生物活性植物化妆品组合物及其生产方法

生物活性植物化妆品组合物及其生产方法
【专利摘要】本发明涉及来源于植物细胞汁的膜和细胞浆级分的生物活性植物化妆品组合物。本发明也涉及制备这些生物活性植物化妆品组合物的方法和这些组合物在多种化妆品制剂中的用途和作为局部皮肤化妆品应用的用途。
【专利说明】生物活性植物化妆品组合物及其生产方法
与相关申请的交叉引用
[0001]此申请是在2008年5月7日提交的美国专利申请系列号12/116，924的部分继续案，所述美国专利申请系列号12/116，924是在2003年I月24日提交的美国专利申请系列号10/351，910，在2008年10月28日公布的现在的美国专利号7，442，391的分案，所述美国专利号7，442，391要求在2002年I月25日提交的美国临时专利申请序列号60/351，886的优先权益，其公开以其整体引入本文作为参考。
发明领域
[0002]本发明涉及生物活性植物化妆品组合物及其生产方法及其用途。
发明背景
[0003]在过去几十年间，化妆品工业已接受在多种化妆品制剂和产品中使用植物和植物产品。尽管此趋势预计将持续，就需要更精炼和质量更高的植物成分，所述成分一致地展示对化妆品工业和消费者有吸引力的特征。这些有吸引力的生物活性特征中的一些包括抗炎活性和抗氧化剂活性。着色、安全性、相容性和延长的货架期也是来源于植物成分的化妆品制剂的有价值的特征。
[0004]化妆品工业已整体加强了对开发和销售“天然”化妆品制剂的支持力度，所述化妆品制剂使用目前工业上现有的多种单一或掺合的植物成分。此方法与基于合成成分的方法不同，在于允许化妆品工业从原料成分开发具有一致的产品完整性、性能和保质期的化妆品。使用植物成分的一大主要阻碍是成分，特别是有关生物活性植物成分的性能和稳定性的不一致性。现在使用的作为化妆品制剂成分的许多生物活性植物化妆品成分展示了效力丧失、气味偏差、不想要的着色变深和不理想的沉淀。这些负面属性增加了从生物活性植物成分制造的最终产品相关的微生物污染和增殖、稳定性和安全性考虑的风险。
[0005]为了保证质量、安全性和一致性，化妆品工业对用于化妆品制剂的所有引入原料已开发和实施了多种标准操作程序和严格的规范控制。大多数(如果不是全部)现有的植物提取物不能遵从化妆品工业日益增加的控制和一致性参数。目前的植物提取方法限制了产品规范参数，留下许多质量、性能和相容性的可变窗口。另外，现有的提取方法不能传递在植物细胞内存在的全部活性谱。因此，由于用于生物活性植物化妆品成分的提取方法的不足，不能实现基于植物的化妆品制剂的全部潜能。
[0006]用于从植物中提取生物活性成分的许多现有方法涉及对植物组织或对该组织中含有的目的生物活性成分，或对二者均有害的技术。此外，许多现有的提取和分离方法得到含有生物或化学污染物的粗植物提取物，所述污染物能够引起生物活性效力的丧失、增加的细胞毒性和缩短的货架期。此外，为了得到更精炼的植物提取物，现有的提取方法经常需要使用苛刻的化学溶剂。
[0007]因此，存在对用于提取生物活性植物组合物的方法的需要，所述方法保留组合物的生物活性并从不同批次中得到一致的产品。此外，在化妆品工业中需要能够满足有关货架期、细胞毒性、质量和性能的工业标准的植物组合物。[0008]本发明涉及克服本领域的这些缺陷。
发明概述
[0009]本发明涉及生物活性植物化妆品组合物，其包括(I)来源于从新鲜植物生物质提取的细胞汁的膜级分和(2)稳定剂。膜级分具有抗蛋白水解活性，细胞生长抑制活性，和/或抗蛋白水解和细胞生长抑制活性。抗蛋白水解活性是由于至少一种蛋白酶的抑制，并且细胞生长抑制活性是由于至少一种细胞类型的增殖抑制。
[0010]本发明也涉及适于对哺乳动物局部应用的生物活性植物化妆品制剂。所述生物活性植物化妆品制剂包括化妆可用的载体和化妆有效量的上述生物活性植物化妆品组合物。 [0011]本发明也涉及抑制哺乳动物皮肤组织中的抗炎活性的方法。此方法涉及对皮肤组织应用有效增强皮肤组织中的抗蛋白水解活性的量的上述生物活性植物化妆品组合物。
[0012]本发明也涉及使哺乳动物皮肤组织中的细胞紊乱正常化的方法。此方法涉及对皮肤组织应用有效抑制不想要的皮肤细胞过度增殖的量的上述生物活性植物化妆品组合物。
[0013]本发明也涉及制备生物活性植物化妆品组合物的方法，其涉及提供已从新鲜植物生物质提取的植物细胞汁。然后在有效将其分离为膜级分和细胞汁上清的条件下处理植物细胞汁。在有效得到稳定的生物活性植物化妆品组合物的条件下转化膜级分，所述生物活性植物化妆品组合物展示抗蛋白水解，细胞生长抑制活性，和/或抗蛋白水解和细胞生长抑制活性，其中抗蛋白水解活性是由于至少一种蛋白酶的抑制，并且细胞生长抑制活性是由于至少一种细胞类型的增殖抑制。
[0014]本发明也涉及由上面刚刚描述的方法制备的生物活性植物化妆品组合物。
[0015]本发明也涉及适于对哺乳动物局部应用的生物活性植物化妆品制剂。所述制剂包括化妆可用的载体和化妆有效量的上面刚刚描述的生物活性植物化妆品组合物。
[0016]本发明也涉及抑制哺乳动物皮肤组织中的抗炎活性的方法，所述方法通过对皮肤组织应用有效增强皮肤组织中的抗蛋白水解活性的量的上述生物活性植物化妆品组合物。
[0017]本发明还涉及使哺乳动物皮肤组织中的细胞紊乱正常化的方法，涉及对皮肤组织应用有效抑制不想要的皮肤细胞过度增殖的量的具有细胞生长抑制活性的生物活性植物化妆品组合物。
[0018]本发明也涉及包含由上述方法制备的膜级分的生物活性植物化妆品组合物。
[0019]本发明也涉及生物活性植物化妆品组合物，其包括(I)来源于从新鲜植物生物质提取的细胞汁的细胞浆(cell serum)级分，其中所述细胞浆级分具有抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，和/或抗氧化剂和细胞生长刺激活性，和(2)稳定剂。所述细胞生长刺激活性是由于至少一种细胞类型的增殖刺激。
[0020]本发明也涉及适于对哺乳动物局部应用的生物活性植物化妆品制剂，其包括化妆可用的载体和化妆有效量的上面刚刚描述的生物活性植物化妆品组合物。
[0021]本发明还涉及增强哺乳动物皮肤组织中的抗氧化剂活性的方法，所述方法涉及对哺乳动物皮肤组织应用有效增加皮肤组织中的抗氧化剂活性的量的上述生物活性植物化妆品制剂。
[0022]本发明也涉及刺激哺乳动物皮肤组织中的细胞增殖的方法，所述方法涉及对皮肤组织应用有效刺激皮肤组织中的成纤维细胞的增殖的量的上述生物活性植物化妆品制剂。
[0023]本发明也涉及制备生物活性植物化妆品组合物的方法，所述方法涉及提供已从新鲜植物生物质提取的植物细胞汁。然后在有效将其分离为膜级分和细胞汁上清的条件下处理植物细胞汁。在有效将细胞汁上清分离为细胞质级分和细胞浆级分的条件下加工细胞汁上清。在有效得到细胞浆级分滤液的条件下精炼细胞浆级分。在有效得到稳定生物活性植物化妆品组合物的条件下稳定细胞浆级分滤液，所述生物活性植物化妆品组合物展示抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，或抗氧化剂和细胞生长刺激活性。
[0024]本发明也涉及由上面刚刚描述的方法制备的稳定的生物活性植物化妆品组合物。
[0025]本发明也涉及适于对哺乳动物局部应用的生物活性植物化妆品制剂，其包括化妆可用的载体和化妆有效量的由上述方法制备的生物活性植物化妆品组合物。
[0026]本发明也涉及增强哺乳动物皮肤组织中的抗氧化剂活性的方法。此方法涉及对皮肤组织应用有效增加皮肤组织中的抗氧化剂活性的量的上述生物活性植物化妆品组合物。
[0027]本发明还涉及刺激哺乳动物皮肤组织中的细胞增殖的方法。此方法涉及对皮肤组织应用有效刺激皮肤组织中的成纤维细胞的增殖的量的上述生物活性植物化妆品组合物。
[0028]用于制备生物活性植物化妆品组合物的方法相比现有方法的优势在于，其得到的植物提取物捕获了植物细胞中含有的全部活性谱。然后能够将这些提取物分离为细胞浆或膜组分，同时仍然保持每种组分内含有的生物活性。此外，根据本发明的方法生产的组合物具有比其他传统植物提取物可证明的对皮肤更安全的细胞毒性谱。另外，本发明的组合物满足化妆品工业的微 生物要求。因此，由于一致性、质量、安全性、货架期和有关抗炎和抗氧化剂能力的显著的生物活性效力，本发明的生物活性植物化妆品组合物是现有的植物化妆品成分的显著改进。
[0029]本发明的生物活性植物化妆品组合物展示了对化妆品工业有价值的抗炎和抗氧化剂活性。此外，生物活性植物化妆品组合物的细胞毒性谱符合化妆品成分的工业标准，并展示了作为局部皮肤化妆品有利水平的细胞增殖刺激活性和一定的细胞生长抑制活性。本发明的制备生物活性植物化妆品成分的方法可用于多种植物以得到一致、稳定和高质量的生物活性植物化妆品组合物。
[0030]本发明的生物活性植物化妆品组合物满足有关化妆品原料成分的微生物要求的工业标准。工业标准要求所有活性和非活性成分(即化妆品制剂的所有赋形剂)不是其在化妆品产品的完成的制剂组合物中的贡献。通常，这些完成的制剂组合物具有防腐系统，所述系统预防可能对产品的完整性有风险的微生物污染。在检测防腐系统的保护强度的一个工业使用标准中，对产品进行28天的挑战试验，在此期间在产品中接种微生物，观察所述产品是否经受住这些处理，不被污染。另外，在化妆品工业中，详细检查每种成分以确保微生物水平不过高以至于当产品没有最佳保藏时导致产品后续污染或对产品的货架期构成危险。
[0031]特别地，工业标准统计学“在化妆品领域中活性成分的微生物要求规定，可接受每克或每毫升最高100个微生物的总微生物计数。此外样品(IOg)必须不含大肠杆菌(Escherichia col i)、白色念珠菌(Candida albicans)、假单胞菌属物种(Pseudomonas sp.)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ”(G.A.Nowak,“CosmeticPreparations, ” Verlag fur Chem.，Augsburg, 1: 126 (1985),其全部公开内容引入本文作为参考)。本发明的生物活性植物化妆品组合物满足上述要求，并且因此对完成的化妆品制剂组合物不构成风险。[0032]本发明的生物活性植物化妆品组合物具有高度有价值的关于皮肤的生物活性属性，包括，例如抗炎和抗氧化剂活性，以及细胞增殖刺激特征。众所周知，在新生和死亡的皮肤细胞之间存在平衡。在年轻和健康的皮肤中可见皮肤的最佳状态(即通常在年龄25岁以下的人中可见)。在此年龄以前，皮肤细胞处于调控状态并处于良好平衡的更新系统；从最深的基底层长出，并最终增殖(即，从皮肤深层上升)至顶部(即我们肉眼可见的层)。此细胞流出的平衡是更新平衡的一部分。随着成年人的衰老此平衡丧失，在新细胞长出后增殖速率变慢。增加或刺激细胞增殖的概念是基于恢复在“较年轻”皮肤中可见的最佳平衡。这已导致对细胞增殖刺激物例如类视黄醇和ΑΗΑ(α-羟基酸)的关注。这些成分基本上通过刺激作用模式增加增殖率，由于加速的细胞增殖导致更平滑、看起来更年轻的皮肤。本发明的生物活性植物化妆品组合物，特别是来源于细胞浆级分的组合物，展示了刺激细胞增殖的能力。[0033]在更复杂的方式中，增加的皮肤增殖是伤口愈合和皮肤病况的关键。在某些皮肤病况中，皮肤增殖倾向于过度增殖状态。这些病况近似并发展为疾病态，使其自身在皮肤上显现。例如牛皮藓、湿疹和头皮屑的病况都是过度增殖的病症。于是，皮肤细胞生长抑制剂是明显和建议的减缓增殖速率的方法，以使速率正常化。多种本发明的生物活性植物化妆品组合物，特别是来源于膜级分的组合物展示了这些细胞抑制属性。
[0034]许多原因导致皮肤上出现炎症。这通常与损伤有关，现在专家们开始理解微炎症(micro-1nflammation)的级联效应。皮肤的此微炎症能够由刺激性成分例如肥阜和细胞毒性成分，普通的紫外光例如最低限度的阳光，和在更激烈的方式下由强烈暴露于阳光导致。最近，炎症在皮肤衰老中的作用已被更清楚地理解并提示为形成自由基的间接途径，自由基的作用明确涉及膜脂氧化。因此，抗炎剂是重要的化妆品成分，但监管限制将其限制为作为药物使用。然而，本发明的生物活性植物化妆品组合物，特别是来源于膜级分的组合物，展示了抗炎属性。
[0035]抗氧化剂的作用对营养和化妆品产品已变得越来越重要。抗氧化剂延迟、防御和帮助修复氧化降解的不利影响。在植物界中，大自然已提供了防御多种氧化因素的天然抗氧化剂。本发明的生物活性植物化妆品组合物，特别是来源于细胞浆级分的组合物，证明了这些抗氧化剂活性。
附图简述
[0036]图1是示意图，其说明了用于制备本发明的生物活性植物化妆品组合物的方法的一个实施方案。
发明详述
[0037]本发明涉及来源于植物的膜级分或细胞浆级分的生物活性植物化妆品组合物。本文中使用的术语“膜来源的化妆品组合物”一般指来源于植物的膜级分的本发明的生物活性植物化妆品组合物。术语“浆来源的化妆品组合物” 一般指来源于植物的细胞浆级分的本发明的生物活性植物化妆品组合物。
[0038]本发明也涉及用于生产本发明的生物活性植物化妆品组合物的方法，以及使用组合物的方法。
膜来源的化妆品组合物
[0039]本发明的膜来源的化妆品组合物包括(I)来源于从新鲜植物生物质提取的细胞汁的膜级分和(2)稳定剂。膜级分具有抗蛋白水解活性，细胞生长抑制活性，和/或抗蛋白水解和细胞生长抑制活性。抗蛋白水解活性是由于至少一种蛋白酶的抑制，并且细胞生长抑制活性是由于至少一种细胞类型的增殖抑制。适用于本发明的稳定剂的实例包括乳化剂、防腐剂、抗氧化剂、聚合物及其混合物。 [0040]在本发明的一个方面，膜来源的化妆品组合物具有针对例如丝氨酸蛋白酶和基质金属蛋白酶的蛋白酶组的抗蛋白水解活性。丝氨酸蛋白酶的实例包括嗜中性粒细胞弹性蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂。基质金属蛋白酶的实例是明胶酶B。在本发明的另一个方面，蛋白酶的抑制是可逆的。因为丝氨酸蛋白酶在以受控水平存在时具有某些积极生理作用，使用可逆抑制剂将不影响这些正常的酶促功能。可逆抑制将不会引起不可逆抑制剂能够导致的对防御和修饰机制不理想的长期修饰。
[0041]本发明的膜来源的化妆品组合物具有范围为约0.1和约25.0 μ g干物质/ml之间的IC5tl值的抗蛋白水解效力。在本申请中使用的术语“IC5(I值”代表实现50%的蛋白酶抑制所需的在膜级分中含有的干物质浓度。
[0042]本发明的膜来源的化妆品组合物具有范围为约25和500 μ g干物质/ml之间的NRU50值的细胞生长抑制活性效力。在本申请中使用的术语“NRU5(i值”代表将细胞类型的活力降低至50%所需的膜级分中的干物质浓度。由于膜来源的化妆品组合物的增殖抑制的细胞类型的实例是成纤维细胞。
[0043]本发明的膜来源的化妆品组合物可来源于所有植物类型的膜级分。可用作本发明中新鲜植物生物质源的合适的植物的实例包括来自以下科的植物:菊科、豆科、唇形科和禾本科。特别地，已经过检测并发现适于作为新鲜植物生物质源的具体植物的实例包括，但不限于，红车轴草(Trifolium pratense)、莲(Nelumbo nucifera)、金盖花(Calendulaofficinalis)、紫花苜猜(Medicago sativa)、薰衣草(Lavandula angustifolia)、鼠尾草(Salvia officinalis)和大麦(Hordeum vulgare)。膜来源的化妆品组合物可来源于植物的花组织(例如，红车轴草、莲、金盏花)和/或来源于叶和茎组织(例如，红车轴草、莲、鼠尾草)。
[0044]在一个实施方案中，来源于植物细胞汁的膜级分构成膜来源的化妆品组合物的约0.5和约95之间的重量百分比。
[0045]本发明的膜来源的化妆品组合物能够具有以下具体物理化学值:(1)约0.1和30%之间的非挥发性残留物值；⑵约0.5和2.0g/cm3之间的比重值；(3)约300和50，OOOcps之间的粘度值；和(4)约2.5和9.5之间的pH值。
[0046]本发明也涉及适于对包括人的哺乳动物局部应用的生物活性植物化妆品制剂，其中所述制剂包括化妆可用的载体和化妆有效量的膜来源的化妆品组合物。用于本发明的合适的化妆可用载体的实例包括亲水霜基底、亲水乳液基底、亲水表面活性剂基底、疏水霜基底、疏水乳液基底，和疏水表面活性剂基底。在制剂的一个实施方案中，膜来源的化妆品组合物以范围为制剂总重量的约0.001%和约90%之间的量存在。
[0047]本发明也涉及抑制哺乳动物皮肤组织中的抗炎活性的方法，所述方法涉及对皮肤组织应用有效增强皮肤组织中的抗蛋白水解活性的量的膜来源的化妆品组合物。
[0048]本发明也涉及使哺乳动物皮肤组织中的细胞紊乱正常化的方法。此方法涉及对皮肤组织应用有效抑制不想要的皮肤细胞过度增殖的量的膜来源的化妆品组合物。浆来源的化妆品组合物
[0049]本发明的浆来源的化妆品组合物包括(I)来源于从新鲜植物生物质提取的细胞汁的细胞浆级分，其中所述细胞浆级分具有抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，和/或抗氧化剂和细胞生长刺激活性，和(2)稳定剂。所述细胞生长刺激活性是由于至少一种细胞类型的增殖刺激。适用于本发明的稳定剂的实例包括防腐剂和抗氧化剂。用于本发明的合适的防腐剂包括山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸甲酯钠和柠檬酸。用于本发明的合适的抗氧化剂的实例是偏亚硫酸氢钠。
[0050]在一个实施方案中，浆来源的化妆品组合物的抗氧化剂活性包括超氧化物清除活性和中性粒细胞呼吸爆发抑制活性。浆来源的化妆品组合物具有范围为约50和190 μ g干物质/ml之间的ICR5tl值的超氧化物清除效力。在本申请中使用的术语“ ICR50值”代表抑制50%的细胞色素C还原所需的在细胞浆级分中含有的干物质的浓度。细胞浆来源的化妆品成分具有范围为约1.0和125 μ g干物质/ml之间的细胞生长刺激效力和约110和190%之间的NRU值，其中“NRU值”代表细胞活力。浆来源的化妆品组合物以约1.0和5.0 μ g干物质/ml之间抑制呼吸爆发，并以约120和180 μ g干物质/ml之间刺激呼吸爆发。浆来源的化妆品组合物具有引起呼吸爆发的双相调节的能力，所述呼吸爆发来自佛波醇十四酸酯乙酸酯(phorbol myristate acetate)刺激的中性粒细胞。
[0051 ] 由于浆来源的化妆品组合物被刺激增殖的细胞类型的实例包括成纤维细胞。
[0052]本发明的浆来源的化妆品组合物可来源于所有植物类型的细胞浆级分。可用作本发明中新鲜植物生物质 源的合适植物的实例包括来自以下科的植物:菊科、豆科、唇形科和禾本科。特别地，已经过检测并发现适于作为新鲜植物生物质来源的具体植物的实例包括，但不限于，红车轴草、莲、金盏花、紫花苜蓿、薰衣草、鼠尾草和大麦。浆来源的化妆品组合物可来源于植物的花组织(例如，红车轴草、莲、金盏花)和/或来源于叶和茎组织(例如，红车轴草、莲、大麦、薰衣草、紫花苜蓿和鼠尾草)。
[0053]在一个实施方案中，来源于植物细胞汁的细胞浆级分构成浆来源的化妆品组合物的约I和约10之间的重量百分比。
[0054]本发明也涉及适于对哺乳动物局部应用的生物活性植物化妆品制剂，其包括化妆可用的载体和化妆有效量的浆来源的化妆品组合物。合适的化妆可用载体的实例包括，但不限于亲水霜基底、亲水乳液基底、亲水表面活性剂基底、疏水霜基底、疏水乳液基底和疏水表面活性剂基底。在一个实施方案中，浆来源的化妆品组合物以范围为化妆品制剂总重量的约0.001%和95%之间的量存在。
[0055]本发明还涉及增强哺乳动物皮肤组织中的抗氧化剂活性的方法，其包括对皮肤组织应用有效增加皮肤组织中的抗氧化剂活性的量的浆来源的化妆品组合物。
[0056]本发明也涉及刺激哺乳动物皮肤组织中的细胞增殖的方法，其包括对皮肤组织应用有效刺激皮肤组织中的细胞增殖的量的浆来源的化妆品组合物。
制备生物活性植物化妆品组合物的全过程
[0057]通过示例，下面参考图1描述制备本发明的生物活性植物化妆品组合物的全过程。如图1所示，收获、收集和洗涤新鲜植物2以得到新鲜植物生物质。对此新鲜植物生物质进行研磨、浸溃和冲压4以得到植物细胞汁6和滤饼(preSS-Cake)8。然后使植物细胞汁6过滤通过尼龙网布10以得到经过滤的植物细胞汁12。将经过滤的植物细胞汁12暴露于微波处理14以凝结植物细胞汁12。冷却凝结的植物细胞汁16，然后对其进行离心18以得到膜级分20和植物细胞汁上清30。如下所述，使用膜级分20制备膜来源的生物活性植物化妆品组合物28 ( 即，膜来源的化妆品组合物)。如下所述，使用植物细胞汁上清30制备细胞浆来源的生物活性植物化妆品组合物52 (即，浆来源的化妆品组合物)。
[0058]为了生产生物活性植物化妆品组合物28，将膜级分20掺入聚合物基质22并用制备的聚合物、防腐剂和抗氧化剂稳定24。然后中和稳定的膜级分26以得到膜来源的生物活性植物化妆品组合物28。
[0059]为了生产生物活性植物化妆品组合物52，对植物细胞汁上清30进行等电沉淀32以得到含有细胞质级分36和细胞浆级分38的混合物。为了从细胞质级分36中分离细胞浆级分38，对混合物进行离心34。然后对细胞浆级分38进行微波处理以引起凝结42。依赖于植物来源，在微波处理前，首先调节细胞浆级分38的pH。在凝结42后，然后冷却混合物44，接着过滤46以得到细胞浆滤液48。用防腐剂和抗氧化剂稳定50细胞浆滤液48以得到细胞浆来源的生物活性植物化妆品组合物52。
制备膜来源的化妆品组合物的方法
[0060]在一个实施方案中，制备膜来源的化妆品组合物的方法如下。此方法涉及提供已从新鲜植物生物质提取的植物细胞汁。然后在有效将其分离为膜级分和细胞汁上清的条件下处理植物细胞汁。得到的膜级分具有抗蛋白水解活性，细胞生长抑制活性，或抗蛋白水解和细胞生长抑制活性。然后在有效得到稳定的生物活性植物化妆品组合物的条件下转化膜级分，所述生物活性植物化妆品组合物展示抗蛋白水解，细胞生长抑制活性，或抗蛋白水解和细胞生长抑制活性，其中抗蛋白水解活性是由于至少一种蛋白酶的抑制，并且细胞生长抑制活性是由于至少一种细胞类型的细胞生长的抑制。
[0061 ] 植物细胞汁可从所有植物类型提取。可用作本发明中新鲜植物生物质源的合适植物的实例包括但不限于来自以下科的植物:菊科、豆科、唇形科和禾本科。特别地，已经过检测并发现适于作为新鲜植物生物质源的具体植物的实例包括，但不限于，红车轴草、莲、金盏花、紫花苜蓿、薰衣草、鼠尾草和大麦。可使用植物的多种部分。例如，可使用许多植物类型的茎和叶组织。对其他植物，可使用花作为用于本发明的植物细胞汁源。例如，本发明的一个实施方案使用红车轴草、莲或金盏花的花组织用于植物细胞汁的提取。在另一个实施方案中，使用红车轴草、莲或鼠尾草的叶和茎组织。
[0062]可使用多种提取技术提取植物细胞汁。然而，所述提取技术应得到保存植物的生物活性组分的植物细胞汁。
[0063]制备用于提取植物细胞汁的植物生物质的示例方法涉及收获、收集和洗涤新鲜植物。用于制备新鲜植物生物质的适于遵循的步骤包括，例如下述步骤:(1)保存植物细胞的内在水分含量；(2)优化在收获地上植物组织期间使用的切割高度；(3)在收获期间(例如，在切割地上植物组织期间)保留植物的完整性；(4)使植物生物质生物降解的环境影响和时间因素最小化；和(5)在加工前(例如，在研磨和浸溃前)清洁植物生物质。下面讨论这些步骤的每一个。
[0064]保存内在水分含量:进行的切割应避免由于水分损失的萎蔫。最佳条件是维持和保存天然水分含量的条件。
[0065]最佳和优选的切割高度:应在地上至少若干厘米处切割植物，以限制在收集的生物质中的土壤和其他残渣的量。例如，可在大于或等于地上5厘米的高度处切割任意给定植物源(例如，紫花苜蓿、大麦、薰衣草或鼠尾草)的所有可用的叶和茎生物质。如果使用花组织作为植物生物质源，在提取植物细胞汁前从整株植物上分离花。
[0066]在收获期间保存植物完整性:可通过切割植物的地上茎和叶组织收获植物生物质。以避免或最小化切碎、捣碎、压碎或其他类型植物损伤的方式进行切割。在由于所需设备类型不可能避免切碎的大规模工业收获中，小心地使能够导致在收集的植物中的微生物生长、水分损失、氧化、聚合、异构化和水解过程(即，不想要的分解代谢过程)加剧的损伤最小化。例如，在本发明的一个实施方案中，通过手工切割和收集薰衣草和鼠尾草全植物。在另一个实施方案中，使用收获设备切割紫花苜蓿和大麦组织。在该情况下，每种植物的最低地上切割高度大于或等于5厘米。此外，在切割期间和切割后特别注意使损伤最小化。在另一个实施方案中，通过手工收集金盏花全植物，然后分离花用于进一步加工。
[0067]使降解的环境影响和时间因素最小化:应使切割的植物材料至加工设施的递送时间和生物质在阳光、高温和其他负面环境因素下的暴露最小化，以避免上述不想要的降解过程。例如，在本发明的一个实施方案中，紫花苜蓿和大麦从切割时到进一步加工的递送时间不超过30分钟。在另一个实施方案中，对经历长距离运输的植物进行切割后程序，所述切割后程序涉及立即将植物生物质置于含有冷冻凝胶包装的袋子的泡沫聚苯乙烯冷却器中，以帮助在过夜递送至加工设施期间维持新鲜和天然水分含量。对来自薰衣草、金盏花和鼠尾草的植物生物质 进行这些程序。也可使用实现上述效果的其他切割后程序。
[0068]在研磨和浸溃前的清洁步骤:一旦收获了植物组织，就进行在进一步加工前的洗涤步骤以去除土壤颗粒和来自植物的其他残渣。在避免引起细胞汁从生物质释放，导致损伤，或去除有价值的组分的条件下使用短时间的低压冲洗完成洗涤。例如，在本发明的一个实施方案中，用小于或等于lkg/cm2的水压在少于或等于5分钟内完成植物生物质的洗涤。残留水洗不合任何绿色或黄色的色素，这表明没有随后的损伤。从经洗涤的生物质中去除过量的水以维持干物质含量接近天然水平。
[0069]在如上述收获了植物组织生物质后，进行植物组织生物质的进一步加工以得到植物细胞汁。在一个实施方案中，对收获的植物组织生物质进行研磨、浸溃和冲压以提取细胞内含物，即，细胞汁，和以将其与主要含有细胞壁的富含纤维的压滤饼分离。
[0070]合适的加工方案的实例涉及下述步骤。可使用锤式粉碎机研磨植物以在短时间内得到小尺寸的植物组织颗粒而不显著增加生物质的温度。在一个实施方案中，使用改良的锤式粉碎机在少于或等于10秒的处理时间内产生最大尺寸小于或等于0.5厘米的经浸溃的植物颗粒，其中生物质温度的增加小于或等于5 V。
[0071]如上所述，使经磨碎和浸溃的植物生物质的暴露最小化以避免不想要的分解代谢过程的影响。在植物生物质的研磨和浸溃后尽可能快地开始植物细胞汁的提取及其与压滤饼的分离。在短时间内加工植物生物质而不显著增加温度。在一个实施方案中，在研磨和浸溃后立即使用水平连续螺旋压力机(Compact Press “CP-6”,Vincent Corporation,FL)冲压植物生物质。圆锥体上的压力维持在24kg/cm2的水平，螺杆转速为12rpm，温度增加小于或等于5°C。
[0072]最初的细胞汁通常含有小纤维颗粒，所述颗粒能够吸收有价值的细胞汁组分并堵塞软管和泵。应通过过滤或低速离心去除上述颗粒。例如，在本发明的方法中使用植物细胞汁以前，使在冲压步骤后产生的最初的细胞汁过滤通过四层尼龙纤维。
[0073]一旦提取了植物细胞汁，就在下述过程中处理植物细胞汁，所述过程涉及(I)进行“膜级分凝结步骤”以得到凝结的细胞汁混合物和(2)对凝结的细胞汁混合物进行“膜级分分离步骤”以得到膜级分和细胞汁上清。在一个实施方案中，膜级分凝结步骤包括使细胞汁去稳定化以得到凝结的细胞汁混合物。可使用多种去稳定化技术实现去稳定化，包括例如，温度处理、电膜处理和化学处理。用于本发明的合适的温度处理可包括(I)将细胞汁提取物加热至诱导膜级分凝结所需的处理温度(例如，至约45和70摄氏度之间的温度)和
(2)将细胞汁冷却至有效允许从所述细胞汁上清中进一步定量分离所述膜级分的温度(例如，至约30至45摄氏度的温度)。在实现去稳定化后，进行膜级分的分离步骤。此步骤包括，例如，使用包括过滤和离心的分离技术将凝结的细胞汁混合物分离为膜级分和细胞汁上清。
[0074]在本领域中通常称作“蛋白质-维生素浓缩物”的新鲜得到的膜级分是具有植物原料来源特异性的浓郁颜色和特定气味的糊剂。膜级分主要由植物绿色部分中存在的叶绿体或大多由花中存在的有色体为代表。膜级分的组成主要包括磷脂、膜蛋白、叶绿素和类胡萝卜素。膜级分的干燥导致利用膜级分作为化妆品成分所需的许多有价值的性能的不可逆丧失。如果不干燥，不稳定的膜级分则迅速转化为具有强烈和非特征气味的深色不可分散和不溶的聚集物。因此，这些材料不可用作化妆品成分。下面描述的程序允许将新鲜得到的膜级分转化为稳定和活性的化妆品成分。
[0075]—旦从细胞汁上清中分离膜级分，就在膜级分聚集前对膜级分进行制剂过程，所述过程包括以下步骤:(I)进行“稳定化步骤”以得到经稳定化的膜级分组分；(2)对经稳定化的膜级分组分进行“聚合物基质掺入步骤”以得到膜级分基质；和(3)对膜级分基质进行“中和步骤”以得到本发明的膜来源的化妆品组合物。
[0076]在一个实施方案中，稳定化步骤包括混合非离子型乳化剂和至少一种抗氧化剂以及膜级分以得到经稳定化的膜级分组分。在聚合物基质掺入步骤中，将经稳定化的膜级分组分掺入聚合物基质以得到膜级分基质。用于本发明的合适的聚合物包括，例如，至少一种聚合物乳化剂和至少一种防腐剂。然后对膜级分基质进行中和步骤，所述步骤包括调节膜级分基质的pH至2.5和6.5之间的范围，得到在本申请中描述的膜来源的化妆品组合物。
[0077]在另一个实施方案中，如下进行膜来源的化妆品组合物的稳定以得到约100克组合物:
(a)膜级分的稳定化包括其与非离子型乳化剂聚山梨醇酯80(吐温80)和抗氧化剂(Tenox4)的混合。例如，剧烈混合20克新鲜的膜级分直至均质和3.5克吐温80和0.1克TenoX4( 丁基羟基茴香醚和丁基羟基甲苯的在油中的溶液)，同时避免在混合时曝气。
(b)聚合物乳化剂，丙烯酸酯类/C10-C30丙烯酸酯交联聚合物的分散剂的制备:例如，在69.2克温热的去离子水中分散0.9克Pemulen TR-2并使用温和搅拌混合至均一，避免曝气。平行地在单独的容器中组合5克甘油和I克Phenonip (苯氧乙醇(和)对羟基苯甲酸甲酯(和)对羟基苯甲酸丁酯(和)对羟基苯甲酸乙酯(和)对羟基苯甲酸丙酯的混合物)并混合至均匀。在温和搅拌下，组合含有Pemulen和甘油的相与Phenonip并混合至均匀。
(c)将膜级分掺入聚合物基质:例如，将含有膜级分、吐温80和TenoX4的相加入含有Pemulen、甘油和Phenonip的相并剧烈搅拌混合，同时避免曝气。
(d)产品的中和:例如，用18%的氢氧化钠(NaOH)水溶液中和含有膜级分和其他组分的批次并剧烈混合以产生具有pH = 5.0+0.4的均匀系统。
[0078]得到的多相产品是不透明的凝胶，其显示的性能完全满足化妆品成分的所有要求。发现在多相化妆品成分中的防腐剂和抗氧化剂的最佳组成对所有植物源非常类似，并且可有效使用Pemulen和Carbopol的不同组合。稳定性研究提示，通过所述方法从膜级分生产的化妆品成分在8°C稳定至少4-6月，维持物理化学完整性和活性 。
制备浆来源的化妆品组合物的方法
[0079]本发明也涉及制备展示抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，或抗氧化剂和细胞生长刺激活性的浆来源的化妆品组合物的方法。所述方法包括提供已从新鲜植物生物质提取的植物细胞汁，这已在有关膜来源的化妆品组合物的上文中描述。然后在有效将植物细胞汁分离为膜级分和细胞汁上清的条件下处理植物细胞汁。此步骤也和有关膜来源的化妆品组合物的上文中描述的相同。在有效将细胞汁上清分离为细胞质级分和细胞浆级分的条件下加工细胞汁上清。在有效得到细胞浆级分滤液的条件下精炼细胞浆级分，所述细胞浆级分滤液具有抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，或抗氧化剂和细胞生长刺激活性。在有效得到稳定的生物活性植物化妆品组合物的条件下稳定化细胞浆级分滤液，所述生物活性植物化妆品组合物展示抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，或抗氧化剂和细胞生长刺激活性。
[0080]植物细胞汁可从所有植物类型提取。可用作本发明中新鲜植物生物质源的合适植物的实例包括但不限于来自以下科的植物:菊科、豆科、唇形科和禾本科。特别地，已经过检测并发现适于作为新鲜植物生物质源的具体植物的实例包括，但不限于，红车轴草、莲、金盏花、紫花苜蓿、薰衣草、鼠尾草和大麦。
[0081]如上所述，一旦将植物细胞汁分离为膜级分和细胞汁上清，就对细胞汁上清进行加工步骤。在一个实施方案中，所述加工步骤包括(I)进行“细胞质级分沉淀步骤”以得到包括细胞质级分和细胞浆级分的细胞质/细胞浆混合物，和(2)进行“细胞浆分离步骤”以分离细胞质级分与细胞浆级分。细胞质级分主要包括白色可溶性蛋白质；在03植物中，这些蛋白质主要由酶核酮糖二磷酸羧化酶组成。细胞浆含有低分子量可溶性组分。
[0082]细胞质级分沉淀步骤可包括使用合适的沉淀技术，包括例如，等电滴定和电渗析诱导细胞汁上清内的细胞质级分的沉淀。在一个实施方案中，等电滴定包括将细胞汁上清的pH调节为在约2.5和6.5之间。使用合适的分离技术，包括例如过滤和离心的技术诱导细胞质/细胞浆混合物分离为细胞质级分和细胞浆级分。例如，通过利用5.0N盐酸(HCl)调节为pH = 4.0的滴定方法诱导沉淀。
[0083]评估细胞质级分完全分离的定量标准是在随后的滤液或上清中缺乏可检测水平的高分子量蛋白质和/或缺乏核酮糖二磷酸脱羧酶。例如，可在冷冻离心中以大于或等于3，OOOg大于或等于20分钟分离沉淀的细胞汁上清,并且在具有pH = 4.0的细胞楽:中实现缺乏具有大于或等于10，000的分子量的蛋白质。
[0084]通常将细胞浆称为“棕色汁”，尽管最初此澄清液体具有淡黄色和轻微的特征气味。在数小时内，不稳定的细胞浆不可逆地转化为具有大量沉淀物和强烈非特征气味的深棕色悬浮液。因此，“棕色汁”不能用作化妆品成分。下述程序允许精炼细胞浆(棕色汁)以得到稳定和有活性的化妆品成分。这是通过从细胞浆中去除引起导致不想要的沉淀产生和颜色和气味恶化的不可逆转化的主要成分实现。此程序包括:pH调节、热处理、冷却、真空过滤和稳定化。一些特定的程序团(regiment procedures)可根据植物来源细胞衆而变化。应该注意，此程序必须在完成细胞浆和细胞质级分的分离后立即使用。 [0085]一旦产生了细胞浆级分，就对其进行精炼过程。此精炼过程包括(I)进行“温度处理步骤”以得到凝结的细胞浆级分，和(2)进行澄清步骤以得到细胞浆级分滤液。用于本发明的合适的温度处理步骤包括(I)将细胞浆级分加热至诱导细胞浆级分内凝结所需的加热温度，和(2)立即将细胞浆级分冷却至有效允许进一步定量分离所述细胞浆级分滤液的温度。在一个实施方案中，加热温度为在约80和约95摄氏度之间，并且将被加热的细胞浆级分冷却到至少低至约15摄氏度的温度。用于本发明的合适的澄清步骤包括澄清凝结的细胞浆级分以得到细胞浆级分滤液，其中所述澄清包括例如过滤和离心的澄清技术。在一个实施方案中，过滤可包括真空过滤凝结的细胞浆级分以得到细胞浆级分滤液。在另一个实施方案中，在温度处理步骤前，将细胞浆级分的PH合适地调节至约3.0和4.0之间。
[0086]在产生了细胞浆滤液后，就对其进行上述稳定化步骤以得到浆来源的化妆品组合物。在一个实施方案中，稳定化步骤包括在至少一种防腐剂和至少一种抗氧化剂的混合物中孵育细胞浆级分滤液以得到经稳定化的细胞浆级分滤液。用于本发明的合适的防腐剂包括例如，山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸甲酯钠和柠檬酸。用于本发明的合适的抗氧化剂的实例是偏亚硫酸氢钠。
[0087]在一个实施方案中，可如下进行细胞浆的稳定化:
(a)例如，对从鼠尾草和金盏花得到的、通过利用5.0N盐酸(HCI)调节至pH = 3.0的滴定法诱导的细胞浆进行PH调节。这样的调节对从紫花苜蓿、大麦和薰衣草得到的细胞浆不是必需的。
(b)对从所有可用的植物源得到的细胞浆进行热处理。例如，在温度探针控制下将细胞浆暴露于微波处理。持续此处理直到温度达到90°C。温度探针指示诱导不想要的成分的完全凝结所需的点。一旦诱导了凝结，立即将被处理的细胞汁冷却至10°C。
(c)能够通过过滤或离心澄清凝结的细胞衆。例如，可通过双层Whatman2号滤器真空过滤凝结的细胞衆。丢弃沉淀物，并将滤液用于进一步加工。
(d)滤液的稳定化包括的加入特定防腐剂和抗氧化剂并孵育所述混合物直到实现其完全的稳定化(通常需要大于或等于30分钟的充分混合)。
[0088]经稳定化的细胞浆滤液显示了完全满足化妆品成分所有要求的性能。稳定性研究提示，通过这些方法从细胞浆生产的化妆品成分在室温稳定至少10-12个月(即，它们维持物理化学完整性和活性)。
实施例
实施例1
来源于紫花苜猜(Medicago sativa)细胞衆级分的化妆品植物成分101的制备
[0089]生物质的制备。收获足够量的新鲜紫花苜蒂(MedicaRo sativa)植物生物质(即，茎和叶组织)以得到约IOOkg干物质。经计算，新鲜紫花苜蓿植物生物质中的干物质水平为15.75%，需要收获约635kg新鲜紫花苜蓿植物生物质以得到IOOkg干物质。注意保存植物生物质的内在水分含量和避免由于水分损失而萎蔫。在地上至少5厘米处切割植物以限制在收集的植物生物质中的土壤和其他残渣的量。以避免或最小化切碎、捣碎和压碎植物的方式进行切割。在切割后不多于60分钟将收获的植物递送至加工。这样做是为了最小化植物生物质暴露于阳光、高温和其他负面环境因素。在进一步加工前进行洗涤步骤以去除土壤颗粒和来自植物的其他残渣。通过在< lkg/cm2水压下洗涤< 5分钟收获的植物完成此洗涤步骤。残留水洗物不含任何绿色色素，表明合适的水压和洗涤持续时间。从洗涤后的生物质中去除过量的水。
[0090]植物生物质的研磨、浸渍和冲压。在收获、收集和洗涤植物生物质后，然后对植物进行研磨、浸溃和冲压以提取细胞内含物(即，植物细胞汁)并将其与富含纤维的压滤饼分离。使用锤式粉碎机研磨紫花苜蓿生物质以在短时间内得到合适的小尺寸的植物组织颗粒并且不显著增加生物质的温度。将锤式粉碎机设定为在< 10秒的处理时间内产生< 0.5厘米的经浸溃的植物颗粒的最大尺寸。这仅导致<5°C的生物质温度的增加。使用水平连续螺旋压力机(Compact Press“CP-6”,Vincent Corporation,FL)从植物生物质中提取植物细胞汁。将螺旋压力机圆锥体上的压力维持在24kg/cm2的水平，螺杆转速为12rpm，温度仅增加<5°C。此处理得到压滤饼和植物细胞汁。最初的植物细胞汁含有小纤维颗粒，通过过滤通过4层尼龙纤维或通过使用低速离心将所述颗粒去除。
[0091] 分离膜级分与细胞汁。将滤过的植物细胞汁暴露于使用温度探针控制的微波处理。持续此处理直到细胞汁的温度达到60°C。一旦诱导凝结，将经处理的细胞汁立即冷却至40°C。使用大于或等于3，000g，大于或等于20分钟的离心实现膜级分与凝结的细胞汁的分离。这得到膜级分(沉淀物)和含有细胞质级分和细胞浆级分(即，低分子量可溶性组分)的细胞汁上清。将细胞汁上清用于进一步加工以得到化妆品植物成分101。保存膜级分用于制备对应物膜来源的化妆品组合物。
[0092]分离细胞质级分与细胞汁上清。为了分离出细胞质级分，对细胞汁上清进行等电沉淀。使用利用5.0N盐酸(HCI)使细胞汁上清的pH变为4.0的滴定法诱导细胞质级分的沉淀。通过大于或等于3，000g,大于或等于20分钟的离心实现沉淀的细胞质级分与细胞浆的分离。这得到细胞浆(上清)，其能够进一步精炼以得到植物化妆品成分101。
[0093]处理细胞浆以产生化妆品植物成分101。细胞浆的精炼包括以下步骤:热处理、冷却、过滤和稳定。在分离细胞浆和细胞质级分后立即进行精炼。将细胞浆暴露于使用温度探针控制的微波处理。持续此处理直到细胞浆的温度达到90°C。一旦诱导凝结，将经处理的细胞衆立即冷却至10°c。将凝结的细胞衆真空过滤通过双层Whatman2号滤器。丢弃沉淀物，并将得到的细胞浆滤液用于进一步处理(即，稳定化)。通过加入防腐剂和抗氧化剂并孵育混合物直至完全溶解来实现细胞浆滤液的稳定。使用的防腐剂和抗氧化剂包括下述:0.1 %山梨酸钾、0.1 %苯甲酸钠、0.1 %对羟基苯甲酸甲酯钠和0.2%偏亚硫酸氢钠。此制备导致18.1kg干物质产量(或约340升)的化妆品植物成分101的产生，将其用于其物理化学和生物活性特性的表征。化妆品植物成分101的推荐储存条件包括在避光的密封容器中在15和25°C之间的温度储存。
实施例2
来源于紫花苜猜(Medlicago sativa)细胞衆级分的化妆品植物成分101的产品规格
[0094]根据在实施例1中的上述方法制备化妆品植物成分101。如下所述进行化妆品植物成分101的分析以测定其多种物理化学、微生物、细胞毒性和生物活性特征。化妆品植物成分101是澄清液体，其具有淡黄色和轻微的特征气味。在载体介质中未加入溶剂(即甘油、油或水)。
[0095]表1总结了化妆品植物成分101的物理和化学数据。
表1.物理和化学数据
【权利要求】
1.生物活性植物化妆品组合物，所述组合物包含: 来源于从新鲜植物生物质提取的细胞汁的细胞浆级分滤液，所述细胞浆级分滤液具有抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，和/或抗氧化剂和细胞生长刺激活性，其中所述新鲜植物生物质来自植物源，所述植物源选自由莲花(莲(Nelumbo nucifera))和红三叶草(红车轴草(Trifolium pratense))组成的组；和 稳定剂，其中所述细胞生长刺激活性是由于至少一种细胞类型的增殖刺激， 其中根据以下步骤所述细胞浆级分滤液来源于细胞汁: 提供植物细胞汁，所述植物细胞汁是已从新鲜植物生物质中提取的； 在有效将植物细胞汁分离为膜级分和细胞汁上清的条件下处理植物细胞汁； 在有效将细胞汁上清分离为细胞质级分和细胞浆级分的条件下加工细胞汁上清；和 在有效得到细胞浆级分滤液的条件下精炼细胞浆级分，其中所述精炼包括对细胞浆级分进行温度处理步骤以得到凝结的细胞浆级分，和澄清凝结的细胞浆级分以得到细胞浆级分滤液。
2.根据权利要求1的生物活性植物化妆品组合物，其中所述稳定剂选自由防腐剂和抗氧化剂组成的组。
3.根据权利要求2的生物活性植物化妆品组合物，其中所述防腐剂选自由山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸甲酯钠和柠檬酸组成的组。
4.根据权利要求2的生物活性 植物化妆品组合物，其中所述抗氧化剂是偏亚硫酸氢钠。
5.根据权利要求2的生物活性植物化妆品组合物，其中所述抗氧化剂活性选自由超氧化物清除活性和嗜中性粒细胞呼吸爆发抑制活性组成的组。
6.根据权利要求1的生物活性植物化妆品组合物，其中所述细胞浆级分滤液包含所述生物活性植物化妆品组合物的约I和约10之间的重量百分比。
7.根据权利要求6的生物活性植物化妆品组合物，其中所述生物活性植物化妆品组合物具有范围为约50和约190 μ g干物质/ml之间的ICR5tl值的超氧化物清除效力，其中所述ICR50值代表抑制50%的细胞色素C还原所需的在细胞浆中含有的干物质的浓度。
8.根据权利要求1的生物活性植物化妆品组合物，其中所述细胞浆级分滤液具有范围为约1.0和125 μ g干物质/ml之间的细胞生长刺激效力。
9.根据权利要求8的生物活性植物化妆品组合物，其中所述细胞浆级分滤液具有约110和190 %之间的NRU值，其中所述NRU值代表细胞活力。
10.根据权利要求1的生物活性植物化妆品组合物，其中所述生物活性植物化妆品组合物具有引起来自佛波醇十四酸酯乙酸酯刺激的嗜中性粒细胞的呼吸爆发的双相调节的能力，在于所述组合物以约1.0和5.0 μ g干物质/ml之间抑制所述呼吸爆发，并且以约120和180 μ g干物质/ml之间刺激所述呼吸爆发。
11.根据权利要求1的生物活性植物化妆品组合物，其中所述生物活性植物化妆品组合物包含与表38或表39中所示特征基本相同的特征。
12.适于对哺乳动物局部应用的生物活性植物化妆品制剂，所述化妆品制剂包含化妆可用的载体和化妆有效量的根据权利要求1的生物活性植物化妆品组合物。
13.根据权利要求12的化妆品制剂，其中所述化妆可用的载体选自由亲水霜基底、亲水乳液基底、亲水表面活性剂基底、疏水霜基底、疏水乳液基底，和疏水表面活性剂基底组成的组。
14.根据权利要求12的化妆品制剂，其中所述生物活性植物化妆品组合物以范围为化妆品制剂总重量的约0.001%和约95%之间的量存在。
15.根据权利要求1的生物活性植物化妆品组合物，其中所述植物源是莲花(莲(Nelumbo nucifera))。
16.根据权利要求1的生物活性植物化妆品组合物，其中所述植物源是红三叶草(红车轴草(Trifolium pratense))。
17.根据权利要求12的化妆品制剂，其中所述植物源是莲花(莲(Nelumbonucifera))。
18.根据权利要求12的化妆品制剂，其中所述植物源是红三叶草(红车轴草(Trifolium pratense))。
19.制备生物活性植物化妆品组合物的方法，所述方法包括: 提供植物细胞汁，所述植物细胞汁是已从新鲜植物生物质提取的，其中所述新鲜植物生物质来自植物源，所述植物源选自由莲花(莲(Nelumbo nucifera))和红三叶草(红车轴草(Trifolium pratense))组成的组； 在有效将植物细胞汁分离为膜级分和细胞汁上清的条件下处理植物细胞汁； 在有效将细胞汁上清分离为细胞质级分和细胞浆级分的条件下加工细胞汁上清； 在有效得到细胞浆级分滤液的条件下精炼细胞浆级分，所述细胞浆级分滤液具有抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，和/或抗氧化剂和细胞生长刺激活性，其中所述精炼包括对细胞浆级分进行温度处理步骤以得到凝结的细胞浆级分，和澄清凝结的细胞浆级分以得到细胞浆级分滤液；和 在有效得到稳定的生物活性植物化妆品组合物的条件下使细胞浆级分滤液稳定化，所述生物活性植物化妆品组合物展示出所述抗氧化剂活性，细胞生长刺激活性，或抗氧化剂和细胞生长刺激活性。
20.根据权利要求19的方法，其中所述处理包括: 使植物细胞汁凝结以得到凝结的细胞汁混合物，和 将凝结的细胞汁分离为膜级分和细胞汁上清。
21.根据权利要求20的方法，其中所述凝结包括: 使植物细胞汁去稳定化以得到凝结的细胞汁混合物，其中所述去稳定化是通过热处理、电膜处理、化学处理和/或其组合实现的。
22.根据权利要求21的方法，其中所述热处理包括: 将植物细胞汁加热至诱导膜级分凝结所需的热处理温度，和 将经加热的细胞汁冷却至有效允许所述膜级分与所述细胞汁上清定量分离的温度。
23.根据权利要求22的方法，其中所述加热在45至70摄氏度进行。
24.根据权利要求22的方法，其中所述冷却在30至45摄氏度进行。
25.根据权利要求20的方法，其中所述分离通过过滤或离心进行。
26.根据权利要求19的方法，其中所述加工包括: 对细胞汁上清进行细胞质级分沉淀步骤以得到包含细胞质级分和细胞衆级分的细胞质/细胞浆混合物，和 分离细胞质级分与细胞浆级分。
27.根据权利要求26的方法，其中所述细胞质级分沉淀步骤通过等电滴定、电渗析和/或其组合进行。
28.根据权利要求27的方法，其中所述等电滴定包括: 将细胞汁上清的PH调节至约2.5和6.5之间。
29.根据权利要求26的方法，其中所述分离通过过滤或离心进行。
30.根据权利要求19的方法，其中所述温度处理步骤包括: 将细胞浆级分加热至诱导细胞浆级分内的凝结所需的加热温度，和 将细胞浆级分冷却至有效允许进一步定量分离所述细胞浆级分滤液的温度。
31.根据权利要求30的方法，其中所述加热温度是80至95摄氏度。
32.根据权利要求30的方法，其中所述冷却是冷却到至少低至约15摄氏度的温度。
33.根据权利要求19的方法，其中所述澄清通过过滤或离心进行。
34.根据权利要求33的方法，其中所述过滤包括: 真空过滤凝结的细胞浆级分 以得到所述细胞浆级分滤液。
35.根据权利要求19的方法，所述方法还包括: 在所述精炼前立即将细胞浆级分的PH调节至约3.0至4.0。
36.根据权利要求19的方法，其中所述稳定化包括: 在至少一种防腐剂和至少一种抗氧化剂的混合物中孵育所述细胞浆级分滤液以得到稳定的生物活性植物化妆品组合物。
37.根据权利要求36的方法，其中所述防腐剂选自由山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸甲酯钠，和柠檬酸组成的组。
38.根据权利要求36的方法，其中所述抗氧化剂是偏亚硫酸氢钠。
39.根据权利要求19的方法,其中所述植物源是莲花(莲(Nelumbonucifera))。
40.根据权利要求19的方法,其中所述植物源是红三叶草(红车轴草(Trifoliumpratense))。
41.通过根据权利要求19的方法制备的稳定的生物活性植物化妆品组合物。
【文档编号】A61Q19/00GK103547253SQ201280019509
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2012年2月21日 优先权日:2011年2月22日
【发明者】M·克格诺夫, O·杜瓦-克格诺夫 申请人:阿克佐诺贝尔化学国际公司