用于降解拟除虫菊酯的方法和物质的制作方法

专利名称：用于降解拟除虫菊酯的方法和物质的制作方法
用于降解拟除虫菊酯的方法和物质
参考序列表
本说明书附有包括SEQ ID NOS: 1_4的序列表，将其全文通过引用合并入本文。发明领域
本发明涉及用于降解拟除虫菊酯例如氯菊酯的方法，用于进行该降解的酶促组 合物，以及其它方面。
背景
拟除虫菊酯是与由菊花产生的天然杀虫剂除虫菊素相似的一组人造杀虫剂。拟 除虫菊酯被广泛用于控制各种昆虫。拟除虫菊酯抑制昆虫的神经系统。存在在化学结构 和暴露的症状上不同的两种类型。I型拟除虫菊酯包括烯丙菊酯、胺菊酯、苄呋菊酯、右 旋苯醚菊酯、生物苄呋菊酯和氯菊酯。II型拟除虫菊酯的一些实例是氯氰菊酯、氟氯氰 菊酯、溴氰菊酯、苯醚氰菊酯、氰戊菊酯和氟氰胺菊酯。I和II型拟除虫菊酯都抑制昆 虫的神经系统。该抑制在神经细胞膜的钠离子通道上发生。一些拟除虫菊酯也影响称为 GABA的神经递质的作用。在许多用于控制昆虫的商业产品(包括家用杀虫剂、宠物喷 雾剂(pet sprays)和洗发剂)中发现有拟除虫菊酯。一些拟除虫菊酯也用作直接用于头的 虱治疗和用作可用于衣服的驱蚊剂。
氯菊酯是拟除虫菊酯种类的杀虫剂的成员。由于氯菊酯对水生生物的高 毒性，因此，除了用作大面积蚊子杀成虫剂外，其为美国环境保护署(UnitedStates Environmental Protection Agency，EPA)对于农作物和大面积应用限制使用的杀虫剂。然而，其被分类为用于住宅和工业应用的普遍使用的杀虫剂。根据EPA数据，每年有大约 2百万磅氯菊酯被用于农业、住宅和公共卫生使用场所。
氯菊酯，除了其由人使用时具有相对安全性以外，还以昆虫/节肢动物驱除性 著称。因此，氯菊酯的另一个主要用途是在地毯料(carpeting)制造中用作防蛀剂。作为 制造过程的部分，会产生含氯菊酯的废水(effluent)。所得的废水对地毯制造工业产生了 处理和处置问题，因为由于其潜在的毒性，废水不能直接排放入环境。
因此，必须小心操作，因为已知如果不注意地将其引入水流或水循环的话，氯 菊酯可毒害鱼类。在哺乳动物中，氯菊酯通过改变神经膜钠通道的正常生物化学和生理 学来改变神经功能。人的中毒症状包括皮肤和眼睛的刺激、对声音或触摸的易怒性、异 常的面部感觉、皮肤上的刺痛、麻刺或发痒(creeping)的感觉、麻木、头痛、眩晕、恶 心、呕吐、腹泻、过度唾液分泌和疲劳。
因此需要无毒的、环境安全和用户友好的、能够解除废水以及其他溶液和混合 物中的氯菊酯毒性的拟除虫菊酯去污染剂，例如氯菊酯去污染剂。还需要可作用于不存 在于溶液中的氯菊酯的拟除虫菊酯去污染剂，例如氯菊酯去污染剂。本文中所示的公开 内容满足和解决了这些需要。
概述
本文中提供了降解拟除虫菊酯例如氯菊酯的方法，所述方法包括将拟除虫菊酯 与含有有机磷水解酶(organophosphatehydrolase，ΟΡΗ)的组合物接触。本文中还提供了降解样品中的拟除虫菊酯例如氯菊酯的方法，所述方法包括将样品与含有有机磷水解酶 (OPH)的组合物接触。在一个方面，拟除虫菊酯例如氯菊酯被完全降解。在另一个方 面，拟除虫菊酯例如氯菊酯被部分降解。
本文中还提供了使样品中的拟除虫菊酯例如氯菊酯失活的方法，所述方法包括 将样品与含有OPH的组合物接触。
本文中还提供了使样品中拟除虫菊酯例如氯菊酯的活性降低的方法，所述方法 包括将样品与含有OPH的组合物接触。在一个方面，样品具有在大约6.5至9.0范围内 的ρΗ。在另一个方面，ρΗ为大约8.5。在另一个方面，将样品的ρΗ调整至8.5。在 一个方面，样品的温度在大约20°C至30°C的范围内。在另一个方面，样品的温度是大约 22 °C。
在一个方面，含有拟除虫菊酯的样品例如含有氯菊酯的样品是来自制造过程的 废水。在一个方面，所述制造过程包括用拟除虫菊酯例如氯菊酯处理地毯料。
本文中还提供了降解样品中的拟除虫菊酯例如氯菊酯的方法，所述方法包括将 样品与含有表达OPH的微生物的组合物接触。在一个方面，所述微生物是细菌。
本文中还提供了降解拟除虫菊酯的组合物例如降解氯菊酯的组合物，所述组合 物包含至少一种分离的酶。在一个方面，降解拟除虫菊酯的组合物例如降解氯菊酯的组 合物包含ΟΡΗ。在一个方面，提供了 OPH用于降解拟除虫菊酯的用途。
附图概述
附图被合并入本说明书中并且构成本说明书的一部分，其举例说明了各种实施方案。


图1图解说明了在15分钟的时间过程中样品中剩余的氯菊酯的量。
图2举例说明了 OWi的降解氯菊酯的活性作为温度的函数。Offl活性表示为每 克酶的OPH单位数。
图3举例说明了 OPH的降解氯菊酯的活性作为ρΗ的函数。OPH活性表示为每 克酶的OPH单位数。
图4举例说明了 OPH的降解氯菊酯的活性作为缓冲液浓度的函数。OPH活性表 示为相对活性百分比。
发明详述
本文中提供了降解拟除虫菊酯的方法，所述方法包括将拟除虫菊酯与含有有机 磷水解酶(OPH)的组合物接触。
此外，提供了降解拟除虫菊酯例如氯菊酯的方法，其中拟除虫菊酯存在于样品 中，所述方法包括将样品与含有有机磷水解酶(OPH)的组合物接触。
在一个方面，完全降解或至少部分降解该拟除虫菊酯。
拟除虫菊酯因具有杀昆虫性质而著称(参见，例如US 2007/0276013Α1、 WO 2005077186、WO 93-22297、WO 93-10 083、DE-A 2 641 343、ΕΡ-Α-347 488、 ΕΡ-Α-210 487、美国专利 3,264,177 和 ΕΡ-Α-234 045)。
在一个方面，拟除虫菊酯选自已知来自ΕΡ-Α-048 186的氟丙菊酯、已知来自EP-A-067 46的顺式氯氰菊酯、已知来自EP_A_206 149的高效氟氯氰菊酯、已知 来自DE-A-2 802 962的氯氟氰菊酯、已知来自DE_A_2 326 077的氯氰菊酯、已知来 自DE-A-2 3 077的溴氰菊酯、已知来自DE-A-2 737四7的高效氰戊菊酯、已知来自 DE-A-3 117 510的醚菊酯、已知来自DE-A-2 231 312的甲氰菊酯、已知来自DE_A_2 335 347的氰戊菊酯、已知来自DE-A-2 757 066的氟氰戊菊酯、已知来自EP_A_106 469 的高效氯氟氰菊酯、已知来自DE-A-2 3 077的氯菊酯、已知来自EP_A_038 617的氟 胺氰菊酯、已知来自DE-A-2 742 546的四溴菊酯、已知来自EP_A_(^6 542的zeta-氟 氯氰菊酯、已知来自DE-A-2709 264的氟氯氰菊酯、已知来自EP_A_049 977的联苯菊 酯、已知来自DE-A-2653189的乙氰菊酯、已知来自DE-A-3604781的eflusilanate、已知 来自 DE-A-37 08 231 的氟螨醚(fubfenprox)、已知来自 PesticideManual 1997、issue 11、 第1056页的除虫菊素、已知来自GB-A-I 168 797的苄呋菊酯(已知来自"The Pesticide Manual、第 13 版、2003、第 232 页的条目 197、by The British Crop Protection Council)的 精高效氯氟氰菊酯和苯醚菊酯。
在一个方面，拟除虫菊酯选自氟丙菊酯、烯丙菊酯(右旋-顺-反式、右旋-反 式)、高效氟氯氰菊酯、联苯菊酯、生物烯丙菊酯、生物烯丙菊酯-5-环戊基-异构体、 生物氯菊酯、生物氯菊酯、生物苄呋菊酯、二氯炔戊菊酯(chlovaporthrin)、顺-氯氰菊 酯、顺-苄呋菊酯、顺-氯菊酯、功夫菊酯(clocythrin)、乙氰菊酯、氟氯氰菊酯、氯氟氰 菊酯、氯氰菊酯(α-、β-、θ-、ζ-)、苯醚氰菊酯、溴氰菊酯、右旋烯炔菊酯(1R-异 构体)、顺式氰戊菊酯、醚菊酯、五氟苯菊酯、甲氰菊酯、吡氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴 氟菊酯、氟氰戊菊酯、三氟醚菊酯(fhifenprox)、氟氯苯菊酯、氟氰胺菊酯、苄螨醚、精 高效氯氟氰菊酯、炔咪菊酯、噻恩菊酯、高效氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、甲氧卞 氟菊酯、氯菊酯(顺_、反_)，苯醚菊酯(1R-反式异构体)、右旋炔丙菊酯、丙氟菊 酯、protrifenbute、pyresmethrin、苄呋菊酯、RU 15525、氟硅菊酯(silafluofen)、氟胺氰 菊酯、七氟菊酯、环戊烯丙菊酯、胺菊酯(-1R-异构体)、四溴菊酯、四氟苯菊酯、ZXI 8901、除虫菊素类(除虫菊素).。
在一个方面，拟除虫菊酯选自氟丙菊酯、顺式氯氰菊酯、高效氟氯氰菊酯、氯 氟氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、顺式氰戊菊酯、醚菊酯(ethofenprox)、甲氰菊酯、 氰戊菊酯、氟氰戊菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟胺氰菊酯、氟氰胺菊酯、四溴菊 酯、zeta-氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯、乙氰菊酯、eflusilanate，苄螨醚、除虫 菊素、苄呋菊酯、精高效氯氟氰菊酯、烯丙菊酯、胺菊酯、右旋苯醚菊酯、生物苄呋菊 酯、苯醚氰菊酯和苯醚菊酯。
在一个方面，拟除虫菊酯选自烯丙菊酯、胺菊酯、苄呋菊酯、右旋苯醚菊酯、 生物苄呋菊酯和氯菊酯。
在一个方面，拟除虫菊酯选自氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、苯醚氰菊 酯、氰戊菊酯和氟氰胺菊酯。
在一个方面，拟除虫菊酯选自氯菊酯、苄呋菊酯和苯醚菊酯。
在一个方面，拟除虫菊酯是氯菊酯。
氯菊酯是拟除虫菊酯的一个实例，其是在例如农业以及材料生产和加工等领域 中广泛使用的化合物。然而，氯菊酯以及其他拟除虫菊酯对鱼和各种哺乳动物是有毒的，因此必需小心地操作和处置来自氯菊酯的工业和商业使用的含有氯菊酯的废物。例 如，来自地毯制造过程中的含氯菊酯废水带来了操作和处置问题。本文中显示有机磷水 解酶(OPH)可降解氯菊酯。通过使用高效催化酶处理氯菊酯废物和含氯菊酯组合物，可 避免使用额外的有毒或昂贵的化学品。
1.定义和缩写
按照本文详述，使用下列缩写和定义。应当指出，如本文中所使用的，除非上 下文中明确地指出，否则单数形式无定冠词和有定冠词(一个(种)或这/该(种)等) 的指代物包括多个(种)所指物。因此，例如，提到“酶”，包括许多这样的酶，提到“制剂”包括提到一种或多种制剂以及对于本领域技术人员来说是已知的其等价物，等寸。
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语都具有与本领域技术人 员通常理解的相同的意义。在下文中提供下列术语。
1.1.定义
如本文中所使用的，术语“表达”是指籍以依据基因的核酸序列产生多肽的过 程。该过程包括转录和翻译。
“分离的”意指序列至少大体上不含至少一种与该序列天然结合并且在自然界 (例如基因组序列)中发现的其他成分。
“纯化的”意指材料以相对纯的状态存在，例如至少大约90%纯、至少大约 95%纯或至少大约96%、97%, 98%或99%纯。
如本文中所使用的，“氨基酸序列”与术语“多肽”和/或术语“蛋白质”同 义。在一些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“肽”同义；在一些情况下，术语“氨 基酸序列”与术语“酶”同义。
如本文中所使用的，“核苷酸序列”或“核酸序列”是指寡核苷酸序列或多核 苷酸和其变体、同源物、片段和衍生物。核苷酸序列可以是基因组来源的、合成或重组 来源的序列，可以是双链或单链，无论代表有义链还是反义链。如本文中所使用的，术 语“核苷酸序列”包括基因组DNA、cDNA、合成的DNA和RNA。
如本文中所使用的，“合成的”化合物是通过体外化学或酶促合成产生的。其 包括，但不限于，使用宿主生物例如酵母细胞宿主或选择的其他表达宿主的最佳密码子 用法产生的变体核酸。如本文中所使用的，“ΟΡΗ活性”是指本文中所示的对氯菊酯的 降解。
7“样品”，当在本文中使用该术语时，是可含有氯菊酯的任何物质。 1.2.缩写除非另外指出，否则应用下列缩写 cDNA 互补 DNA DEAE 二乙氨基乙醇DNA 脱氧核糖核酸EC 酶分类的酶学委员会(enzyme commission for enzyme classification) GCMS 气相色谱-质谱法 HPLC 高效液相色谱
mRNA 信使核糖核酸
OP 有机磷酸盐/酯
OPH 有机磷水解酶
PCR 聚合酶链反应
ppm 百万分率(parts per million)
RT-PCR 逆转录酶聚合酶链反应
SDS-PAGE十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
IXSSC 0.15M NaCL 0.015M 柠檬酸钠、pH 7.0
w/v 重量/体积
w/w 重量/重量
2.用于除去拟除虫菊酯污染的方法和组合物
2.1.组合物
本文中公开的用于除去拟除虫菊酯例如氯菊酯污染的组合物包含有机磷水解酶 (ΟΡΗ)。OPPi，也称为磷酸三酯酶，在本文中显示可降解氯菊酯。如本文中所公开的， 去除污染的酶促方法提供了优于其他去污剂的重大优势。作为催化剂，酶是高效的并且 可在数分钟或甚至数秒内对许多倍于其自身重量的污染物进行解毒。
ΟΡΗ,最初称为对硫磷水解酶，是在许多细菌分离中发现的酶。OPH具有抗多 种有机磷酸盐/酯(OP)化合物包括化学战神经毒剂的活性。许多研究者已研究了 OPPi， 关于结构和功能的信息可见于本领域中(例如、Mulbry等人、J.Bacteriol. (1989) 171 : 6740-6746 ； RausheL Cum Opin.Microbiol. (2002) 5 288-295)。
在一个方面，“有机磷水解酶”、“ΟΡΗ”、“磷酸三酯酶”、“PTE”，如本文中所使用的，是指在例如有机磷酸酯(OP)的水解中，具有作用于有机磷化合物(例如 对氧磷)(包括膦酸和次膦酸的酯)的能力的任何芳二烷基磷酸酶(E.C.3.1.8.1)。
OPH的常用的其他名称包括对氧磷酶、A-酯酶、芳基三磷酸(酯) 酶、有机磷酯酶、酯酶Bi、酯酶E4、对氧磷酯酶、甲基对氧基嘧啶磷酯酶 (pirimiphos-methyloxonesterase) ； OPA酸酐酶、有机磷水解酶、对氧磷水解酶、有机磷 酸酸酐酶。
该酶的基因已被克隆、测序并且在许多原核和真核宿主生物中进行了表 达。OPH酶的2个常见来源是从缺陷假单胞菌(Pseudomonas diminuta) MG和黄杆菌 (Flavobacterium sp.)菌株ATCC 27551分离的相同的opd基因。缺陷假单胞菌MG opd基 因由McDaniel等人((1989) J.Bacteriol.、170 2306-2311 ；以其全文通过引用合并入本 文)分离。McDaniel等人的opd基因(登录号为M20392)在Genebank中注释如下，并且 以其全文通过引用合并入本文LOCUS PSEPTE 1322bp DNA BCT，1996年4月21日， DEFINITION PlasmidpCMSl (来自缺陷假单胞菌)磷酸二酯酶(opd)基因、完全编码序 列.登录号 M20392 NID gl51517 VERSION M20392.1 GI 151517。来自缺陷假单胞菌序 列的氨基酸序列示于SEQ ID NO 1中。
opd基因的开放阅读框架，如由McDaniel等人报导的，包含975个碱基，编码具 有35kDa分子量的325个氨基酸残基的OPH多肽。Mulbry等人(J.Bacteriol. (1989) 171 6740-6746 ；以其全文通过引用合并入本文)也克隆了 opd基因，但该克隆相对于上述opd 基因缺少 4 个氨基端残基 Mer-Ile-Gly-Thr 或 SIGT) (SEQ ID NO 2)。
黄杆菌MTCC 2495的有机磷水解酶的氨基酸序列示于SEQ ID NO 4中。示于 SEQ ID NO 3中的氨基酸序列与SEQ ID NO 4有1个氨基酸的差异，即在末端缺少丝氨酸。
在另外的方面，OPH包含具有SEQ ID No.l的氨基酸序列。在另外的方面， OPH包含具有SEQ ID No.3的氨基酸序列。在另外的方面，OPH包含具有SEQ ID No.4的氨基酸序列。
还确定了 OPH的三维晶体结构，其显示天然酶是每亚基含有2个Zn2+离子的均 二聚体。Co2+置换的酶对具有P-F和P-S键的神经毒剂和底物具有更大的活性(Omburo 等人、J.Biol.Chem. (1992)沈7 13278-13283)。虽然与其他降解化学试剂的酶相比较已 对OPH进行了更多的研究，但其细胞功能和天然底物仍然未知。
在一个方面，提供了与本文中定义的氨基酸序列或与具有本文中定义的特殊性 质的多肽具有一定程度的序列同一性或序列同源性的多肽的用途。在一个方面，提供了 与SEQ ID No.l、SEQ ID No.3或SEQ ID No.4具有一定程度的序列同一性的肽或其同源 物。此处，术语“同源物”意指与受试氨基酸序列或受试核苷酸序列具有序列同一性的 实体。此处，术语“同源性”可等同于“序列同一性”。
同源氨基酸序列和/或核苷酸序列应当提供和/或编码保持OPH酶的功能活性 和/或增强其活性的多肽。
在本说明书中，同源序列包括可与受试序列至少50%，优选至少55%，例如至 少60%，例如至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至 少95%，至少96%，至少97%，至少98%或至少99%同一的氨基酸序列。通常，同源 物将包括与受试氨基酸序列相同的活性位点等。虽然也可在相似性(即具有相似的化学 性质/功能的氨基酸残基)方面考虑同源性，但在本发明的背景中，优选以序列同一性表 述同源性。
在一个实施方案中，OPH酶是具有SEQ IDNo 1、3或4中显示的序列或与其具 有至少50%，优选至少55%，例如至少60%，例如至少65%，至少70%，至少75%， 至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%或至少 99%序列同一性的序列的有机磷水解酶。
可通过眼睛或更常用地借助于可容易获得的序列比较程序来进行序列同一性比 较。此类可商购获得的计算机程序使用复杂的比较算法来比对两个或更多个序列，以最 佳地反映出可能已导致所述两个或更多个序列之间的差异的进化事件。因此，此类算法 使用评分系统进行操作，其中相同或相似氨基酸获得奖赏(评分)，而插入缺口、缺口延 伸和不相似氨基酸的比对获得罚分。比较算法的评分系统包括
i)每一次插入缺口时赋予罚分(缺口罚分，gap penalty score)，
ii)每一次将已有缺口延伸额外位点时，赋予罚分(延伸罚分，extension penalty score),
iii)当比对相同氨基酸时赋予高评分，和
iv)当比对非相同氨基酸时赋予可变的评分。
大多数比对程序允许对缺口罚分作修改。然而，当使用这样的软件进行序列比9较时，优选使用缺省值。
对非相同氨基酸的比对所给予的评分根据评分矩阵(scoring matrix)(也称为替换 矩阵(substitution matrix))赋予。这样的替换矩阵中提供的评分反映了在进化过程中一 个氨基酸被另一个氨基酸置换的可能性各有不同并且取决于被置换的氨基酸的物理/化 学性质这样的事实。例如，极性氨基酸被另一个极性氨基酸所置换的可能性高于被疏水 性氨酸置换的可能性。因此，评分矩阵将为相同的氨基酸赋予最高的评分，为不相同但 相似的氨基酸赋予较低的评分，为不相同不相似的氨基酸赋予甚至更低的评分。最常使 用的评分矩阵是PAM矩阵(Dayhoff等人(1978)、Jones等人(1992))、BLOSUM矩阵 (Henikoff 和 Henikoff (1992))和 Gonnet 矩阵(Gonnet 等人(1992))。
进行这样的比对的合适计算机程序包括但不限于Vector NTI (Invitrogen Corp.)以 及 ClustalV、ClustalW 和 ClustalW2 程序(Higgins DG & Sharp PM (1988)、Higgins 等人 (1992)、Thompson等人(1994)、Larkin等人Q007))。不同比对工具的选择可在www. expasv.org上从ExPASy Proteomics服务器获得。可进行序列比对的软件的另一个实例 是BLAST (基础局部比对检索工具)，其可从目前可在http://www.ncbi.nlm、nih.gov/上 找到的美国国立生物技术信息中心的网页获得，并且最早在Altschul等人(1990)J.Mol. Biol.215 ； 403-410 中进行了描述。
在软件已产生比对后，就可能计算相似性百分比和序列同一性百分比。软件通 常将这作为序列比对的一部分来完成并且产生数值结果。
在一个实施方案中，优选使用ClustalW软件进行序列比对。优选，使用下列用 于配对比对的参数来进行使用ClustalW的比对
权利要求
1.降解拟除虫菊酯的方法，所述方法包括将拟除虫菊酯与含有有机磷水解酶(OPH) 的组合物接触。
2.权利要求1的方法，其中所述拟除虫菊酯存在于样品中，所述方法包括将样品与含 有有机磷水解酶(OPH)的组合物接触。
3.权利要求1至2中任一项的方法，其中拟除虫菊酯被完全降解或至少部分降解。
4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述拟除虫菊酯选自氟丙菊酯、顺式氯氰 菊酯、高效氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、顺式氰戊菊酯、醚菊酯、 甲氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟胺氰菊酯、氟氰胺菊 酯、四溴菊酯、zeta-氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯、乙氰菊酯、eflusilanate、除虫 菊素、苄呋菊酯、Y-氯氟氰菊酯、烯丙菊酯、胺菊酯、右旋苯醚菊酯、生物苄呋菊酯、 苯醚氰菊酯和苯醚菊酯。
5.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述拟除虫菊酯选自烯丙菊酯、胺菊酯、苄 呋菊酯、右旋苯醚菊酯、生物苄呋菊酯和氯菊酯。
6.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述拟除虫菊酯选自氯氰菊酯、氟氯氰菊 酯、溴氰菊酯、苯醚氰菊酯、氰戊菊酯和氟氰胺菊酯。
7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述拟除虫菊酯选自氯菊酯、苄呋菊酯和苯 醚菊酯。
8.权利要求1至7中任一项的方法，其中所述拟除虫菊酯是氯菊酯。
9.权利要求2至8中任一项的方法，其中所述样品具有在大约6.5至大约9.0范围内 的pH。
10.权利要求2至9中任一项的方法，其中pH是大约8.5。
11.权利要求10的方法，其中将样品的pH调整至8.5。
12.权利要求2至11中任一项的方法，其中样品的温度在大约20°C至30°C的范围内。
13.权利要求12的方法，其中样品的温度是大约22°C。
14.权利要求2至13中任一项的方法，其中所述样品是来自制造过程的废水。
15.权利要求14的方法，其中所述制造过程包括使用拟除虫菊酯处理地毯料。
16.降解样品中的拟除虫菊酯的方法，所述方法包括将所述样品与含有表达OPH的微 生物的组合物接触。
17.权利要求16的方法，其中所述微生物是细菌。
18.使拟除虫菊酯失活的方法，所述方法包括将拟除虫菊酯与含有OPH的组合物接触。
19.使拟除虫菊酯的活性降低的方法，所述方法包括将拟除虫菊酯与含有OPH的组合 物接触。
20.使样品中的拟除虫菊酯失活的方法，所述方法包括将所述样品与含有OPH的组合 物接触。
21.使样品中的拟除虫菊酯的活性降低的方法，所述方法包括将所述样品与含有OPH 的组合物接触。
22.权利要求15至21中任一项的方法，其中所述拟除虫菊酯是氯菊酯。
23.降解拟除虫菊酯的组合物，所述组合物包含至少一种分离的酶。
24.权利要求22的组合物，其包含ΟΡΗ。
25.权利要求23至24中任一项的组合物，其中所述拟除虫菊酯是氯菊酯。
26.0ΡΗ用于降解拟除虫菊酯的用途。
27.权利要求26的用途，其中所述拟除虫菊酯是氯菊酯。
全文摘要
本发明提供了用于对拟除虫菊酯例如氯菊酯进行酶促解毒的方法和组合物。所述方法包括将有机磷水解酶OPH的组合物施加到被拟除虫菊酯例如氯菊酯污染的表面或物质上。
文档编号A62D3/02GK102026688SQ200980115334
公开日2011年4月20日 申请日期2009年4月29日 优先权日2008年4月30日
发明者C·克斯塔博利 申请人:丹尼斯科美国公司