胰高血糖素拮抗剂/反向激动剂的制作方法

专利名称：胰高血糖素拮抗剂/反向激动剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及拮抗胰高血糖素肽激素对胰高血糖素受体的作用的活性剂。更具体来说，本发明涉及胰高血糖素拮抗剂或反向激动剂。
背景技术：
胰高血糖素是与胰岛素合作起作用的重要激素类物质，其介导血液中葡萄糖量的内环境稳定性调节。当血糖水平下降时，胰高血糖素主要通过刺激一些细胞(主要是肝细胞)释放葡萄糖来起作用。胰高血糖素的作用与胰岛素的作用相反，胰岛素在血糖水平增加时刺激细胞摄取并贮存葡萄糖。胰高血糖素和胰岛素都是肽类激素。
胰高血糖素是在胰腺的α胰岛细胞中产生的，胰岛素是在β胰岛细胞中产生的。糖尿病是常见的葡萄糖代谢障碍。该疾病的特征是高血糖，并且可分为胰岛素依赖型的1型糖尿病和非胰岛素依赖型的2型糖尿病。1型糖尿病患者表现出高血糖和低胰岛素血，并且对该型疾病的常规治疗是提供胰岛素。然而，在某些1型或2型糖尿病中，绝对或相对高的胰高血糖素水平导致高血糖。在健康的对照动物以及1型或2型糖尿病动物模型中，用选择性和特异性抗体除去循环的胰高血糖素能导致血糖水平下降(Brand等人，Diabetologia 37，985(1994)；Diabetes 43，[suppl 1]，172A(1994)；Am.J.Physio.269，E469-E477(1995)；Diabetes 44[suppl 1]，134A(1995)；Diabetes45，1076(1996))。这些研究表明，抑制胰高血糖素或拮抗胰高血糖素的作用可用作糖尿病常规抗高血糖治疗的辅助治疗。可通过提供拮抗剂或反向激动剂，即抑制或阻止胰高血糖素引起的反应的物质来抑制胰高血糖素的作用。拮抗剂可以是肽类或非肽类物质。
天然胰高血糖素是具有29个氨基酸的肽，其序列如下His-Ser-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-NH2.
胰高血糖素通过结合并激活其受体来实施其作用，其受体是7-跨膜G蛋白偶联受体家族的胰高血糖素-分泌素分支(Jelinek等人，Science 259，1614，(1993))。受体通过激活腺苷酰环化酶第二信使系统来行使功能，并且结果是提高cAMP水平。
几篇出版物公开了起胰高血糖素拮抗剂作用的肽。大概特征确定得最充分的拮抗剂是DesHis1[Glu9]-胰高血糖素酰胺(Unson等人，Peptides 10，1171(1989)；Post等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90，1662(1993))。其他拮抗剂是DesHis1，Phe6[Glu9]-胰高血糖素酰胺(Azizh等人，Bioorganic & Medicinal Chem.Lett.16，1849(1995))和NLeu9，Ala11，16-胰高血糖素酰胺(Unson等人，J.Biol.Chem.269(17)，12548(1994))。
肽激素的肽拮抗剂经常是非常有效的。然而，已知由于被生理酶降解它们通常不是口服有效的，并且体内分布不佳。因此，肽激素的口服有效的非肽类拮抗剂一般是优选的。在非肽类胰高血糖素拮抗剂当中，发现喹喔啉衍生物(2-苯乙烯基-3-[3-(二甲基氨基)丙基甲基氨基]-6，7-二氯喹喔啉将胰高血糖素从大鼠肝脏受体上替换下来(Collins，J.L.等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters2(9)915-918(1992))。WO 94/14426公开了用作胰高血糖素拮抗剂的醌茜素—包含一对连接的9，10-蒽二酮基的一种天然产物及其合成类似物。US专利4,359,474公开了1-苯基吡唑衍生物的胰高血糖素拮抗特性。US专利4,374,130公开了用作胰高血糖素拮抗剂的取代的乙硅烷环己烷(disilacyclohexanes)。WO98/04528(BayerCorporation)公开了用作胰高血糖素拮抗剂的取代的吡啶和联苯。US专利5,776,954(Merck & Co.，Inc.)公开了用作胰高血糖素拮抗剂的取代的吡啶基吡咯，WO98/21957、WO98/22108、WO98/22109和US 5,880,139(Merck & Co.，Inc.)公开了用作胰高血糖素拮抗剂的2，4-二芳基-5-吡啶基咪唑。此外，WO97/16442和US专利5,837,719(Merck & Co.，Inc.)公开了用作胰高血糖素拮抗剂的2，5-取代的芳基吡咯。WO98/24780、WO98/24782、WO99/24404和WO99/32448(Amgen Inc.)公开了具有胰高血糖素拮抗活性的取代的嘧啶酮和吡啶酮化合物以及取代的嘧啶化合物。Madsen等人(J.Med.Chem.1998(41)5151-7)公开了一系列用作竞争性人胰高血糖素受体拮抗剂的2-(苯并咪唑-2-基硫基)-1-(3，4-二羟基苯基)-1-乙酮。
WO99/01423和WO00/39088(Novo Nordisk A/S)公开了用作胰高血糖素拮抗剂/反向激动剂的不同系列的亚烷基酰肼。
这些已知的胰高血糖素拮抗剂与本发明化合物在结构上不同。定义下面是用于描述本发明化合物的术语的详细定义“卤素”是指选自F、Cl、Br和I。
本文所用术语“C1-6-烷基”是指具有1-6个碳原子的饱和直链或支链烃基。代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、正己基、异己基等。
本文所用术语“C2-6-链烯基”是指具有2-6个碳原子和至少一个双键的直链或支链烃基。这样的基团的实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、异丙烯基、1，3-丁二烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、2，4-己二烯基、5-己烯基等。
本文所用术语“C2-6-炔基”是指具有2-6个碳原子和至少一个三键的直链或支链烃基。这样的基团的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基、2，4-己二炔基等。
本文所用术语“C1-6-烷氧基”是指基团-O-C1-6-烷基，其中C1-6-烷基如上所定义。代表性实例是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基、异己氧基等。
本文所用术语“C1-6-链烷酰基”是指基团-C(O)H或-C(O)-C1-5-烷基。代表性实例是甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基等。
本文所用术语“C3-8-环烷基”是指具有3-8个碳原子的饱和碳环基团。代表性实例是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。
本文所用术语“C4-8-环烯基”是指具有4-8个碳原子、含有1或2个双键的非芳族碳环基团。代表性实例是1-环戊烯基、2-环戊烯基、3-环戊烯基、1-环己烯基、2-环己烯基、3-环己烯基、2-环庚烯基、3-环庚烯基、2-环辛烯基、1，4-环辛二烯基等。
本文所用术语“杂环基”代表含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子，并任选含有一个或两个双键的非芳族3-10元环。代表性实例是吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环丙烷基、四氢呋喃基等。
本文所用术语“芳基”包括芳族碳环系，例如苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、茚基、戊搭烯基(pentalenyl)、薁基等。芳基还包括上述碳环系的部分氢化衍生物。这样的部分氢化衍生物的非限制性实例有1，2，3，4-四氢萘基、1，4-二氢萘基等。
本文所用术语“亚芳基”包括二价芳族碳环系，例如亚苯基、亚联苯基、亚萘基、亚蒽基、亚菲基、亚芴基、亚茚基、亚戊搭烯基、亚薁基等。亚芳基还包括上述碳环系的部分氢化衍生物。这样的部分氢化衍生物的非限制性实例有1，2，3，4-四氢亚萘基、1，4-二氢亚萘基等。
本文所用术语“芳氧基”是指基团-O-芳基，其中芳基如上所定义。
本文所用术语“芳酰基”是指基团-C(O)-芳基，其中芳基如上所定义。
本文所用术语“杂芳基”包括含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子的杂芳环系，例如呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、异噁唑基、异噻唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、吡喃基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，2，3-三嗪基、1，2，4-三嗪基、1，3，5-三嗪基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、四唑基、噻二嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、嘌呤基、喹唑啉基、喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、萘啶基(naphthyridinyl)、蝶啶基、咔唑基、氮杂_基、二氮杂_基、吖啶基等。杂芳基还包括上述杂环系的部分氢化衍生物。这样的部分氢化衍生物的非限制性实例有2，3-二氢苯并呋喃基、吡咯啉基、吡唑啉基、二氢吲哚基、噁唑烷基、噁唑啉基、氧杂氮杂_基(oxazepinyl)等。
“芳基-C1-6-烷基”、“杂芳基-C1-6-烷基”、“芳基-C2-6链烯基”等是指被如上所定义的芳基或杂芳基取代的C1-6-烷基或C2-6-链烯基，例如 本文所用术语“任选取代的”是指基团未取代或者被一个或多个特定取代基取代。当所述基团被一个以上取代基取代时，取代基可相同或不同。
一些上述定义的术语可能在结构式中出现一次以上，在出现时，每一术语应当是彼此独立的。
此外，当使用术语“独立地为”和“独立地选自”时，应当理解，所述的基团可相同或不同。发明描述本发明是基于下述意想不到的发现下面公开的通式(I)化合物拮抗胰高血糖素的作用。
这些化合物的有利之处在于，对胰高血糖素受体有选择性，并且对胰高血糖素受体表现出的结合亲和力比对在结构上相关的GIP(胃抑制肽)受体和GLP-1受体的结合亲和力高。
因此，本发明涉及通式(I)化合物 其中R1、R2、R3、R4和R5独立地为氢或C1-6-烷基，A是-C(O)-、-CH(OR6)-或-CHF-，其中R6是氢或C1-6-烷基，Z是亚芳基或衍生自含有1或2个选自氮、氧和硫的5或6元杂芳环的二价基团，其可任选被1或2个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR9、-NR9R10和C1-6-烷基的R7和R8取代，其中R9和R10独立地为氢或C1-6-烷基，X是-(CH2)q-(CR12R13)r-(CH2)s-， 或 其中r是0或1，q和s独立地为0、1、2或3，R11、R12、R13和R14独立地为氢、C1-6-烷基或C3-8环烷基，D是 其中R15、R16、R17和R18独立地为·氢、卤素、-CN，-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-S(O)2CF3，-SCF3，-NO2，-OR21，-NR21R22，-SR21，-NR21S(O)2R22，-S(O)2NR21R22，-S(O)NR21R22，-S(O)R21，-S(O)2R21，-C(O)NR21R22，-OC(O)NR21R22，-NR21C(O)R22，-CH2C(O)NR21R22，-OCH2C(O)NR21R22，-OC(O)R21，-C(O)R21或-C(O)OR21，·C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6炔基，所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22和C1-6-烷基的取代基取代，·C3-8环烷基、C4-8环烯基、杂环基、C3-8环烷基-C1-6-烷基、C3-8-环烷基-C1-6-烷氧基、C3-8环烷氧基、C3-8环烷基-C1-6烷硫基、C3-8-环烷硫基、C3-8环烷基-C2-6链烯基、C3-8-环烷基-C2-6-炔基、C4-8-环烯基-C1-6烷基、C4-8-环烯基-C2-6-链烯基、C4-8-环烯基-C2-6-炔基、杂环基-C1-6烷基、杂环基-C2-6-链烯基、杂环基-C2-6-炔基、芳基、芳氧基、芳氧基羰基、芳酰基、芳基-C1-6-烷氧基、芳基-C1-6-烷基、芳基-C2-6-链烯基、芳基-C2-6-炔基、杂芳基、杂芳基-C1-6-烷基、杂芳基-C2-6-链烯基或杂芳基-C2-6-炔基，其中所述环部分可任选被一个或多个选自卤素、-C(O)OR21、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22和C1-6-烷基的取代基取代，其中R21和R22独立地为氢、C1-6-烷基、芳基-C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R21和R22与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，或者当处于相邻位置时，R16-R18中的两个基团可一起形成桥基团-(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-，其中a是0、1或2，c是1或2，R23、R24、R25和R26独立地为氢、C1-6-烷基或氟，R19和R20独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C3-8-环烷基-C1-6-烷基，E是 或 其中R27和R28独立地为氢、卤素、-CN、-CF3、-OR32、-NR32R33、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C4-8-环烯基或芳基，其中所述芳基可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-NO2、-OR32、-NR32R和C1-6-烷基的取代基取代，其中R32和R33独立地为氢或C1-6-烷基，或者当连接在同一氮原子上时，R32和R33与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，R29、R30和R31独立地为■氢、卤素、-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-SCF3，-OR34，-NR34R35，-SR34，-S(O)R34，-S(O)2R34，-C(O)NR34R35，-OC(O)NR34R35，-NR34C(O)R35，-OCH2C(O)NR34R35，-C(O)R34或-C(O)OR34，■C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6-炔基，所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■C3-8-环烷基、C4-8环烯基、杂环基、C3-8-环烷基-C1-6-烷基、C3-8环烷基-C2-6-链烯基、C3-8-环烷基-C2-6-炔基、C4-8-环烯基-C1-6烷基、C4-8-环烯基-C2-6-链烯基、C4-8-环烯基-C2-6-炔基、杂环基-C1-6-烷基、杂环基-C2-6-链烯基、杂环基-C2-6-炔基、芳基、芳氧基、芳酰基、芳基-C1-6-烷氧基、芳基-C1-6-烷基、芳基-C2-6-链烯基、芳基-C2-6-炔基、杂芳基、杂芳基-C1-6-烷基、杂芳基-C2-6-链烯基或杂芳基-C2-6-炔基，其中所述环部分可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，或者当连接在同一环碳原子或不同的环碳原子上时，R29、R30和R31当中的两个基团可一起形成基团-O-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-O-、-(CH2)t-CR36R37(CH2)l-或-S-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-S-，其中t和l独立地为0、1、2、3、4或5，R36和R37独立地为氢或C1-6-烷基，以及通式(I)化合物的旋光或几何异构体或互变异构形式，包括这些异构体或互变异构形式的混合物，或它们的可药用盐。
另一方面，本发明涉及通式(I’)化合物 其中R1、R2、R3、R4和R5独立地为氢或C1-6-烷基，A是-C(O)-、-CH(OR6)-或-CHF-，其中R6是氢或C1-6-烷基，Z是亚芳基或衍生自含有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子的5或6元杂芳环的二价基团，其可任选被1或2个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR9、-NR9R10和C1-6-烷基的R7和R8取代，其中R9和R10独立地为氢或C1-6-烷基，X是-(CH2)q-(CR12R13)r-(CH2)s- ， 或 其中r是0或1，q和s独立地为0、1、2或3，R11、R12、R13和R14独立地为氢、C1-6-烷基或C3-8环烷基，D是 或 其中R15、R16、R17和R18独立地为·氢、卤素、-CN，-CH2CN，-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-S(O)2CF3，-SCF3，-NO2，-OR21，-NR21R22，-SR21，-NR21S(O)2R22，-S(O)2NR21R22，-S(O)NR21R22，-S(O)R21，-S(O)2R21，-C(O)NR21R22，-OC(O)NR21R22-NR21C(O)R22，-CH2C(O)NR21R22，-OCH2C(O)NR21R22，-CH2OR21，-CH2NR21R22，-OC(O)R21，-C(O)R21或-C(O)OR21，·C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6-炔基，所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22和C1-6-烷基的取代基取代，·C3-8环烷基、C4-8-环烯基、杂环基、C3-8环烷基-C1-6-烷基、C3-8-环烷基-C1-6-烷氧基、C3-8环烷氧基、C3-8-环烷基-C1-6-烷硫基、C3-8-环烷硫基、C3-8-环烷基-C2-6-链烯基、C3-8环烷基-C2-6-炔基、C4-8-环烯基-C1-6-烷基、C4-8-环烯基-C2-6-链烯基、C4-8-环烯基-C2-6-炔基、杂环基-C1-6-烷基、杂环基-C2-6-链烯基、杂环基-C2-6-炔基、芳基、芳氧基、芳氧基羰基、芳酰基、芳基-C1-6-烷氧基、芳基-C1-6-烷基、芳基-C2-6-链烯基、芳基-C2-6-炔基、杂芳基、杂芳基-C1-6-烷基、杂芳基-C2-6-链烯基或杂芳基-C2-6-炔基，其中所述环部分可任选被一个或多个选自卤素、-C(O)OR21、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22和C1-6-烷基的取代基取代，其中R21和R22独立地为氢、C1-6-烷基、芳基-C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R21和R22与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，或者当处于相邻位置时，R15-R18中的两个基团可一起形成桥基团-(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-，其中a是0、1或2，c是1或2，R23、R24、R25和R26独立地为氢、C1-6-烷基或氟，R19和R20独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C3-8-环烷基-C1-6-烷基，E是 或 其中R27和R28独立地为氢、卤素、-CN、-CF3、-OR32、-NR32R33、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C4-8-环烯基或芳基，其中所述芳基可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-NO2、-OR32、-NR32R33和C1-6-烷基的取代基取代，其中R32和R33独立地为氢或C1-6-烷基，或者当连接在同一氮原子上时，R32和R33与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，R29、R30和R31独立地为■氢、卤素、-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-SCF3，-OR34，-NR34R35，-SR34，-S(O)R34，-S(O)2R34，-C(O)NR34R35，-OC(O)NR34R35，-NR34C(O)R35，-OCH2C(O)NR34R35，-C(O)R34或-C(O)OR34，■C1-6-烷基、C2-6链烯基或C2-6-炔基，所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■C3-8-环烷基、C4-8-环烯基、杂环基、C3-8-环烷基-C1-6-烷基、C3-8-环烷基-C2-6-链烯基、C3-8-环烷基-C2-6-炔基、C4-8-环烯基-C1-6-烷基、C4-8-环烯基-C2-6-链烯基、C4-8-环烯基-C2-6-炔基、杂环基-C1-6-烷基、杂环基-C2-6-链烯基、杂环基-C2-6-炔基、芳基、芳氧基、芳酰基、芳基-C1-6-烷氧基、芳基-C1-6-烷基、芳基-C2-6-链烯基、芳基-C2-6-炔基、杂芳基、杂芳基-C1-6-烷基、杂芳基-C2-6-链烯基或杂芳基-C2-6-炔基，其中所述环部分可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，或者当连接在同一环碳原子或不同的环碳原子上时，R29、R30和R31当中的两个基团可一起形成基团-O-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-O-、-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-或-S-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-S-，其中t和l独立地为0、1、2、3、4或5，R36和R37独立地为氢或C1-6-烷基，以及通式(I’)化合物的旋光或几何异构体或互变异构形式，包括这些异构体或互变异构形式的混合物，或它们的可药用盐。
另一方面，本发明涉及通式(I″)化合物 其中R1、R2、R3、R4和R5独立地为氢或C1-6-烷基，A是-C(O)-、-CH(OR6)-或-CHF-，其中R6是氢、C1-6-烷基或卤素，Z是亚芳基或衍生自含有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子的5或6元杂芳环的二价基团，其可任选被1或2个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR9、-NR9R10和C1-6-烷基的R7和R8取代，其中R9和R10独立地为氢或C1-6-烷基，X是-(CH2)q-(CR12R13)r-(CH2)s-， 或 其中r是0或1，q和s独立地为0、1、2或3，R11、R12、R13和R14独立地为氢或C1-6-烷基，D是 或 其中R15、R16、R17和R18独立地为·氢、卤素、-CN，-CH2CN，-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-OS(O)2CF3，-SCF3，-NO2，-OR21，-NR21R22，-SR21，-NR21S(O)2R22，-S(O)2NR21R22，-S(O)NR21R22，-S(O)R21，-S(O)2R21，-OS(O)2R21，-C(O)NR21R22，-OC(O)NR21R22，-NR21C(O)R22，-CH2C(O)NR21R22，-OCH2C(O)NR21R22，-CH2OR21，-CH2NR21R22，-OC(O)R21，-C(O)R21或-C(O)OR21，·C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6-炔基，所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22和C1-6-烷基的取代基取代，·C3-8-环烷基、C4-8-环烯基、杂环基、C3-8-环烷基-C1-6-烷基、C3-8-环烷基-C1-6-烷氧基、C3-8环烷氧基、C3-8环烷基-C1-6-烷硫基、C3-8-环烷硫基、C3-8-环烷基-C2-6-链烯基、C3-8-环烷基-C2-6-炔基、C4-8-环烯基-C1-6-烷基、C4-8-环烯基-C2-6链烯基、C4-8-环烯基-C2-6-炔基、杂环基-C1-6-烷基、杂环基-C2-6-链烯基、杂环基-C2-6-炔基、芳基、芳氧基、芳氧基羰基、芳酰基、芳基-C1-6-烷氧基、芳基-C1-6-烷基、芳基-C2-6-链烯基、芳基-C2-6-炔基、杂芳基、杂芳基-C1-6-烷基、杂芳基-C2-6-链烯基或杂芳基-C2-6-炔基，其中所述环部分可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22和C1-6-烷基的取代基取代，其中R21和R22独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R21和R22与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，或者当处于相邻位置时，R15-R18中的两个基团可一起形成桥基团-(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-，其中a是0、1或2，c是1或2，R23、R24、R25和R26独立地为氢、C1-6-烷基或氟，R19和R20独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C3-8-环烷基-C1-6-烷基，E是 或 其中R27和R28独立地为氢、卤素、-CN、-CF3、-OR32、-NR32R33、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C4-8-环烯基或芳基，其中所述芳基可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-NO2、-OR32、-NR32R33和C1-6-烷基的取代基取代，其中R32和R33独立地为氢或C1-6-烷基，或者当连接在同一氮原子上时，R32和R33与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，R29、R30和R31独立地为■氢、-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-SCF3，-OR34，-NR34R35，-SR34，-S(O)R34，-S(O)2R34，-C(O)NR34R35，-OC(O)NR34R35，-NR34C(O)R35，-OCH2C(O)NR34R35，-C(O)R34或-C(O)OR34，■C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6-炔基，所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■C3-8-环烷基、C4-8-环烯基、杂环基、C3-8环烷基-C1-6-烷基、C3-8-环烷基-C2-6-链烯基、C3-8-环烷基-C2-6-炔基、C4-8-环烯基-C1-6-烷基、C4-8-环烯基-C2-6-链烯基、C4-8-环烯基-C2-6-炔基、杂环基-C1-6-烷基、杂环基-C2-6-链烯基、杂环基-C2-6-炔基、芳基、芳氧基、芳酰基、芳基-C1-6-烷氧基、芳基-C1-6-烷基、芳基-C2-6-链烯基、芳基-C2-6-炔基、杂芳基、杂芳基-C1-6-烷基、杂芳基-C2-6-链烯基或杂芳基-C2-6-炔基，其中所述环部分可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，或者当连接在同一环碳原子或不同的环碳原子上时，R29、R30和R31当中的两个基团可一起形成基团-O-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-O-、-(CH2)t-CR36R37(CH2)l-或-S-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-S-，其中t和l独立地为0、1、2、3、4或5，R36和R37独立地为氢或C1-6-烷基，以及通式(I″)化合物的旋光或几何异构体或互变异构形式，包括这些异构体或互变异构形式的混合物，或它们的可药用盐。
在一个实施方案中，R1、R2、R3、R4和R5是氢。
在一个实施方案中，A是-CHF-。
在另一个实施方案中，A是-CH(OR6)-，其中R6的定义同式(I)中所述，例如是-CH(OH)-。
在一个实施方案中，Z是 其中R7和R8的定义同式(I)中所述，例如是 在一个实施方案中，X是 -(CH2)s-， 或 其中q是0或1，r是0或1，s是0、1或2，且R12和R13独立地为氢或C1-6-烷基。
在另一个实施方案中，X是-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHC(CH3)2-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-C(O)CH2CH2-、-C(O)CH＝CH-、-(CH2)s-、-C(O)-、-C(O)O-或-NHC(O)-，其中s是0或1。
在另一个实施方案中，X是-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-C(O)CH＝CH-、-(CH2)s-、-C(O)-、-C(O)O-或-NHC(O)-，其中s是0或1在另一个实施方案中，X是-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-CH2-、-C(O)-或-NHC(O)-。
在另一个实施方案中，X是-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)CH2-或-C(O)-，例如-C(O)NH-。
在一个实施方案中，D是 或 其中R15、R16、R17、R18、R19和R20的定义同式(I)中所述。
在另一个实施方案中，D是 其中R15、R16和R17的定义同式(I)中所述。
在一个实施方案中，R15、R16和R17独立地为氢、卤素、-CN、-NO2、-CF3、-OCF3-、-SCF3、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、-S-C1-6-烷基、-C(O)OR21、-C(O)R21、-CH2OR21、-C(O)NR21R22、-S(O)R21、-S(O)2R21、-S(O)2CF3、-S(O)2NR21R22、C3-8-环烷基、C3-8-环烷基-C1-6-烷氧基或C3-8-环烷基-C1-6-烷硫基，或芳基、杂芳基或芳氧基，其可任选被-CF3、-OCF3、C1-6-烷基、卤素或-C(O)OR21取代，或者当处于相邻位置时，R15、R16和R17当中的两个基团可一起形成桥基团-(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-，其中R21和R22独立地为氢或C1-6-烷基，且a、c、R23、R24、R25和R26的定义同式(I)中所述。
在另一个实施方案中，R15、R16和R17独立地为氢、卤素、-CN、-CF3、-OCF3或C1-6-烷氧基，或者R15和R16一起形成桥基团-CF2-O-CF2-O-，且R17是氢。
在另一个实施方案中，R15、R16和R17独立地为氢、卤素、-CN、-CF3、-OCF3或C1-6-烷氧基。
在另一个实施方案中，D是 或 其中R15、R16、R19和R20的定义同式(I)中所述。
在另一个实施方案中，D是 其中R15和R16都是氢，且R19是C1-6烷基、C3-8-环烷基或C3-8-环烷基-C1-6-烷基。
在另一个实施方案中，D是 其中R15和R16都是氢，且R19和R20都是C1-6-烷基。
在一个实施方案中，E 或 其中R27、R28、R29、R30和R31的定义同式(I)中所述。
在另一个实施方案中，E是 其中R27和R28的定义同式(I)中所述。
在另一个实施方案中，E是 其中R27和R28的定义同式(I)中所述。
在一个实施方案中，R27和R28独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C4-8-环烯基或苯基，其中所述苯基可任选如式(I)中所述被取代。
在另一个实施方案中，R27和R28独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基。
在另一个实施方案中，R27是氢，且R28是C1-6-烷基或C3-8-环烷基，例如叔丁基、环己基或环己烯基。
在另一个实施方案中，E是 其中R29、R30和R31的定义同式(I)中所述。
在另一个实施方案中，E是 其中R29、R30和R31的定义同式(I)中所述。
在一个实施方案中，R29、R30和R31独立地为■氢、-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-SCF3，-OR34，-NR34R35，-SR34，-S(O)R34，-S(O)2R34，-C(O)NR34R35，-OC(O)NR34R35，-NR34C(O)R35，-OCH2C(O)NR34R35，-C(O)R34或-C(O)OR34，■C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6-炔基，其中所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，其中所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的基团取代，其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
在另一个实施方案中，R29、R30和R31独立地为氢、C1-6-烷氧基、卤素、-CF3、-OCF3或-NR34R35，其中R34和R35的定义同式(I)中所述，或C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，其中所述基团可任选如式(I)中所述被取代。
在另一个实施方案中，R29、R30和R31独立地为氢或C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，其中所述基团可任选如式(I)中所述被取代。
在另一个实施方案中，R29、R30和R31独立地为氢或C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，■所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，■或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
在另一个实施方案中，R29和R31都是氢，且R30不是氢。
在另一个实施方案中，R29和R31都是氢，且R30是C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，■所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■其中R34和R35独立地为氢、C1-6烷基或芳基，■或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
在另一个实施方案中，R29和R31都是氢，且R30是C4-8-环烯基，■所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，■或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
在另一个实施方案中，R29和R31都是氢，且R30是环己烯基，■所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，■或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
在另一个实施方案中，R30被一个C1-6-烷基取代基例如叔丁基或甲基取代。
在另一个实施方案中，R29、R30和R31独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基。
在另一个实施方案中，R29和R31都是氢，且R30是C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，例如叔丁基、环己基或环己烯基。
在一个实施方案中，本发明提供了式(I1)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、X、D和E的定义同式(I)或任一上述实施方案中所述。在一个实施方案中，本发明涉及式(I2)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、D和E的定义同式(I)或任一上述实施方案中所述。
在一个实施方案中，本发明涉及式(I3)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R15、R16、R17、R29、R30、和R31的定义同式(I)或任一上述实施方案中所述。
在式(I1)、(I2)和(I3)的一个实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是氢。
在一个实施方案中，本发明涉及式(I4)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、X、D和E的定义同式(I)或任一上述实施方案中所述。
在一个实施方案中，本发明涉及式(I5)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、D和E的定义同式(I)或任一上述实施方案中所述。
在式(I4)和(I5)的一个实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R7和R8是氢。
本发明化合物可具有一个或多个不对称中心，其任何旋光异构体，不论是分离的、纯的或部分纯化的旋光异构体，还是其外消旋混合物，都包括在本发明范围内。
此外，当分子中存在双键或全不饱和或部分不饱和环系时，可形成几何异构体。任何几何异构体，不论是分离的、纯的或部分纯化的几何异构体，还是其混合物，都包括在本发明范围内。同样，具有其旋转受限制的键的分子也可形成几何异构体。它们也包括在本发明范围内。
此外，某些本发明化合物可以以不同的互变异构形式存在，并且本发明化合物所能够形成的任何互变异构形式都包括在本发明范围内。
本发明还包括本发明化合物的可药用盐。这样的盐包括可药用酸加成盐、可药用金属盐、铵盐和烷基化铵盐。酸加成盐包括无机酸以及有机酸的盐。合适的无机酸的代表性实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、硝酸等。合适的有机酸的代表性实例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、乙醇酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗坏血酸、扑酸(pamoic acid)、二亚甲基水杨酸、乙二磺酸、葡萄糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、EDTA、羟基乙酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。可药用无机酸或有机酸加成盐的其它实例包括在J.Pharm.Sci.1977，66，2中列出的可药用盐，该文献引入本发明以作参考。金属盐的实例包括锂盐、钠盐、钾盐、镁盐等。铵盐和烷基化铵盐的实例包括铵盐、甲基铵盐、二甲基铵盐、三甲基铵盐、乙基铵盐、羟基乙基铵盐、二乙基铵盐、正丁基铵盐、仲丁基铵盐、叔丁基铵盐、四甲基铵盐等。
还作为可药用酸加成盐包括在本发明范围内的是本发明化合物所能够形成的水合物。
此外，可药用盐包括碱性氨基酸盐例如赖氨酸盐、精氨酸盐和鸟氨酸盐。
酸加成盐可作为直接的化合物合成产物获得。或者，可将游离碱溶解在含有适当酸的合适的溶剂中，并通过将溶剂蒸发或者将盐和溶剂分离开来分离出盐。
使用本领域技术人员众所周知的方法，本发明化合物可与标准低分子量溶剂形成溶剂化物。这样的溶剂化物也包括在本发明范围内。
本发明还包括本发明化合物的前药，其给药后通过代谢过程发生化学转化，形成药理活性物质。一般情况下，这样的前药是通式(I)化合物的官能衍生物，其在体内易于转化成所需的式(I)化合物。“前药设计”，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述了选择和制备合适的前药衍生物的常规方法。
本发明还包括本发明化合物的活性代谢物。
本发明化合物能拮抗胰高血糖素的作用，因此可用于治疗和/或预防受益于这样的拮抗作用的病症和疾病。
因此，本发明化合物可用于治疗和/或预防高血糖、IGT(葡萄糖耐量异常)、胰岛素抗性综合征、综合征X、1型糖尿病、2型糖尿病、高脂血症、异常脂血症、高甘油三酯血症、高脂蛋白血症、高胆固醇血症、包括动脉粥样硬化在内的动脉硬化、胰高血糖素瘤、急性胰腺炎、心血管疾病、高血压、心肥大、胃肠道障碍、肥胖症、作为肥胖症后果的糖尿病、糖尿病性异常脂血症。
此外，本发明化合物可用作确定具有胰高血糖素受体缺陷的患者的诊断剂，用作提高胃酸分泌和逆转由于施用胰高血糖素而引起的肠可动性不足的治疗剂。
因此，另一方面，本发明涉及用作药物的本发明化合物。
本发明还涉及药物组合物，其中包含至少一种本发明化合物作为活性组分和一种或多种可药用载体或赋形剂。
药物组合物优选呈单位剂型，其中包含约0.05mg-约1000mg、优选约0.1mg-约500mg、特别优选约0.5mg-约200mg本发明化合物。
此外，本发明还涉及本发明化合物在制备用于治疗和/或预防能受益于胰高血糖素拮抗作用的病症或疾病的药物组合物中的应用。
本发明还涉及治疗和/或预防能受益于胰高血糖素拮抗作用的病症或疾病的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用有效量的本发明化合物。
在优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备治疗和/或预防任何胰高血糖素介导的病症和疾病的药物。
在优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备治疗和/或预防高血糖的药物。
在优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备降低哺乳动物血糖的药物。
在另一优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备治疗和/或预防IGT的药物组合物。
在另一优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备和/或预防2型糖尿病的药物组合物。
在另一优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备延迟或预防从IGT向2型糖尿病转化的进程的药物组合物。
在另一优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备延迟或预防从非胰岛素需要性2型糖尿病向胰岛素需要性2型糖尿病转化的进程的药物组合物。
在另一优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备治疗和/或预防1型糖尿病的药物组合物。这样的治疗和/或预防通常伴随胰岛素治疗。
在另一优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备治疗和/或预防肥胖症的药物组合物。
在另一优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备治疗和/或预防脂质代谢障碍例如异常脂血症的药物组合物。
在另一优选的本发明实施方案中，本发明化合物可用于制备治疗和/或预防食欲调节或能量消耗紊乱的药物组合物。
在本发明的另一方面，本发明化合物与饮食和/或锻炼联合采用。
在本发明的另一方面，本发明化合物与一种或多种其它活性物质以任意合适的比例联合施用。这样的其它活性剂选自抗糖尿病剂、抗高脂血症剂、抗肥胖剂、抗高血压剂、和治疗糖尿病导致的或与糖尿病有关的并发症的活性剂。
合适的抗糖尿病剂包括胰岛素、胰岛素类似物和衍生物，例如在EP 792 290(Novo Nordisk A/S)中公开的那些，例如NεB29-十四烷酰基des(B30)人胰岛素，在EP 214 826和EP 705 275(Novo NordiskA/S)中公开的那些，例如AspB28人胰岛素，在US 5,504,188(EliLilly)中公开的那些，例如LysB28ProB29人胰岛素，在EP 368 187(Aventis)中公开的那些，例如Lantus，所有这些文献都引入本发明以作参考，GLP-1衍生物，例如在WO98/08871(Novo Nordisk A/S)中公开的那些，该文献引入本发明以作参考，以及口服活性的降血糖剂。
口服活性的降血糖剂优选包括咪唑啉类药物、磺酰脲类药物、双胍类药物、美格列奈类药物(meglitinides)、噁二唑烷二酮类药物、噻唑烷二酮类药物、葡萄糖苷酶抑制剂、胰高血糖素拮抗剂、GLP-1激动剂、作用于β-细胞ATP依赖性钾通道的活性剂例如钾通道打开剂，如在WO97/26265、WO99/03861和WO00/37474(Novo Nordisk A/S)中公开的那些，这些文献引入本发明以作参考，或那格列奈(nateglinide)或钾通道阻断剂例如BTS-67582，胰岛素敏化剂、DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制剂、PTP酶抑制剂、涉及刺激糖异生和/或糖原分解的肝脏酶的抑制剂、葡萄糖摄取调节剂、GSK-3(糖原合酶激酶-3)抑制剂，调节脂质代谢的化合物例如抗高脂血症剂和抗脂血症剂，降低食物摄取的化合物，PPAR(过氧化物酶体增殖子激活受体)和RXR(类维生素AX受体)激动剂例如ALRT-268、LG-1268或LG-1069。
在一个本发明实施方案中，将本发明化合物与胰岛素或胰岛素类似物或衍生物例如NεB29-十四烷酰基des(B30)人胰岛素、AspB28人胰岛素、LysB28ProB29人胰岛素、Lantus、或包含一种或多种这些活性剂的混合制剂联合给药。
在另一个本发明实施方案中，将本发明化合物与磺酰脲类药物例如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、格列本脲、优降糖、格列吡嗪或格列齐特联合给药。
在另一个本发明实施方案中，将本发明化合物与双胍类药物例如甲福明联合给药。
在另一个本发明实施方案中，将本发明化合物与美格列奈类药物(meglitinide)例如瑞格列奈或列格列奈联合给药。
在另一个本发明实施方案中，将本发明化合物与噻唑烷二酮类胰岛素敏化剂例如曲格列酮、环格列酮、吡格列酮、rosiglitazone、isaglitazone、达格列酮、恩格列酮、CS-011/CI-1037或T174，或在WO97/41097、WO97/41119、WO97/41120、WO00/41121和WO98/45292(Dr.Reddy’s Research Foundation)中公开的化合物联合给药。
在另一个本发明实施方案中，将本发明化合物与胰岛素敏化剂例如Gl 262570、YM-440、MCC-555、JTT-501、AR-H039242、KRP-297、GW-409544、CRE-16336、AR-H049020、LY510929、MBX-102、CLX-0940、GW-501516或在下列文献中公开的化合物联合给药WO99/19313、WO00/50414、WO00/63191、WO00/63192、WO00/63193(Dr.Reddy’s Research Foundation)和WO00/23425、WO00/23415、WO00/23451、WO00/23445、WO00/23417、WO00/23416、WO00/63153、WO00/63196、WO00/63209、WO00/63190和WO00/63189(Novo Nordisk A/S)。
在另一个本发明实施方案中，将本发明化合物与α-葡萄糖苷酶抑制剂例如伏格列波糖、乙格列酯、米格列醇或阿卡波糖联合给药。
在另一个本发明实施方案中，将本发明化合物与作用于β-细胞ATP依赖性钾通道的活性剂例如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、格列本脲、优降糖、格列吡嗪、格列齐特、BTS67582、瑞格列奈或那格列奈联合给药。
在另一个本发明实施方案中，将本发明化合物与抗高脂血症剂或抗脂血症剂例如考来烯胺、考来替泊、氯贝特、吉非贝齐、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、丙丁酚或右旋甲状腺素联合给药。
在本发明的另一方面，将本发明化合物与一种以上的上述化合物联合给药，例如与下列各组化合物联合给药甲福明和磺酰脲类药物例如格列本脲或优降糖；磺酰脲类药物和阿卡波糖；甲福明和美格列奈例如瑞格列奈；阿卡波糖和甲福明；磺酰脲类药物、甲福明和曲格列酮；磺酰脲类药物、甲福明和吡格列酮；磺酰脲类药物、甲福明和胰岛素敏化剂例如在WO00/63189或WO97/41097中公开的那些；美格列奈例如瑞格列奈、甲福明和曲格列酮；美格列奈例如瑞格列奈、甲福明和吡格列酮；美格列奈例如瑞格列奈、甲福明和胰岛素敏化剂例如在WO00/63189或WO97/41097中公开的那些；胰岛素和磺酰脲类药物；胰岛素和美格列奈例如瑞格列奈；胰岛素和甲福明；胰岛素、甲福明和美格列奈例如瑞格列奈；胰岛素、甲福明和磺酰脲类药物；胰岛素和曲格列酮；胰岛素和吡格列酮；胰岛素和胰岛素敏化剂例如在WO00/63189或WO97/41097中公开的那些；胰岛素和洛伐他汀；胰岛素类似物或衍生物、甲福明和美格列奈例如瑞格列奈；胰岛素类似物或衍生物、甲福明和磺酰脲类药物；胰岛素类似物或衍生物和曲格列酮；胰岛素类似物或衍生物和吡格列酮；胰岛素类似物或衍生物和胰岛素敏化剂例如在WO00/63189或WO97/41097中公开的那些；胰岛素类似物或衍生物和洛伐他汀等。
此外，可将本发明化合物与一种或多种抗肥胖剂或食欲调节剂联合给药。
这样的活性剂可选自CART(可卡因苯丙胺调节的转录)激动剂、NPY(神经肽Y)拮抗剂、MC4(melanocortin 4)激动剂、阿立新拮抗剂、TNF(肿瘤坏死因子)调节剂、CRF(促肾上腺皮质素释放因子)激动剂、CRF BP(促肾上腺皮质素释放因子结合蛋白)拮抗剂、urocortin激动剂，β3肾上腺素能激动剂例如CL-316243、AJ-9677、GW-0604、LY362884、LY377267或AZ-40140，MSH(黑素细胞刺激激素)激动剂、MCH(黑素细胞浓缩激素)拮抗剂、CCK(缩胆囊素)激动剂，血清素再摄取抑制剂例如氟西汀、赛乐特(seroxat)或西酞普兰，血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、5HT(血清素)激动剂、铃蟾肽激动剂、良姜素(galanin)拮抗剂、生长激素、生长激素释放化合物、TRH(促甲状腺素释放激素)激动剂、UCP 2或3(解偶联蛋白2或3)调节剂、leptin激动剂、DA(多巴胺)激动剂(溴隐亭、doprexin)、脂酶/淀粉酶抑制剂、PPAR抑制剂、RXR调节剂或TRβ激动剂。
在一个本发明实施方案中，抗肥胖剂是leptin。
在另一个本发明实施方案中，抗肥胖剂是右旋苯丙胺或苯丙胺。
在另一个本发明实施方案中，抗肥胖剂是芬氟拉明或右芬氟拉明。
在另一个本发明实施方案中，抗肥胖剂是西布曲明。
在另一个本发明实施方案中，抗肥胖剂是奥利司他。
在另一个本发明实施方案中，抗肥胖剂是马吲哚或芬特明。
此外，本发明化合物可以与一种或多种抗高血压剂联合给药。抗高血压剂的实例有β-阻断剂，例如阿普洛尔、阿替洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔和美托洛尔，ACE(血管紧张素转化酶)抑制剂例如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、喹那普利和雷米普利，钙通道阻断剂例如硝苯地平、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地尔硫_和维拉帕米，以及α-阻断剂例如多沙唑嗪、乌拉地尔、哌唑嗪和特拉唑嗪。其它参考可参见RemingtonTheScience and Practice of Pharmacy，19th Edition，Gennaro，Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1995。
应当理解，本发明化合物与饮食和/或锻炼、一种或多种上述化合物以及任选一种或多种其它活性物质的任意合适组合都在本发明范围内。
药物组合物本发明化合物可单独给药，或者与可药用载体或赋形剂联合给药，可以以单剂量或多个剂量给药。本发明药物组合物可用可药用载体或稀释剂以及其它已知的助剂和赋形剂依据常规技术例如在下述文献中公开的技术配制RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，19 Edition，Gennaro，Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1995。
可特定地配制药物组合物以通过任意合适的途径给药，合适的给药途径有例如经口、直肠、经鼻、经肺、局部(包括颊和舌下)、透皮、脑池内、腹膜内、阴道和非胃肠道(包括皮下、肌内、鞘内、静脉内和真皮内)途径，经口途径是优选的。应当理解，优选的给药途径取决于所治疗患者的身体一般状况和年龄、所治疗病症的性质以及所选的活性组分。
经口给药的药物组合物包括固体剂型例如胶囊、片剂、糖锭剂、丸剂、锭剂、粉剂和粒剂。如果适当的话，可给它们提供包衣例如肠溶衣，或者依据本领域众所周知的方法将它们配制以控制活性组分的释放例如持续释放或延迟释放。
经口给药的液体剂型包括溶液、乳剂、悬浮液、糖浆剂和酏剂。
非胃肠道给药的药物组合物包括无菌水性和非水性可注射溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及使用前重新配制成无菌可注射乳液或分散液的无菌粉末。贮药库注射剂也在本发明范围内。
其它合适的给药形式包括栓剂、喷雾剂、膏剂、霜剂、凝胶剂、吸入剂、皮肤贴剂、植入物等。
一般的口服剂量为约0.001-约100mg/kg体重/天，优选为约0.01-约50mg/kg体重/天，更优选为约0.05-约10mg/kg体重/天，每天分成一份或多份剂量例如1-3份剂量给药。确切剂量将取决于给药频率和方式，所治疗患者的性别、年龄、体重和身体一般状况，所治疗病症和任意伴发疾病的性质和严重程度，以及对于本领域技术人员来说显而易见的其它因素。
方便起见，可通过本领域技术人员已知的方法将制剂制成单位剂型。用于每天口服给药一次或多次例如1-3次的典型单位剂型可含有0.05-约1000mg、优选约0.1-约500mg、更优选约0.5mg-约200mg。
对于非胃肠道给药途径例如静脉内、鞘内、肌内和类似给药，所采用的剂量一般是大约口服给药剂量的一半。
本发明化合物一般是作为物质本身或者作为其可药用盐使用。一个实例是具有游离酸的化合物的碱加成盐。当式(I)化合物含有游离酸时，这样的盐是按照常规方法通过用等当量可药用碱处理式(I)游离酸的溶液或悬浮液制得的。代表性实例如上所述。
对于非胃肠道给药，可使用式(I)新化合物在无菌水溶液、水性丙二醇、维生素E水溶液或芝麻油或花生油中的溶液。如果需要的话，可将这样的水溶液适当地缓冲，并首先用足量的盐水或葡萄糖使液体稀释剂等渗。水溶液特别适于静脉内、肌内、皮下和腹膜内给药。所用的无菌水介质都易于通过本领域技术人员已知的标准技术获得。
合适的药物载体包括惰性固体稀释剂或填充剂，无菌水溶液和各种有机溶剂。固体载体的实例有乳糖、石膏粉、蔗糖、环糊精、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸和纤维素的低级烷基醚。液体载体的实例有糖浆、花生油、橄榄油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧乙烯和水。类似地，载体或稀释剂可包括本领域已知的任何缓释材料例如单独使用或者与蜡混合的甘油一硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。把通过将式(I)新化合物和可药用载体混合而形成的药物组合物以适于所公开的给药途径的不同剂型方便地给药。方便起见，可通过本领域技术人员已知的方法将制剂制成单位剂型。
适于经口给药的本发明制剂可制成各含有预定量活性组分，并且可含有合适的赋形剂的离散单位例如胶囊或片剂。此外，口服制剂可以呈粉末或颗粒，在水或非水液体中的溶液或悬浮液，或水包油或油包水乳液的形式。
如果使用固体载体进行经口给药，制剂可以是以粉末或小丸形式置于硬明胶胶囊中的小片，或者其可以呈锭剂或糖锭剂的形式。固体载体的量可以有很大变化，但是其通常为约25mg-约1g。如果使用液体载体，制剂可以呈糖浆、乳液、软明胶胶囊或无菌注射液体例如水或非水液体悬浮液或溶液的形式。
可通过常规制片技术制得的典型片剂可含有核活性化合物(化合物本身或其盐)5.0mg乳糖Ph.Eur. 67.8mg微晶纤维素(Avicel) 31.4mgAmberiite_IRP88* 1.0mg硬脂酸镁Ph.Eur. 适量包衣羟丙基甲基纤维素 大约9mgMywacett 9-40 T** 大约0.9mg*Polacrillin钾NF，片剂崩解剂，Rohm and Haas。**用作膜包衣增塑剂的酰化的甘油一酯。
如果需要的话，本发明药物组合物可含有式(I)化合物和另外的药理活性物质例如上述活性物质。
实施例下述实施例和一般方法提及了在说明书与合成方案中鉴定的中间体化合物和终产物。使用下述实施例来更详细地描述本发明化合物，但是所述的化学反应是依据其制备本发明胰高血糖素拮抗剂的一般适用性公开的。有时反应可能并不能适用于包括在本发明所公开的范围内的所有化合物。本领域技术人员能很容易认识到这样的化合物。在这些情况下，通过作一些本领域技术人员已知的常规改变，即通过适当地饱和干扰性基团、换成其它常规试剂、或对反应条件作一些常规改变，可成功地进行这些反应。或者，本文所公开的其它反应或常规反应可适于制备相应的本发明化合物。在所有制备方法中，所有原料都是已知的，或者可易于由已知的原料制得。除非另有说明，所有温度都是以摄氏度给出，并且当提到产率时，所有份数和百分比都是按重量的，当提到溶剂和稀释剂时，所有份数都是按体积计的。
在下述实施例中表示的某些NMR数据仅是所选的数据。
在实施例和药理方法中，下述术语具有下列含义DCM 二氯甲烷DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO二甲亚砜M.p.熔点TFA 三氟乙酸THF 四氢呋喃EDAC1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐HOBt1-羟基苯并三唑HOAt3-羟基-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶，还称为1-羟基-7-氮杂苯并三唑EGTA乙二醇二(β-氨基乙醚)N，N，N’N’-四乙酸BSA N，O-二(三甲基甲硅烷基)乙酰亚胺酸盐IBMX异丁基甲基黄嘌呤HPLC-MS(方法A)使用下列仪器操作·Sciex API 100 Singles四相质谱仪·Perkin Elmer Series 200 Quard泵·Perkin Elmer Series 200自动取样器·Applied Biosystems 785A UV检测器·Sedex 55蒸发光散射检测器·Valco柱，用通过从泵定时控制的Valco驱动器开关。
使用在Macintosh PowerPC 7200计算机上运行的Sciex Sample控制软件来进行仪器控制和获得数据。
HPLC泵与含有下列组分的4个洗脱剂贮器相连A乙腈B水C0.5％TFA水溶液D0.02 M乙酸铵对样本的要求是它们在可接受的溶剂例如甲醇、乙醇、乙腈、THF、水及其混合物中含有大约500μg/mL预分析的化合物(高浓度的强洗脱溶剂将干扰在低乙腈浓度下进行的色谱)。
分析是通过在柱上注射20μL样本溶液而在室温进行的，用乙腈在0.05％TFA或0.002M乙酸铵中的梯度溶液洗脱柱。根据分析方法使用不同的洗脱条件。
让从柱上流下来的洗脱液流经分流T-连接器，其将大约20μL/分钟经由大约1m.75μ石英玻璃毛细管流到API 100光谱计的API界面上。
余下的1.48mL/分钟流经UV检测器并到达ELS检测器。
在LC分析期间，并行地从质谱仪、UV检测器和ELS检测器上获得检测数据。
用于不同方法的LC条件、检测器设置以及质谱仪设置列在下表中。
HPLC-MS(方法B)使用下列仪器操作·Hewlett Packard series 1100 G1312A Bin Pump·Hewlett Packard series 1100 Column隔室·Hewlett Packard series 1100 G13 15A DAD二极管阵列检测器·Hewlett Packard series 1100 MSD通过HP Chemstation软件控制仪器。
HPLC泵与含有下列组分的2个洗脱剂贮器相连A0.01％TFA水溶液B0.01％TFA在乙腈中的溶液分析是通过将适当体积的样本(优选1μL)注射到柱上而在40℃进行的，用乙腈进行梯度洗脱。
所用的HPLC条件、检测器设置以及质谱仪设置列在下表中。
HPLC-MS(方法C)使用下列仪器操作·Hewlett Packard series 1100 G1312A Bin Pump·Hewlett Packard series 1100 G13 15A DAD二极管阵列检测器·Sciex 300三四相质谱仪·Gilson 215微注射器·Sedex 55蒸发光散射检测器泵和检测器是通过在Macintosh G3计算机上运行的MassChrom1.1.1软件控制的。Gilson Unipoint Version 1.90控制自动注射器。
HPLC泵与含有下列组分的2个洗脱剂贮器相连A0.01％TFA水溶液B0.01％TFA在乙腈中的溶液分析是通过将适当体积的样本(优选1μL)注射到柱上而在室温进行的，用乙腈进行梯度洗脱。
所用的HPLC条件、检测器设置以及质谱仪设置列在下表中。
制备用于下述实施例的构件构件1(RS)-异丝氨酸乙酯盐酸盐将粗无水乙醇(40mL)在冰浴上冷却，滴加亚硫酰氯(4mL)，同时将温度保持在5℃以下。向该冷溶液中加入(RS)-异丝氨酸(2.5g，23.79mmol)，并继续搅拌直至获得均匀溶液。移去冰浴，继续在室温搅拌17小时。将该溶液真空浓缩，获得了4.0g(100％)(RS)-异丝氨酸乙酯盐酸盐，为油状物。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.22(t，3H)，3.00(dm，2H)，4.15(q，2H)，4.40(dd，1H)，6.30(brs，1H)，8.32(brs，2H).13C-NMR(DMSO-d6)δ14.7(q)，42.4(t)，61.7(t)，67.7(d)，171(s).构件2(R)-异丝氨酸乙酯盐酸盐步骤A(R)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基)乙酸向D-(+)-苹果酸(15.0g，0.1119mol)在无水甲苯(150mL)内的悬浮液中加入2，2-二甲氧基丙烷(50mL，0.392mmol)。将该混合物在100℃回流2小时，并真空蒸发。将残余物溶解在乙醚(150mL)中，通过快速柱色谱纯化，使用乙醚作为洗脱剂(200mL)。合并纯的级分，真空蒸发，将残余物在正己烷中搅拌。收集沉淀，用正己烷洗涤并干燥，获得了15.7g(81％)(R)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基)乙酸，为固体。1H-NMR(丙酮-d6)δ1.57(ds，6H)，2.85(m，2H)，4.80(dd，1H)，11.0(brs，1H).13C-NMR(Acetone-d6)δ25.9(q)，26.8(q)，36.2(t)，71.5(d)，111.2(s)，170.7(s)，172.7(s).元素分析C7H10C5的计算值C，48.28％；H，5.79％.实测值C，48.31％；H，6.09％.步骤B(R)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)氨基甲酸苄酯将(R)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基)乙酸(10.0g，57.41mmol)、三乙胺(10mL，68.89mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(14mL，63.15mmol)在无水甲苯(100mL)中的混合物于85℃加热和搅拌。当停止释放出气体后，继续搅拌1小时。加入无水苯甲醇(6.3mL，63.15mmol)，并继续加热17小时。真空蒸发后，将残余物在二氯甲烷、水和盐水之间分配。用二氯甲烷将水相萃取2次，用饱和碳酸氢钠将合并的有机相洗涤2次。将有机相干燥(硫酸镁)、过滤、并真空浓缩后，通过快速柱色谱纯化残余物，使用二氯甲烷洗脱。获得了6.4g(40％)(R)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)氨基甲酸苄酯，为油状物。1H-NMR(丙酮-d6)δ1.56(s，6H)，3.61(m，2H)，4.64(dd，1H)，5.08(dd，2H)，6.51(br s，1H)，7.29-7.38(m，5H).步骤C(R)-3-苄氧基羰基氨基-2-羟基丙酸向(R)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)氨基甲酸苄酯(6.0g，25.08mmol)在乙腈(100mL)内的溶液中加入盐酸(1N，100mL)。将该混合物在40℃搅拌3小时，并真空浓缩至一半初始体积。通过过滤收集固体，并用水洗涤。将粗产物在丙酮(100mL)中搅拌5分钟，并过滤。将甲苯加到澄清且无色的滤液中，真空浓缩直至获得沉淀。通过过滤收集沉淀，干燥，获得了4.45g(87％)(R)-3-苄氧基羰基氨基-2-羟基丙酸。1H-NMR(丙酮-d6)δ3.45(ddd，1H)，3.58(ddd，1H)，4.29(dd，1H)，5.08(s，2H)，6.41(br s，1H)，7.29-7.38(m，5H).13C-NMR(丙酮-d6)δ45.1(t)，66.4(t)，70.4(d)，128.3(d)，128.9(d)，138.0(d)，157.2(s)，173.8(s)；HPLC-MS(方法C)m/z＝262(M+Na+)；Rt＝2.20min.M.p.131-132℃.元素分析C11H13NO5的计算值C，55.23％；H，5.48％；N，5.85％.实测值C，55.35％；H，5.72％；N，5.82％.步骤D(R)-异丝氨酸将(R)-3-苄氧基羰基氨基-2-羟基丙酸(4.4g，18.39mmol)溶解在无水乙醇(150mL)中。在氮气氛下加入披钯活性炭(10％，0.5g)，将该混合物在1个大气压下氢化17小时。过滤出催化剂，并用水洗涤。通过真空蒸发将合并的滤液和洗涤液浓缩至约20mL。通过滴加甲醇(100mL)获得了沉淀。过滤出沉淀，用甲醇洗涤并干燥，获得了1.78g(92％)(R)-异丝氨酸，为固体。1H-NMR(D2O)δ3.07(dd，1H)，3.30(dd，1H)，4.19(dd，1H).13C-NMR(D2O)δ43.0(t)，68.9(d)，177.5(s).M.p.200-201℃.步骤E(R)-异丝氨酸乙酯盐酸盐该化合物是按照类似于上述制备(RS)-异丝氨酸乙酯盐酸盐的方法制得的。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.22(t，3H)，2.88(dd，1H)，3.10(dd，1H)，4.14(q，2H)，4.40(m，1H)，6.32(d，1H)，8.28(br s，2H).13C-NMR(DMSO-d6)13.9(q)，41.4(t)，60.7(t)，66.9(d)，170.9(s).构件3(S)-2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基三氟乙酸铵步骤A(S)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基)乙酸向L-苹果酸(3g，22.4mmol)在甲苯(25mL)内的悬浮液中加入2，2-二甲氧基丙烷(8.5g，81mmol)。将该悬浮液加热回流20分钟。通过真空蒸发除去溶剂，获得了(S)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]-4-基)-乙酸。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.52(6H，d)，2.75(2H，t)，4.78(1H，t).12.52(1H，brs).步骤B(S)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)氨基甲酸苄酯向在甲苯(20mL)内的(S)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基)乙酸(1g，5.7mmol)和三乙胺(0.66 g，6.5mmol)中加入叠氮磷酸二苯酯(phosphorazidic acid diphenyl ester)(1.7g，6.2mmol)。将该溶液加热回流1小时。加入苯甲醇(0.54g，5mmol)，并继续回流6小时。冷却后，将该溶液在乙酸乙酯(2×50mL)与碳酸氢钠水溶液(10％，2×50mL)之间分配。合并有机层，干燥(硫酸钠)，并通过真空蒸发除去溶剂，获得了976 mg(S)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)氨基甲酸苄酯粗产物，为油状物。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.53(6H，d)，3.34(1H，m)，3.50(1H，m)，4.50(1H，d)，4.64(1H，t)，5.03(2H，d)，7.32(5H，m)步骤C(S)-2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基三氟乙酸铵将粗制(S)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)氨基甲酸苄酯(976 mg，3.5mmol)溶解在乙醇(14mL)中，加入钯(10％披钯活性炭，300mg)和1，3-环己二烯(2.8g，35mmol)，将该反应在室温搅拌1小时，并在40℃加热10分钟。过滤后，加入TFA(0.4g，3.5mmol)，并通过蒸发除去溶剂，获得了(S)-2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基三氟乙酸铵，为油状物。1H-NMR(CDCl3)δ1.46(6H，d)，3.40-3.70(2H，m)，4.38(1H，m)，7.25(＞4H，brs)；HPLC-MS(方法B)m/z＝146(M+)；Rt＝0.38min.构件43-氨基-2-氟丙酸甲酯将无水甲醇(5.3mL)在冰浴上冷却至-15℃，滴加亚硫酰氯(2.5mL)，同时将温度保持在5℃以下。向该冷的溶液中加入(RS)-3-氨基-2-氟丙酸(0.27g，2.52mmol)，并继续搅拌直至获得均匀溶液。移去冰浴，并继续在室温搅拌17小时。该溶液真空浓缩，进一步与无水甲醇共蒸发3次。过滤出残余物，用DCM洗涤并干燥，获得了0.13g(33％)3-氨基-2-氟丙酸甲酯盐酸盐，为固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ3.36(m，2H)，3.76(s，3H)，5.51(d，2H)，8.59(brs，3H).构件53-氨基-2(R)-甲氧基丙酸甲酯盐酸盐步骤(A)(R)-2-羟基琥珀酸二甲酯向(250mL)的冰冷溶液中加入乙酰氯(12.5mL)，将该溶液在0℃搅拌1小时。加入(R)-苹果酸(20.0g)，并将该溶液在室温搅拌16小时。通过真空蒸发除去溶剂，以定量产率获得了(R)-2-羟基琥珀酸二甲酯，为油状物。1H-NMR(CDCl3)δ4.52(dd，1H)，3.80(s，3H)，3.71(s，3H)，3.55(bs，1H)，2.88(dd，1H)，2.80(dd，1H)步骤(B)(R)-2-甲氧基琥珀酸二甲酯将上述(R)-2-羟基琥珀酸二甲酯再溶解在甲基碘(100mL)中，加入新制备的氧化银(30.2g)，并将该混合物在室温搅拌24小时。将该反应混合物用乙腈(200mL)稀释，经由硅藻土过滤以除去银盐和过量氢氧化银。将滤液干燥，获得了(R)-2-甲氧基琥珀酸二甲酯，为油状物(23.2g，88％)。1H-NMR(CDCl3)δ4.20(dd，1H)，3.78(s，3H)，3.71(s，3H)，3.48(s，3H)，2.80(dd，2H).步骤(C)(R)-2-甲氧基琥珀酸1-甲酯将上述(R)-2-甲氧基琥珀酸二甲酯悬浮在2N盐酸中，加热回流30分钟，获得了澄清溶液。将溶剂真空蒸发，以定量产率获得了2(R)-甲氧基琥珀酸，为油状物。将该油状物再溶解在乙酸酐(120mL)中，并在110℃加热2小时。通过旋转蒸发除去溶剂，获得了油状物。加入冰冷的甲醇(150mL)，将该混合物在0℃搅拌3小时，然后在室温搅拌16小时。除去溶剂，获得了(R)-2-甲氧基琥珀酸1-甲酯。1H-NMR(CDCl3)δ10.30(bs，1H)，4.19(dd，1H)，3.80(s，3H)，3.50(s，3H)，2.86(dd，1H)，2.78(dd，1H).步骤(D)3-叔丁氧基羰基氨基-2(R)-甲氧基丙酸甲酯不用进一步纯化，将上述(R)-2-甲氧基琥珀酸1-甲酯(5.0g，30.8mmol)溶解在亚硫酰氯(16mL)中，加热回流2小时，通过旋转蒸发除去亚硫酰氯和微量组分，然后与乙腈共蒸发。1H-NMR(CDCl3)δ3.27(dd，1H)，3.48(dd，1H)，3.51(s，3H)，3.80(s，3H)，4.22(dd，1H).
将纯净的酰基氯溶解在甲苯(50mL)中。加入三甲基甲硅烷基叠氮化物(5.0mL，38.2mmol)，并将该混合物在100℃加热过夜。加入叔丁醇(30mL)，继续加热16小时。将该反应混合物冷却，通过过滤除去不溶物。将有机相用水(100mL)、饱和碳酸氢钠溶液(100mL)、10％柠檬酸溶液(100mL)、水(100mL)和饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂。通过柱色谱法纯化残余的油状物，用20％乙酸乙酯/庚烷洗脱。合并纯的级分(用钼酸铵/硫酸铈/硫酸将TLC板染色)，并干燥。最终获得的3-叔丁氧基-羰基氨基-2(R)-甲氧基丙酸甲酯是600mg(9％)。
1H-NMR(CDCl3)δ6.93(t，1H)，3.83(t，1H)，3.64(s，3H)，3.25(s，3H)，3.18(dd，2H)，1.36(s，9H).步骤(E)3-氨基-2(R)-甲氧基丙酸甲酯盐酸盐将3-叔丁氧基羰基氨基-2-甲氧基丙酸甲酯(500mg，2mmol)溶解在10％TFA在DCM内的溶液(20mL)中，将该反应混合物在室温搅拌30分钟。除去溶剂，将残余物与30mL1N氯化氢的乙醚溶液共蒸发2次。产量320mg(88％)。1H-NMR(CDCl3)δ8.25(s，3H)，4.21(dd，1H)，3.71(s，3H)，3.40(s，3H)，3.15(m，1H)，2.98(m，1H).构件6(R)-3-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-2-羟基丙酸((R)-Fmoc-异丝氨酸向(R)-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基)乙酸(5.88g，33.8mmol)中加入甲苯(100mL)、三乙胺(4.7mL，33.8mmol)和二苯氧基磷酰基叠氮化物(8.0mL，37.2mmol)。将该反应混合物加热至100℃，并在氮气氛下于100℃搅拌1.5小时。加入9-芴甲醇(5.1g，26mmol)，并将该反应混合物回流6小时。冷却至室温后，将该混合物转移到分液漏斗中，并用水(2×50mL)洗涤。真空除去溶剂，并与乙腈(100mL)共蒸发。将残余的浅棕色油状物溶解在DCM(20mL)中，在硅胶柱上纯化，用DCM作为洗脱剂。通过蒸发除去DCM，获得了浅黄色油状物，将其再溶解在乙腈(150mL)中，并加入盐酸(1N，75mL)。将该黄色反应混合物在室温搅拌3小时。真空除去溶剂，加入甲苯(100mL)，并将该悬浮液加热回流，冷却至室温。通过过滤分离出(R)-Fmoc-异丝氨酸(3.1g，28％)，为粉末。Mp165-166℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.5(brs，1H)，7.90(m，2H)，7.70(m，2 H)，7.50-7.30(m，4H)，5.45(brs，1H)，4.23(m，3H)，4.05(m，1H)，3.17(m，1H)；HPLC-MS (方法B)m/z＝350(M+Na)；Rt＝3.20min.构件73-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯基胺(3-(tert-Butyldimethylsilanyloxymethyl)-4-trifluoromethoxyphenyl amine)步骤A5-硝基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯在装配有温度计和分液漏斗的三颈圆底烧瓶中，将HNO3(5mL发烟硝酸，100％)在冰浴中冷却。用0.5小时将2-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(5g，22.7mmol)缓慢地加到冷却的硝酸中，同时将温度保持在15℃以下。然后将该反应在60℃搅拌1小时，在室温搅拌2小时。将该反应混合物加到冰水中，分离出油状物。将该油状残余物加到水(50mL)中，用碳酸氢钠水溶液中和，然后用乙酸乙酯(25mL)萃取。再用乙酸乙酯(15mL)将水相萃取一次。将合并的有机相用饱和氯化钠(2×15mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并真空浓缩，获得了5.69g5-硝基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ3.93(3H，s)，7.82(1H，d)，8.58(1H，d)，8.67(1H，s).步骤B5-氨基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯将5-硝基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯(5.69 g，21.5mmol)溶解在99.9％乙醇(80mL)中，加入氯化亚锡(II)二水合物(24.2g，107mmol)。将该悬浮液在75℃搅拌2小时，然后真空浓缩。将残余物加到乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)中，并用4N氢氧化钠(50mL)将pH调节至8。将液体从生成的细沉淀中倾出，用乙酸乙酯洗涤沉淀并倾出，该操作进行2次。将合并的有机相用水∶饱和氯化钠(1∶1)溶液(2×100mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并真空浓缩。通过柱色谱(120g二氧化硅)纯化残余物，用乙酸乙酯∶庚烷(1∶1)洗脱，获得了3.8g5-氨基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ3.82(3H，s)，5.63(2H，s)，6.79(1H，d)，7.07(1H，s)，7.11(1H，d).步骤C(5-氨基-2-三氟甲氧基苯基)甲醇在装配有温度计和分液漏斗的三颈烧瓶中，在氮气氛下将5-氨基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯(3.0g，12.8mmol)溶解在THF(20mL)中。在搅拌下用10分钟滴加冰冷的氢化锂铝(1MTHF溶液，15mL)。继续在室温搅拌1小时，将该反应混合物真空浓缩。将残余物悬浮在DCM(150mL)和水(50mL)中，并经由硅藻土过滤。将滤液在DCM与水之间分配。将合并的有机相用水(2×20mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并真空浓缩，获得了2.47g(5-氨基-2-三氟甲氧基苯基)甲醇。1H-NMR(DMSO-d6)δ3.92(2H，d)，5.18(1H，t)，5.28(2H，s)，6.45(1H，d)，6.91(1H，d).步骤(D)3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯基苯胺将(5-氨基-2-三氟甲氧基苯基)甲醇(1.2g，5.8mmol)溶解在DMF(5mL)中，加入咪唑(0.48g，7.1mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(0.99g，6.6mmol)，并将该混合物搅拌16小时。用乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)萃取该反应混合物。用乙酸乙酯(20mL)将水相再萃取一次。将合并的有机相用水(10mL)、柠檬酸水溶液(10mL，10％)和水(2×10mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩。通过柱色谱法(110g，硅胶)纯化残余物，用乙酸乙酯和庚烷(1∶3)作为洗脱剂，获得了1.2g3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯基苯胺。1H-NMR(DMSO-d6)δ0.82(9H，s)，3.25(6H，s)，4.52(2H，s)，5.23(2H，s)，6.41(1H，d)，6.61(1H，s)，6.86(1H，d).构件84-环己-1-烯基苯胺该化合物是按照类似于J.v.Braun等人，J.Liebigs Ann.Chem.，472(1929)，1-89中描述的方法制得的，即将苯胺(2当量)、环己酮(1当量)在乙醇和37％盐酸中回流4-5天，然后加入乙酸乙酯、水、和氢氧化钠，用85％磷酸中和，相分离，并将有机相蒸馏。向残余物中加入催化量的硫酸，并蒸馏(180℃，5-7毫巴)。再将残余物蒸馏(120℃，3毫巴)，获得了(在残余物中)所需的4-环己-1-烯基苯胺。1HNMR(DMSO-d6)δ1.50-1.60(m，2H)，1.60-1.70(m，2H)，2.10-2.15(m，2H)，2.20-2.30(brds，2H)，5.00(s，2H)，5.90(t，1H)，6.50(d，2H)，7.10(d，2H).构件94-环己基苯胺该化合物是商购获得的(例如得自Lancaster或Avocado)。构件104-环己基环己基胺该化合物的制备描述在文献中，参见H.Booth等人，J.Chem.Soc.(B)，1971，1047-1050。构件114-(2-甲基环己-1-烯基)苯胺和(R，S)-4-(6-甲基环己-1-烯基)苯胺
将2-甲基环己酮(112g，1,0mol)、苯胺(186g，2mol)和乙醇(26mL)的混合物在室温搅拌，用30分钟加入12M盐酸(167mL)。将该深黄色溶液在85℃回流7天。将该溶液冷却，并用乙酸乙酯稀释。将该混合物在冰浴中搅拌，并用27％氢氧化钠溶液碱化(pH＝9)，将温度保持在30℃以下。分离出有机层，用盐水洗涤(3×)，用硫酸镁干燥，浓缩，获得了棕色油状物(131g)。减压除去过量苯胺。加入催化量的12M盐酸(1mL)，将该残余物在高度真空下分馏。收集在145-175℃(0.2mmHg)蒸馏出来的馏份，并进行色谱纯化(硅胶)，用30％乙酸乙酯/甲苯洗脱，获得了4-(2-甲基环己-1-烯基)苯胺和(R，S)-4-(6-甲基环己-1-烯基)苯胺的9∶1混合物(8.7g)。4-(2-甲基环己-1-烯基)苯胺1HNMR(DMSO-d6)δ1,53(s，3H)，1,61(m，4H)，2,00(bs，2H)，2,13(bs，2H)，4,92(s，2H)，6,50(d，2H)，6,79(d，2H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝188(M+)；Rt＝2,96min.(R，S)-4-(6-甲基环己-1-烯基)苯胺1HNMR(DMSO-d6)δ0,88(d，3H)，1,61(m，4H)，2,00(bs，2H)，2,13(bs，2H)，2,74(m，1H)，4,92(s，2H)，5,68(t，1H)，6,50(d，2H)，6,79(d，2H).构件124-(4-叔丁基环己-1-烯基)苯胺 4-(4-叔丁基环己-1-烯基)苯胺是按照类似于制备构件11的方法，使用4-叔丁基环己酮(0.59mol)和苯胺制得的。1H NMR(DMSO-d6)δ0,88(s，9H)，1,21(m，2H)，1,90(m，2H)，2,10-2,50(m，3H)，4,97(s,2H)，5,90(m，1H)，6,50(d，2H)，7,06(d，2H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝230(M+)；Rt＝4,07min.构件13(R，S)-4-(5-甲基环己-1-烯基)苯胺和(R，S)-4-(3-甲基环己-1-烯基)苯胺 将(R，S)-3-甲基环己酮(123mL，1.0mol)、苯胺(182mL，2.0mol)、12M盐酸(167mL，2.0mol)、和乙醇(26mL)的混合物在90℃回流10天。将该溶液冷却，并用乙酸乙酯稀释。用6M氢氧化钠溶液将水层碱化(pH＝10)。分离出有机层，用盐水洗涤(3×)，用硫酸镁干燥，浓缩，获得了棕色油状物。减压除去过量苯胺。加入催化量的12M盐酸(1mL)，将残余物在高度真空下分馏。收集在123-128℃(0.15-0.20mmHg)蒸馏出来的馏份，获得了21.0g油状物。1H-NMR表明存在(R，S)-4-(5-甲基环己-1-烯基)苯胺和(R，S)-4-(3-甲基环己-1-烯基)苯胺的3∶2混合物。(R，S)-4-(5-甲基环己-1-烯基)苯胺1HNMR(DMSO-d6)δ1.00(d，3H)，1.45-1.95(m，3H)，2.10-2.45(m，3H)，5.04(s，2H)，5.86(t，1H)，6.48(d，2H)，7.06(d，2H).(R，S)-4-(3-甲基环己-1-烯基)苯胺1HNMR(DMSO-d6)δ1.00(d，3H)，1.45-1.95(m，3H)，2.10-2.45(m，3H)，5.04(s，2H)，5.75(d，1H)，6.48(d，2H)，7.06(d，2H).用于液相合成通式(Ia)和(Ib)化合物的一般方法(A) 其中R2、R3、R7、R8、A、E和D的定义同式(I)中所述。
由一般方法(A)生成的化合物可经由酯途径或羧酸途径制得。这两条途径的唯一不同在于将苯甲酸作为酯保护起来。将酯脱保护(步骤2a)，获得了等同于羧酸途径的中间体。
实施例1和2中举例说明了依据酯途径的方法，实施例3中举例说明了依据羧酸途径的方法。实施例1(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤14-((4-环己基苯基氨基)甲基)苯甲酸甲酯将4-甲酰基苯甲酸甲酯(6.65g，40.5mmol)溶解在热的甲醇(175mL)中。向该混合物中加入4-环己基苯胺(7.1g，40.5mmol)。向所得悬浮液中加入甲醇(75mL)，并将该混合物加热回流1小时。冷却至0℃以后，将该混合物过滤，将固体用冰冷的甲醇洗涤，并在40℃真空干燥16小时，获得了10.95g4-[(4-环己基苯基亚氨基)-甲基]苯甲酸甲酯。将该化合物(10.93g，34mmol)悬浮在甲醇(200mL)中，加入冰醋酸(27mL)，然后以少量多次的方式加入氰基硼氢化钠(1.9g，30mmol)。将该混合物在室温搅拌1小时，并真空浓缩。将残余物溶解在DCM(200mL)中，用5％碳酸钠水溶液(5×80mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并真空浓缩。向残余物中加入乙酸乙酯(100mL)和正庚烷(200mL)，并真空浓缩至初始体积的一半。过滤出固体，用正庚烷洗涤，在40℃真空干燥16小时，获得了9.52g(87％)4-((4-环己基苯基氨基)甲基)苯甲酸甲酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.2-1.4(5H，m)，1.65(5H，m)，2.30(1H，t)，3.84(3H，s)，4.30(2H，d)，6.18(1H，t)，6.50(2H，d)，6.87(2H，d)，7.49(2H，d)，7.92(2H，d)；HPLC-MS(方法B)m/z＝324(M+1)；Rt=7.18min步骤24-[1-(环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯将5-甲氧基-3-(三氟甲基)苯胺(2.0g，10.5mmol)溶解在乙酸乙酯(10mL)中，加入无水HCl在乙酸乙酯(15mL)中的溶液，并真空除去溶剂。将该固体与甲苯(3×15mL)共蒸发。加入甲苯(75mL)和双光气(13mL)，将该反应混合物在氮气氛下回流2.5小时。真空除去过量双光气，将澄清的油状物与甲苯共蒸发。获得的异氰酸酯不用进一步纯化直接使用。
将上述异氰酸酯溶解在DCM(75mL)中，加入4-((4-环己基苯基氨基)-甲基)苯甲酸甲酯(2.3g，7.1mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过夜，真空除去溶剂，通过硅胶柱色谱纯化残余的油状物，用庚烷与乙酸乙酯(7∶3)的混合物洗脱。获得了3g4-[1-(环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟-甲基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯，为油状物。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.22(宽峰，1H)，1.37(宽峰，4H)，1.7(宽峰，1H)，1.79(宽峰，4H)，3.77(s，3H)，3.83(s，3H)，4.98(s，2H)，6.81(s，1H)，7.18(d，2H)，7.23(d，2H)，7.42(m，3H)，7.51(s，1H)，7.90(d，2H)，8.53(s，1H)，10.01(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝541(M+1)；Rt＝8.98min.步骤2a4-[1-(环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酸将4-[1-(环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯(3.0g)溶解在无水乙醇(50mL)中，加入氢氧化钠(4N，15mL)，将该反应混合物在室温搅拌16小时。真空除去有机溶剂，加入水(50mL)，用盐酸(4N)将pH调节至酸性反应，然后加入乙酸乙酯(200mL)。将有机相用水(5×50mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并真空蒸发。将残余物从乙腈(25mL)中重结晶，获得了4-[1-(环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酸(1.83g)，为晶体。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.22(m，1H)，1.37(m，4H)，1.70(m，1H)，1.79(m，4H)，3.77(s，3H)，4.95(s，2H)，6.81(s，1H)，7.18(d，2H)，7.23(d，2H)，7.40(d，2H)，7.42(s，1H)，7.51(s，1H)，7.89(d，2H)，8.55(s，1H)，12.90(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝527(M+1)；Rt＝8.23min；M.p.148-150℃.元素分析C29H29N2F3O4的计算值C，66.15％；H5.55％；N5.32％.实测值C，66.65％；H5.70％；N5.33％.步骤3(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯将4-[1-(环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酸(420mg，0.8mmol)溶解在DMF(10mL)中，然后加入HOBt(160mg，1.2mmol)和EDAC(230mg，1.2mmol)。将该反应混合物静置30分钟，然后加入溶解在DMF(5mL)中的(R)-异丝氨酸乙酯(260mg，1.2mmol)和二异丙基乙基胺(210mL，1.2mmol)，并将该反应混合物在室温搅拌16小时。加入水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，将有机相用水(5×50mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并真空蒸发。通过硅胶柱色谱纯化残余物，用庚烷与乙酸乙酯的混合物(1∶3)洗脱，获得了510mg(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯，为无定形固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.12(t，3H)，1.22(m，1H)，1.37(m，4H)，1.70(m，1H)，1.79(宽峰，4H)，3.41(m，1H)，3.52(m，1H)，3.77(s，3H)，4.06(q，2H)，4.21(q，1H)，4.95(s，2H)，5.68(d，1H)，6.81(s，1H)，7.18(d，2H)，7.23(d，2H)，7.33(d，2H)，7.42(s，1H)，7.51(s，1H)，7.77(d，2H)，8.47(t，1H)，8.53(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝658(M+1)；Rt＝8.17min.步骤4将(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基-氨基}-2-羟基丙酸乙酯溶解在乙醇(15mL)中，并加入氢氧化钠(2N，2mL)。将该反应混合物在室温搅拌60分钟。然后真空除去乙醇，加入水(50mL)，用4N盐酸将pH调节至酸性反应。过滤并用水(5×5mL)洗涤，真空干燥，获得了460mg本标题化合物，为固体结晶。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.22(m，1H)，1.37(m，4H)，1.70(m，1H)，1.79(宽峰，4H)，3.37(m，1H)，3.51(m，1H)，3.77(s，3H)，4.09(t，1H)，4.95(s，2H)，6.80(s，1H)，7.18(d，2H)，7.23(d，2H)，7.33(d，2H)，7.42(s，1H)，7.51(s，1H)，7.77(d，2H)，8.47(t，1H)，8.53(s，1H)；HPLC-MS(方法A.)m/z＝614(M+1)；Rt＝7.67min.元素分析C32H34N3F3O6(+1.25H2O)C，60.42％；H，5.78％；N，6.61％.实测值C，60.25％；H，5.55％；N，6.50％.实施例2(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤24-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯将4-((4-环己基苯基氨基)甲基)苯甲酸甲酯(2.38g，7.36mmol)溶解在DCM(150mL)中，加入异氰酸3，5-二(三氟甲基)苯基酯(1.36mL，8.10mmol)，并将该混合物在室温搅拌16小时。将该反应混合物周水(3×15mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，获得了4.3g4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.17-1.44(m，5H)，1.66-1.82(m，5H)，3.83(s，3H)，4.98(s，2H，7.20-7.28(m，4H)，7.44(d，2H)，7.62(s，1H)，7.93(d，2H)，8.24(s，2H)，8.94(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝579(M+1)；Rt＝9.50min步骤2a4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸将4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯(4.2g，7.36mmol)悬浮在乙醇(80mL)中，加入氢氧化钠(4N，11mL)，并在室温搅拌16小时。将该反应混合物真空浓缩至干，向残余物中加入水(50mL)，用盐酸(4N，12mL)酸化。用乙酸乙酯将水相萃取2次(75mL和25mL)，并将合并的有机相用水洗涤(3×15mL)，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，获得了4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.32-1.43(m，5H)，1.7(m，1H)，1.75-1.85(5H)，4.98(s，2H)，7.20-7.28(m，4H)，7.4(d，2H)，7.61(d，1H)，7.88(d，2H)，8.25(s，2H)，8.93(s，1H)，12.90(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝565(M+1)；Rt＝8.65min；M.p.148.5-149.5℃.元素分析C29H26F6N2O3的计算值C，61.70％；H，4.64％；N，4.96％.实测值C，61.54％；H，4.71％；N，4.92％.步骤3(R)-3-{4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯将4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸(0.22 g，0.39mmol)溶解在DMF(3mL)中，并加入1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.06g，0.47mmol)和EDAC(0.09g，1.2mmol)。将该混合物搅拌1.5小时，加入在DMF(2mL)中的(R)-异丝氨酸乙酯(0.10g，0.59mmol)和二异丙基乙基胺(0.10mL，0.59mmol)。将该混合物在室温搅拌16小时。将该反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(25mL)萃取。用乙酸乙酯(10mL)萃取水相。将合并的有机相用盐酸(0.2N，3×10mL)和水∶饱和氯化钠(1∶1)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩。通过柱色谱法(35g硅胶)纯化残余物，用乙酸乙酯和正庚烷(6∶4)洗脱，获得了0.27g(R)-3-{4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.14(t，3H)，1.19-1.42(m，5H)，1.67-1.85(m，5H)，3.38-3.48(m，1H)，3.49-3.57(m，1H)，4.08(q，2H)，4.20(m，1H)，4.97(s，2H)，5.67(d，1H)，7.20-7.27(m，4H)，7.36(d，2H)，7.62(s，1H)，7.75(d，2H)，8.24(s，2H)，8.48(t，1H)，8.90(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝680(M+1)；Rt＝8.42min.步骤4将(R)-3-{4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯(0.26g，0.38mmol)溶解在乙醇(96％，15mL)中，加入氢氧化钠(4N，0.57mL，2.3mmol)。在25℃搅拌1小时后，将该混合物真空蒸发，向残余物中加入水(30mL)，并用盐酸(4N，0.62mL)酸化。将水相用乙酸乙酯萃取2次(25mL和10mL)，并将合并的有机相用饱和氯化钠∶水(1∶1)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，获得了0.21g本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.21-1.45(m，5H)，1.66-1.86(m，5H)，3.37-3.44(m，1H)，3.53-3.60(m，1H)，4.18(t，1H)，4.95(s，2H)，7.18-7.27(m，4H)，7.45(d，2H)，7.60(s，1H)，7.78(d，2H)，8.24(s，2H)，8.44(t，1H)，8.90(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝652(M+1)；Rt＝7.93min.实施例3(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤14-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸将4-环己基苯胺(8.0g，53mmol)溶解在甲醇(200mL)中，分批加入4-甲酰基苯甲酸(9.4g，53mmol)在冰醋酸(12mL)中的悬浮液，将所得混合物在回流温度加热1.5小时。冷却至室温后，分批加入氰基硼氢化钠(5.0g，80mmol)在甲醇(100mL)中的混合物，并将所得混合物在室温搅拌16小时。将该混合物过滤，用水充分洗涤，在50℃真空干燥3天，获得了12.8g(78％)4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.1-1.35(5H，m)，1.65-1.75(5H，m)，2.29(1H，m)，4.31(2H，s)，6.15(1H，bs)，6.45(2H，d)，6.89(2H，d)，7.46(2H，d)，7.88(2H，d).步骤24-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸将3-溴苯胺(1.4g，8.1mmol)溶解在乙醚(50mL)中，加入3.5M无水HCl在乙酸乙酯(2.3mL)中的混合物。将该混合物真空浓缩。向残余物中加入甲苯(100mL)并真空浓缩。向残余物中加入甲苯(100mL)和双光气(8.1g，41mmol)，并将所得混合物回流1.5小时。冷却后，将该混合物真空浓缩。将残余物溶解在甲苯(100mL)中并真空浓缩。将残余物溶解在DMF(30mL)中，加入4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸(1.3g，4.1mmol)。将该混合物在室温搅拌16小时。向该混合物中加入乙酸乙酯(150mL)，并用水∶盐水(1∶1)(2×100mL)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，首先用乙酸乙酯∶正庚烷∶三乙胺的混合物(7∶2∶1)洗脱，然后用乙酸乙酯洗脱，最后用甲醇洗脱，获得了1.95g(94％)4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸。1H-NMR(CDCl3)δ1.2-1.4(5H，m)，1.7-1.8(5H，m)，4.94(2H，s)，7.1-7.25(6H，m)，7.30(2H，d)，7.44(1H，d)，7.78(1H，t)，7.83(2H，d)，8.38(1H，s)；HPLC-MS(方法B)m/z＝507(M+1)；R1＝5.52min.步骤3(R)-3-{4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯将4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸(0.20g，0.39mmol)溶解在DMF(2.5mL)中，加入EDAC(0.12g，0.6mmol)和HOBt(0.089mg，0.6mmol)，并将该混合物在室温搅拌10分钟。加入溶解在DMF(2.5mL)中的(R)-异丝氨酸乙酯盐酸盐(0.10g，0.6mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(130μL)，并将所得混合物在室温搅拌16小时。向该混合物中加入乙酸乙酯(70mL)，用水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠将有机相干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，用含有10％乙酸的乙酸乙酯∶正庚烷混合物(1∶2)洗脱。获得了100mg(R)-3-{4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯。HPLC-MS(方法B)m/z＝624(M+1)；Rt＝5.33分钟。步骤4(R)-3-{4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2羟基丙酸将(R)-3-{4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基-丙酸乙酯(100mg)溶解在乙醇(10mL)中，加入1N氢氧化钠(480μL)，并将所得混合物在室温搅拌1小时。加入1N盐酸(480μL)，并将该混合物真空浓缩。将残余物悬浮在水(50mL)中并过滤，获得了38mg本标题化合物。1H-NMR(CDCl3)δ1.2-1.4(5H，m)，1.7-1.85(5H，m).2.45(1H，s)，3.7(2H，m)，4.30(1H，m)，4.78(2H，s)，6.23(1H，s)，6.95-7.3(8H，m)，7.42(1H，s)，7.60(2H，d)；HPLC-MS(方法A)m/z＝595(M+1)；Rt＝7.48min.实施例4(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.2-1.4(5H，m)，1.7-1.8(5H，m)，3.40(1H，m)，3.56(1H，dt)，4.18(1H，t)，4.97(2H，s)，5.5(1H，brd)7.14-7.25，(6H，m)，7.34(2H，d)，7.55(2H，d)，7.79(2H，d)，8.38(1H，s)，8.44(1H，t)；HPLC-MS(方法A)m/z＝600(M+1)；Rt＝7.38min.实施例5(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ1.15-1-45(m，5H)，1.60-1.90(m，5H)，4.95(s，2H)，7.12(d，2H)，7.19(d，2H)，7.24(d，1H)，7.45(t，1H)，7.72(d，2H)，7.75(sbr，1H)，7.90(s，1H)，8.55(s，1H)，8.58(s br，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝584(M+1)；Rt＝4.99min.实施例6(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3-氟-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.15-1-45(m，5H)，1.60-1.85(m，5H)，3.25-3.65(m，3H)，4.13(t，1H)，4.95(s，2H)，7.10-7.22(m，5H)，7.30(d，2H)，7.75(m，3H)，8.45(t，1H)，8.78(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝602(M+1)；Rt＝7.83min.实施例7(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-(3-氰基-5-三氟甲基苯基)-1-(4-环己-1-烯基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.15-1.70(m，4H)，2.12(s，2H)，2.35(s，2H)，5.00(s，2H)，6.15(s，1H)，7.10-7.40(m，6H)，7.78(m，3H)，8.20(d，2H)，8.90(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝607(M+1)；Rt＝7.42min.实施例8(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-(3-氰基-5-三氟甲基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.15-1.45(m，5H)，1.60-1.85(m，5)，3.45-3.60(m，3H)，4.15(t，1H)4.95(s，2H)，7.20(dd，4H)，7.35(d，2H)，7.76(d，2H)，7.88(s，1H)，8.18(s，1H)，8.21(s，1H)，8.45(t，1H)，8.95(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝609(M+1)；Rt＝7.58 min.实施例9(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-(3-溴-5-三氟甲基苯基)-1-(4-环己-1-烯基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.50-1.76(m，4H)，2.15(m，2H)，2.33(m，2H)，3.37(m，2H)，3.54(m，1H)，4.14(dd，1H)，4.95(s，2H)，6.17(t，1H)，7.17(d，2H)，7.33(d，2H)，7.40(d，2H)，7.46(s，1H)，7.75(d，2H)，7.91(s，1H)，8.07(s，1H)，8.44(t，1H)，8.66(s，1H).实施例10(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3-甲氧基-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.51-1.76(m，4H)，2.15(m，2H)，2.34(m，2H)，3.37(m，2H)，3.54(m，1H)，3.75(s，3H)，4.14(dd，1H)，4.95(s，2H)，6.16(t，3H)，6.78(s，1H)，7.16(d，2H)，7.32(d，2H)，7.38(d，2H)，7.43(s，1H)，7.76(d，2H)，8.44(t，1H)，8.51(s，1H).实施例11(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己-1-烯基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸
本标题化合物是按照一般方法(A)，并如下所述改动步骤2制得的步骤24-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己-1-烯基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯向在甲苯(20mL)内的3-溴苯甲酸(1.2g，5.7mmol)中加入三乙胺(0.91mL，6.5mmol)和二苯氧基磷酰基叠氮化物(1.3mL，6.2mmol)，并在搅拌下将该混合物加热至100℃。1小时后，加入4-[(4-环己-1-烯基苯基氨基)甲基]-苯甲酸甲酯(按照类似于实施例1，步骤1的方法制得的)(1.6g，5mmol)，并继续加热1.5小时。冷却至室温后，将该混合物与乙酸乙酯(50mL)转移到分液漏斗中。将有机混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(2×50mL)洗涤，用乙酸乙酯(50mL)回洗。收集有机层，干燥(硫酸钠)，真空除去溶剂，获得了棕色油状物，通过硅胶柱纯化，用DCM洗脱，获得了700mg4-[3-(3-溴苯基)-1-(4-环己-1-烯基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯。HPLC-MS(方法B)m/z＝521(M+1)；Rt＝6.1分钟。本标题化合物的数据1H-NMR(CDCl3)δ1.54(s，2H)，1.65(s，2H)；2.15(s，2H)，2.36(s，2H)，3.56(br s，2H)，4.19(brs，1H)，4.71(s，2H)，6.09(s，1H)，6.42(s，1H)，6.90-7.18(m，6H)，7.30.7.70(m，6H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝592.5(M+1)；Rt＝4.73min.实施例12(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-(3-溴-5-三氟甲基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.14-1.43(m，5H)，1.64-1.83(m，5H)，3.40-3.45(m，1H)，3.45-3.53(m，1H)，4.00(t，1H)，4.95(s，2H)，7.13-7.27(m，4H)，7.33(d，2H)，7.48(s，1H)，7.77(d，2H)，7.92(s，1H)，8.07(s，1H)，8.43(t，1H)，8.71(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝662(M+1)；Rt＝8.17min.实施例13(一般方法(A))(S)-反式-3-{4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤1反式-4-[(4-叔丁基环己基氨基)甲基]苯甲酸甲酯 将4-甲酰基苯甲酸甲酯(10.6g，64.4mmol)溶解在甲醇(200mL)中。加入4-叔丁基环己基胺的17∶83顺式/反式混合物(10.0g，64.4mmol，Aldrich)，立即沉淀出了白色晶体。将该混合物加热回流30分钟以完全形成亚胺，然后在冰浴上冷却至0℃。通过过滤收集纯的反式-4-[(4-叔丁基环己基亚氨基)甲基]苯甲酸甲酯晶体，并真空干燥过夜。产量15.3g(78％)。1HNMR(CDCl3)，300MHzδ8.37(s，1H)；8.06(d，2H)；7.77(d，2H)；3.92(s，3H)；3.17(m，1H)；1.83(m，4H)；1.60(m，2H)，1.09(m，3H)；0.87(s，9H).元素分析C19H27NO2的计算值C，75.71％；H，9.03％；N，4.65％.实测值C，75.60％；H，9.37％；N，4.68％.
将母液干燥，获得了4.2g(22％)白色固体，根据NMR证实其主要由亚氨基顺式异构体组成。1HNMR(CDCl3)，300MHzδ8.36(s，1H)；8.07(d，2H)；7.81(d，2H)；3.92(s，3H)；3.54(m，1H)；1.55-1.92(m，8H)；1.14(m，1H)；0.90(s，9H). 将反式-4-[(4-叔丁基环己基亚氨基)甲基]苯甲酸甲酯(21.0g，69.2mmol)悬浮在甲醇(300mL)中，加入乙酸(50mL)。向所得澄清溶液中加入氰基硼氢化钠(3.5g，55.5mmol)，将该混合物在室温搅拌30分钟。然后通过旋转蒸发将反应混合物的体积减至三分之一，加入乙酸乙酯(500mL)。用碳酸钠溶液(5％，500mL)洗涤有机相，并用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，获得了本标题化合物，为白色固体结晶，其纯度足以进行以后的反应。产量21.1g(100％)。1HNMR(CDCl3)，300MHzδ7.98(d，2H)；7.38(d，2H)；3.90(s，3H)；3.86(s，2H)；2.39(m，1H)；2.01(m，2H)；1.77(m，2H)；1.51(bs，1H)；0.93-1.18(m，5H)；0.82(s，9H)；HPLC-MS(方法BRt＝4.87m/z＝304(M+1).步骤2反式-4-[1-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-3-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酸甲酯将反式-4-[(4-叔丁基环己基氨基)甲基]苯甲酸甲酯(1.0g，3.3mmol)溶解在乙腈(40mL)中，加入异氰酸3，5-二(三氟甲基)苯基酯(0.9g，3.6mmol)，并将该反应混合物在室温搅拌过夜。将溶剂真空浓缩至5-10mL，通过过滤分离出结晶，获得了1.45g(81％)反式-4-[1-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-3-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酸甲酯1H-NMR(DMSO-d8)δ9.08(s，1H)；8.25(s，2H)；7.91(d，2H)；7.60(s，1H)；7.40(d，2H)；4.65(s，2H)；4.07(宽峰，1H)；3.83(s，3H)；1.71(宽峰，4H)；1.42(宽峰，2H)；1.11(宽峰，2H)；0.93(宽峰，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝559(M+1)；Rt＝9.40min；M.p.188-190℃(CH3CN).元素分析C28H32N2F6O3的计算值C，60.21％；H，5.77％；N，5.02％.实测值C，60.46％；H，5.94％；N，5.00％.步骤2a反式-4-[1-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-3-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酸将反式-4-[1-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-3-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酸甲酯(1.4g)悬浮在无水乙醇(20mL)中，加入氢氧化钠(2N，11mL)，并将该反应混合物轻度回流2小时。真空除去乙醇，加入水(40mL)，用盐酸(4N)将pH调节至酸性反应，然后加入乙酸乙酯(200mL)。分离出有机相，用水(4×50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发，获得了1.1g(85％)反式-4-[1-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-3-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酸，为固体。
1H-NMR(DMSO-d6)δ12.85(s，1H)；9.08(s，1H)；8.25(s，2H)；7.89(d，2H)；7.61(s，1H)；7.38(d，2H)；4.65(s，2H)；4.07(m，1H)；1.73(m，4H)；1.43(m，2H)；1.11(m，2H)；0.93(m，1H)；0.82(s，9H)；M.p.239-241℃(MeCN).元素分析C27H30N2F6O3的计算值C，59.55％；H，5.55％；N，5.14％.实测值C，59.58％；H，5.65％；N，5.11％.
在步骤3和4之后获得了本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ0.83(s，9H)，0.90-0.99(m，1H)，1.06-1.15(m，2H)，1.37-1.50(m，2H)，1.64-1.80(m，4H)，3.35-3.43(m，1H)，3.52-3.61(m，1H)，4.01-4.11(m，1H)，4.18(t，1H)，4.63(s，2H)，7.35(d，2H)，7.61(s，1H)，7.81(d，2H)，8.27(s，2H)，8.43(t，1H)，9.07(s，1H)，12.46(宽峰，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝632(M+1)；Rt＝8.00min；M.p.185-187℃.元素分析C30H35F6N3O5的计算值C，57.05％；H，5.59％；N，6.65％.实测值C，57.32％；H，5.70％；N，6.27％.实施例14(一般方法(A))(R)-反式-3-{4-[3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-叔丁基环己基)脲基甲基苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ0.82(s，9H)，0.93(m，1H)，1.11(m，2H)，1.43(m，2H)，1.71(m，4H)，3.38(m，1H)，3.56(m，1H)，4.05(m，1H)，4.16(t，1H)，4.63(s，2H)，7.33(d，2H)，7.61(s，1H)，7.80(d，2H)，8.26(s，2H)，8.43(t，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝632(M+1)；Rt＝8.17min；M.p.184-187℃.元素分析C30H35N3F6O5(+0.5乙酸乙酯)的计算值C，56.88％；H，5.82％；N，6.22％.实测值C，56.63％；H，5.66％；N，6.47％.实施例15(一般方法(A))反式-(R)-3-{4-[3-(3-甲基-5-三氟甲基苯基)-1-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ0.82(s，9H)，0.93(m，1H)，1.11(m，2H)，1.43(m，2H)，1.71(m，4H)，2.33(s，3H)，3.38(m，1H)，3.56(m，1H)，4.05(m，1H)，4.16(t，1H)，4.63(s，2H)，7.10(s，1H)，7.33(d，2H)，7.73(s，1H)，7.80(d，2H)，8.43(t，1H)，8.62(s，1H)；HPLC-MS(方法A)m/z＝578(M+1)；Rt＝7.45min.实施例16(一般方法(A))(RS)-3-{4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤14-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酸将4-甲酰基苯甲酸甲酯(10.6g，64mmol)溶解在甲醇(200mL)中。加入4-叔丁基苯胺(9.61g，64mmol)，并将所得悬浮液回流15分钟。冷却至室温后，加入TFA(5.18mL，68mmol)，然后分批加入氰基硼氢化钠(3.26g，52mmol)。将所得混合物在室温搅拌2小时，并真空浓缩。将残余物在乙酸乙酯(200mL)与1N氢氧化钠水溶液(150和100mL)之间分配。将有机相干燥(硫酸镁)并真空蒸发，获得了19.0g(99％)4-[(4-叔丁基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯，为固体。1H-NMR(CDCl3)δ1.28(9H，s)，3.92(3H，s)，4.39(2H，s)，6.57(2H，d)，7.20(2H，d)，7.44(2H，d)，8.00(2H，d ).步骤2将上述苯甲酸甲酯(0.73g，2.44mmol)溶解在乙腈(7mL)中，加入异氰酸4-三氟甲氧基苯基酯(405μL，2.68mmol)。将所得混合物在室温搅拌3小时，然后回流1.5小时。冷却并真空浓缩后，通过硅胶柱色谱纯化残余物，首先用乙酸乙酯和庚烷的混合物(1∶6)洗脱，然后用乙酸乙酯与庚烷的混合物(1∶3)洗脱，获得了1.14g(94％)4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(4-三氟-甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯，为油状物。1H-NMR(CDCl3)δ1.35(9H，s)，3.91(3H，s)，4.97(2H，s)，6.30(1H，s)，7.1(4H，m)，7.32-7.43(6H，m)，7.96(2H，d).TLCRf＝0.11(SiO2；乙酸乙酯/庚烷(1∶6))；HPLC-MS(方法B)m/z＝501(M+1)；Rt＝9.05min步骤2a将上述脲基甲基苯甲酸甲酯(1.14g，2.28mmol)溶解在1，4-二氧杂环己烷(25 mL)中，并加入1N氢氧化钠水溶液(5mL)。将所得混合物在室温搅拌1小时。加入乙醇(15mL)和1N氢氧化钠水溶液(5mL)，并将所得混合物在室温搅拌16小时。将该混合物真空浓缩，在1N盐酸(100mL)与乙酸乙酯(2×50mL)之间分配。将合并的有机相干燥(硫酸镁)并真空浓缩，获得了847mg(76％)4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酸，为固体。1H-NMR(CDCl3)δ1.33(9H，s)，3.91(3H，s)，4.97(2H，s)，6.30(1H，s)，7.1(4H，m)，7.33(2H，d)，7.43(4H，m)，8.03(2H，d).步骤3(RS)-3-[4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯向[1-(4-叔丁基苯基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酸(1.0g，2.06mmol)在DMF(1mL)和DCM(10mL)内的溶液中加入1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.33g，2.47mmol)。在室温搅拌1小时，然后依次加入EDAC(0.47g，2.47mmol)、(RS)-异丝氨酸乙酯盐酸盐(0.52g，3.09mmol)和二异丙基乙基胺(1.1mL，6.18mmol)。在室温搅拌17小时后，将该反应混合物在水、盐水与乙酸乙酯之间分配。再用乙酸乙酯萃取水相。将合并的有机相用水和盐水洗涤。干燥(硫酸镁)后，并过滤，将有机相真空蒸发。通过硅胶柱色谱纯化残余物，用甲苯和乙酸乙酯的混合物(6∶4)洗脱。获得了1.2g(97％)(RS)-3-4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]-苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯，为油状物。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.12(t，3H)，1.27(s，9H)，3.45(m，2H)，4.05(q，2H)，4.21(dd，1H)，4.98(s，2H)，5.67(d，1H)，7.20(dd，4H)，7.35(dd，4H)，7.55(d，2H)，5.77(d，2H)，8.42(s，1H)，8.48(t，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝602(M+1)；Rt＝3.38min.步骤4将3-4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酰基-氨基}-2-羟基丙酸乙酯在无水乙醇(20mL)中的溶液搅拌，并加入1M氢氧化钠(6mL)。继续搅拌17小时，用盐酸将该溶液酸化。倾出溶剂，通过加热将剩余的油状物溶解在乙腈(20mL)中。在剧烈搅拌下滴加水(20mL)，将该混合物冷却至室温。过滤出沉淀，用水洗涤，干燥，获得了0.51g(43％)本标题化合物，为固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.25(s，9H)，3.50(ddd，2H)，4.18(dd，1H)，4.95(s，2H)，7.20(dd，4H)，7.39(dd，4H)，7.52(d，2H)，7.78(d，2H)，8.32(s，1H)，8.46(t，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝574(M+1)；Rt＝3.07min.元素分析C29H30F3N3O6的计算值C，60.73％；H，5.27％；N，7.33％.实测值C，60.77％；H，5.37；N％，7.26％.实施例17(一般方法(A))(RS)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤3(RS)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基-氨基}-2-羟基丙酸乙酯产量0.33g(89％)。1H-NMR(CDCl3)δ1.30(t，3H)，1.68(m，2H)，1.79(m，2H)，2.23(m，2H)，2.38(m，2H)，3.41(d，1H)，3.83(m，2H)，4.27(q，2H)，4.37(dd，1H)，4.92(s，2H)，6.20(m，1H)，6.27(s，1H)，6.51(t，1H)，6.98(s，1H)，7.04(d，2H)，7.18(d，2H)，7.33(d，2H)，7.42(d，2H)，7.68(d，2H).步骤4(RS)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸将(RS)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]-苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯(0.99g，1.61mmol)在乙醇(15mL)和THF(15mL)中的溶液搅拌，并加入1M氢氧化钠(6mL)。将该混合物在40℃搅拌4小时，并用1N盐酸酸化。真空蒸发后，用半制备性HPLC(Gilson系统)纯化残余物。合并纯的级分，并真空蒸发，获得了0.74g(79％)本标题化合物，为固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.56(m，2H)，1.70(m，2H)，2.17(s，2H)，2.33(s，2H)，3.35(m，2H)，3.55(m，2H)，4.15(dd，1H)，4.95(s，2H)，6.20(s.1H)，7.12(s，1H)，7.18(d，2H)，7.33(d，2H)，7.40(d，2H)，7.62(s，2H)，7.76(d，2H)，8.43(t，1H)，8.55(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝582(M+1)；Rt＝5.13min元素分析C29H30Cl2N3O5的计算值C，61.86％；H，5.02％；N，7.21％.实测值C，61.10％；H，5.05％；N，7.03％.实施例18(S)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 将4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酸(130mg，0.26mmol)溶解在DMF(2mL)中，然后加入EDAC(50mg，0.26mmol)和HOBt(43mg，0.32mmol)，并将该反应混合物在室温搅拌1小时。将上述(S)-2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基三氟乙酸铵粗产物溶解在DMF(1mL)中，并与二异丙基乙基胺(450mg，3.5mmol)一起加到该反应混合物中。将该混合物在室温搅拌16小时。将该反应混合物转移到硅胶柱上，并用DCM洗脱，蒸发后获得了(S)-4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]-N-(2，2-二甲基-5-氧代-[1，3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)苯甲酰胺粗产物，为油状物。将该油状物再溶解在乙腈(5mL)中，加入盐酸(1N，5mL)，并将该混合物在室温搅拌1.5小时。通过蒸发除去溶剂，通过半制备HPLC纯化粗产物(乙腈/水梯度)，获得了本标题化合物。HPLC-MS(方法B)m/z＝582(M+1)；Rt＝5.10分钟。实施例19(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤3(R)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯1H-NMR(丙酮-d6)δ1.20(t，3H)，1.70(dm，4H)，2.31(dm，4H)，3.70(m，2H)，4.15(q，2H)，4.35(dd，1H)，5.02(s，2H)，6.22(m，1H)，7.00(s，1H)，7.0(d，2H)，7.40(dd，4H)，7.61(ds，2H)，7.80(d，3H)，7.89(s，1H).步骤4将(R)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]-苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸乙酯(0.60g，0.98mmol)在乙醇(5mL)和THF(5mL)中的溶液搅拌，并加入4N氢氧化钠(0.76mL，2.94mmol)。将该溶液在室温搅拌3小时，然后用1N盐酸酸化。真空蒸发，获得了油状物，将其在乙酸乙酯、水和盐水之间分配。用乙酸乙酯将水相萃取2次，用水和盐水洗涤合并的有机相。干燥(硫酸镁)，过滤，并真空蒸发，获得了0.43g(73％)本标题化合物，为固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.50-1.80(4H，m)，2.08-2.38(4H，m)，3.36-3.65(2H，m)，4.14-4.24(1H，m)，4.96(2H，m)，6.17(1H，t)，7.14(1H，t)，7.18(2H，d)，7.35(2H，d)，7.42(2H，d)，7.63(2H，d)，7.78(2H，d)，8.48(1H，t)，8.55(1H，s)；HPLC-MS(方法B)m/z＝582(M+1)；Rt＝5.11min.实施例20(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-(3-氯苯基)-1-(4-环己-1-烯基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.56-1.71(m，4H)，2.15-2.33(m，4H)，3.37-3.51(m，2H)，4.14-4.17(m，1H)，4.96(s，1H)，6.17(t，1H)，7.12(dd，1H)，7.27-7.41(m，8H)，7.62(t，1H)，7.87(d，2H)，8.38-8.43(m，3H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝548(M+1)；Rt＝4.69min.实施例21(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-苯基脲基甲基]苯甲酰基氨基-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.56-1.71(m，4H)，2.15-2.40(m，4H)，3.30-3.51(m，2H)，4.14-4.19(m，1H)，4.97(s，1H)，6.16(t，1H)，6.98(t，1H)，7.12-7.48(m，10H)，7.79(d，2H)，8.15(s，1H)，8.43(t，1H).实施例22(一般方法(A))(R)-3-{4-[3-苄基-1-(4-环己-1-烯基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.50-1.75(m，4H)，1.86(s，2H)，2.08(s，2H)，3.30-3.60(m，2H)，4.13-4.20(m，1H)，4.25(d，2H)，4.87(s，2H)，6.18(t，1H)，6.55(t，1H)，7.08-7.42(m，11H)，7.77(d，2H)，8.48(t，1H).实施例23(一般方法(A))(RS)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-氟丙酸 步骤1和24-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酸1H-NMR(DMSO-d6)δ1.52-1.77(m，4H)，2.10-2.23(m，2H)，2.26-2.38(m，2H)，4.95(s，2H)，6.18(t，1H)，7.14(t，1H)，7.17(d，2H)，7.34(d，2H)，7.40(d，2H)，7.64(dd，2H)，7.85(d，2H)，8.55(s，1H).元素分析C27H24N2O3Cl2的计算值C，65.46％；H，4.88％；N，5.65％.实测值C，65.43％；H，5.10％；N，5.66％.步骤3(RS)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-氟丙酸甲酯1H-NMR(DMSO-d6)δ1.52-1.75(m，4H)，2.10-2.40(m，4H)，3.60-3.81(m，5H)，4.95(s，2H)，5.04-5.35(m，1H)，6.18(m，1H)，7.10-7.80(m，11H)，8.55(s，1H)，8.75(t，1H)，13.45(brs，1H).步骤4将(RS)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-氟丙酸甲酯在THF和甲醇的混合物中水解，获得了本标题化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.59-1.72(m，4H)，2.15-2.33(m，4H)，3.58-3.81(m，2H)，4.96(s，2H)，5.17-5.23(m，1H)，6.18(m，1H)，7.13-7.80(m，11H)，8.54(s，1H)，8.73(t，1H)，13.45(brs，1H).实施例24(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤24-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯将4-((4-环己基苯基氨基)甲基)苯甲酸甲酯(0.32g，1mmol)悬浮在乙腈(5mL)中，加入异氰酸4-(三氟甲硫基)苯基酯(0.24g，1.1mmol)。第一天后再加入异氰酸酯(0.05g)，第二天后再加入一部分异氰酸酯(0.05g)。在第三天停止反应，并真空浓缩。通过硅胶(30g)柱色谱纯化残余物，使用乙酸乙酯∶正庚烷(400mL1∶4和100mL1∶1)洗脱，获得了0.53g4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.16-1.43(m，5H)，1.65-1.82(m，5H)，3.84(s，3H)，4.99(s，2H)，8.62(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝543(M+1)；Rt＝9.35min.步骤2a4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酸将4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯(0.53g，0.98mmol)溶解在乙醇(96％，11mL)中，并加入氢氧化钠(4N，1.47mL)。将该混合物搅拌过夜。将该反应浓缩至干，加入水(15mL)，用盐酸(4N，1.6mL)酸化至pH2-3，并用乙酸乙酯(25mL)萃取。将水相再用乙酸乙酯(15mL)萃取一次，将合并的有机相用水(10mL)洗涤3次，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。从乙酸乙酯∶正庚烷中结晶，获得了0.34g4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟-甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酸。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.5-1.42(m，5H)，1.67-1.83(m，5H)，2.45(m，1H)，5.00(s，2H)，7.15-7.25(dd，4H)，7.40(d，2H)，7.54-7.63(dd，4H)，7.88(d，2H)，7.62(s，1H)，12.90(宽峰1H)，HPLC-MS(方法B)m/z＝529(M+1)；Rt＝8.55min；M.p.162.0-164.0℃.元素分析C28H27F3N2O3S的计算值C，63.62％；H，5.15％；N，5.30％.实测值C，63.97％；H，5.28％；N，5.26％.步骤3(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯将4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酸(0.32g，0.606mmol)溶解在DMF(7mL)中，并加入HOAt(0.10g，0.727mmol)和EDAC(0.14g，0.727mmol)。将该混合物搅拌30分钟。然后加入(R)-3-氨基-2-羟基丙酸甲酯盐酸盐(0.14g)和二异丙基乙基胺(0.16mL，0.909mmol)。将该反应搅拌过夜。将该反应混合物与乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)转移到分液漏斗中，并萃取。用乙酸乙酯(15mL)将水相再萃取一次，将合并的有机相用盐酸(0.2N，3×10mL)和饱和氯化钠水溶液(3×10mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。将残余物在柱(硅胶，30g)上纯化，用乙酸乙酯和正庚烷的混合物(200mL，40∶60和450mL1∶1)洗脱，获得了0.33g(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)-脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.16-1.43(m，5H)，1.66-1.81(m，5H)，2.47(m，1H)，3.4(m，1H)，3.51(m，1H)，3.63(s，3H)，4.22(q，1H)，4.97(s，2H)，5.73(d，1H)，7.2(dd，(4H)，7.35(d，2H)，7.60(dd，4H)，7.76(d，2H)，8.50(t，1H)，8.60(s，1H)，HPLC-MS(方法B)m/z＝630(M+1)；Rt＝8.07min.步骤4将(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-三氟甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酰基-氨基}-2-羟基丙酸甲酯(0.32g，0.508mmol)溶解在乙醇(15mL)中，并加入氢氧化钠(4N，0.76mL，3.05mmol)。将该反应混合物搅拌1.5小时。将该反应蒸发，加入水(15mL)，用盐酸(4N，0.8mL)酸化。用乙酸乙酯(20mL)萃取该混合物。将水相用乙酸乙酯(15mL)再萃取一次，用水(3×10mL)洗涤合并的有机相，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，获得了本标题化合物(0.3g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.12-1.42(m，5H)，1.66-1.82(m，5H)，2.45(m，1H)，3.38(m，1H)，3.54(m，1H)，4.17(q，1H)，4.96(s，2H)，5.45(宽峰，1H)，7.20(dd，4H)，7.34(d，2H)，7.60(dd，4H)，7.78(d，2H)，8.45(t，1H)，8.60(s，1H)，12.53(宽峰，1H)，HPLC-MS(方法B)m/z＝616(M+1)；Rt＝7.68min.元素分析C31H32F3N3O5S的计算值C，60.48％；H，5.24％；N，6.83％.实测值C，60.25％；H，5.52％；N，6.53％.实施例25(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己烯-1-基苯基)-3-(3-甲磺酰基-4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 制备在步骤2中使用的异氰酸3-甲基磺酰基-4-三氟甲氧基苯基酯，中间体D-N＝C＝O向甲基碘(59.0g，0.41mol)在DMF(150mL)内的溶液中加入碳酸钾(23.0g，0.16mol)。用30分钟分批加入2-(三氟甲氧基)苯硫酚(16.0g，0.08mol)。将该反应混合物剧烈搅拌过夜。加入水(250mL)。用乙酸乙酯(2×150mL)萃取该反应混合物。将合并的有机相用50％饱和氯化钠水溶液(4×100mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并真空浓缩，获得了15.0g1-甲硫基-2-三氟甲氧基。
将1-甲硫基-2-三氟甲氧基苯(15.0g，72mmol)溶解在DCM(200mL)中，用30分钟以少量多次的方式加入间氯过苯甲酸(39.0g，216mmol)。然后将该反应混合物静置过夜。加入DCM(200mL)，然后缓慢地加入氢氧化钠(2N，200mL)。分离出有机相，用氢氧化钠(2N，3×150mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，获得了15.8g1-甲基磺酰基-2-三氟甲氧基苯。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ8.11(d，1H)，7.71(t，1H)，7.48(m，2H)3.23(s 1H)；M.p.44-46℃.元素分析C8H7F3O3S的计算值C，40.00％；H，2.94％. 实测值C，40.22％；H，2.92％.
将1-甲基磺酰基-2-三氟甲氧基苯(15.7g，65mmol)溶解在浓硫酸(27mL)中，将该溶液加热至40℃。用45分钟滴加硝酸(100％，27mL)。将该反应混合物在60℃静置过夜，冷却，然后倒入碎冰(300mL)上。通过过滤分离沉淀产物，用水(10×50mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，获得了17.5g3-甲基磺酰基-4-三氟甲氧基硝基苯。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.69(d，1H)，8.64(d，1H)，7.95(d，1H)3.45(s3H)；M.p.
102-104℃.元素分析C8H6F3NO5S的计算值C，33.69％；H，2.12％；N，4.91％.实测值C，33.91％；H，2.08％；N，4.92％.
将3-甲基磺酰基-4-三氟甲氧基硝基苯(17.5g)溶解在甲醇(400mL)中，然后加入披钯活性炭(10％，50％水，3.2g)。将该反应混合物在1atm氢气下氢化17小时，过滤并真空浓缩，获得了14.3g3-甲基磺酰基-4-三氟甲氧基苯胺。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.26(d，1H)，7.14(d，1H)，6.85(dd，1H)5.89(s，2H)3.21(s，3H)；M.p.106-109℃.元素分析C8H8F3NO3S的计算值37.65％C，3.16％H，5.49％N.实测值37.65％C，3.14％H，5.45％N.
向溶解在乙酸乙酯(6mL)内的3-甲基磺酰基-4-三氟甲氧基苯胺(2.0mmol，500mg)中加入3N氯化氢在乙酸乙酯中的溶液(5mL)，然后真空浓缩。将残余物用甲苯(3×5mL)处理，每次都真空浓缩。在氮气氛下向残余物中加入甲苯(10mL)和双光气(6mmol，0.73mL)，并将该悬浮液轻度回流2小时。再加入双光气(6mmol，0.73mL)，并继续回流过夜。将该反应混合物真空浓缩，获得了异氰酸3-甲基磺酰基-4-三氟甲氧基苯基酯。步骤3(R)-3-{4-[1-(4-环己烯-1-基苯基)-3-(3-甲磺酰基-4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯该中间体是用一般方法(A)(步骤1、2、2a、和3)制得的。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.60(m，2H)，1.72(m，2H)，2.18(m，2H)，2.36(m，2H)，3.27(s，3H)，3.41(m，1H)，3.51(m，1H)，3.61(s，3H)，4.23q，1H)，4.96(s，2H)，5.70(d，1H)，6.18(m，1H)，7.19(d，2H)，7.33(d，2H)，7.39(d，2H)，7.53(d，1H)，7.75(d，2H)，8.00(d，1H)，8.18(s，1H)，8.50(t，1H)，8.85(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝690(M+1)Rt＝6.92min.步骤4将(R)-3-{4-[1-(4-环己烯-1-基苯基)-3-(3-甲磺酰基-4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯水解，获得了本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.60(m，2H)，1.72(m，2H)，2.18(m，2H)，2.36(m，2H)，3.27(s，3H)，3.41(m，1H)，3.51(m，1H)，4.17(t，1H)，4.96(s，2H)，5.50(宽峰，1H)，6.18(m，1H)，7.19(d，2H)，7.33(d，2H)，7.39(d，2H)，7.53(d，1H)，7.75(d，2H)，8.00(d，1H)，8.18(s，1H)，8.50(t，1H)，8.85(s，1H)，12.55(宽峰，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝676(M+1)；Rt＝6.50min.实施例26(一般方法(A))反式-(R)-3-{4-[-3-(3，5-二(甲基)苯基)-1-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 步骤1和2反式-4-[3-(3，5-二(甲基)苯基)-1-(叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酸甲酯1H-NMR(DMSO-d6)δ0.82(s，9H)，0.93(m，1H)，1.11(m，2H)，1.41(m，2H)，1.71(m，4H)，2.23(s，6H)，3.83(s，3H)，4.09(m，1H)，4.61(s，2H)，6.60(s，1H)，7.08(s，2H)，7.38(d，2H)，7.90(d，2H)，8.20(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝451(M+1)；Rt＝8.93min.步骤2a反式-4-[3-(3，5-二(甲基)苯基)-1-(叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酸该化合物是通过将反式-4-[3-(3，5-二(甲基)苯基)-1-(叔丁基-环己基)脲基甲基]苯甲酸甲酯水解制得的。1H-NMR(DMSO-d6)δ0.82(s，9H)，0.93(m，1H)，1.11(m，2H)，1.41(m，2H)，1.71(m，4H)，2.23(s，6H)，4.09(m，1H)，4.61(s，2H)，6.60(s，1H)，7.08(s，2H)，7.38(d，2H)，7.90(d，2H)，8.20(s，1H)，12.82(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝437(M+1)；Rt＝8.00min.元素分析C27H36N2O3的计算值C，74.28％；H，8.31％；N，6.42％.实测值C，74.31％；H，8.40％；N，6.35％。步骤3反式-(R)-3-{4-[-3-(3，5-二(甲基)苯基)-1-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯该化合物是由反式-4-[3-(3，5-二(甲基)苯基)-1-(叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酸制得的。1H-NMR(DMSO-d6)δ0.82(s，9H)，0.93(m，1H)，1.11(m，2H)，1.43(m，2H)，1.71(m，4H)，2.23(s，6H)，3.42(m，1H)，3.52(m，1H)，3.63(s，3H)，4.05(m，1H)，4.23(q，1H)，4.59(s，2H)，5.70(d，1H)，6.58(s，1H)，7.08(s，2H)，7.30(d，2H)，7.78(d，2H)，8.18(s，1H)，8.47(t，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝538(M+1)；Rt＝7.43min；M.p.159-160℃.元素分析C31H43N3O5的计算值C，69.25％；H，8.06％；N，7.81％.实测值C，69.03％；H，8.15％；N，7.79％.步骤4将反式-(R)-3-{4-[-3-(3，5-二(甲基)苯基)-1-(4-叔丁基环己基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯水解，获得了本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ0.82(s，9H)，0.93(m，1H)，1.11(m，2H)，1.43(m，2H)，1.71(m，4H)，2.23(s，6H)，3.40(m，1H)，3.55(m，1H)，4.05(m，1H)，4.18(t，1H)，4.59(s，2H)，6.58(s，1H)，7.08(s，2H)，7.30(d，2H)，7.78(d，2H)，8.18(s，1H)，8.47(t，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝524(M+1)；Rt＝7.08min.元素分析C30H41N3O5，1.5H2O的计算值C，65.43％；H，8.05％；N，7.63％.实测值C，65.54％；H，7.93％；N，7.44％.实施例27(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(CDCl3)δ7.64(d，2H)，7.49(br s，1H)，7.25-7.15(m，6H)，7.03(d，2H)，6.90 (m，1H)，6.40(s，1H)，4.75(s，2H)，4.30(brs，1H)，3.80-3.60(m，2H)，2.49(m，1H)，1.90-1.65(m，5H)，1.45-1.25(m，5H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝584(M+1)；Rt＝5.28min.实施例28(一般方法(A))(R)-(3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3-氟-5-三氟甲基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.75(s，1H)，8.42(t，1H)，7.75(d，4H)，7.45-7.30(m，4H)，7.20(d，3H)，6.20(s，1H)，4.96(s，2H)，4.15(dd，1H)，3.55(m，1H)，3.40(m，1H)，2.35(brs，2H)，2.15(brs，2H).1.75-1.55(m，4H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝600(M+1)；Rt＝5.01min.实施例29(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3-甲硫基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(DMSO-d6)δ12.2(brs，1H)，8.44(t，1H)，8.20(s，1H)，7.78(m，2H)，7.40(s，1H)，7.33(m，2H)，7.25-7.10(m，6H)，6.84(d，1H)，4.95(s，1H)，4.15(dd，1H)，3.55(m，1H)，3.38(m，1H).2.42(s，3H)1.85-1.65(m，5H)，1.40-1.15(m，5H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝562(M+1)；Rt＝4.77min.实施例30(一般方法(A))(R)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(2，2，4，4-四氟-4H-苯并[1，3]二氧杂环己烯-6-基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 1H-NMR(CDCl3)δ7.70-7.50(m，3H)，7.45-7.30(m，4H)，7.25-6.85(m，6H)，6.12(s，1H)，4.80(s，2H)，4.28(m，1H)，3.70(m，2H)，2.40-2.00(m，4H)，1.70-1.55(m，4H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝644(M+1)；Rt＝5.13min.实施例3 1(一般方法(A))3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2(R)-甲氧基丙酸 步骤3将4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，5-二氯-苯基)脲基甲基]苯甲酸(500mg，1.0mmol)、HOBt(184mg，1.2mmol)和EDAC(232mg；1.2mrol)溶解在DCM(4.0mL)与DMF(1.0mL)的混合物中。将澄清溶液在室温搅拌1小时。加入3-氨基-2(R)-甲氧基丙酸甲酯盐酸盐(257mg，1.5mmol)在DCM(2.0mL)和DMF(0.2mL)中的溶液，然后加入二异丙基乙基胺(515μL)。将该混合物在室温搅拌过夜，然后用DCM(40mL)稀释，并用饱和氯化钠/水的混合物(1∶2)洗涤一次。用无水硫酸钠干燥有机相，并真空干燥。步骤4将该油状物溶解在THF(4.0mL)与甲醇(4.0mL)的混合物中。加入4N氢氧化钠水溶液(625μL，2.5mmol)，并将该混合物在室温搅拌2小时。用1N盐酸将pH调节至3.0，然后除去溶剂。将产物再溶解在乙酸乙酯(20mL)中，并用水(20mL)洗涤。用乙酸乙酯(10mL)回萃取水相，将合并的有机萃取液用氯化钠(2×20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。除去溶剂后，获得了230mg(67％)纯的本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.90(bs，1H)，8.55(s，1H)，8.54(t，1H)，7.76(d，2H)，7.63(s，2H)，7.41(d，2H)，7.34(d，2H)，7.20(d，2H)，7.15(s，1H)，6.18(s，1H)，4.95(s，2H)，3.90(dd，1H)，3.57(m，1H)，3.42(m，1H)，3.29(s，3H)，2.34(m，2H)，2.16(m，2H)，170(m，2H)，1.59(m，2H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝596.2(M+1)；Rt＝5.93min.实施例32(一般方法(A))3-(4-{3-(3，5-二氯苯基)-1-[4-(2-甲基环己-1-烯基)苯基]脲基甲基}苯甲酰基氨基)-2-(R)-羟基丙酸和(R，S)-3-(4-{3-(3，5-二氯苯基)-1-[4-(6-甲基环己-1-烯基)苯基]脲基甲基)苯甲酰基氨基)-2-(R)-羟基丙酸 使用4-(2-甲基环己-1-烯基)苯胺和(R，S)-4-(6-甲基环己-1-烯基)苯胺(构件11)以及(R)-3-氨基-2-羟基丙酸甲酯(构件5)的混合物，依据一般方法(A)获得了本标题化合物。(R，S)-3-(4-{3-(3，5-二氯苯基)-1-[4-(6-甲基环己-1-烯基)苯基]脲基甲基}苯甲酰基氨基)-2(R)-羟基丙酸1H-NMR(DMSO-d6)δ1,55(s，3H)，1,63(bs，4H)，2,03(bs，2H)，2,19(bs，2H)，3,47(dm，2H).4,16(m，1H)，4,96(s，2H)，5,49(bs，1H)，7,15(m，5H)，7,33(d，2H)，7,61(s，2H)，7,78(d，2H)，8,45(t，1H)，8,65(s，1H)，12,53(bs,1H)；M.p.105-107℃；HPLC-MS(方法B)m/z＝596(M+)；Rt＝5,34min.3-(4-{3-(3，5-二氯苯基)-1-[4-(6-甲基环己-1-烯基)苯基]脲基甲基}苯甲酰基-氨基)-2(R)-羟基丙酸1H-NMR(DMSO-d6)δ0,90(ds，3H)，1,63(bs，4H)，2,03(bs，2H)，2,19(bs，2H)，3,47(dm，2H)，4,16(m，1H)，4,96(s，2H)，5,49(bs，1H)，5,93(t，1H)，7,15(m，5H)，7,33(d，2H)，7,61(s，2H)，7,78(d，2H)，8,45(t，1H)，8,62(s，1H)，12,53(bs，1H).实施例33(一般方法(A))3-{4-[1-[4-(4-叔丁基环己-1-烯基)苯基]-3-(3，5-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-(R)-羟基丙酸 使用4-(4-叔丁基环己-1-烯基)苯胺(构件12)和(R)-3-氨基-2-羟基丙酸甲酯(构件5)，依据一般方法(A)获得了本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ 0,88(s，9H)，1,23(m，2H)，1,93(m，2H)，2,27(m，3H)，3,47(dm，2H)，4,16(dd，1H)，4,95(s，2H)，6,19(m，1H)，7,13(m1H)，7,18(d，2H)，7,33(d，2H)，7,39(d,2H)，7,62(s，2H)，7,77(d，2H)，8,44(t，1H)，8,55(s，1H)，12,53(bs，1H)；M.p.151-155℃；HPLC-MS(方法B)m/z＝638(M+)；Rt＝6.04实施例34(一般方法(A))(R，S)-3-(4-(3-(3，5-二氯苯基)-1-(4-(5-甲基环己-1-烯基)苯基)脲基甲基)-苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸和(R，S)-3-(4-(3-(3，5-二氯苯基)-1-(4-(3-甲基环己-1-烯基)苯基)脲基甲基)苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 使用(R，S)-4-(5-甲基环己-1-烯基)苯胺与(R，S)-4-(3-甲基环己-1-烯基)苯胺(构件13)的混合物，依据一般方法(A)获得了本标题化合物的混合物(6∶4)。(R，S)-3-(4-(3-(3，5-二氯苯基)-1-(4-(5-甲基环己-1-烯基)苯基)脲基甲基)-苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸1H-NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ1.02(d，3H)，1.15-1-24(m，1H)，1.61-1.96(m，3H)，2.14-2.44(m，3H)，3.40(t，2H)，3.47-3.62(m，1H)，4.10-4.19(m，1H)，4.95(s，2H)，6.16(t，1H)，7.14(t，1H)，7.17(d，2H)，7.34(d，2H)，7.39(d，2H)，7.61(d，2H)，7.76(d，2H)，8.44(t，1H)，8.56(s，1H)，12.08(sbr，1H).(R，S)-3-(4-(3-(3，5-二氯苯基)-1-(4-(3-甲基环己-1-烯基)苯基)脲基甲基)-苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.02(d，3H)，1.15-1-24(m，1H)，1.61-1.96(m，3H)，2.14-2.44(m，3H)，3.40(t，2H)，3.47-3.62(m，1H)，4.10-4.19(m，1H)，4.95(s，2H)，6.04(d，1H)，7.14(t，1H)，7.17(d，2H)，7.34(d，2H)，7.39(d，2H)，7.61(d，2H)，7.76(d，2H)，8.44(t，1H)，8.53(s，1H)，12.08(sbr， 1H).实施例353-{4-[3-[1(S)-(4-氯苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2(R)-羟基丙酸 4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯将4-甲酰基苯甲酸甲酯(47g，285mmol)溶解在甲醇(400mL)中，在机械搅拌下缓慢地加入4-环己基苯胺(50g，0.285mmol)在甲醇(200mL)中的溶液。再加入甲醇(1L)，将该悬浮液在室温搅拌3天。过滤，洗涤并真空干燥，获得了90.7g(99％)4-[(4-环己基苯基亚氨基)甲基]苯甲酸甲酯。将其溶解在N-甲基吡咯烷酮(855mL)和甲醇(45mL)中。在机械搅拌下分批加入硼氢化钠小丸(42.4g，1.12mol)，将温度保持在40℃以下。然后将该混合物在室温搅拌2小时，在40℃搅拌16小时。将该混合物冷却至5℃，缓慢地加入水(2L)。然后加入丙酮(350mL)，并将该混合物在5℃搅拌1小时。过滤，用水(2×500mL)洗涤，并真空干燥，获得了78g(86％)4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯，为固体。1H-NMR(CDCl3)δ1.2-1.4(5H，m)，1.7-1.85(5H，m)，2.39(1H，m)，3.97(3H，s)，4.04(1H，bs)，4.39(2H，s)，6.55(2H，d)，7.01(2H，d)，7.44(2H，d)，8.00(2H，d).N-氯氨基甲酰基-4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯将4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯(75g，0.23mol)溶解在THF(750mL)中。加入二异丙基乙基胺(56.0mL，0.32mmol)和4-二甲基氨基吡啶(1.0g；8.1mmol)。将该溶液冷却至5℃。以少量多次的方式加入碳酸二(三氯甲基)酯(28.0g，0.093mol)，同时将内部反应温度保持在10℃以下。将该混合物在10℃再搅拌2小时，然后转移到分液漏斗中。加入乙酸乙酯(800mL)和水(1000mL)。混合后，分离出有机层，用无水硫酸钠干燥，并通过真空旋转蒸发浓缩至干。以定量产率获得了产物，为稳定、坚硬的结晶物。1H-NMR(CDCl3)δ7.92(d，2H)；7.40(d，2H)；7.25(d，2H)；7.17(d，2H)；4.98(s，2H)；3.83(s，3H)；2.5(m，1H)；1.65-1.80(m，5H)；1.15-1.40(m，5H).N-氯氨基甲酰基-4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯将4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯(75g，0.23mol)溶解在THF(750mL)中。加入二异丙基乙基胺(56.0mL，0.32mmol)和4-二甲基氨基吡啶(1.0g；8.1mmol)。将该溶液冷却至5℃。以少量多次的方式加入碳酸二(三氯甲基)酯(28.0g，0.093mol)，同时将内部反应温度保持在10℃以下。将该混合物在10℃再搅拌2小时，然后转移到分液漏斗中。加入乙酸乙酯(800mL)和水(1000mL)。混合后，分离出有机层，用无水硫酸钠干燥，并通过真空旋转蒸发浓缩至干。以定量产率获得了产物，为稳定、坚硬的结晶物。1H-NMR(CDCl3)δ7.92(d，2H)，7.40(d，2H)，7.25(d，2H)，7.17(d，2H)，4.98(s，2H)，3.83(s，3H)，2.5(m，1H)，1.65-1.80(m，5H)，1.15-1.40(m，5H).4-[3-[1(S)-(4-氯苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯向装配有机械搅拌器的2L反应烧瓶中加入N-氯氨基甲酰基-4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯(94g，0.244mol)、N-甲基-2-吡咯烷酮(1.0L)和三乙胺(68mL，0.487mol)。向该澄清溶液中滴加(S)-1-(4-氯苯基)乙基胺(38.0g，0.244mol)，将内部反应温度保持在30℃以下。继续搅拌2小时，然后将该反应混合物在水(1.0L)与乙酸乙酯(1.0L)之间分配。充分混合后，分离出有机层，用5％柠檬酸水溶液(500mL)和饱和氯化铵(500mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。除去溶剂，将残余物的油状物从乙腈中蒸发一次。产物的纯度足以进行随后的合成。产量103g(84％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ7.88(d，2H)，7.32(d，2H)，7.30(d，4H)，7.19(d，2H)，7.08(d，2H)，6.28(d，1H)，4.88(dd，2H)，4.76(m，1H)， 3.81(s，3H)，2.44(m，1H)，1.65-1.80(m，5H)，1.15-
1.40(m，5H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝505(M+1)；Rt＝6.17min.4-[3-[1(S)-(4-氯苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸将4-[3-[1(S)-(4-氯苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸甲酯(35.0g，69.3mmol)溶解在乙醇(400mL)中。加入4N氢氧化钠水溶液(100mL)，将该澄清的溶液在室温搅拌3小时。用4N盐酸(100mL)中和该溶液，放置在冰浴上以引起结晶。收集晶体，用水充分洗涤，并真空干燥过夜。产量34.25g(100％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.85(bs，1H)，7.85(d，2H)，7.32(d，2H)，7.30(d，4H)，7.19(d，2H)，7.08(d，2H)，6.27(d，1H)，4.85(m，3H)，2.45(m，1H)，1.65-1.80(m，5H)，1.15-1.40(m，5H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝491(M+1)；Rt＝5.50min.3-{4-[3-[1(S)-(4-氯苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2(R)-羟基丙酸甲酯将4-[3-[1(S)-(4-氯苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酸(200mg，0.4mmol)、HOBt(75mg，0.5mmol)、和EDAC(94mg，0.5mmol)溶解在DMF(200μL)和DCM(2mL)的混合物中。将该澄清溶液在室温搅拌90分钟。加入R-异丝氨酸甲酯盐酸盐(95mg，0.6mmol)在DCM(1.0mL)和DMF(0.4mL)的混合物中的溶液，并将该反应混合物在室温搅拌过夜。将该反应混合物在DCM(20mL)与水(20mL)之间分配。分离出有机相，并用盐水和水(1∶2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，并蒸发至干。然后将残余物从乙腈中蒸发，以定量产率获得了本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.48(t，1H)，7.73(d，2H)，7.34(d，2H)，7.30(d，2H)，7.24(d，2H)，7.18(d，2H)，7.08(d，2H)，6.27(d，1H)，5.70(d，1H)，4.34(m，1H)，4.32(d，2H)，4.22(q，1H)，3.62(s，3H)，3.52(m，1H)，3.40(m，1H)，1.65-1.80(m，5H).1.10-1.40(m，9H).3-{4-[3-[1(S)-(4-氯苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2(R)-羟基丙酸将3-{4-[3-[1(S)-(4-氯苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2(R)-羟基丙酸甲酯(280mg，0.473mmol)溶解在THF(2.5mL)和甲醇(2.5mL)的混合物中，并加入4N氢氧化钠水溶液(0.355mL)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。通过加入1N盐酸将pH调节至3.0。通过真空旋转蒸发除去溶剂，将残余物再溶解在乙酸乙酯(10mL)中。将有机相用水洗涤2次，用盐水洗涤一次，然后真空浓缩至于，获得了本标题化合物，为粉末。产量168mg(89％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ8.46(t，1H)，7.75(d，2H)，7.35(d，2H)，7.31(d，2H)，7.25(d，2H)，7.19(d，2H)，7.08(d，2H)，6.28(d，2H)，4.85(m，1H)，4.80(d，2H)，4.15(m，1H)，3.55(m，1H)，3.40(m，1H)，1.65-1.80(m，5H)，1.10-1.40(m，9H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝579(M+1)；Rt＝5.27min.实施例363-{4-[3-联苯-2-基甲基-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2(R)-羟基丙酸 该化合物是这样制得的按照类似于实施例35的方法，将N-氯氨基甲酰基-4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酸甲酯和联苯-2-基甲基胺反应，然后将该苯甲酸甲酯水解，与(R)-异丝氨酸乙酯盐酸盐偶联。水解，获得了本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.6(s，1H)，8.45(t，1H)，7.78(d，2H)，7.45-7.20(m，14H)，7.05(d，2H)，6.10(t，1H)，5.50(bs，1H)，4.85(s，2H)，4.2(m，3H)，3.55(m，1H)，2.45(m，1H)，1.85-1.70(m，5H)，1.40-1.20(m，6H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝606(M+1)；Rt＝5.08min.
用于液相合成通式(Ia)和(Ib)化合物的一般方法(B) 其中R2、R3、R7、R8、A、E和D的定义同式(I)中所述。
当A是-CHOH-时，使用1)BSA和2)D-N＝C＝O进行步骤6。否则仅使用D-N＝C＝O进行步骤6。
在下述实施例中进一步举例说明该方法。实施例37(一般方法(B))(R)-3-{4-[3-(4-氰基-3-三氟甲基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤1是用与一般方法(A)相同的方法进行的。步骤24-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酸甲酯将4-((4-环己基苯基氨基)甲基)苯甲酸甲酯(2.0g，6.18mmol)悬浮在氢氧化钠(1N，6.18mL)中，滴加二碳酸二叔丁酯(1.67g，7.42mmol)在THF(10mL)中的溶液。将该反应混合物搅拌过夜，真空浓缩，获得了固体残余物，将其再溶解在乙醚(50mL)中，用水洗涤(25mL)，加入氢氧化钠(1.3mL，1N)。用乙醚(25mL)在pH11-12再次萃取水相。将合并的有机相用硫酸氢钠(30mL，10％)和水(3×20mL)洗涤，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。从乙酸乙酯和正庚烷中结晶，获得了1.98g4-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.13-1.44(m，14H)，1.63-1.81(m，5H)，2.46(m，1H)，3.83(s，3H)，4.88(s，2H)，7.12(m，4H)，7.48(d，2H)，7.92(d，2H)；HPLC-MS(方法 B)m/z＝424(M+1)；Rt＝9.10min；M.p.99.5-101.0℃.元素分析C26H33NO4的计算值C，73.73％；H，7.85％；N，3.3 1％.实测值C，73.30％；H，8.07％；N，3.26％.步骤34-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酸将4-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酸甲酯悬浮在乙醇(30mL)中，并加入氢氧化钠(4N，8.1mL)。将该反应混合物搅拌过夜。将该混合物浓缩至干，悬浮在水(100mL)中，用盐酸(8.5mL，4N)酸化，并用乙酸乙酯(100mL)萃取。用乙酸乙酯(30mL)将水相再萃取一次，将合并的有机相用水(3×50mL)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物从乙酸乙酯与正庚烷的混合物中结晶，获得了1.75g4-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酸。1H-NMR(CDCl3-d6)δ1.18-1.42(m，14H)，1.68-1.87(m，5H)，2.46(m，1H)，4.88(s，2H)，7.10(m，4H)，7.47(d，2H)，8.07(d，2H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝410(M+1)；Rt＝8.15min；M.p.192.5-194.5℃.元素分析C25H31NO4的计算值C，73.32％；H，7.63％；N，3.42％.实测值C，73.03％；H，7.86％；N，3.36％.步骤4(R)-3-(4-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸甲酯将4-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酸溶解在DMF(10mL)中，并加入HOBt(0.40g，2.93mmol)和EDAC(0.52g，2.73mmol)。将该反应混合物搅拌45分钟。然后加入(R)-3-氨基-2-羟基丙酸甲酯在DMF(8mL)中的溶液和二异丙基乙基胺(0.46mL)。将该混合物搅拌过夜。将该反应混合物用水(40mL)稀释，并用乙酸乙酯(75mL)萃取。将水相用乙酸乙酯(30mL)萃取。将合并的有机相用盐酸(0.2N，3×30mL)、水∶饱和氯化钠(3×30mL)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。通过硅胶(100g)柱色谱纯化残余物，使用乙酸乙酯与正庚烷的混合物(1L(1∶1)和0.5L(7∶3))洗脱，获得了0.77g(R)-3-(4-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.16-1.41(m，14H)，1.63-1.81(m，5H)，2.46(m，1H)，3.42(m，1H)，3.54(m，1H)，3.62(s，3H)，4.24(m，1H)，4.84(s，2H)，5.70(d，1H)，7.12(m，4H)，7.28(d，2H)，7.78(d，2H)，8.51(t，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝511(M+1)；Rt＝7.63min.步骤5(R)-3-{4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯将(R)-3-(4-{[叔丁氧基羰基-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基-丙酸甲酯溶解在乙酸乙酯(10mL)中，加入无水氯化氢在乙酸乙酯中的溶液(3M，10mL)。将该混合物在室温搅拌2小时，并真空浓缩。将残余物悬浮在乙酸乙酯(15mL)中，并浓缩。该操作重复2次。然后将残余物悬浮在乙酸乙酯(10mL)中，并在5℃放置过夜。过滤出沉淀，用冰冷的乙酸乙酯洗涤，并真空干燥，获得了0.62g(R)-3-{4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.12-1.43(m，5H)，1.63-1.82(m，5H)，2.45(m，1H)，3.42(m，1H)，3.53(m，1H),3.60(s，3H)，4.25(t，1H)，4.48(s，2H)，7.18(m，4H)，7.57(d，2H)，7.82(d，2H)，8.58(t，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝411(M+1)；Rt＝4.93min.步骤6(R)-3-{4-[3-(4-氰基-3-三氟甲基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯将5-氨基-2-氰基三氟甲苯(0.07g，0.36mmol)溶解在乙酸乙酯(2mL)中，并加入无水氯化氢在乙酸乙酯中的溶液(3.5M，5.5mL)。15分钟后，将该溶液浓缩至干，从甲苯(3×5mL)中共蒸发3次。向残余物中加入甲苯(2.5mL)，用氮气吹扫约10分钟，然后加入双光气(0.43mL)。将该混合物在氮气氛下轻度回流1小时。将该混合物冷却，真空浓缩至干，然后从甲苯中共蒸发2次以除去过量双光气，获得了异氰酸4-氰基-3三氟甲基苯基酯。
将(R)-3-{4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯盐酸盐(0.13g，0.3mmol)溶解在DCM(5mL)中，并加入BSA(0.22mL，0.9mmol)。将该混合物搅拌0.5小时，加入二异丙基乙基胺(0.052mL，0.3mmol)。将该反应混合物加到上述异氰酸酯中，并将该混合物搅拌过夜。将该反应混合物转移到分液漏斗中，并用水(10mL)洗涤2次，用硫酸镁干燥并真空浓缩。通过柱色谱(30g)纯化残余物，依次使用乙酸乙酯/正庚烷(4∶6)(400mL)和乙酸乙酯(200mL)洗脱，获得了0.085g(R)-3-{4-[3-(4-氰基-3-三氟甲基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.12-1.44(m，6H)，1.66-1.82(m，5H)，3.41(m，1H)，3.53(m，1H)，3.60(s，3H)，4.22(m，1H)，4.47(s，2H)，5.69(s，1H)，7.21(m，4H)，7.33(d，2H)，7.76(d，2H)，7.98(s，2H)，8.14(s，1H)，8.48(t，1H)，9.1(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝623(M+1)；Rt＝6.02min.步骤7将(R)-3-{4-[3-(4-氰基-3-三氟甲基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基-氨基}-2-羟基丙酸甲酯(0.07g，0.124mmol)悬浮在乙醇(3mL)中，并加入氢氧化钠(4N，0.19mL，0.742mmol)。将该反应混合物搅拌1.5小时，浓缩以除去乙醇。将残余物用水(10mL)稀释，并用盐酸(4N，0.21mL)酸化。用乙酸乙酯(2×10mL)萃取该混合物，将合并的有机相用水(3×10mL)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩，获得了本标题化合物(0.68g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ.1.16-1.42(m，6H)，1.66-1.82(m，5H)，3.40(m，1H)，3.54(m，1H)，4.16(m，1H)，4.48(s，2H)，7.20(m，4H)，7.34(d，2H)，7.78(d，2H)，7.99(s，2H)，8.16(s，1H)，8.44(t，1H)，9.1(s，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝609(M+1)；Rt＝7.27min.实施例38(一般方法(B))(R)-3-{4-[3-(3-叔丁基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤6(R)-3-{4-[3-(3-叔丁基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯将3-(叔丁基)苯胺(0.054g，0.36mmol)溶解在乙酸乙酯(2mL)中，并加两次无水氯化氢在乙酸乙酯中的溶液(3.5M，3mL+2.5mL)。15分钟后，将该混合物浓缩至干，从甲苯(3×5mL)中共蒸发3次。向残余物中加入甲苯(2.5mL)，用氮气吹扫约10分钟，然后加入双光气(0.43mL)。将该混合物在氮气氛下轻度回流1小时。将该混合物冷却，真空浓缩。该操作重复2次以除去过量双光气。将该混合物浓缩至干，从甲苯中共蒸发3次(每次5mL)。将残余物浓缩至干，并从甲苯中共蒸发两次。然后将其再溶解在甲苯(2.5mL)中，用氮气吹扫约10分钟，然后加入双光气(0.43mL)。将该混合物在氮气氛下轻度回流1小时。冷却后，将该混合物浓缩，从甲苯中共蒸发2次以除去过量双光气，获得了异氰酸3-叔丁基苯基酯。
将(R)-3-{4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯盐酸盐(0.13g，0.3mmol)溶解在DCM(5mL)中，加入BSA(0.22mL，0.9mmol)。将该混合物搅拌0.5小时，并加入二异丙基乙基胺(0.052mL，0.3mmol)。将该反应混合物加到上述异氰酸酯中，并搅拌过夜。将该反应混合物转移到分液漏斗中，并用水(10mL)洗涤2次，用硫酸镁干燥并真空浓缩。通过硅胶(30g)柱色谱纯化残余物，依次使用乙酸乙酯和正庚烷(64)(400mL)与乙酸乙酯(100mL)洗脱，获得了0.12g(R)-3-{4-[3-(3-叔丁基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.23(s，11H)，1.28-1.42(m，3H)，1.65-1.80(m，5H)，2.47(m，1H)，3.40(m，1H)，3.51(m，1H)，4.22(m，1H)，4.94(s，2H)，5.71(d，1H)，6.99(d，1H)，7.12-7-24(m，5H)，7.28(d，1H)，7.36(d，2H)，7.42(s，1H)，7.77(d，2H)，8.08(s，1H)，8.50(t，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝(585+1)；Rt＝8.30min步骤7将(R)-3-{4-[3-(3-叔丁基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯(0.11g，0.188mmol)溶解在乙醇(4mL)中，并加入氢氧化钠(4N，0.28mL，1.128mmol)。将该反应搅拌1.5小时，并真空浓缩以除去乙醇。将残余物用水(10mL)稀释，用盐酸(4N，0.3mL)酸化，并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机相用水(3×10mL)洗涤，用硫酸镁干燥，并真空浓缩，获得了本标题化合物(0.10g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.23(s，9H)，1.28-1.42(m，4H)，1.65-1.81(m，5H)，2.47(m，1H)，3.38(m，1H)，3.55(m，1H)，4.16(m，1H)，4.94(s，2H)，7.00(d，1H)，7.11-7.24(m，6H)，7.28(d，1H)，7.35(d，1H)，7.41(s，1H)，7.80(d，2H)，8.10(s，1H)，8.46(t，1H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝572(M+1)；Rt＝7.78min.实施例39(一般方法(B))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3-羟基甲基-4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 制备用于步骤6的3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯胺将发烟硝酸(5mL)在冰浴上冷却，用30分钟缓慢地加入2-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(5g，22.7mmol)，同时将温度保持在15℃以下。然后将该反应在60℃搅拌1小时，在室温搅拌2小时。将该混合物倒在冰上，由此分离出了油状物。倾出含水上清液，向油状物中加入水(50mL)。用碳酸氢钠中和后，用乙酸乙酯(25mL)萃取该混合物。用乙酸乙酯(15mL)将水相再萃取一次。将合并的有机相用饱和氯化钠(2×15mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并真空浓缩，获得了5.69g5-硝基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯。1H NMR(DMSO-d6)δ3.93(3H，s)，7.82(1H，d)，8.58(1H，d)， 8.67(1H，s)；HPLC-MS(方法B)m/z266；Rt＝6.0min.
将5-硝基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯(5.69g，21.5mmol)溶解在乙醇99.9％(80mL)中，并加入氯化亚锡(II)二水合物(24.2g，107mmol)。将悬浮液在75℃油浴上搅拌2小时，并真空浓缩。加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，用4N氢氧化钠(50mL)将pH调节至8。将沉淀中的液体倾出。用乙酸乙酯将沉淀洗涤2次。用乙酸乙酯(60mL)将水相萃取2次。将合并的有机相用饱和氯化钠溶液(2×100mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩。通过柱色谱(120g二氧化硅)纯化，使用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱，获得了3.8g5-氨基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯。1HNMR(DMSO-d6)δ3.82(3H，s)，5.63(2H，s)，6.79(1H，d)，7.07(1H，s)，7.11(1H，d)；HPLC-MS(方法B)m/z236，Rt＝4.6min.
在装配有温度计和加液漏斗的三颈烧瓶内，于氮气氛下将5-氨基-2-三氟甲氧基苯甲酸甲酯(3.0g，12.8mmol)溶解在THF(20mL)中。在搅拌下用10分钟滴加冰冷的氢化锂铝(1MTHF溶液，15mL)。继续在室温搅拌1小时，将该反应真空浓缩。将残余物悬浮在DCM(150mL)和水(50mL)中，然后经由硅藻土过滤，用DCM和水洗涤。分离出滤液，用DCM(30mL)将水相再萃取一次。将合并的有机相用水(2×20mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，获得了2.47g(5-氨基-2-三氟甲氧基苯基)甲醇。1HNMR(DMSO-d6)δ3.92(2H.d)，5.18(1H，t)，5.28(2H，s)，6.45(1H，d)，6.91(1H，d)；HPLC-MS(方法B)m/z208，Rt＝7.2min.
将5-氨基-2-三氟甲氧基苯基)甲醇(1.2g，5.8mmol)溶解在DMF(5mL)中，加入咪唑(0.48g，7.1mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(0.99g，6.6mmol)。将该反应混合物搅拌16小时，加入水(20mL)。用乙酸乙酯(2×50mL)萃取该混合物，将合并的有机相用水(10mL)、柠檬酸(10mL，10％)和水(2×10mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩。通过柱色谱(110g，二氧化硅)纯化残余物，使用乙酸乙酯和庚烷(1∶3)洗脱，获得了1.2g3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯胺。1HNMR(DMSO-d6)δ0.82(9H，s)，3.25(6H，s)，4.52(2H，s)，5.23(2H，s)，6.41(1H，d)，6.61(1H，s)，6.86(1H，d)；HPLC-MS(方法B)m/z322；Rt＝7.17min.步骤6(R)-3-{4-[3-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯将碳酸二(三氯甲基)酯(三光气)(0.09g，0.31mmol)溶解在DCM(2mL)中，并在冰浴中于氮气氛下冷却。将3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯胺(0.3g，0.93mmol)从甲苯中蒸发2次以除去所有水分，然后溶解在DCM(2mL)中，并加入二异丙基乙基胺(0.32mL)。将该溶液加到冷却的三光气溶液中，并将该混合物在20℃搅拌2.5小时。将(R)-3-{4-[(4-环己基苯基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基-丙酸甲酯盐酸盐(0.37g，0.83mmol)从甲苯中蒸发2次，溶解在DMF(3mL)中，并加入二异丙基乙基胺(0.141mL，0.83mmol)。在搅拌下将该溶液加到上述异氰酸酯中，在氮气氛下于80℃加热2小时。将该反应混合物真空蒸发，用DCM(80mL)、柠檬酸水溶液(10％，25mL)萃取残余物。用DCM(30mL)萃取水相。将合并的有机相用柠檬酸水溶液(10％，3×25mL)洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。通过硅胶(58g)柱色谱纯化残余物，使用乙酸乙酯和正庚烷(940mL，1∶1和300mL乙酸乙酯)洗脱，获得了0.03g(R)-3-{4-[3-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯。HPLC-MS(方法B)m/z＝758(M+1)；Rt＝9.57分钟。步骤7将(R)-3-{4-[3-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯基]-1-(4-环己基-苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸甲酯(24mg，0.032mmol)溶解在乙醇(1mL)中，并加入氢氧化钠(0.05mL，019mmol)。将该反应混合物搅拌2小时，浓缩以除去乙醇。将残余物用水(10mL)稀释，用盐酸(4N，0.3mL)酸化，并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机相用水(3×10mL)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩，获得了17mg(R)-3-{4-[3-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸。HPLC-MS(方法B)m/z＝744(M+1)；Rt＝9.35分钟。
将(R)-3-{4-[3-[3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-4-三氟甲氧基苯基]-1-(4-环己基-苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸(17mg，0.023mmol)溶解在乙腈∶水(9∶1)(2mL)中，并加入氟化铯(35mg，0.35mmol)。将该反应混合物在80℃搅拌6小时，再加入氟化铯(35mg)。将该混合物在60℃搅拌过夜，真空浓缩，用乙酸乙酯(10mL)和水(5mL)稀释。将有机相用水(3×5mL)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。通过制备HPLC纯化残余物，获得了本标题化合物。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.35(m，5H)，1.79(m，5H)，4.49(s，2H)，4.95(s，2H)，5.29(s，1H)，7.12-7.26(m，6H)，7.34(d，2H)，7.49(dd，1H)，7.63(d，1H)，7.77(d，2H)，8.42(t，1H)；HPLC-Ms(方法B)m/z＝630(M+1)；Rt＝6.62min.
用于固相合成通式(Ic)化合物的一般方法(C) 其中R2、R3、R4、R5、A、Z、D和E的定义同(I)中所述，X是-C(O)NH-或-C(O)NHCR12R13-其中R12和R13的定义同式(I)中所述，且树脂是用2-氯三苯甲基连接基团负载的聚苯乙烯树脂。当A是-CHOH-时，使用1)BSA和2)D-N＝C＝O或D-CHR13-N＝C＝O进行步骤4。否则，仅使用D-N＝C＝O或D-CHR13-N＝C＝O进行步骤4。
在下述实施例中举例说明该方法。实施例40(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(3，4-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 步骤1结合在树脂上的(R)-Fmoc-异丝氨酸将用2-氯三苯甲基氯连接团官能化的50mg聚苯乙烯树脂与N-甲基-2-吡咯烷酮(500μL)和1，2-二氯丙烷(500μL)涡旋1小时。将树脂过滤，并用N-甲基-2-吡咯烷酮1，2-二氯丙烷(1∶1，2×1mL)洗涤。加入N-甲基-2-吡咯烷酮(500μL)和1，2-二氯丙烷(500μL)，然后加入150μmol(R)-Fmoc-异丝氨酸和100μL二异丙基乙基胺。将该悬浮液在25℃振摇4小时后，通过过滤分离出树脂，并用DCM∶甲醇∶二异丙基乙基胺17∶2∶1(2×1mL)和N-甲基-2-吡咯烷酮(2×1mL)洗涤。步骤2结合在树脂上的(R)-3-(4-甲酰基苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸向上述结合在树脂上的(R)-Fmoc-异丝氨酸中加入500μL20％吡啶在DMF中的溶液。振摇30分钟后，排放出树脂，并用N-甲基-2-吡咯烷酮(6×1mL)洗涤。然后将200μmol 4-甲酰基苯甲酸(30mg)和200μmolHOBt(31mg)溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮(500μL)中，并加到树脂中，然后加入溶解在乙腈(500μL)中的200μmol二异丙基碳二亚胺(25.2mg)。将该混合物在25℃振摇4小时，然后过滤，并用N-甲基-2-吡咯烷酮(3×1mL)洗涤树脂。步骤3结合在树脂上的(R)-3-{4-[(4-叔丁基苯基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸将上述结合在树脂上的(R)-3-(4-甲酰基苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸用0.5M4-叔丁基苯胺(0.25mmol)在N-甲基-2-吡咯烷酮与原甲酸三甲酯的混合物(1∶1，0.5mL)中的溶液和冰醋酸(50μL)于25℃处理1小时。加入溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮和甲醇(1∶1，0.25mL)中的氰基硼氢化钠(250μmol，16mg)，将该混合物在25℃涡旋4小时，然后过滤，并用N-甲基-2-吡咯烷酮与甲醇的混合物(1∶1，2×1mL)3×1mL N-甲基-2-吡咯烷酮(3×1mL)和1，2-二氯丙烷与二异丙基乙基胺的混合物(7∶1，2×0.75mL)洗涤。步骤4结合在树脂上的(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(3，4-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸向上述结合在树脂上的(R)-3-{4-[(4-叔丁基苯基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸中加入1，2-二氯丙烷(500μL)和BSA(100μL)，并将该混合物在25℃涡旋1小时。加入200μmol异氰酸3，4-二氯苯酯，在25℃振摇5小时，然后过滤，将树脂用2×1mLDCM、4×1mL N-甲基-2-吡咯烷酮、2×1mL H2O、3×1mL THF和5×1mLDCM洗涤，获得了结合在树脂上的本标题化合物。步骤5(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(3，4-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸将上述结合在树脂上的(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(3，4-二氯苯基)脲基甲基]-苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸用1mL 20％TFA在DCM中的溶液于25℃处理1小时。过滤出产物，将树脂用1mL DCM洗涤。将合并的萃取液真空浓缩，获得了本标题化合物。1H-NMR(CDCl3)δ7.65(d，2H)，7.45-7.40(m，4H)，7.35-7.20(m，3H)，7.10-7.00(m，3H)，6.30(s，1H)，4.90(s，2H)，4.40(m，1H)，3.83(m，2H)，1.32(s，9H)；HPLC-MS(方法B)m/z＝558(M+1)；Rt＝4.71min.
下述实施例是如上所述进行的。实施例41(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基环己基)-3-(3，4-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝564(M+1)；Rt＝4.92分钟/5.02分钟。实施例42(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3，4-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝584(M+1)；Rt＝5.12分钟。实施例43(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(2，2，4，4-四氟-4H-苯并[1，3]二氧杂环己烯-6-基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝646(M+1)；Rt＝5.24分钟。实施例44(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(2，2，4，4-四氟-4H-苯并[1，3]二氧杂环己烯-6-基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝620(M+1)；Rt＝4.88分钟。实施例45(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基环己基)-3-(2，2，4，4-四氟-4H-苯并[1，3]二氧杂环己烯-6-基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝606(M+1)；Rt＝5.11分钟/5.20分钟。实施例46(-般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基苯基)-3-(3，4-二氟苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝526(M+1)；Rt＝4.24分钟。实施例47(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3，4-二氟苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝552(M+1)；Rt＝4.65分钟。实施例48(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，4-二氟苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝550(M+1)；Rt＝6.77分钟。实施例49(一般方法(C))(R)-3-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝618(M+1)；Rt＝7.58分钟。实施例50(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-氟-3-硝基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝579(M+1)；Rt＝6.85分钟。实施例51(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(4-异丙基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝558(M+1)；Rt＝7.73分钟。实施例52(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-环己-1-烯基苯基)-3-(3，4-二氯苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝582(M+1)；Rt＝4.99分钟。实施例53(一般方法(C))(R)-3-{4-[3-(4-乙酰基苯基)-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝558(M+1)；Rt＝6.42分钟。实施例54(一般方法(C))3-{4-[3-[1(RS)-(4-溴苯基)乙基]-1-(4-环己基苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2(R)-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝624(M+1)；Rt＝7.45分钟。实施例55(一般方法(C))(R)-3-{4-[1-(4-环己基苯基)-3-(3，5-二氟苯基)脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝552(M+1)；Rt＝4.76分钟。
用于固相合成通式(Id)化合物的一般方法(D) 其中R2、R3、R4、R5、A、Z、D和E的定义同式(I)中所述，X是-C(O)-(CR12R13)r-(CH2)s-其中r、s、R12和R13的定义同式(I)中所述，且树脂是用2-氯三苯甲基连接基团负载的聚苯乙烯树脂。当A是-CHOH-时，用1)BSA和2)D-C(O)OH或D-CHR13-C(O)OH进行步骤4。否则，仅用D-C(O)OH或D-CHR13-C(O)OH进行步骤4。实施例56(一般方法(D))(R)-3-[4-({(4-叔丁基环己基)-[2-(4-三氟甲氧基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 步骤1结合在树脂上的(R)-Fmoc-异丝氨酸将用2-氯三苯甲基氯连接团官能化的50mg聚苯乙烯树脂与N-甲基-2-吡咯烷酮(500μL)和1，2-二氯丙烷(500μL)涡旋1小时。将树脂过滤，并用N-甲基-2-吡咯烷酮1，2-二氯丙烷(1∶1，2×1mL)洗涤。加入N-甲基-2-吡咯烷酮(500μL)和1，2-二氯丙烷(500μL)，然后加入150μmol(R)-Fmoc-异丝氨酸和100μL二异丙基乙基胺。将该悬浮液在25℃振摇4小时后，通过过滤分离出树脂，并用DCM∶甲醇∶二异丙基乙基胺17∶2∶1(2×1mL)和N-甲基-2-吡咯烷酮(2×1mL)洗涤。步骤2结合在树脂上的(R)-3-(4-甲酰基苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸向上述结合在树脂上的(R)-Fmoc-异丝氨酸中加入500μL20％吡啶在DMF中的溶液。振摇30分钟后，排放出树脂，并用N-甲基-2-吡咯烷酮(6×1mL)洗涤。然后将200μmol4-甲酰基苯甲酸(30mg)和200μmolHOBt(31mg)溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮(500μL)中，并加到树脂中，然后加入溶解在乙腈(500μL)中的200μmol二异丙基碳二亚胺(25.2mg)。将该混合物在25℃振摇4小时，然后过滤，并用N-甲基-2-吡咯烷酮(3×1mL)洗涤树脂。步骤3结合在树脂上的(R)-3-{4-[(4-叔丁基环己基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸将上述结合在树脂上的(R)-3-(4-甲酰基苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸用0.5M4-叔丁基环己基胺(0.25mmol)在N-甲基-2-吡咯烷酮与原甲酸三甲酯的混合物(1∶1，0.5mL)中的溶液和冰醋酸(50μL)于25℃处理1小时。加入溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮和甲醇(1∶1，0.25mL)中的氰基硼氢化钠(250μmol，16mg)，将该混合物在25℃涡旋4小时，然后过滤，并用N-甲基-2-吡咯烷酮与甲醇的混合物(1∶1，2×1mL)3×1mL N-甲基-2-吡咯烷酮(3×1mL)和1，2-二氯丙烷与二异丙基乙基胺的混合物(7∶1，2×0.75mL)洗涤。步骤4结合在树脂上的(R)-3-[4-({(4-叔丁基环己基)-2-(4-三氟甲氧基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸向上述结合在树脂上的(R)-3-{4-[(4-叔丁基环己基氨基)甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸中加入1，2-二氯丙烷(500μL)和BSA(100μL)，将该混合物在25℃涡旋1小时，然后过滤。向该树脂中加入4-(三氟甲氧基)苯基乙酸(400μmol)在N-甲基-2-吡咯烷酮、1，2-二氯丙烷和二异丙基乙基胺(4.5∶4.5∶1，1mL)中的溶液，然后加入溴三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐(400μmol)在1，2-二氯丙烷(500μL)中的溶液。将该混合物在50℃反应3小时，将树脂冷却至25℃，同时用N-甲基-2-吡咯烷酮(4×1mL)、和DCM(10×1mL)洗涤，获得了结合在树脂上的本标题化合物。步骤5(R)-3-[4-({(4-叔丁基环己基)-[2-(4-三氟甲氧基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸将上述结合在树脂上的(R)-3-{4-[1-(4-叔丁基环己基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)-脲基甲基]苯甲酰基氨基}-2-羟基丙酸用1mL 20％TFA在DCM中的溶液于25℃处理1小时。过滤出产物，并用1mL DCM洗涤树脂。将合并的萃取液真空浓缩，获得了本标题化合物。HPLC-MS(方法A)m/z＝579(M+1)；Rt＝7.20分钟。
下述实施例是如上所述进行的。实施例57(一般方法(D))(R)-3-[4-({(4-叔丁基环己基)-[2-(3-氟-5-三氟甲基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝581(M+1)；Rt＝7.22分钟。实施例58(一般方法(D))(R)-3-[4-({(2，2-二苯基乙基)-[2-(3-氟-5-三氟甲基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝623(M+1)；Rt＝6.87分钟。实施例59(一般方法(D))(R)-3-(4-{[5-氯苯并[b]噻吩-3-羰基)-(2，2-二苯基乙基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝613(M+1)；Rt＝6.50分钟。实施例60(一般方法(D))(R)-3-[4-({(2，2-二苯基乙基)-[2-(4-三氟甲氧基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝621(M+1)；Rt＝6.90分钟。实施例61(-般方法(D))(R)-3-(4-{[(4-叔丁基环己基)-(5-氯苯并[b]噻吩-3-羰基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝571(M+1)；Rt＝7.15分钟。实施例62(一般方法(D))(R)-3-(4-{[(2，2-二苯基乙基)-(5-三氟甲氧基-1H-吲哚-2-羰基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法A)m/z＝646(M+1)；Rt＝6.93分钟。实施例63(一般方法(D))(R)-3-[4-({(4-环己基苯基)-[(4-三氟甲氧基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝599(M+1)；Rt＝5.19分钟。实施例64(一般方法(D))(R)-3-[4-({(4-环己基苯基)-[(3-三氟甲氧基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝599(M+1)；Rt＝5.1 7分钟。实施例65(一般方法(D))(R)-3-[4-({(4-环己基苯基)-[(3-氟-5-三氟甲基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝601(M+1)；Rt＝5.19分钟。实施例66(一般方法(D))(R)-3-(4-{([(3，5-二(三氟甲基)苯基)乙酰基]-(4-环己基苯基)氨基)甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝651(M+1)；Rt＝5.50分钟。实施例67(一般方法(D))(R)-3-[4-({(4-环己基苯基)-[(3-三氟甲基苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝583(M+1)；Rt＝5.08分钟。实施例68(一般方法(D))(R)-3-[4-({(4-环己基苯基)-[(3，4-二氯苯基)乙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝583(M+1)；Rt＝5.26分钟。实施例69(一般方法(D))(R)-3-(4-{[[(3-溴苯基)乙酰基]-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝595(M+1)；Rt＝5.01分钟。实施例70(一般方法(D))(R)-3-(4-{[(联苯-4-基乙酰基)-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基-丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝591(M+1)；Rt＝5.38分钟。实施例71(一般方法(D))(R)-3-(4-{[(4-环己基苯基)-(2-萘基乙酰基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝565(M+1)；Rt＝5.10分钟。实施例72(一般方法(D))(R)-3-(4-{[(3-(3，5-二(三氟甲基)苯基)丙酰基)-(4-环己基苯基)氨基]甲基}苯甲酰基氨基)-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝665(M+1)；Rt＝5.51分钟。实施例73(一般方法(D))(R)-3-[4-({(4-环己基苯基)-[3-(3-硝基苯基)丙酰基]氨基}甲基)苯甲酰基氨基]-2-羟基丙酸 HPLC-MS(方法B)m/z＝665(M+1)；Rt＝5.51分钟。
下列优选的化合物在本发明范围内，并且可依据本文所公开的方法制得。其它优选的化合物是 其中
此外，下列化合物在本发明范围内，并且可依据本文所公开的方法制得
此外，下列优选的化合物(纯的(R)或(S)构型的对映体，或其混合物，包括外消旋体)在本发明范围内，并且可依据上述方法制得 药理方法下面描述用于评价本发明化合物效力的结合测定以及功能测定。
可在使用克隆人胰高血糖素受体的竞争性结合测定中测定化合物与胰高血糖素受体的结合。
拮抗作用可作为在5nM胰高血糖素存在下化合物抑制形成的cAMP的量来确定。胰高血糖素结合测定(I)使用克隆人受体测定受体结合(Lok等人，Gene140，203-209(1994))。在幼仓鼠肾细胞系(A3 BHK570-25)中表达插到使用EcoRI/SSt1限制性位点的pLJ6’表达载体(Lok等人)中的受体。在0.5mg/mL G-418存在下选择克隆，并且显示在40代以上是稳定的。经表明Kd是0.1nM。
质膜是这样制备的将细胞生长至融合，将其从表面分离下来，将细胞重悬在冷的缓冲液(10mM tris/HCl，pH7.4，含有30mM NaCl，1mM二硫苏糖醇，5mg/L亮抑蛋白酶肽(Sigma)，5mg/L胃蛋白酶抑制剂(Sigma)，100mg/L杆菌肽(Sigma)和15 mg/L重组的抑肽酶(NovoNordisk A/S))，使用Poltron PT10-35匀浆器(Kinematica)匀浆两次，每次10秒，并在一层41 w/v％蔗糖上以95.000×g离心75分钟。将位于两层之间的白色带在缓冲剂中稀释，以40.000×g离心45分钟。将含有质膜的沉淀悬浮在缓冲液中，并在-80℃贮藏直至使用。
依据氯胺T法(Hunter和Greenwood，Nature194，495(1962))将胰高血糖素碘化，并用阴离子交换色谱法(Jrgensen等人，Hormoneand Metab.Res.4，223-224(1972)纯化。在碘化当天，比活性是460μCi/μg。将示踪剂以等分试样的方式在-18℃贮藏，融化后立即使用。
在滤器微量滴定板(MADVN65，Millipore)中以一式三份进行结合测定。缓冲液是50mM HEPES，5mM EGTA，5mM MgCl2，0.005％吐温20，pH7.4。将胰高血糖素溶解在0.05MHCl中，加入等量(w/w)人血清白蛋白，并冷冻干燥。在使用的当天，将其溶解在水中，并在缓冲液中稀释至所需浓度。
将测试化合物溶解并在DMSO中稀释。向各个孔中加入140μL缓冲液、25μL胰高血糖素或缓冲液、和10μLDMSO或测试化合物。将示踪剂(50.000cpm)在缓冲剂中稀释，并向各孔中加入25μL。然后向各孔中加入25μL等分试样的在缓冲液中稀释的1-4μg新融化的质膜蛋白。将平板在30℃培养2小时。用10-6M胰高血糖素测定非特异性结合。然后通过真空过滤(Millipore真空歧管)将结合的示踪剂与未结合的示踪剂分离。用2×100μL缓冲液/孔洗涤平板。将平板风干2小时，之后使用Millipore Puncher将滤器从平板上取下来。将滤器在γ计数器中计数。功能测定(I)在96孔微量滴定板(组织培养板，Nunc)中进行功能测定。在测定中使用的缓冲液是50mM tris/HCl，1mM EGTA，1.5mM MgSO4，1.7mM ATP，20μMGTP，2mM IBMX，0.02％吐温-20和0.1％人血清白蛋白。pH是7.4。加入35μL等分试样的在50 mM tris/HCl，1mMEGTA，1.8mM MgSO4，0.0222％吐温-20和0.111％人血清白蛋白，pH7.4中稀释的胰高血糖素和所测试的拮抗剂。加入20μL50mM tris/HCl，1mM EGTA，1.5mM MgSO4，11.8mM ATP，0.14mM GTP，14mM IBMX和0.1％人血清白蛋白，pH7.4。在临测定前将GTP溶解。
加入在tris/HCl，EGTA，MgSO4，人血清白蛋白缓冲液(实际浓度取决于贮藏的质膜中的蛋白浓度)中的含有5μg质膜蛋白的50μL。
总测定体积为140μL。将平板在连续振摇下于37℃培养2小时。通过加入25μL0.5NHCl来终止反应。使用闪烁近似工具(Amersham)测定cAMP。胰高血糖素结合测定(II)用人胰高血糖素受体转染BHK(幼仓鼠肾细胞系)细胞，并制备细胞的膜制备物。让含有闪烁剂的小麦胚芽凝集素(Wheat GermAgglutinin)衍生化的SPA珠子(WGA珠子)(Amersham)与膜结合。125I-胰高血糖素与膜中的人胰高血糖素受体结合，并将在WGA珠子中的闪烁剂激发至轻度发射。与受体结合的胰高血糖素或样本与125I-胰高血糖素竞争。
膜制备的所有步骤都是在冰上或在4℃进行的。收获BHK细胞并离心。将离心团重悬在匀浆缓冲液(25mM HEPES，pH＝7.4，2.5mMCaCl2，1.0mM MgCl2，250mg/L杆菌肽，0.1mM Pefabloc)中，使用Poltron 10-35匀浆器(Kinematica)匀浆2×10秒，并加入相同量的用于重悬的匀浆缓冲液。离心(以2000×g离心15分钟)后，将上清液转移到冷的离心管中，并以40.000×g离心45分钟。将离心团重悬在匀浆缓冲液中，匀浆2×10秒(Polytron)，再加入匀浆缓冲液。将该悬浮液以40.000×g离心45分钟，将离心团重悬在重悬缓冲液(25mMHEPES，pH＝7.4，2.5mM CaCl2，1.0mM MgCl2)中，并匀浆2×10秒(Polytron)。蛋白浓度一般为约1.75 mg/mL。加入闪烁缓冲液(25mMHEPES，pH＝7.4，2.5mM CaCl2，1.0mM MgCl2，1％牛血清白蛋白，500mg/L杆菌肽，2.5 M蔗糖)，并将膜制备物在-80℃贮藏。
在opti板(聚苯乙烯微板，Packard)中进行胰高血糖素结合测定。向每个孔中加入50μL测定缓冲液(25 mM HEPES，pH＝7.5，2.5mM CaCl2，1.0mM MgCl2，0.003％吐温-20，0.005％杆菌肽，0.05％叠氮化钠)和5μL胰高血糖素或测试化合物(在DMSO中)。然后向孔中加入50μL示踪剂(125I-猪胰高血糖素，50.000cpm)和含有人胰高血糖素受体的50μL膜(7.5μg)。最后将含有1 mg珠子的50μLWGA珠子转移到孔中。将opti板在摇动器上培养4小时，然后静置8-48小时。将opti板在Topcounter中计数。用500nM胰高血糖素测定非特异性结合。
实施例的化合物表现出的IC50值低于1500nM，并且当在胰高血糖素结合测定(II)中测试时，它们当中有很多低于250nM。GIP结合测定用人GIP受体转染BHK(幼仓鼠肾细胞系)细胞，并制备细胞的膜制备物。让含有闪烁剂的小麦胚芽凝集素衍生化的SPA珠子(WGA珠子)(Amersham)与膜结合。让125I-GIP与膜中的人GIP受体结合，将在WGA珠子中的闪烁剂激发至轻度发射。与受体结合的GIP或样本与125I-GIP竞争。
膜制备的所有步骤都是在冰上或在4℃进行的。收获BHK细胞并离心。将离心团重悬在匀浆缓冲液(25mM HEPES，pH＝7.4，2.5mMCaCl2，1.0mM MgCl2，250mg/L杆菌肽，0.1mM Pefabloc)中，使用Poltron 10-35匀浆器(Kinematica)匀浆2×10秒，并加入相同量的用于重悬的匀浆缓冲液。离心(以2000×g离心15分钟)后，将上清液转移到冷的离心管中，并以40.000×g离心45分钟。将离心团重悬在匀浆缓冲液中，匀浆2×10秒(Polytron)，再加入匀浆缓冲液。将该悬浮液以40.000×g离心45分钟，将离心团重悬在重悬缓冲液(25mMHEPES，pH＝7.4，2.5mM CaCl2，1.0mM MgCl2)中，并匀浆2×10秒(Polytron)。蛋白浓度一般为约1.75mg/mL。加入稳定化缓冲液(25mMHEPES，pH＝7.4，2.5mM CaCl2，1.0mM MgCl2，1％牛血清白蛋白，500mg/L杆菌肽，2.5M蔗糖)，并将膜制备物在-80℃贮藏。
在opti板(聚苯乙烯微板，Packard)中进行GIP结合测定。向每个孔中加入50测定缓冲液(25 mM HEPES，pH＝7.5，2.5mM CaCl2，1.0mM MgCl2，0.003％吐温-20，0.005％杆菌肽，0.05％叠氮化钠)和5μLGIP或测试化合物(在DMSO中)。然后向孔中加入50μL示踪剂(125I-猪GIP，50.000cpm)和含有人GIP受体的50μL膜(20μg)。最后将含有1mg珠子的50μLWGA珠子转移到孔中。将opti板在摇动器上培养3.5小时，然后静置8-48小时。将opti板在Topcounter中计数。用500nM GIP测定非特异性结合。
权利要求
1.通式(I)化合物 其中R1、R2、R3、R4和R5独立地为氢或C1-6-烷基，A是-C(O)-、-CH(OR6)-或-CHF-，其中R6是氢或C1-6-烷基，Z是亚芳基或衍生自含有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子的5或6元杂芳环的二价基团，其可任选被1或2个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR9、-NR9R10和C1-6-烷基的R7和R8取代，其中R9和R10独立地为氢或C1-6-烷基，X是-(CH2)q-(CR12R13)r-(CH2)s- ， 或 其中r是0或1，q和s独立地为0、1、2或3，R11、R12、R13和R14独立地为氢、C1-6-烷基或C3-8环烷基，D是 或 其中R15、R16、R17和R18独立地为·氢、卤素、-CN，-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-S(O)2CF3，-SCF3，-NO2，-OR21，-NR21R22，-SR21，-NR21S(O)2R22，-S(O)2NR21R22，-S(O)NR21R22，-S(O)R21，-S(O)2R21，-C(O)NR21R22，-OC(O)NR21R22，-NR21C(O)R22，-CH2C(O)NR21R22，-OCH2C(O)NR21R22-OC(O)R21，-C(O)R21或-C(O)OR21，或-C(O)OR21，·C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6炔基，所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22和C1-6-烷基的取代基取代，·C3-8环烷基、C4-8-环烯基、杂环基、C3-8环烷基-C1-6-烷基、C3-8-环烷基-C1-6-烷氧基、C3-8环烷氧基、C3-8环烷基-C1-6-烷硫基、C3-8-环烷硫基、C3-8-环烷基-C2-6链烯基、C3-8环烷基-C2-6-炔基、C4-8-环烯基-C1-6-烷基、C4-8-环烯基-C2-6-链烯基、C4-8-环烯基-C2-6炔基、杂环基-C1-6-烷基、杂环基-C2-6-链烯基、杂环基-C2-6-炔基、芳基、芳氧基、芳氧基羰基、芳酰基、芳基-C1-6-烷氧基、芳基-C1-6-烷基、芳基-C2-6-链烯基、芳基-C2-6炔基、杂芳基、杂芳基-C1-6烷基、杂芳基-C2-6-链烯基或杂芳基-C2-6-炔基，其中所述环部分可任选被一个或多个选自卤素、-C(O)OR21、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR21、-NR21R22和C1-6-烷基的取代基取代，其中R21和R22独立地为氢、C1-6-烷基、芳基-C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R21和R22与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，或者当处于相邻位置时，R15-R18中的两个基团可一起形成桥基团-(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-，其中a是0、1或2，c是1或2，R23、R24、R25和R26独立地为氢、C1-6-烷基或氟，R19和R20独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C3-8-环烷基-C1-6-烷基，E是 或 其中R27和R28独立地为氢、卤素、-CN、-CF3、-OR32、-NR32R33、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C4-8-环烯基或芳基，其中所述芳基可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-NO2、-OR32、-NR32R33和C1-6-烷基的取代基取代，其中R32和R33独立地为氢或C1-6-烷基，或者当连接在同一氮原子上时，R32和R33与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，R29、R30和R31独立地为■氢、卤素、-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-SCF3，-OR34，-NR34R35，-SR34，-S(O)R34，-S(O)2R34，-C(O)NR34R35，-OC(O)NR34R35，-NR34C(O)R35，-OCH2C(O)NR34R35，-C(O)R34或-C(O)OR34，■C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6-炔基，所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■C3-8-环烷基、C4-8-环烯基、杂环基、C3-8环烷基-C1-6-烷基、C3-8-环烷基-C2-6-链烯基、C3-8-环烷基-C2-6-炔基、C4-8-环烯基-C1-6-烷基、C4-8-环烯基-C2-6-链烯基、C4-8-环烯基-C2-6-炔基、杂环基-C1-6-烷基、杂环基-C2-6-链烯基、杂环基-C2-6-炔基、芳基、芳氧基、芳酰基、芳基-C1-6-烷氧基、芳基-C1-6-烷基、芳基-C2-6-链烯基、芳基-C2-6-炔基、杂芳基、杂芳基-C1-6-烷基、杂芳基-C2-6-链烯基或杂芳基-C2-6-炔基，其中所述环部分可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环，或者当连接在同一环碳原子或不同的环碳原子上时，R29、R30和R31当中的两个基团可一起形成基团-O-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-O-、-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-或-S-(CH2)t-CR36R37-(CH2)l-S-，其中t和l独立地为0、1、2、3、4或5，R36和R37独立地为氢或C1-6-烷基，以及通式(I)化合物的旋光或几何异构体或互变异构形式，包括这些异构体或互变异构形式的混合物，或它们的可药用盐。
2.权利要求1的化合物，其中R1、R2、R3、R4和R5是氢。
3.权利要求1或2的化合物，其中A是-CHF-。
4.权利要求1或2的化合物，其中A是-CH(OR6)-，其中R6如权利要求1中所定义。
5.权利要求4的化合物，其中A是-CH(OH)-。
6.前述权利要求任一项的化合物，其中Z是 其中R7和R8如权利要求1中所定义。
7.权利要求6的化合物，其中Z是
8.前述权利要求任一项的化合物，其中X是 -(CH2)s-， 或 其中q是0或1，r是0或1，s是0、1或2，且R12和R13独立地为氢或C1-6-烷基。
9.权利要求8的化合物，其中X是-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHC(CH3)2-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-C(O)CH2CH2-、-C(O)CH＝CH-、-(CH2)s-、-C(O)-、-C(O)O-或-NHC(O)-，其中s是0或1。
10.权利要求9的化合物，其中X是-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-C(O)CH＝CH-、-(CH2)s-、-C(O)-、-C(O)O-或-NHC(O)-，其中s是0或1。
11.权利要求1 0的化合物，其中X是-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-CH2-、-C(O)-或-NHC(O)-。
12.权利要求11的化合物，其中X是-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)NHCH(CH3)-、-C(O)CH2-或-C(O)-。
13.权利要求12的化合物，其中X是-C(O)NH-。
14.前述权利要求任一项的化合物，其中D是 或 其中R15、R16、R17、R18、R19和R29如权利要求1中所定义。
15.权利要求14的化合物，其中D是 其中R15、R16和R17如权利要求1中所定义。
16.权利要求14或15的化合物，其中R15、R16和R17独立地为氢、卤素、-CN、-NO2、-CF3、-OCF3-、-SCF3、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、-S-C1-6-烷基、-C(O)OR21、-C(O)R21、-CH2OR21、-C(O)NR21R22、-S(O)R21、-S(O)2R21、-S(O)2CF3、-S(O)2NR21R22、C3-8-环烷基、C3-8-环烷基-C1-6-烷氧基或C3-8-环烷基-C1-6-烷硫基，或芳基、杂芳基或芳氧基，其中所述基团可任选被-CF3、-OCF3、C1-6-烷基、卤素或-C(O)OR21取代，或者当处于相邻位置时，R15、R16和R17当中的两个基团可一起形成桥基团-(CR23R24)a-O-(CR25R26)c-O-，其中R21和R22独立地为氢或C1-6-烷基，且a、c、R23、R24、R25和R26如权利要求1中所定义。
17.权利要求16的化合物，其中R15、R16和R17独立地为氢、卤素、-CN、-CF3、-OCF3或C1-6-烷氧基，或者R15和R16一起形成桥基团-CF2-O-CF2-O-，且R17是氢。
18.权利要求17的化合物，其中R15、R16和R17独立地为氢、卤素、-CN、-CF3、-OCF3或C1-6-烷氧基。
19.权利要求14的化合物，其中D是 或 其中R15、R16、R19和R20如权利要求1中所定义。
20.权利要求19的化合物，其中D是 其中R15和R16都是氢，且R19是C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C3-8-环烷基-C1-6-烷基。
21.权利要求19的化合物，其中D是 其中R15和R16都是氢，且R19和R20都是C1-6-烷基。
22.前述权利要求任一项的化合物，其中E 或 其中R27、R28、R29、R30和R31如权利要求1中所定义。
23.权利要求22的化合物，其中E是 其中R27和R28如权利要求1中所定义。
24.权利要求23的化合物，其中E是 其中R27和R28如权利要求1中所定义。
25.权利要求23或24的化合物，其中R27和R28独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C4-8-环烯基或苯基，其中苯基任选如权利要求1所述被取代。
26.权利要求25的化合物，其中R27和R28独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基。
27.权利要求26的化合物，其中R27是氢，且R28是C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基。
28.权利要求27的化合物，其中R27是氢，且R28是C1-6-烷基或C3-8-环烷基。
29.权利要求22的化合物，其中E是 其中R29、R30和R31如权利要求1中所定义。
30.权利要求29的化合物，其中E是 其中R29、R30和R31如权利要求1中所定义。
31.权利要求29或30的化合物，其中R29、R30和R31独立地为■氢、-CHF2，-CF3，-OCF3，-OCHF2，-OCH2CF3，-OCF2CHF2，-SCF3，-OR34，-NR34R35，-SR34，-S(O)R34，-S(O)2R34，-C(O)NR34R35，-OC(O)NR34R35，-NR34C(O)R35，-OCH2C(O)NR34R35，-C(O)R34或-C(O)OR34，■C1-6-烷基、C2-6-链烯基或C2-6-炔基，其中所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■C3-8环烷基或C4-8-环烯基，其中所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的基团取代，其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
32.权利要求31的化合物，其中R29、R30和R31独立地为氢、C1-6-烷氧基、卤素、-CF3、-OCF3或-NR34R35，其中R34和R35如权利要求1中所定义，或C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，所述基团任选如权利要求1所述被取代。
33.权利要求32的化合物，其中R29、R30和R31独立地为氢或C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，所述基团任选如权利要求1所述被取代。
34.权利要求32的化合物，其中R29、R30和R31独立地为氢或C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8环烯基，■所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■其中R34和R35独立地为氢、C1-6烷基或芳基，■或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
35.权利要求34的化合物，其中R29和R31都是氢，且R30不是氢。
36.权利要求34的化合物，其中R29和R31都是氢，且R30是C3-8-环烷基或C4-8-环烯基，■所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，■或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
37.权利要求36的化合物，其中R29和R31都是氢，且R30是C4-8-环烯基，■所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，■或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
38.权利要求37的化合物，其中R29和R31都是氢，且R30是环己烯基，■所述基团可任选被一个或多个选自卤素、-CN、-CF3、-OCF3、-NO2、-OR34、-NR34R35和C1-6-烷基的取代基取代，■其中R34和R35独立地为氢、C1-6-烷基或芳基，■或者当连接在同一氮原子上时，R34和R35与所述氮原子可一起形成任选含有1或2个选自氮、氧和硫的另外的杂原子、并任选含有1或2个双键的3-8元杂环。
39.权利要求37或38的化合物，其中R30被一个C1-6-烷基取代基取代。
40.权利要求33的化合物，其中R29、R30和R31独立地为氢、C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基。
41.权利要求40的化合物，其中R29和R31都是氢，且R30是C1-6-烷基、C3-8-环烷基或C4-8-环烯基。
42.权利要求1的化合物，其具有通式(I1) 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、X、D和E如权利要求1或任一前述权利要求中所定义。
43.权利要求1的通式(I2)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、D和E如权利要求1或任一前述权利要求中所定义。
44.权利要求1的化合物，其具有通式(I3) 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R15、R16、R17、R29、R30、和R31如权利要求1或任一前述权利要求中所定义。
45.权利要求42、43或44的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是氢。
46.权利要求1的化合物，其具有通式(I4) 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、X、D和E如权利要求1或任一前述权利要求中所定义。
47.权利要求1的通式(I5)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、D和E如权利要求1或任一前述权利要求中所定义。
48.权利要求46或47的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R7和R8是氢。
49.前述权利要求任一项的化合物，其中所述化合物的IC50值不高于5μM，所述值是通过本文所公开的胰高血糖素结合测定(I)或胰高血糖素结合测定(II)测定的。
50.权利要求49的化合物，其中所述化合物的IC50值低于1μM、优选低于500nM、更优选低于100nM，所述值是通过本文所公开的胰高血糖素结合测定(I)或胰高血糖素结合测定(II)测定的。
51.前述权利要求任一项的化合物，其中所述化合物是可用于治疗和/或预防选自高血糖、IGT、2型糖尿病、1型糖尿病、异常脂血症和肥胖症的适应征的物质。
52.用作药物的权利要求1-51任一项的化合物。
53.药物组合物，其中包含至少一种权利要求1-51任一项的化合物作为活性组分和一种或多种可药用载体或赋形剂。
54.单位剂型形式的权利要求53的组合物，其中包含约0.05mg-约1000mg、优选约0.1mg-约500mg、特别优选约0.5mg-约200mg权利要求1-51任一项的化合物。
55.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防能受益于胰高血糖素拮抗作用的病症或疾病的药物中的应用。
56.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防胰高血糖素介导的病症和疾病的药物中的应用。
57.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防高血糖的药物中的应用。
58.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于降低哺乳动物血糖的药物中的应用。
59.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防IGT的药物中的应用。
60.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防2型糖尿病的药物中的应用。
61.权利要求60的应用，其中所述应用是在制备用于延迟或预防从IGT向2型糖尿病转化的进程的药物中的应用。
62.权利要求60的应用，其中所述应用是在制备用于延迟或预防从非胰岛素需要性2型糖尿病向胰岛素需要性2型糖尿病转化的进程的药物中的应用。
63.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防1型糖尿病的药物中的应用。
64.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防肥胖症的药物中的应用。
65.权利要求1-51任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防异常脂血症的药物中的应用。
66.权利要求55-65任一项的应用，其中所述药物与另外的抗糖尿病剂联合用于治疗。
67.权利要求55-66任一项的应用，其中所述药物与另外的抗肥胖剂联合用于治疗。
68.权利要求55-67任一项的应用，其中所述药物与另外的抗高脂血症剂联合用于治疗。
69.权利要求55-68任一项的应用，其中所述药物与另外的抗高血压剂联合用于治疗。
70.治疗和/或预防能受益于胰高血糖素拮抗作用的病症或疾病的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用有效量的权利要求1-51任一项的化合物或权利要求53或54的药物组合物。
71.权利要求70的方法，其中化合物的有效量为约0.05mg-约2000mg/天、优选约0.1mg-约1000mg/天、特别优选约0.5mg-约500mg/天。
全文摘要
拮抗胰高血糖素对胰高血糖素受体作用的一类新化合物。由于它们的胰高血糖素受体拮抗作用，所述化合物可适于治疗和/或预防受益于胰高血糖素拮抗作用的任何疾病和病症例如高血糖、1型糖尿病、2型糖尿病、脂质代谢障碍和肥胖症。
文档编号C07D263/56GK1437581SQ01811591
公开日2003年8月20日 申请日期2001年6月21日 优先权日2000年6月23日
发明者A·S·卓根森, I·T·克里斯滕森, J·T·克德拉, P·玛德森, C·拜赫伦斯, C·萨姆斯, J·劳 申请人:诺沃挪第克公司