专利名称：一种藻红蛋白β和α亚基基因启动子及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种藻红蛋白β和α亚基基因启动子及其制备方法和应用背景技术基因工程操作中重要的元件一之是启动子，启动子对于启动基因及其高效表达具有重要意义，目前已有细菌及真核生物来源的启动子，但这些启动子应用于藻类基因工程操作并不总能发挥作用，而藻类来源的启动子更是空白，影响了藻类基因工程的发展和应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种藻红蛋白β和α亚基基因启动子，它能弥补现有技术的上述不足。
一种藻红蛋白β和α亚基基因启动子，其特征是它用如下的核酸序列表征TCAAATCGGGCTTCAACTCCTTCGATGAAGGTGGCGGGTTGTCCCAAACTCTCCAACACGGAGTTGACGTCAGACCGTAAAATACGGAGTTCCTCGGCGACCTCCTTTACGGGGGTTGCCGAGACCACCTCTTGGAGGGATTTTAGTTCCCCTACAAGGGAGTCATGGGCGGTCCACAGAGCGCGGACCTGGGATTCCAGGGAAGTCCCCTGAAGGGTGTTATCGCCCGTTCCACGGGGGCTTGAAACCGCGACAGCGGGAGCAGGCCGGGGTGCCTGGGGCACTGCGGCAACAGCCGGAGTCGATGCTGCATTCCCCTGCGGGGGTGATAACGAGGGCAAAAGGAGGTTCCGGGGTTCCCGGTCGGGGGTATCATTCCGCGATGAAGCGGCGCCAGTACGGCTGGAACTTTTCCGTATAGGGATACTAATACATCAGATGATAAAAAATAACAGCTGAAACAGCTAAGTCCTTTATATTAAAATTTAAGGAGAGCTCT一种藻红蛋白β和α亚基基因启动子的制备方法，其特征是将引物P1TCAAATCGGGCTTCAAC和P2AGAGCTCTCCTTAAATT，用聚合酶链式反应，以龙须菜基因组DNA为模板，进行扩增。
藻红蛋白β和α亚基基因启动子用于红藻或蓝藻细胞特异性的基因载体的构建。
本发明的藻红蛋白β和α亚基基因启动子对藻类基因工程的发展和应用有重要意义。
具体实施方案在如下的50μl聚合酶链式反应体系中1×聚合酶链式反应缓冲液；3mM Mg2+；50pmol引物P1，TCAAATCGGGCTTCAAC，和P2；AGAGCTCTCCTTAAATT；200μMdNTP；50ng龙须菜基因组DNA为模板，以如下的循环参数扩增94℃ 8min预变性，94℃ 1min，50℃ 2min，72℃ 2min，30循环，得到的产物即藻红蛋白β和α亚基基因启动子，它可用如下的核酸序列表征TCAAATCGGGCTTCAACTCCTTCGATGAAGGTGGCGGGTTGTCCCAAACTCTCCAACACGGAGTTGACGTCAGACCGTAAAATACGGAGTTCCTCGGCGACCTCCTTTACGGGGGTTGCCGAGACCACCTCTTGGAGGGATTTTAGTTCCCCTACAAGGGAGTCATGGGCGGTCCACAGAGCGCGGACCTGGGATTCCAGGGAAGTCCCCTGAAGGGTGTTATCGCCCGTTCCACGGGGGCTTGAAACCGCGACAGCGGGAGCAGGCCGGGGTGCCTGGGGCACTGCGGCAACAGCCGGAGTCGATGCTGCATTCCCCTGCGGGGGTGATAACGAGGGCAAAAGGAGGTTCCGGGGTTCCCGGTCGGGGGTATCATTCCGCGATGAAGCGGCGCCAGTACGGCTGGAACTTTTCCGTATAGGGATACTAATACATCAGATGATAAAAAATAACAGCTGAAACAGCTAAGTCCTTTATATTAAAATTTAAGGAGAGCTCT。用低熔点凝胶回收藻红蛋白β和α亚基基因启动子后，连入含绿色荧光蛋白报告基因的启动子检测载体-pEGFP，重组体用电激仪转入蓝藻-集胞藻，以无藻红蛋白β和α亚基基因启动子插入的空载体做为空对照相比，电激转化后24小时在荧光显微镜下观察，可见样品中的绿色荧光，而对照没有绿色荧光。而若将同样的含启动子的重组体导入大肠杆菌及真核生物哺乳动物细胞中，却没有报告基因的表达，又由于该启动子来源于红藻，说明本发明的藻红蛋白β和α亚基基因启动子对报告基因有对红藻和蓝藻的细胞特异性基因表达启动活性。
权利要求
1.一种藻红蛋白β和α亚基基因启动子，其特征是它用如下的核酸序列表征TCAAATCGGGCTTCAACTCCTTCGATGAAGGTGGCGGGTTGTCCCAAACTCTCCAACACGGAGTTGACGTCAGACCGTAAAATACGGAGTTCCTCGGCGACCTCCTTTACGGGGGTTGCCGAGACCACCTCTTGGAGGGATTTTAGTTCCCCTACAAGGGAGTCATGGGCGGTCCACAGAGCGCGGACCTGGGATTCCAGGGAAGTCCCCTGAAGGGTGTTATCGCCCGTTCCACGGGGGCTTGAAACCGCGACAGCGGGAGCAGGCCGGGGTGCCTGGGGCACTGCGGCAACAGCCGGAGTCGATGCTGCATTCCCCTGCGGGGGTGATAACGAGGGCAAAAGGAGGTTCCGGGGTTCCCGGTCGGGGGTATCATTCCGCGATGAAGCGGCGCCAGTACGGCTGGAACTTTTCCGTATAGGGATACTAATACATCAGATGATAAAAAATAACAGCTGAAACAGCTAAGTCCTTTATATTAAAATTTAAGGAGAGCTCT
2.一种藻红蛋白β和α亚基基因启动子的制备方法，其特征是将引物P1TCAAATCGGGCTTCAAC和P2AGAGCTCTCCTTAAATT，用聚合酶链式反应，以龙须菜基因组DNA为模板，进行扩增。
3.藻红蛋白β和α亚基基因启动子应用于红藻和蓝藻细胞特异性的基因载体的构建。
全文摘要
一种藻红蛋白β和α亚基基因启动子，其特征是它用核酸序列表征制备时将引物P1TCAAATCGGGCTTCAAC和P2AGAGCTCTCCTTAAATT，用聚合酶链式反应，以龙须菜基因组DNA为模板，进行扩增。本发明的藻红蛋白β和α亚基基因启动子对藻类基因工程的发展和应用有重要意义。
文档编号C07H21/00GK1528911SQ0313506
公开日2004年9月15日 申请日期2003年9月29日 优先权日2003年9月29日
发明者隋正红, 张学成, 任雪莹, 臧晓南, 茅云翔 申请人:中国海洋大学