专利名称：：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在制备美容化妆品中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明提供了粒细胞巨噬细胞集落剌激因子的新用途，尤其是公开了粒细胞巨噬细胞集落剌激因子在制备美容化妆品中的用途，同时还提供了其生产工艺，属于生物美容制品
技术领域：
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背景技术：
：本发明涉及的粒细胞巨噬细胞集落剌激因子(granulocytemacrophagecolonystimulatingfactor,以下简称GM-CSF)是人体内分泌的一种重要的促细胞生长增殖的细胞剌激因子，具有显著的诱导未成熟的骨髓细胞前体细胞增殖和成熟等功能。它由T细胞、内皮细胞、上皮细胞、成纤维细胞、肥大细胞、B细胞和巨噬细胞等分泌。根据其糖基化程度不同，分为9个以上不同的类型，分子量从14.5-32kd不等。GM-CSF作为一种强有力的细胞分裂因子，具有很高的生物活性。极微量GM-CSF即能强烈促进相关细胞的增殖和成熟。目前，GM-CSF的研究和应用均局限在治疗肿瘤放化疗后的白细胞减少、骨髓移植和再生障碍性贫血等方面，GM-CSF还作为疫苗佐剂使用。经检索相关文献尚未发现GM-CSF在美容方面的研究和应用。
发明内容本发明公开了粒细胞巨噬细胞集落剌激因子在制备美容化妆品中的用途，用于人们的美容化妆。本发明的技术解决方案包括以GM-CSF为主要活性成分，采用真空冷冻干燥工艺制成冻干粉形式的化妆品。本发明还提供了一种含有GM-CSF为主要活性成分的美容化妆品，具体配方如下(重量份数比)GM-CSF3002000iig(活性成分)甘露醇3060mg(赋形剂)所述的美容化妆品的制备方法，包括以下步骤将GM-CSF及甘露醇用低温纯化水配制成水溶液，并置于冰浴中，待分装。将上述配制而得的水溶液，分装到西林瓶中，置于真空冷冻干燥机中进行冻干后即得冻干粉。冻干粉的制剂制造按上述比例将GM-CSF及甘露醇，用低温纯化水配制成水溶液，并置于冰浴中；将上述配制而得的水溶液，分装到西林瓶中，将胶塞半加塞，置于真空冷冻干燥机中进行冻干。冻干工艺及条件为开启真空冷冻干燥机，对制品进行预冷，将制品温度降至-6(TC，降温时间为4-5小时。启动真空泵，将箱内真空度抽至0.3Mbar。加温，升华，升华时间为14-18小时，升华完毕，压塞，箱内充入无菌气体，开箱，取出制品，轧盖，入库。产品形式为冻干粉，使用时需用水溶解。以下实验表明本发明的美容效果1材料GM-CSF:为市售品，也可采用基因工程法自行生产。使用前要进行活性测定，活性测定采用的是TF-1细胞/MTT比色法，具体操作方法均见中国药典2005版。甘露醇为市售药用级。2方法2.1冻干粉制剂的制造参见上文2.2稳定性试验取上述制得的制剂(冻干粉)，分别置于室温及7t:冰箱中，分别于放置不同的时间后取样，进行含量及活性测定。2.5美容效果试验实验品只含有GM-CSF及甘露醇的冻干粉制剂空白对照品不含GM-CSF，只含有甘露醇的冻干制剂实验品及空白对照品，在使用前均用水溶解，之后，涂布于面部皮肤，并用超声波的进行导入。分别进行如下美容效果试验2.5.1嫩肤、去皱试验选取4055岁老年人60人，男女各半。随机分为2组，每组30人，男女各半。每组分别使用上述实验品或空白对照品，每5天1次，连续2个月，然后分别评价其嫩肤、去皱的美容效果。2.5.2祛斑试验选取2035岁面部有色斑的女性60人，随机分为2组，每组30人。每组分别使用上述各实验品或空白对照品，连续2个月，然后分别评价其祛斑效果。2.5.3祛痘试验选取1825岁面部有青春痘的人60人，男女各半，随机分为2组，每组30人，男女各半。每组分别使用上述各实验品或空白对照品，连续2个月，然后分别评价其祛痘效果。2.5.4安全性试验在上述嫩肤去皱试验、祛斑试验及祛痘试验中，同时观察其对皮肤的剌激性、过敏性及其它不良反应。3结果3.1冻干粉制剂的制造结果经上述工艺制造出来的冻干粉制剂，外观呈疏松的块状或粉状，呈白色或类白色。加水极易溶解，溶解后呈澄清透明的溶液。经微生物学检测，未检出活的微生物，为无菌溶液。超过国家有关化妆品的卫生标准。3.2稳定性试验结果表1稳定性试验结果4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>从上表可以看出，本发明之制品，在常温放置及7t:下放置至36个月时，其含量均未见明显变化；在常温下放置至18个月时，其活性未见明显变化；在7t:下放置至30个月时，其活性仍未见明显变化。结果表明，本发明之制品，可在常温下保存18个月，如置于7t:以下，则保存时间更长，可长达2.5年以上。3.5美容效果试验结果3.5.1嫩肤、去皱试验结果表2嫩肤、去皱试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由上表可以看出，GM-CSF组的美容效果显著优于对照品组。3.5.2祛斑试验结果表3祛斑试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由上表可以看出，GM-CSF组祛斑效果显著优于对照组。3.5.3祛痘试验结果表4祛痘试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由上表可以看出，GM-CSF组的祛痘效果显著优于对照组。3.6安全性试验结果表5安全性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>经90人使用后，未发现对皮肤有剌激性，只发现1人面部轻度过敏，有2人局部发痒或潮红。具体实施例方式通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。主要材料GM-CSF:可自行制造，也可外购购获得。其制造的主要工艺过程为GM-CSF工程菌在发酵罐内发酵，离心取菌体，用PBS液洗涤两次，置抽提液中抽提。离心取上清，盐析。离心，取沉淀。将沉淀复溶，用层析法进行纯化，收GM-CSF峰，置_201:低温冰柜中冻存。取样进行纯度及活性测定。甘露醇市售药用级。实施例1:量取GM-CSF300yg、甘露醇60mg，溶解于100ml低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例2:量取GM-CSF800yg、甘露醇50mg，将GM-CSF及甘露醇用低温纯化水100ml配制成水溶液，并置于冰浴中，将上述配制而得的水溶液，分装到西林瓶中，置于真空冷冻干燥机中进行冻干后即得冻干粉；冻干工艺及条件为开启真空冷冻干燥机，对制品进行预冷，将制品温度降至-6(TC，降温时间为4-5小时；启动真空泵，将箱内真空度抽至0.3Mbar;加温，升华，升华时间为14-18小时，升华完毕，压塞，箱内充入无菌气体，开箱，取出制品，轧盖，入库。实施例3:量取GM-CSF1100yg、甘露醇40mg，溶解于100ml低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例4:量取GM-CSF1400iig、甘露醇40mg，溶解于100ml低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例5:量取GM-CSF1700iig、甘露醇35mg，溶解于100ml低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例6:量取GM-CSF2000yg、甘露醇30mg，将GM-CSF及甘露醇用低温纯化水100ml配制成水溶液，并置于冰浴中，将上述配制而得的水溶液，分装到西林瓶中，置于真空冷冻干燥机中进行冻干后即得冻干粉；冻干工艺及条件为开启真空冷冻干燥机，对制品进行预冷，将制品温度降至-6(TC，降温时间为4-5小时；启动真空泵，将箱内真空度抽至0.3Mbar;加温，升华，升华时间为14-18小时，升华完毕，压塞，箱内充入无菌气体，开箱，取出制品，轧盖，入库。权利要求粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在制备美容化妆品中的应用。2.—种含有GM-CSF为主要活性成分的美容化妆品(重量份数比)GM-CSF3002000iig甘露醇3060mg。3.权利要求2所述美容化妆品的制备工艺，包括以下步骤将GM-CSF及甘露醇用低温纯化水100ml配制成水溶液，并置于冰浴中，将上述配制而得的水溶液，分装到西林瓶中，置于真空冷冻干燥机中进行冻干后即得冻干粉；冻干工艺及条件为开启真空冷冻干燥机，对制品进行预冷，将制品温度降至-6(TC，降温时间为4-5小时；启动真空泵，将箱内真空度抽至0.3Mbar;加温，升华，升华时间为14-18小时，升华完毕，压塞，箱内充入无菌气体，开箱，取出制品，轧盖，入库。全文摘要本发明公开了一种粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在制备美容化妆品中的用途，同时还提供了其生产工艺。本发明利用生物技术美容，将粒细胞巨噬细胞集落刺激因子应用于美容，从根本上改善皮肤的生理状态，促进表皮组织的修复和代谢，可使皮肤异常细嫩年轻，淡化色斑，平复皱纹，美容效果显著，且安全可靠，基本无副作用。文档编号A61Q19/06GK101773453SQ20101011054公开日2010年7月14日申请日期2010年2月10日优先权日2010年2月10日发明者冯来坤申请人:冯来坤