专利名称：醋酸奥曲肽生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种醋酸奥曲肽生产工艺。
背景技术：
奥曲肽是人工合成的生长抑制素，是九十年代临床应用最具有成效的激素类药物，它与天然生长抑制素的药理作用相同，但半衰期延长了三十倍，具有广泛的应用价值，它能抑制多种胃肠道激素的分泌及其他多种内分泌功能，在临床上治疗各型的胰腺炎、胰腺瘘管、肠瘘、肝硬化食道胃底曲张静脉出血、消化道溃疡出血、严重腹泻等，并有望用于消化系统内分泌肿瘤的治疗，但是现有的合成工艺选用了价格昂贵的L-Thr(ol)，使患者的使用受到价格的限制。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术中现有的合成醋酸奥曲肽工艺选用了价格昂贵的L-Thr(ol)，使患者的使用受到价格限制，需要一种价廉的醋酸奥曲肽合成工艺的问题。本发明设计醋酸奥曲肽生产工艺，其特征在于由下列工艺步骤组成，(1)取Boc-Thr(Ac)-Wang树脂(1.01mmol/g，1.01mmol)装入反应容器中，用DMF浸泡，洗涤，加入TFA与二氯甲烷的混合液，25℃反应半小时，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，加三乙胺与二氯甲烷混合液，25℃反应十分钟，分别用DMF，二氯甲烷各洗涤三次，抽干，加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，25℃反应一小时，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(2)上述试剂卡氏法检测氨基为阳性的，用接肽试剂补接后重复用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干至卡氏法检测氨基为阴性，加入封头试剂，25℃反应一小时，用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，加入脱帽试剂，25℃反应十二分钟，用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(3)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(4)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Lys(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(5)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(6)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(7)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(8)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-D-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂，(9)将八肽树脂转移到茄形瓶中，冷却下加入脱侧链试剂，25℃搅拌二小时，抽干，二氯甲烷，DMF，无水乙醇各洗涤三次，抽干，(10)取步骤(9)的八肽树脂转移到茄形瓶中，加入50％的乙醇，25℃搅拌在一小时内滴加硼氢化钠和乙醇溶液，25℃搅拌四小时后过滤，用50％的乙醇分次洗涤，再将滤液和洗涤合并，加醋酸至PH值得7，40℃下减压浓缩，(11)在上述浓缩液中加水，搅拌中滴加氨水至PH值7.8，室温空气中氧化24小时，用冰醋酸调至PH值5.5，加活性碳搅拌30分钟后过滤，(12)滤液分批经纯化后冻干得白色疏松块状成品。本发明的优点利用硼氢化钠还原取代价格昂贵的L-Thr(ol)，可大大降低醋酸奥曲肽生产合成的成本。
下面结合实施例对本发明作详细说明，具体实施方式
(1)取10g的Boc-Thr(Ac)-Wang树脂(1.01mmol/g，1.01mmol)装入反应容器中，用100mlDMF浸泡，洗涤，使树脂充分膨胀，加入50ml TFA与50ml二氯甲烷的混合液，25℃反应半小时，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，加8ml三乙胺与92ml二氯甲烷混合液，25℃反应十分钟，分别用DMF，二氯甲烷各洗涤三次，抽干，加入23.4g Fmoc-Cys(Trt)-OH，12.8g TBTU，6.1g HOBt，用80ml接肽试剂溶解，25℃反应一小时，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(2)上述试剂卡氏法检测氨基为阳性的，用40ml接肽试剂补接后重复用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干至卡氏法检测氨基为阴性，加入100ml封头试剂，25℃反应一小时，用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，加入100ml脱帽试剂，25℃反应十二分钟，用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，测定氨基为0.722mmol/g，(3)在上述脱帽反应后的树脂中，加11.9g Fmoc-Thr(tBu)-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，测定氨基为0.663mmol/g，(4)在上述脱帽反应后的树脂中，加13.9g Fmoc-Lys(Boc)-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，测定氨基为0.601mmol/g，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(5)在上述脱帽反应后的树脂中，加15.7gFmoc-D-Trp(Boc)-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，测定氨基为0.543mmol/g，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(6)在上述脱帽反应后的树脂中，加11.6g Fmoc-Phe-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，测定氨基为0.478mmol/g树脂，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(7)在上述脱帽反应后的树脂中，加17.6g Fmoc-Cys(Trt)-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，测定氨基为0.434mmol/g树脂，(8)在上述脱帽反应后的树脂中，加11.6g Fmoc-D-Phe-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，测定氨基为0.391mmol/g树脂，，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂20.8g，接肽总收率为78.5％，每步接肽收率为97％以上，树脂体积增加约一倍，(9)将20.8g八肽树脂转移到茄形瓶中，冷却下加入脱侧链试剂，25℃搅拌二小时，抽干，二氯甲烷，DMF，无水乙醇各洗涤三次，抽干，得八肽树脂16.9g(10)取步骤(9)的八肽树脂16.9g转移到茄形瓶中，加入150ml 50％的乙醇，25℃搅拌在一小时内滴加2g硼氢化钠和50ml乙醇溶液，25℃搅拌四小时后过滤，用150ml50％的乙醇分次洗涤，再将滤液和洗涤合并，加醋酸至PH值得7，40℃下减压浓缩，(11)在上述浓缩液中加水4200ml，搅拌中滴加2M的NHOH至PH值7.8，室温空气中氧化24小时，用冰醋酸调至PH值5.5，加活性碳搅拌30分钟后过滤，(12)滤液分批经纯化后冻干得1.1g白色疏松块状成品，收率10.7％。本品性状、溶解度、鉴别、比旋度、吸收度、水分、相关肽、氨基酸组分、醋酸含量等各项均达到欧洲药典的规定。
上述英文缩写表L-Thr(ol) L-型苏氨醇Boc-Thr(Ac)-Wang树脂 叔丁氧羰酰-苏氨酸(乙酰基)王树脂TFA 三氟乙酸DMF 二甲基甲酰胺TBTU 氧-(1氢-苯并三氮唑基)-四甲基脲-四氟化硼HOBt 1-羟基苯并三氮Fmoc-Cys(Trt)-OH 芴甲氧羰基-半胱氨酸(三苯甲基)Fmoc-Thr(tBu)-OH 芴甲氧羰基-苏氨酸(叔丁基)Fmoc-Lys(Boc)-OH 芴甲氧羰基-赖氨酸(叔丁氧酰)Fmoc-D-Trp(Boc)-OH芴甲氧羰基-D-型-色氨酸(叔丁氧酰)Fmoc-Phe-OH 芴甲氧羰基-苯丙氨酸Fmoc-D-Phe-OH 芴甲氧羰基-D-型苯丙氨酸
权利要求
1.醋酸奥曲肽生产工艺，其特征在于由下列工艺步骤组成，(1)取Boc-Thr(Ac)-Wang树脂(1.01mmol/g，1.01mmol)装入反应容器中，用DMF浸泡，洗涤，加入TFA与二氯甲烷的混合液，25℃反应半小时，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，加三乙胺与二氯甲烷混合液，25℃反应十分钟，分别用DMF，二氯甲烷各洗涤三次，抽干，加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，25℃反应一小时，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(2)述试剂卡氏法检测氨基为阳性的，用接肽试剂补接后重复用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干至卡氏法检测氨基为阴性，加入封头试剂，25℃反应一小时，用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，加入脱帽试剂，25℃反应十二分钟，用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(3)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(4)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Lys(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(5)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(6)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(7)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(8)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-D-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂，(9)将八肽树脂转移到茄形瓶中，冷却下加入脱侧链试剂，25℃搅拌二小时，抽干，二氯甲烷，DMF，无水乙醇各洗涤三次，抽干，NHOH(10)取步骤(9)的八肽树脂转移到茄形瓶中，加入50％的乙醇，25℃搅拌在一小时内滴加硼氢化钠和乙醇溶液，25℃搅拌四小时后过滤，用50％的乙醇分次洗涤，再将滤液和洗涤合并，加醋酸至PH值得7，40℃下减压浓缩，(11)在上述浓缩液中加水，搅拌中滴加氨水至PH值7.8，室温空气中氧24小时，用冰醋酸调至PH值5.5，加活性碳搅拌30分钟后过滤，(12)滤液分批经纯化后冻干得白色疏松块状成品，上述英文缩写表Boc-Thr(Ac)-Wang树脂叔丁氧羰酰-苏氨酸(乙酰基)王树脂TFA 三氟乙酸DMF 二甲基甲酰胺TBTU氧-(1氢-苯并三氮唑基)-四甲基脲-四氟化硼HOBt1-羟基苯并三氮Fmoc-Cys(Trt)-OH芴甲氧羰基-半胱氨酸(三苯甲基)Fmoc-Thr(tBu)-OH芴甲氧羰基-苏氨酸(叔丁基)Fmoc-Lys(Boc)-OH芴甲氧羰基-赖氨酸(叔丁氧 酰)Fmoc-D-Trp(Boc)-OH 芴甲氧羰基-D-型-色氨酸(叔丁氧 酰)Fmoc-Phe-OH 芴甲氧羰基-苯丙氨酸Fmoc-D-Phe-OH 芴甲氧羰基-D-型苯丙氨酸
全文摘要
本发明涉及一种醋酸奥曲肽生产工艺，其特征在于由下列工艺步骤组成，取Boc－Thr(Ac)－Wang树脂装入反应容器中，加入TFA与二氯甲烷的混合液反应，洗涤后加三乙胺与二氯甲烷混合液反应，加入Fmoc－Cys(Trt)－OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，卡氏法检测氨基为阳性用接肽试剂补接后至卡氏法检测氨基为阴性，加入封头试剂、脱帽试剂，洗涤，加Fmoc－Thr(tBu)－OH，TBTU，HOBt，加Fmoc－Lys(Boc)－OH，TBTU，HOBt，溶解，加Fmoc－D－Trp(Boc)－OH，TBTU，HOBt，接肽试剂溶解，加Fmoc－Phe－OH，TBTU，HOBt，加入反应容器，洗涤抽干，加Fmoc－Cys(Trt)－OH，TBTU，HOBt，加Fmoc－D－Phe－OH，TBTU，HOBt，干燥得八肽树脂，八肽树脂中加入脱侧链试剂，乙醇，硼氢化钠和乙醇溶液，乙醇洗涤，加醋酸及滴加NHOH至pH值7.8，用冰醋酸调至pH值5.5，滤液分批经纯化后冻干得白色疏松块状成品。本发明的优点利用硼氢化钠还原取代价格昂贵的L－Thr(ol)，可大大降低醋酸奥曲肽生产合成的成本。
文档编号C07K7/00GK1490330SQ0213752
公开日2004年4月21日 申请日期2002年10月18日 优先权日2002年10月18日
发明者周逸明 申请人:上海子能高科股份有限公司