细胞的培养板；(2)胎儿成纤维细胞然后与解离酶例如胰蛋白酶温育大约3分钟，有利于从培养板解附；(3)解附的细胞然后通过离心而沉积，然后用洗涤剂例如十二烷基硫酸钠(SDS)溶解。然后将上清液透析去除痕量SDS。
也通过化学(例如有机溶剂)，酶学(例如溶菌酶和EDTA)，机械，或物理细胞破碎方法(例如匀化，超声，高压匀化，摩擦搅动)分离胞内产物。也包括机械和非机械方法的组合。
从胎儿细胞培养基或溶胞产物纯化蛋白质的实施例应用各种方法能进行胞外(细胞培养基)或胞内(溶胞产物)产物的纯化，有利于产物纯化或去除不期望的污染物。一种方法是固-液相分离(例如离心/沉降，萃取，过滤)。另一种方法是浓缩(例如蒸发，超滤，吸附，沉淀)。还有另一种方法是色谱法(例如大小排阻色谱，离子交换色谱，层析聚焦，疏水性相互作用，亲和色谱，固定化金属-离子亲和色谱，共价色谱。本领域技术人员容易实施这些技术。如果需要，也可以应用灭菌技术例如过滤或加热或照射(有关蛋白质纯化的更多信息参见RatledgeC，Kristiansen B(2001)，基础生物学，第二版，剑桥出版社，剑桥，U.K.)。
在本发明的另一个实施方案中，鉴定了胎儿组织表达的化合物或促进这些化合物表达的条件。一旦得以鉴定，本发明还涉及通过改变外部细胞环境或者通过重组表达促进胎儿组织表达的化合物的表达的方法。然后可以从天然组织(野生型)或者从合适的表达载体例如细菌或酵母(有或没有编码区修饰的重组形式)分离该化合物，然后配制成改善皮肤状况的化妆品组合物。有关具体组合物的更详细描述请参见这里提供的实施例。下面的描述目的在于说明，而不是对本发明的限制。
胎儿组织和细胞中分子的各自分离和鉴定胎儿组织和细胞表现出与成年人细胞截然不同的基因表达模式。就蛋白质水平来说，这能导致截然不同的ECM成分，生长因子，细胞因子和酶的差异产生(Sullivan KM，Lorenz HP，Meuli M，LinRY，Adzick NS，无疤痕人胎儿伤口修复模型是转化生长因子β不足，JPediatr Surg30198-202；讨论202-3，1995)。例如，胎儿皮肤成纤维细胞产生较高的III型与I型胶原之比和不同的蛋白多糖曲线，以及更多的透明质酸(Mast BA，Diegelmann RF，Krummel TM，CohenIK，哺乳动物胎儿无疤痕伤口愈合，Surg Gynecol Obstet174441-51，1992)。另外蛋白多糖是带有在ECM装配，细胞相互作用，和生长因子贮存中起关键作用的一个或多个葡糖胺多糖侧链的核心蛋白(Ruoslahti E.，细胞调节中的蛋白多糖，J.Biol Chem26413369-72。1989)。
通过标准分子生物学技术可以鉴定胎儿和成人组织之间的基因表达差异。例如，可以应用Northern印迹，减数杂交，差示PCR，微阵列，和实时PCR，来鉴定基因表达差异。(下面是对于各种各样的技术中的一些的样品参考DD-PCR-Liang L，Arthur BP.，利用聚合酶链反应的真核细胞信使RNA的差示展示，Science257967-971，1992；微阵列-Zhang X，Kuroda S，Carpenter D，NishimuraI，Soo C，Moats R，lidaK，Wisner E，Hu FY，Miao S，Beanes S，DangC，Vastardis H，Longaker M，Tanizawa K，Kanayama N，Saito N，TingK，转基因小鼠超表达Nell-1中的颅缝早闭，J ClinInvest110861-70，2002；减数杂交 - Diatchenko L，LauYF，Campbell AP，Chenchik A，Moqadam F，Huang B，Lukyanov S，Lukyanov K，Gurskaya N，Sverdlov ED，Siebert PD，抑制减数杂交差异产生调控的或组织特异性的cDNA探针和文库的方法，Proc NatlAcad Sci U S A936025-30，1996)。应用各种差异基因表达鉴定技术，能阐明胎儿皮肤再生中特定作用的分子“蓝迹”，并且特异分子鉴定是在胎儿再生修复期间被上调或下调。
鉴定的分子在胎儿组织和细胞中的应用然后可以分离早期胎儿，而不是晚期胎儿或成人组织或细胞中的上调分子，并且进行鉴定以用于接着产品开发。这些上调分子可以“回加”，赋予成年人皮肤更“象胎儿”的性质。相反，成年人组织而不是胎儿组织中上调的分子也可以进行鉴定以用于接着的产品开发。人们可以“阻断或抑制”成年人组织中鉴定的上调分子，赋予成年人皮肤更“象胎儿”的性质。
下面是为了阐明而不是限制本发明的范围。要“回加”的分子可以直接从胎儿组织或胎儿细胞培养基，溶胞产物，或提取物得到(参见前面的章节从组织培养系统直接得到)。或者，要“回加”的分子可以为了提高其表达的目的在基因工程细胞中“重组表达”(有或没有事先的基因修饰)。然后可以分别地或联合地在皮肤组合物中使用胎儿细胞或组织中的上调分子。相反，可以使用反义RNA分子或已知的抑制剂(例如用于抑制转化生长因子β的甘露糖-6磷酸酯)瞄向成年人组织而不是胎儿组织中鉴定的上调分子(即要“阻断或抑制”的分子)。然后可以接着在化妆品护肤组合物中使用反义RNA分子或已知的抑制剂。
各种基因分离的实施例比较胎儿成纤维组织(或细胞)与成年人成纤维组织(或细胞)之间的基因表达。换句话说，将无疤痕胎儿伤口愈合中的基因表达与有疤痕的成年人伤口愈合中的基因表达相比较。利用各种分子生物学技术，包括差示PCR，减数杂交和微阵列能比较基因。根据它们在胎儿成纤维细胞，胎儿皮肤，或胎儿皮肤伤口再生中是否是上调的，下调的，或者没有变化的而将基因分类。
各种基因鉴定的实施例克隆并表达分离的基因，这是本领域公知的(更多信息参见WuW(1997)，基因生物技术方法，CRC Press，Boca Raton)。
重组表达之前基因修饰的实施例在确定的基因序列的非编码或非必需区(例如启动子区，非翻译3’区)以及确定的基因序列的编码或必需区中创建突变或基因修饰。所谓“必需”意思是对于实施其想要的功能的基因是关键的基因的部分。一般进行非编码区中的基因修饰来提高基因总的转录或翻译效率和提高最终蛋白质产物纯化的容易程度-这些变换一般不影响基因的功能特征。相反，一般为了修饰翻译的产物以增强或减弱基因的期望的功能的目的(例如对于目标分子改变亲和性，改变皮肤渗透性特征，改变翻译后处理，改变分子的半寿期)进行编码区的基因修饰。对于非编码或编码修饰这两方面的技术是本领域公知的。
原核细胞中各种基因的重组表达的实施例构建包含感兴趣的基因的载体用于晚期插入到原核细胞中。可以使用强启动子(例如T7)或Lac启动子诱导高转录效率。将有效亲和性结合序列例如组氨酸亲和性标记插入到具有蛋白酶裂解位点的N-末端。可以插入附加的序列例如麦芽糖结合蛋白来提高溶解性(Hildebrand A，Romaris M，Rasmussen LM，Heinegard D，TwardzikDR，Border WA，Ruoslahti.，小间隙蛋白多糖二聚糖，核心蛋白聚糖和纤调蛋白聚糖与转化生长因子β的相互作用，Biochem J 302(Pt2)527-34，1994)。
真核细胞中各种基因的重组表达的实施例真核系统例如酵母，杆状病毒，和哺乳动物系统都可以进行基因产物的翻译后修饰。在酵母中可以使用强启动子例如AOX1或在哺乳动物细胞中可以使用巨细胞病毒(CMV)来诱导高转录效率。在翻译产物的N或C末端可以插入亲和性标记。也可以在N-末端插入分泌序列来提高期望的重组分子分泌到细胞培养基中的分泌作用。
通过商业公司使用生物工程植物系统也可以进行重组蛋白质的大规模表达(例如，www.VentriaBio.com)。
在本发明的一个优选的实施方案中，从天然组织(野生型)或者从合适的表达载体例如细菌或酵母(重组形式-有或没有修饰的编码区)能分离胎儿组织表达的特异化合物，然后配制成改善皮肤状况的化妆品组合物。这里描述了具体组合物的实施例。下面是为了阐明而不是限制本发明的范围。
纤调蛋白聚糖形式野生型蛋白质可以商购获得纯化的野生型纤调蛋的聚糖(从Sigma-AldrichCorp.，St Louis，MO购买)。
重组蛋白质通过将纤调蛋白聚糖cDNA，优选人源，克隆到合适的表达载体(例如质粒，腺病毒)中获得重组纤调蛋白聚糖。人纤调蛋白聚糖cDNA是本领域公知的(GenBank登记号X75546)。
重组表达之前的基因修饰也可以利用本领域公知的技术对重组纤调蛋白聚糖cDNA的编码序列进行基因修饰以增强特异性特征。例如，通过利用寡核苷酸引物可以利用定点诱变提高蛋白质对其受体的结合亲合力。另外，可以加入亲水性和分泌序列例如Igκ-链或组氨酸和GST标记序列来提高纯化效率。
也可以利用本领域公知的技术对重组纤调蛋白聚糖cDNA的非编码序列进行基因修饰以增强特异性特征。例如，天然哺乳动物启动子不足以有效产生大量蛋白质。在这样的情况下，可以将CMV和SV40启动子插入到哺乳动物体系中来提高转录效率。另外，可以在3’-端加SV40或β-珠蛋白聚A序列来提高稳定性和蛋白质产生效率。
富集细胞溶胞产物，提取物或培养基从非基因修饰细胞或基因修饰细胞可以分离纤调蛋白聚糖。
细胞和组织培养方法，以及获得细胞溶胞产物或提取物的方法现有技术描述充分，本领域技术人员能够实施(更多信息参见PollardJW，Walker JM(1997)，基础细胞培养方法，第二版，HumanaPress，Totowa，N.J)。可以分离富集纤调蛋白聚糖的细胞培养基，并且处理得到的上清液。这样的处理对于本领域技术人员是显而易见的，并且包括但不限于浓缩上清液，从上清液纯化特异化合物，对上清液灭菌。这些方法应该保证最佳保持胎儿组织表达的化合物的生物学活性。也期望防腐处理和促进灭菌的其它努力。
本发明的优选实施方案还可以含有但不限于透明质酸，ECM肽或多肽，生长因子，和L-抗坏血酸。要明白术语透明质酸包括其衍生物并且广义指葡糖醛酸和N-乙酰基-D-葡糖胺残基构成的各种分子量的酸性多糖的天然存在的，微生物产生的和合成衍生物。
除了被描述是用于护肤组合物护肤剂之外(参见美国专利No.6444647)，还相信透明质酸在胎儿组织再生中起着重要作用(Burd DA，Greco RM，Regauer S，Longaker MT，Siebert JW，GargHG.，透明质酸(Hyaluronic)和伤口愈合新展望。Br J PlastSurg44579-84，1991)。
在本发明的一个优选的实施方案中，透明质酸和胎儿组织表达的化合物一起用于皮肤护理目的并且加强含有胎儿组织表达的化合物的化妆品护肤组合物的效果。在化妆品配方中使用透明质酸和胎儿组织表达的化合物来促进皮肤状况是本发明的新概念。
附加的皮肤护理活性成分本发明的组合物可以含有安全而有效量的一种或多种附加的皮肤护理活性成分，选自但不限于脱皮活性成分，抗粉刺活性成分，维生素类物质，羟基酸，肽，多肽，生长因子，细胞因子，抗氧化剂，自由基清除剂，螯合剂，抗炎剂，局部麻醉剂，鞣皮活性物质，皮肤光亮剂，抗-蜂窝织炎组织试剂，黄酮类物质，抗微生物活性物质，润肤剂，皮肤修补剂，抗真菌活性物质，防晒活性物质，护理剂，结构剂，增稠剂和其混合物。
在优选的实施方案中，在组合物要接触人角质组织的情况下，附加成分应该适合对角质组织施用，即，当混入到组合物中时，它们适合接触人角质组织而没有过度毒性，不兼容性，不稳定性，过敏反应，和合理医药判断范围内的类似性质。CTFA化妆品成分手册，第二版(1992)描述了很多种非限制性的皮肤护理业通常使用的化妆品成分和药物成分，它们适合在本发明组合物中使用。这些成分类别的例子包括研磨剂，吸收剂，美感成分例如香味剂，染料，颜料/着色剂，精油，皮肤感觉物质，收敛剂等(例如丁子香油，薄荷醇，樟脑，桉树油，子丁香酸，乳酸薄荷酯，金缕梅蒸馏产物)，抗粉刺物质，抗结块物质，消泡剂，抗微生物剂(例如丁基氨基甲酸碘代丙酯)，抗氧化剂，粘合剂，生物添加剂，缓冲剂，填充剂，螯合剂，化学添加剂，着色剂，化妆品收敛剂，化妆品杀虫剂，变性剂，药物收敛剂，外部止痛剂，成膜剂或材料(例如聚合物)，有助于组合物的成膜性质和实质性(例如二十碳烯和乙烯吡咯烷酮的共聚物)，不透明剂，pH调节剂，推进剂，还原剂，多价螯合剂，皮肤漂白剂和光亮剂(例如氢醌，曲酸，抗坏血酸，磷酸抗坏血酸镁，抗坏血酸葡糖胺)，皮肤调理剂(例如湿润剂，包括各种各样的和包藏的)，润肤剂和/或恢复剂(例如泛醇和衍生物(例如乙基泛醇)，芦芸，泛酸和衍生物，尿囊素，防风根醇，和甘草酸二钾)，皮肤处理剂，增稠剂，和维生素及其衍生物。
但是，在本发明的任何实施方案中，通过它们提供的利益或者通过它们假设的作用模式能将这里有用的活性成分分类。但是，要明白这里有用的活性成分在某些情况下能提供一个以上的优点或者通过一个以上的作用模式作用。因此，这里的分类只是为了方便起见而不是要将活性物质限制到特定应用或列出的应用。
脱屑活性成分可以向本发明的组合物中加入安全而有效量的脱屑活性成分，更优选大约0.1％至大约10％，甚至更优选大约0.2％至大约5％，还更优选大约0.5％至大约4％，以组合物的重量计。
脱屑活性成分提高本发明的皮肤外观受益。例如，脱屑活性成分是为了改善皮肤的纹理(例如光滑感)。一种适合在本发明中使用的脱屑体系含有巯基化合物和两性离子表面活性剂，并且描述于Bissett的美国专利No.5681852，这里引作参考。另一种适合在本发明中使用的脱屑体系含有水杨酸和两性离子表面活性剂，并且描述于Bissett的美国专利No.5652228，这里引作参考。例如这里专利申请中描述的两性离子表面活性剂也可以在本发明中用作脱屑剂，鲸蜡基甜菜碱是特别优选的。
抗粉刺活性成分本发明的组合物可以含有安全而有效量的一种或多种抗粉刺活性成分。有用的抗粉刺活性成分包括间苯二酚，硫，水杨酸，苯甲酰过氧化物，红霉素，锌等。合适的抗粉刺活性成分的例子进一步详细描述于McAtee等的1997年3月4日公开的美国专利No.5607980中。
抗皱纹活性成分/抗萎缩活性成分本发明的组合物可以进一步含有安全而有效量的一种或多种抗皱纹活性成分或抗萎缩活性成分。适合在本发明的组合物中使用的抗皱纹活性成分/抗萎缩活性成分的例子包括含有硫的D和L氨基酸和它们的衍生物和盐，特别是N-乙酰基衍生物，优选的例子是N-乙酰基-L-半胱氨酸；硫醇(例如乙硫醇)；羟基酸(例如α-羟基酸，例如乳酸和乙醇酸或β-羟基酸，例如水杨酸和水杨酸衍生物例如辛酰基衍生物)，植酸，硫辛酸；溶血磷脂酸，脱皮剂(例如苯酚等)，增强本发明的角质组织外观受益，特别是调节角质组织状况(例如皮肤状况)的维生素类。
如这里使用的，“维生素类”包括所有的天然的和/或合成的维生素A类似物或在皮肤中具有维生素A的生物学活性的视黄醇样化合物以及这些化合物的几何异构体和立体异构体。维生素类优选是视黄醇，视黄醇酯(例如视黄醇C2-C22烷基酯，包括棕榈酸视黄酯，乙酸视黄酯，丙酸视黄酯)，视黄醛，和/或视黄酸(包括所有的反式-视黄酸和/或13-顺式-视黄酸)，更优选除了视黄酸之外的维生素类。这些化合物是本领域公知的并且从很多来源可购买到(例如Sigma Chemical Company(St.Louis，Mo.)，和BoerhingerMannheim(Indianapolis，Ind.))。这里有用的其他维生素类在下面的文献中描述1987年6月30日公开的Parish等人的美国专利No.4677120；1989年12月5日公开的Parish等人的美国专利No.4885311；1991年9月17日公开的Purcell等人的美国专利No.504958；1992年6月23日公开的Purcell等人的美国专利No.5124356；和1992年9月22日再公开的Purcell等人的美国专利No.34075。其他合适的维生素类是维生素E视黄酸酯[视黄酸(反式或顺式)的维生素E酯]，阿达帕林{6-[3-(1-金刚烷基)-4-甲氧基苯基]-2-萘酸}，和tazarotene(6-[2-(4，4-二甲基硫代苯并二氢吡喃-6-基)-乙炔基]烟酸乙酯)。优选的维生素类是视黄醇，棕榈酸视黄酯，乙酸视黄酯，丙酸视黄酯，视黄醛和它们的组合物。
组合物中优选含有大约0.005％至大约2％，更优选大约0.01％至大约2％的维生素类。视黄醇使用的量优选是大约0.01％至大约0.15％；视黄醇酯使用的量优选是大约0.01％至大约2％(例如大约1％)；视黄酸使用的量优选是大约0.01％至大约0.25％；维生素E视黄酸酯，阿达帕林和tazarotene使用的量优选是大约0.01％至大约2％。
肽/多肽如这里使用的，多于三个但是等于或少于34个氨基酸的天然存在的，酶消化的，或合成的氨基酸序列称作“肽”，而“多肽”指多于34个氨基酸的天然存在的，酶消化的，或合成的氨基酸序列。
本发明组合物中可以含有安全而有效量的肽，包括但不限于二肽，三肽，四肽和五肽和其衍生物，以及ECM成分例如胶原，弹性蛋白的酶裂解片段。天然存在的和商业上可购得的含有肽的组合物在这里也是有用的。
当在本发明组合物中存在时，优选以大约1×10-6％至大约10％，更优选大约1×10-6％至大约0.1％，甚至更优选大约1×10-6％至大约0.01％的量含有肽，以组合物的重量计。在肽是CARNOSINE的某些组合物中，组合物优选含有按组合物重量计的大约0.1％至大约5％的这样的肽。
生长因子/细胞因子虽然胎儿组织表达的化合物可以包括生长因子和细胞因子，本发明的优选的实施方案还可以含有安全而有效量的不一定是胎儿组织表达的附加的生长因子或细胞因子。细胞生长刺激化合物或因子在这里描述为对特定细胞系的建立和生长有刺激作用的天然的或外源化合物。这些包括合成代谢生长激素，例如人生长激素和甲状腺刺激激素，或者作用于特异细胞系，例如粒细胞，血小板或红细胞。具体地说，关于促进表皮生长，例如皮肤组织修复或伤口愈合，很多种因子已经鉴定为生长因子，包括但不限于表皮生长因子(EGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，转化生长因子(TGF)，血管内皮生长因子(VEGF)，和胰岛素样生长因子(IGF)。
抗氧化剂/自由基清除剂本发明的组合物可以含有安全而有效量的抗氧化剂/自由基清除剂。抗氧化剂/自由基清除剂特别用于提供抗能引起角质层中脱落和纹理变化的紫外照射和抗能引起皮肤损伤的其他环境物质的保护作用。可以向本发明的组合物加入安全而有效量的抗氧化剂/自由基清除剂，优选占组合物的大约0.1％至大约10％，更优选大约1％至大约5％。
抗氧化剂/自由基清除剂可以使用例如抗坏血酸(维生素C)及其盐，脂肪酸的抗坏血酸酯，抗坏血酸衍生物(例如磷酸抗坏血酸酯镁，磷酸抗坏血酸酯钠，山梨酸抗坏血酸酯)，生育酚(维生素E)，山梨酸生育酚酯，乙酸生育酚酯，生育酚的其他酯，丁酸化羟基苯甲酸和它们的盐，6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸(可以商品名TROLOX购得)，没食子酸和它的烷基酯，特别是没食子酸丙酯，尿酸和它的盐和烷基酯，山梨酸和它的盐，硫辛酸，胺(例如N，N-二乙基羟基胺，氨基-胍)，巯基化合物(例如谷胱甘肽)，二羟基富马酸和它的盐，甜菜碱pidolate，精氨酸pilolate，去甲二氢愈创木酸，生物类黄酮，姜黄素，赖氨酸，甲硫氨酸，脯氨酸，超氧化物歧化酶，水飞蓟素，茶提取物，葡萄皮/种子提取物，黑色素和迷迭香提取物。优选的抗氧化剂/自由基清除剂选自山梨酸生育酚酯，和生育酚的其他酯，更优选山梨酸生育酚酯。例如在局部组合物中使用山梨酸生育酚酯以及应用于本发明的描述于1989年7月11日公开的Donald L.Bissett，Rodney D.Bush和RanjitChatterjee的美国专利No.4847071。
螯合剂本发明的组合物还可以含有安全而有效量的螯合剂或螯合试剂。如这里使用的，“螫合剂”或“螫合试剂”意思是通过形成络合物能从体系中去除金属离子使得金属离子不能容易地参与或催化化学反应的活性试剂。螯合剂内含物特别用于提供抗能引起过渡脱落和皮肤纹理变化的紫外照射和抗能引起皮肤损伤的其他环境物质的保护作用。
可以向本发明的组合物加入的螯合剂的安全而有效量优选是组合物的大约0.1％至大约10％，更优选大约1％至大约5％，这里有用的举例的螯合剂公开于1996年1月30日公开的Bissett等人的美国专利No.5487884；1995年10月31日公开的Bush等人的PCT公开No.91/16035；和1995年10月31日公开的Bush等人的PCT公开No.91/16034。本发明组合物中使用的优选的螯合剂是糠偶酰二肟，糠偶酰一肟，和其衍生物。
类黄酮本发明的组合物可以任选地含有一种类黄酮化合物。美国专利No.5686082和5686367明白地公开了类黄酮，这两篇文献在此引作参考。这里使用的类黄酮化合物从很多来源可购得，例如IndofineChemical Company，Inc.(Somerville，N.J.)，Steraloids，Inc.(Wilton，N.H.)，和Aldrich Chemical Company，Inc.(Milwaukee，Wis.)。
也可以使用上述类黄酮化合物的混合物。
本发明中存在的这里描述的类黄酮化合物优选浓度是大约0.01％至大约20％，更优选大约0.1％至大约10％，还更优选大约0.5％至大约5％。
抗炎剂本发明的组合物中可以加入安全而有效量的抗炎剂，优选是组合物的大约0.1％至大约10％，更优选大约0.5％至大约5％。抗炎剂增强本发明的皮肤外观受益，例如这样的试剂带来更均匀和可接受的皮肤色调和肤色。组合物中使用的抗炎剂的准确量取决于使用的特定抗炎剂，因为这样的试剂效力大大不同。
抗炎剂的例子包括但不限于甾体抗炎剂和非甾体抗炎剂。这些组中包括的各种化合物是本领域技术人员公知的。例如可以参照抗炎剂标准教科书，包括Rainsford KD(1985)，抗炎药和抗风湿病药，CRCPress，Boca Raton，Florida and Scherrer RA，WhitehouseMW(1974)，抗炎剂；化学和药学，Academic Press，NewYork。
另外，当用作化妆产品时转化生长因子β，或其他主要炎症生长因子的天然的或合成的调节剂也可以将炎症最小化(LoganA，Frautschy SA，Gonzalez AM，Sporn MB，Baird A.，局部脑损伤之后大鼠大脑中转化生长因子β1的加强表达，BrainRes587216-25，1992；Border WA，Noble NA，YamaotoT，Harper JR，Yamaguchi Y，Pierschbcher MD，Ruoslahti E.，实验性肾病中转化生长因子β保护抗疤痕的天然抑制剂，Nature360361-4，1992)。
最后，称为“天然的”抗炎剂在本发明的方法中是有用的。这样的试剂可以适当地通过合适的物理和/或化学分离从天然来源(例如植物，真菌，微生物的副产品)作为提取物获得或者能合成制备。例如，可以使用小烛树蜡，防风根醇(例如α防风根醇)，芦芸，植物甾醇类(例如植物甾醇)，Manjistha(从茜草属(Rubia)，特别是红根(Rubia Cordifolia)植物中提取)和Guggal(从没药属(Commiphora)，特别是穆库尔没药(Commiphora Mukul)植物中提取)，可乐果提取物，洋甘菊，红三叶提取物，和sea whip提取物。
抗蜂窝织炎剂(anti-cellulite agents)本发明的组合物还可以含有安全而有效量的抗蜂窝织炎剂。合适的试剂包括但不限于黄嘌呤化合物(例如咖啡因，茶叶碱，可可碱和氨茶碱)。
局部麻醉剂本发明的组合物还可以含有安全而有效量的局部麻醉剂。局部麻醉剂的例子包括苯佐卡因，利多卡因，布比卡因，氯普鲁卡因，待布卡因，依铁卡因，甲哌卡因，丁卡因，Dyclonine，己卡因，普鲁卡因，可卡因，氯胺酮，丙吗卡因，苯酚，和其药学可接受盐。
鞣皮活性成分本发明的组合物可以含有鞣皮活性成分。当存在时，优选含有组合物重量的大约0.1％至大约20％，更优选大约2％至大约7％，还更优选大约3％至大约6％的二羟基丙酮为人工鞣皮活性成分。
二羟基丙酮，也已知为DHA或1，3-二羟基-2-丙酮，是白色至浅白色结晶粉末。
该化合物可以作为单体和二聚体的混合物存在，固体结晶态中二聚体占优势。加热或熔化时，二聚体裂解产生单体。在水溶液中也发生二聚体向单体的转化作用。还已知二羟基丙酮在酸性pH值下更稳定(参见Windholz M，Merck&Co.(1983)，Merck手册化学品，药物，和生物品百科全书，第十版，Merck，Rahway，N.J，entry3167，p.463和“用于化妆品的二羟基丙酮”，E.MerckTechnical Bulletin，03-304 110，319897，180588)。
皮肤光亮剂本发明的组合物可以含有皮肤光亮剂。当存在时，组合物优选含有组合物重量的大约0.1％至大约10％，更优选大约0.2％至大约5％，还更优选大约0.5％至大约2％的皮肤光亮剂。合适的皮肤光亮剂包括本领域公知的那些，包括曲酸，杨梅甙，抗坏血酸和它的衍生物(例如磷酸抗坏血酸镁或磷酸抗坏血酸钠)，和提取物(例如桑葚提取物，胎盘提取物)。适合这里使用的皮肤光亮剂还包括Hillebrand的PCT公开No.WO95/34280，相应于1995年6月12日申请的PCT申请No.U.S.WO95/07432；和Kvalnes，MitchellA.DeLong，Barton J.Bradbury，CurtisB.Moltey，和JohnD.Carter申请的美国专利No.6068834，相应于1995年9月8日申请的PCT公开No.WO95/23780。
皮肤平滑和皮肤修复活性成分本发明的组合物可以含有皮肤平滑或皮肤修复活性成分。适合在这里使用的皮肤平滑或皮肤修复活性成分包括泛酸衍生物(包括泛醇，D-泛醇，乙基泛醇)，芦芸，尿囊素，防风根醇，和甘草亭酸二钾。可以向本发明的组合物中加入安全而有效量的皮肤平滑或皮肤修复活性成分，优选地是形成的组合物重量的大约0.1％至大约30％，更优选大约0.5％至大约20％，还更优选大约0.5％至大约10％。
抗微生物和抗真菌活性成分本发明的组合物可以含有抗微生物或抗真菌活性成分。这样的活性成分能破坏微生物，防止微生物的发展或防止微生物的病理作用。可以向本发明的组合物中加入安全而有效量的抗微生物或抗真菌活性成分，优选大约0.001％至大约10％，更优选大约0.01％至大约5％，还更优选大约0.05％至大约2％。
抗微生物和抗真菌活性成分的例子包括B-内酰胺药物，喹诺酮药物，环丙沙星，诺氟沙星，四环素，红霉素，阿米卡星，2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯基醚，3，4，4’-三氯二苯脲，苯氧基乙醇，苯氧基丙醇，苯氧基异丙醇，强力霉素，卷曲霉素，洗必泰，氯四环素，氧四环素，氯洁霉素，乙胺丁醇，羟乙磺酸己脒定，灭滴灵，戊双脒，庆大霉素，卡那霉素，lineomycin，甲烯土霉素，乌洛托品，二甲胺四环素，新霉素，奈替米星，巴龙霉素，链霉素，妥布霉素，咪康唑，四环素盐酸盐，红霉素锌，依托红霉素，红霉素硬脂酸酯，硫酸阿米卡星，盐酸多西环素，硫酸卷曲霉素，葡萄糖酸洗必泰，盐酸洗必泰，盐酸氯四环素，盐酸氧四环素，盐酸氯洁霉素，盐酸乙胺丁醇，盐酸灭滴灵，盐酸戊双脒，硫酸庆大霉素，硫酸卡那霉素，盐酸lineomycin，盐酸甲烯土霉素，马尿酸乌洛托品，扁桃酸乌洛托品，盐酸二甲胺四环素，硫酸新霉素，硫酸奈替米星，硫酸巴龙霉素，硫酸链霉素，硫酸妥布霉素，盐酸米康唑，酮康唑，盐酸金刚胺，硫酸金刚胺，羟甲辛吡酮，对氯间二甲酚，制霉菌素，癣退，硫氧吡啶锌，和克霉唑。
这里有用的活性成分的优选的例子包括选自水杨酸，苯甲酰过氧化物，3-羟基苯甲酸，乙醇酸，乳酸，4-羟基苯甲酸，乙酰基水杨酸，2-羟基丁酸，2-羟基戊酸，2-羟基己酸，顺式-视黄酸，反式-视黄酸，视黄醇，植酸，N-乙酰基L-半胱氨酸，硫辛酸，壬二酸，花生四烯酸，苯甲酰过氧化物，四环素，布洛芬，萘普生，氢化可的松，acetominophen，间苯二酚，苯氧基乙醇，苯氧基丙醇，苯氧基异丙醇，2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯基醚，3，4，4’-三氯二苯脲，羟甲辛吡酮，盐酸利多卡因，克霉唑，咪康唑，酮康唑，硫酸新霉素，和其混合物的那些。
防晒活性成分暴露于紫外光能导致过度蜕皮和角质层纹理变化。因此，本发明的组合物可以任选地含有防晒活性成分。如这里使用的，“防晒活性成分”包括防晒剂和物理隔光物。合适的防晒活性成分可以是有机物或无机物。
这里有用的无机防晒物质包括下面的金属氧化物；平均初级粒度大约15nm至大约100nm的二氧化钛，平均初级粒度大约15nm至大约150nm的氧化锌，平均初级粒度大约15nm至大约150nm的氧化锆，平均初级粒度大约15nm至大约500nm的氧化铁，和它们的混合物。当在这里使用时，无机防晒剂存在的量是组合物重量的大约0.1％至大约20％，优选大约0.5％至大约10％，更优选大约1％至大约5％。
有很多种常规有机防晒活性成分适合本发明使用。BalsamMS，Sagarin E(1972)，化妆品，科学和技术，第二版，Wiley-Interscience，NewYork公开了很多种合适的活性成分。
本发明有用的组合物中使用的更优选的有机防晒活性成分是2-乙基己基-p-甲氧基桂皮酸酯，丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷，2-羟基-4-甲氧基二苯酮，2-苯基苯并咪唑-5-磺酸，辛基二甲基-p-氨基苯甲酸，氰双苯丙烯酸辛酯和它们的混合物。
组合物中特别有用的组合物是防晒活性成分，例如下面文献中公开的那些1990年6月26日公开的Sabatelli的美国专利No.4937370，和1991年3月12日公开的Sabatelli和Spirnak的美国专利No.4999186。这里公开的防晒剂在单一分子中具有两个不同的发色团部分，其表现出不同的紫外照射吸收谱。发色团部分之一主要在UVB照射范围内吸收，其他在UVA照射范围强吸收。
这类防晒剂优选的成员是2，4-二羟基二苯酮的4-N，N-(2-乙基己基)甲基-氨基苯甲酸酯；与4-羟基二苯甲酰基甲烷的N，N-二-(2-乙基己基)-4-氨基苯甲酸的酯；与4-羟基二苯甲酰基甲烷的4-N，N-(2-乙基己基)甲基-氨基苯甲酸的酯；2-羟基-4-(2-羟基乙氧基)二苯酮的4-N，N-(2-乙基己基)甲基-氨基苯甲酸酯；4-(2-羟基乙氧基)二苯甲酰甲烷的4-N，N-(2-乙基己基)甲基-氨基苯甲酸酯；2-羟基-4-(2-羟基乙氧基)二苯酮的N，N-二-(2-乙基己基)-4-氨基苯甲酸酯；和4-(2-羟基乙氧基)二苯甲酰甲烷的N，N-二-(2-乙基己基)-4-氨基苯甲酸酯和其混合物。
特别优选的防晒活性成分包括4，4’-叔-丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷，2-乙基己基-p-甲氧基桂皮酸酯，苯基苯并咪唑磺酸，和氰双苯丙烯酸辛酯。
使用安全而有效量的有机防晒成分，一般是组合物重量的大约1％至大约20％，更典型地是大约2％至大约10％。精确量将随着选择的一种或几种防晒剂和期望的太阳防护系数(SPF)而不同。
粒状材料本发明的组合物可以含有粒状材料，优选金属氧化物。这里粒子可以是包被的或没有包被的，带电荷的或不带电荷的。带电荷的粒子材料公开于Ha等人的美国专利No.5997887，在这里引作参考。这里有用的颗粒材料包括氯氧化铋，氧化铁，云母，硫酸钡处理过的云母和TiO2，二氧化硅，尼龙，聚乙烯，滑石，苯乙烯，聚丙烯，乙烯/丙烯酸共聚物，绢云母，二氧化钛，氯氧化铋，氧化铁，氧化铝，硅树脂，硫酸钡，碳酸钙，乙酸纤维素，聚甲基丙烯酸甲酯，和其混合物。
无机颗粒材料(例如TiO2，ZnO，或ZrO2)是从很多来源购得的。合适的颗粒材料的一个例子包含从U.S.Cosmetics获得的材料(TRONOX TiO2系列，SAT-T CR837，一种金红石)。优选地，组合物中存在的颗粒材料的含量是组合物重量的大约0.01％至大约2％，更优选大约0.05％至大约1.5％，还更优选大约0.1％至大约1％。
调节剂本发明的组合物可以含有选自湿润剂，润肤剂或护肤剂的调节剂。可以使用各种各样的这样的材料，每一种存在的含量是组合物重量的大约0.01％至大约20％，更优选大约0.1％至大约10％，还更优选大约0.5％至大约7％。这些材料包括但不限于胍，脲，乙醇酸和乙醇酸盐(例如铵和季烷基铵)；水杨酸；乳酸和乳酸盐(例如铵和季烷基铵)；各种形式的芦芸(例如芦芸凝胶)；多羟基醇，例如山梨糖醇，甘露糖醇，木糖醇，赤藓醇，丙三醇，己三醇，丁三醇，丙二醇，丁二醇，己二醇，和类似物；聚乙二醇；糖(例如蜜二糖)和淀粉；糖和淀粉衍生物(例如烷氧化葡萄糖，盐藻糖，葡糖胺)；透明质酸；乳酰胺一乙醇胺；乙酰胺一乙醇胺；泛醇；尿囊素；和其混合物。也在这里有用的是1990年12月11日公开的Orr等人的美国专利No.4976953中描述的丙氧基化甘油。
还有用的是糖的各种C1-C30单酯和多元酯和相关物质。这些酯从糖或多元醇部分和一个或几个羧酸部分衍生。这样的酯材料进一步描述于1977年1月25日公开的Jandacek的美国专利No.2831854，美国专利No.4005196；1977年1月25日公开的Jandacek的美国专利No.4005195；1994年4月26日公开的Letton等人的美国专利No.5306516；1994年4月26日公开的Letton等人的美国专利No.5306515；1994年4月26日公开的Letton等人的美国专利No.5306514；1989年1月10日公开的Jandacek等人的美国专利No.4797300；1976年1月15日公开的Rizzi等人的美国专利No.3963699；1985年5月21日公开的Volpenhein的美国专利No.4518772；1985年5月21日公开的Volpenhein的美国专利No.4517360。
结构剂本发明的组合物，特别是其乳状液可以含有结构剂。在本发明水包油乳状液中特别优选结构剂。不受理论限制，相信结构剂有助于对组合物提供流变学特征，这给组合物带来稳定性。例如，结构剂倾向于有助于形成液体结晶凝胶网格结构。结构剂还可以作为乳化剂或表面活性剂发挥功能。本发明优选的组合物含有大约0.1％至大约20％，更优选大约0.1％至大约10％，还更优选大约0.5％至大约9％的一种或多种结构剂。
优选的结构剂是具有大约1至大约8的HLB并且具有至少大约45℃的熔点的那些。合适的结构剂选自饱和C14-C30脂肪醇，含有大约1至大约5摩尔环氧乙烷的饱和C16-C30脂肪醇，饱和C16-C30二醇，饱和C16-C30单甘油醚，饱和C16-C30羟基脂肪酸，C14-C30羟基化的和非羟基化的饱和脂肪酸，C14-C30饱和乙氧基化脂肪酸，含有大约1至大约5摩尔环氧乙烷二醇的胺和醇，单甘油酯含量至少40％的饱和C14-C30甘油单酯，具有大约1至大约3个烷基和大约2至大约3个饱和甘油单元的饱和C14-C30多甘油酯，C14-C30甘油单醚，C14-C30脱水山梨糖醇一/二酯，含有大约1至大约5摩尔环氧乙烷的C14-C30饱和乙氧基化脱水山梨糖醇一/二酯，C14-C30饱和糖苷甲酯，C14-C30饱和蔗糖一/二酯，含有大约1至大约5摩尔环氧乙烷的C14-C30饱和乙氧基化糖苷甲酯，具有1-2个葡萄糖单元和其混合物的平均度，具有至少大约45℃的熔点的C14-C30饱和葡聚糖苷。
本发明优选的结构剂选自硬脂酸，棕榈酸，十八烷基醇，十六烷基醇，二十二烷基醇，硬脂酸，棕榈酸，平均具有大约1至大约5个环氧乙烷单元的十八醇聚乙二醇醚，平均具有大约1至大约5个环氧乙烷单元的十六醇聚乙二醇醚，和它们的混合物。本发明更优选的结构剂选自十八烷基醇，十六烷基醇，二十二烷基醇，平均具有大约2个环氧乙烷单元的十八醇聚乙二醇醚(steareth-2)，平均具有大约2个环氧乙烷单元的十六醇聚乙二醇醚，及其混合物。甚至更优选的结构剂选自硬脂酸，棕榈酸，十八烷基醇，十六烷基醇，二十二烷基醇，steareth-2，及其混合物。
增稠剂(包括增稠剂和凝胶化试剂)本发明的组合物可以含有一种或几种增稠剂，优选是组合物重量的大约0.1％至大约5％，更优选大约0.1％至大约4％，还更优选大约0.25％至大约3％。
非限制性增稠剂种类包括选自下面的那些羧酸聚合物，交联聚丙烯酸酯聚合物，聚丙烯酰胺聚合物，多糖，和凝胶化试剂树胶。
羧酸聚合物是含有一个或多个从丙烯酸，取代的丙烯酸，和这些丙烯酸和取代的丙烯酸的盐和酯衍生的单体的交联化合物，其中交联剂含有两个或多个碳-碳双键，并且从多羟基醇衍生。本发明中有用的聚合物更详细描述于1992年2月11日公开的Haffey等人的美国专利No.5087445；1985年4月5日公开的Huang等人的美国专利No.4509949；1957年7月2日公开的Brown的美国专利No.2798053；和Wenninger JA，McEwen GN，Cosmetic Toiletry andFragrance Association(1993)，国际化妆品成分典，第五版，Cosmetic Toiletry and Fragrance Association，Washington，D.C.。
交联的聚丙烯酸酯聚合物用作增稠剂或凝胶化试剂，包括阳离子和非离子聚合物，阳离子聚合物一般是优选的。有用的交联的非离子聚丙烯酸酯聚合物和交联的阳离子聚丙烯酸酯聚合物是下面专利文献中公开的那些1992年3月31日公开的Hawe等人的美国专利No.5100660；1989年7月18日公开的Heard的美国专利No.4849484；1989年5月30日公开的Farrar等人的美国专利No.4835206；1986年12月9日公开的Glover等人的美国专利No.4628078；1986年7月8日公开的Flesher等人的美国专利No.4599379；和1987年7月15日公开的Farrar等人的美国专利EP228868。
聚丙烯酰胺聚合物，特别是非离子聚丙烯酰胺聚合物包括取代的支化的或未支化的聚合物。这些聚丙烯酰胺聚合物中更优选的是从Seppic Corporation(Fairfield，N.J.)以商品名Sepigel305购得的CTFA命名聚丙烯酰胺和异链烷烃和laureth-7的非离子聚合物。这里有用的其他聚丙烯酰胺聚合物包括丙烯酰胺和取代的丙烯酰胺与丙烯酸和取代的丙烯酸的多嵌段共聚物。这些多嵌段共聚物商业上可获得的例子包括从Lipo Chemicals，Inc.(Patterson，N.J.)购得的Hypan SR150H，SS500V，SS500W，和SSSA100H。
“多糖”指含有重复糖(即碳水化合物)单元的主链的凝胶化试剂，多糖凝胶化试剂的非限制性例子包括那些选自纤维素，羧甲基羟乙基纤维素，纤维素乙酸丙酸羧酸酯，羟乙基纤维素，羟乙基乙基纤维素，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，甲基羟乙基纤维素，微晶纤维素，纤维素硫酸钠，及其混合物。这里还有用的是烷基取代的纤维素。在这些聚合物中，纤维素聚合物的羟基是羟烷基化的(优选羟乙基化或羟丙基化)，形成羟烷基化纤维素，其然后进一步通过醚键修饰有C10-C30直链或支链烷基。典型地，这些聚合物是C10-C30直链或支链醇与羟烷基纤维素的醚。这里有用的烷基的例子包括那些选自十八烷基，异十八烷基，月桂基，十四烷基，十六烷基，异十六烷基，椰油基(即从椰油醇衍生的烷基)，棕榈基，油基，亚油基，亚麻油基，蓖麻醇酸基，二十二烷基，和它们的混合物。烷基羟烷基纤维素醚中优选的是CTFA命名十六烷基羟乙基纤维素材料，其是十六醇和羟乙基纤维素的醚。该材料由Aqualo Corporation(Wilmington，Del.)以NATROSOLCS Plus出售。其他有用的多糖包括巩膜葡聚糖，它是每三个单元(1-3)连接的葡萄糖单元与(1-6)连接的葡萄糖的线性链，商业上可购得的例子是Michel Mercier ProductsInc.(Mountainside，N.J.)的CLEAROGELCS11。
这里有用的其他增稠剂和凝胶化试剂包括最初得自天然来源的材料。这些凝胶化试剂树胶的非限制性例子包括金合欢胶，琼脂，藻胶，藻酸，藻酸铵，支链淀粉，藻酸钙，角叉菜胶钙，肉碱，角叉菜胶，糊精，明胶，吉兰糖胶，瓜尔胶，瓜尔胶羟丙基trimonium氯化物，水辉石，透明质酸，水合二氧化硅，羟丙基壳聚糖，羟丙基瓜尔胶，梧桐胶，海藻，槐树豆胶，natto胶，藻酸钾，角叉菜钾，藻酸丙二醇，菌核胶，羧甲基葡聚糖钠，角叉菜钠，黄耆胶，黄原胶，和它们的混合物。
附加活性成分本发明的组合物可以含有附加的护肤活性成分，不包括具体种类，包括但不限于安全而有效量的金合欢醇和植烷三醇(phytantrriol)。
金合欢醇是一种天然存在的物质，相信其在角鲨烯和甾醇特别是胆甾醇的生物合成中作为母体和/或中间体起作用。蛋白质修饰和调节中(例如蛋白质的金合欢醇化作用)也涉及金合欢醇，有一种对金合欢醇敏感的细胞核受体。
化学上，金合欢醇是3，7，11-三甲基-2，6，10-十二碳三烯-1-醇，并且这里使用的“金合欢醇”包括其异构体和互变异构体。金合欢醇在商业上可购得，例如商品名是金合欢醇(Dragoco，10GordonDrive，Totowa，N.J.的异构体混合物)和反式-反式-金合欢醇Sigma Chemical Company，P.O.Box14508，St.Louis，Mo.)。
当在本发明的组合物中存在时，组合物优选含有组合物重量的大约0.001％至大约50％，更优选大约0.01％至大约20％，甚至更优选大约0.1％至大约15％，更优选大约0.1％至大约10％，还更优选大约0.5％至大约5％，还更优选大约1％至大约5％的金合欢醇。
植烷三醇是3，7，11，15-四甲基十六烷-1，2，3-三醇的化学通用名。商业上植烷三醇可从BASF(1609 BiddleAvenue，Whyandotte，Mich.)购得。例如，植烷三醇用作蜘蛛脉管/红斑修复剂，黑眼圈/眼袋修复剂，土黄色修复剂，流挂修复剂，抗痒剂，皮肤增厚剂，缩孔剂，油性/光亮减少剂，炎症后高色斑修复剂，伤口治疗剂，抗蜂窝织炎织炎剂，和皮肤纹理包括皱纹和细纹调节剂。
在本发明的组合物中，植烷三醇优选的量是组合物重量的大约0.001％至大约50％，更优选大约0.01％至大约20％，甚至更优选大约0.1％至大约15％，更优选大约0.2％至大约10％，还更优选大约0.5％至大约10％，还更优选大约1％至大约5％。
皮肤可接受载体本发明的局部组合物还含有皮肤可接受载体。安全而有效量的载体是组合物的大约50％至大约99.99％，优选大约80％至大约99.9％，更优选大约90％至大约98％，甚至更优选大约90％至大约95％。
载体可以是各种各样形式。例如，乳状液载体，包括但不限于水包油，油包水，水包油包水和硅氧烷包水包油乳状液在这里是有用的。
根据本发明的乳状液一般含有如上所述溶液和脂质或油。脂质和油可以来自动物，植物或石油，并且可以是天然的或合成的(即人造的)。优选的乳状液还含有湿润剂，例如甘油。乳状液优选还含有载体重量的大约0.01％至大约10％，更优选大约0.1％至大约5％的乳化剂。乳化剂可以是非离子，阴离子或阳离子的。合适的乳化剂公开于例如1973年8月28日公开的美国专利No.3755560；1983年12月20日公开的Dixon等人的美国专利No.4421769；和McCutcheon’去污剂和乳化剂，NorthAmerican Edition，p.317-324(1986)。.
乳状液还可以含有消泡剂，在对角质组织施用时使泡沫最小化。消泡剂包括高分子量硅氧烷和本领域公知的用于该用途的其他材料。
合适的乳状液可以有宽范围粘度，取决于所需的产品形式。优选具有大约50里泊或更小的粘度，更优选大约10里泊或更小，还更优选大约5里泊或更小的低粘度乳状液。
组合物制备用于本发明方法的组合物一般通过常规方法制备，例如本领域公知的制备局部组合物的方法。这样的方法一般包括在有或没有加热，冷却，利用真空等下在一步或几步中将成分混合达到相对均匀状态。
调节皮肤状况的方法本发明的组合物用于促进哺乳动物皮肤状况。这样的角质组织状况的调节可以包括预防性和治疗性调节。例如，这样的调节方法针对增厚角质组织(即建立皮肤的表皮和/或真皮层和应用到指甲和发干质的角质层的情况)和防止和/或延迟哺乳动物皮肤的萎缩，防止和/或延迟哺乳动物皮肤的蜘蛛脉管和/或红斑外观，防止和/或延迟哺乳动物眼下黑圈外观，防止和/或延迟哺乳动物皮肤的土黄色，防止和/或延迟哺乳动物皮肤的流挂，使哺乳动物嘴唇，头发和指甲柔软和/或平滑，防止和/或减轻哺乳动物皮肤瘙痒，调节皮肤纹理(例如皱纹和细纹)，并且改善皮肤颜色(例如红润，雀斑)。
调节角质组织状况包括对角质组织局部施用安全而有效量的本发明的组合物。施用的组合物的量，施用频率和使用时间长短根据胎儿化合物，护肤活性成分和/或给定组合物的其他成分和期望的调节水平(例如着眼于存在的角质组织损伤程度或者预期发生的情况)而大大不同。
在优选的实施方案中，对皮肤长期施用组合物。所谓“长期局部施用”意思是连续局部施用组合物接受者终生期间一较长的时间段，优选至少大约一星期，更优选至少一个月，甚至更优选至少大约三个月，甚至更优选至少大约六个月，甚至更优选至少大约一年。在不同最长施用时间(例如5，10，或20年)之后可获得受益，优选接受者终生自始至终连续长期使用。一般情况下，在这样的延续时间大约每天一次施用，但是应用比例可以大约每周一次至大约每天三次或更多。
能施用很宽范围的本发明组合物的量，提供皮肤外观和/或感觉利益。一般每次施用的本发明组合物的量是，以组合物毫克数/平方厘米皮肤，大约0.1mg/cm2至大约10mg/cm2。特别有用的施用量是大约1mg/cm2至大约2mg/cm2。
优选通过施用下面形式的组合物实施调节角质组织状况皮肤洗液，霜剂，凝胶，泡沫剂，乳膏剂，糊剂，乳状液，喷雾剂，调理剂，滋补剂，化妆品，唇膏，粉底，指甲油，剃须后美容膏，或者优选为了在皮肤或其他角质结构上滞留一些美感，预防性，治疗性或其他利益的类似形式(即“留在上面的”组合物)。对皮肤施用组合物之后，优选留在皮肤上至少大约15分钟，更优选至少大约30分钟，甚至更优选至少大约1小时，还更优选至少几小时，例如多至大约12小时。可以处理脸，头发，和/或指甲外部的任何部分，例如脸，唇，眼下部分，眼睑，头皮，颈，躯干，臂，手，腿，脚，手指甲，脚指甲，头发，睫毛，眉毛等。可以用手指或者用工具或装置(例如垫，棉花签，施用笔，喷雾施用器，等等)施用组合物。
保证皮肤与至少最小量的胎儿化合物和护肤活性成分连续接触的另一种方法是通过使用贴片施用化合物。这样的方法特别用于需要更强处理的问题皮肤部分(例如面爪纹部分，眉线，眼下部分等等)。贴片可以是闭合的，半闭合的或者不闭合的，并且可以是粘着的或不粘着的。贴片中可以含有组合物或者在施用贴片之前将组合物施加到皮肤上。贴片也可以含有另外的活性成分，例如放热反应化学引发剂例如Wu等人的美国专利No.5821250，5981547和5972957中描述的那些。优选贴片在皮肤上保留至少大约5分钟，更优选大约15分钟，甚至更优选至少大约30分钟，甚至更优选至少大约1小时，还更优选过夜，作为夜疗形式。
实施例下面的实施例进一步描述和证明本发明范围内的实施方案。给出实施例只是为了详细说明的目的而不是限制本发明，不脱离本发明的精神和范围的其它很多变化是可能的。
在本发明的一个实施方案中，通过组织培养基或细胞溶胞产物直接分离胎儿细胞或组织表达的化合物并且进一步浓缩或纯化。虽然胎儿组织表达的化合物的各自鉴定或纯化是有用的，本发明化合物的应用不必须要求化合物的各自鉴定或纯化。然后将有或没有进一步浓缩或纯化的组织培养基或细胞溶胞产物根据下面的实施例配制成改善皮肤状况的化妆品组合物。
在本发明的另一个实施方案中，鉴定了胎儿组织表达的化合物或者促进这些化合物表达的条件。一旦得以鉴定，从天然组织(野生型)或者从合适的表达载体例如细菌或酵母(有或没有编码区的修饰作用的重组形式)分离胎儿化合物并且根据下面的实施例配制成改善皮肤状况的化妆品组合物。
下面表中列出的成分“胎儿组织化合物”指，但是不必须限于胎儿组织培养基，溶胞产物，和提取物，其可以或没有进行各种成分的事先鉴定。“胎儿组织化合物”还可以指从胎儿组织直接产生的化合物或者通过有或没有事先的基因修饰作用的重组方法获得的化合物。
表1使用胎儿组织化合物的护肤组合物的例子
为了获得合适的皮肤组合物，上面表中列出的A相成分与合适的混合物(例如Tekmar model RW20DZM)混合。将成分加热，搅拌下升至70-80℃的温度并且搅拌下保持该温度。向B相成分中掺入适当的混合物，加热到70-75℃并保持该温度同时搅拌。充分搅拌下向A相成分加入B相成分以乳化。当乳状液大约60℃时，连续向混合乳状液加入C相成分。搅拌下使乳状液冷却到大约40℃。在大约50℃时，向乳状液加入D和E相成分并且连续混合。在大约40℃时，连续向混合乳状液加入F相成分。搅拌下使乳状液冷却到大约30℃，并且加入G相成分。然后使用合适的混合机(TekmarT-25)混合乳状液大约5分钟得到均匀产物。
在本发明的另一个实施方案中，从天然组织(野生型)或者从合适的表达载体例如细菌，酵母或哺乳动物细胞(有或没有编码区的修饰作用的重组形式)分离胎儿组织表达的特异化合物，并且然后根据下面的表和步骤配制成改善皮肤状况的化妆品组合物。例如，野生型或重组纤调蛋白聚糖可以是纯化的或部分纯化的或没有纯化的形式。纯化的理解意思是存在主要纤调蛋白聚糖蛋白质。部分或没有纯化形式的纤调蛋白聚糖可以还含有其他改善皮肤状况的胎儿化合物，形式不局限于培养基，溶胞产物或提取物。
在制备修复霜剂中制备使用纯化的纤调蛋白聚糖和下面的成分的组合物。
表2使用纯化的纤调蛋白聚糖的护肤组合物的例子 A相成分与合适的混合物(例如Tekmar model RW20DZM)混合。搅拌下加热A相成分至70-80℃的温度。分开地，B相成分与合适的混合物混合，加热至70-75℃并且搅拌下保持该温度。充分搅拌下向A相成分加入B相成分以乳化。当乳状液大约60℃时，连续向混合乳状液加入C相成分。搅拌下使乳状液冷却到大约40℃。在大约50℃时，向乳状液加入D和E相成分并且连续混合。在大约40℃时，连续向混合乳状液加入F相成分。搅拌下使乳状液冷却到大约30℃，并且然后加入G相成分。然后使用合适的混合机(TekmarT-25)混合乳状液大约5分钟得到均匀产物。
或者，使用下面的成分和前面描述的相同步骤，在制备修复乳剂中制备使用富集部分或没有纯化的纤调蛋白聚糖的溶胞产物，提取液，或培养基，和下面的成分的组合物。
表3使用部分纯化的或没有纯化的纤调蛋白聚糖的护肤组合物的例子
不脱离本发明的精神和范围，本领域技术人员可以实现很多改变和变化。因此，一定明白提出详细说明的实施方案只是为了实施例的目的而不是限制本发明，本发明是权利要求书确定的。因此要阅读的下面的权利要求书不止包括字面上给出的要素的组合，而是以基本上相同的方式实施基本上相同的功能获得基本上相同的结果的所有的等价要素。因此理解权利要求书包括特别详细说明的和上述的，概念上等价的，基本上参入本发明实质的那些方案。
权利要求
1.一种促进皮肤再生的方法，包括对哺乳动物皮肤施用胎儿组织表达的化合物。
2.根据权利要求1的促进皮肤再生的方法，进一步包括(a)分离胎儿组织表达的化合物；(b)鉴定胎儿组织表达的化合物；(c)在遗传工程细胞中重组表达胎儿组织表达的化合物；和(d)对哺乳动物皮肤施用胎儿组织表达的化合物。
3.一种促进皮肤再生的方法，包括(a)比较成人组织表达的化合物和胎儿组织表达的化合物；(b)鉴定成人组织中高表达的化合物；(c)阻断成人组织中高表达的该化合物的表达；和(d)对哺乳动物皮肤施用阻断化合物。
4.一种化妆品护肤组合物，含有一种胎儿组织表达的化合物；和一种皮肤可接受的载体。
5.根据权利要求4的化妆品护肤组合物，其中所述胎儿组织表达的化合物是纤调蛋白聚糖。
6.根据权利要求4的化妆品护肤组合物，其中所述胎儿组织表达的化合物是蛋白多糖。
全文摘要
本发明涉及一种化妆品护肤组合物，其包括胎儿组织表达的化合物和一种皮肤可接受的载体，其中所述胎儿组织表达的化合物是纤调蛋白聚糖或蛋白多糖。本发明还涉及向哺乳动物组织施用本发明的护肤组合物以促进皮肤再生的方法。
文档编号A61Q19/08GK1506042SQ0314511
公开日2004年6月23日 申请日期2003年6月19日 优先权日2002年12月11日
发明者苏加璐 申请人:苏加璐