专利名称：一种多肽——具有南瓜蛋白的n端顺序的多肽的制作方法
技术领域：
本发明属于生物化学领域，具体地说，本发明描述了一种多肽——具有南瓜蛋白的N端27个氨基酸顺序的多肽。
背景技术：
南瓜蛋白(Cucurmosin)是一种类型1的核糖体失活蛋白(Ribosome-inactivating Protein)，核糖体失活蛋白是一类能使真核生物细胞的核糖体失活，从而抑制细胞内蛋白质合成的细胞毒素，其作用机制是具有RNA N-糖苷酶或叫多核苷酸·腺苷糖苷酶[EC3.2.2.22]活性。根据其分子结构，可以分为3类，类型1核糖体失活蛋白是具RNA N-糖苷酶活性的单肽链蛋白，例如，来自葫芦科植物瓜蒌块根的天花粉蛋白(Trichosanthin，简称TCS)，苦瓜种子的α，β-苦瓜子蛋白(α，β-Momorcharin，简称α，β-MOM)和西葫芦瓜瓢的西葫芦蛋白(Pepocin，简称PEP)。类型2核糖体失活蛋白是双肽链蛋白，例如，来自大戟科植物蓖麻毒素(Ricin)和豆科植物相思树种子的相思子毒素(Abrin)，它是由一条具有RNA N-糖苷酶活性的A链和一条具凝集素活性的B链通过二硫键连接而成的。类型3核糖体失活蛋白是一类茉莉酮诱导的蛋白(jasmonate-induced protein)，它是由具有RNA N-糖苷酶功能的N端结构域和一个未知功能的C端结构域组成，例如来自大麦的JIP60。从葫芦科植物中分离出来的类型1核糖体失活蛋白，例如天花粉蛋白、苦瓜子蛋白、丝瓜蛋白、白泻根蛋白等，均具有抗肿瘤抗病毒活性，特别是抗艾滋病毒活性。关于类型1核糖体失活蛋白和类型2核糖体失活蛋白已有很多的专利和文献报道。
中国专利99102290.4提供了从南瓜中分离出的类型1核糖体失活蛋白——南瓜蛋白(Cucurmosin)，并公开了它的制备方法。SDS-PAGE显示它的分子量为27kDa，等电点pI＞9，具有强烈抑制细胞内核糖体蛋白质合成的活性；并已培养出可供X-射线衍射用的单晶，晶体结构分析工作正在进行[Chen et al.Acta Cryst.D56 2000，665-666；Shi et alChinese J.struct.chem.2003，22(2)，165-168]。
本发明是基于上述现有技术基础，测定了南瓜蛋白的N端27个氨基酸顺序，它与天花粉蛋白和α-苦瓜子蛋白N-端顺序在蛋白水平上分别有66.7％和55.6％的同一性，二者都有70.3％的相似性。因此认定本发明的多肽——具有南瓜蛋白N端顺序的多肽、或其多肽的活性片断、类似物或衍生物与天花粉蛋白和α-苦瓜子蛋白相似，同为类型1的核糖体失活蛋白家族成员，并具有相似的生物学功能。这种多肽、或其多肽的活性片断、类似物或衍生物可以构成开发治疗药物的基础。
发明内容
本发明的一个目的，是提供分离的新的多肽——南瓜蛋白的N端氨基酸顺序的多肽。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明的说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有下列含义“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本发明中的氨基酸序列涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。
“相同性百分率”是指在两种或多种氨基酸序列比较中序列相同或相似的百分率。两个氨基酸序列如序列A和序列B之间的相同性百分率通过下式计算(序列A与序列B之间相同或相似的残基个数)÷(序列A的残基数+序列B的残基数)×100％。
“相似性”是指氨基酸序列之间对比相应位置氨基酸残基的相同或保守性取代的程度。用于保守性取代的氨基酸例如，带负电荷的氨基酸可包括天冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸可包括赖氨酸和精氨酸；具有不带电荷的头部基团有相似亲水性的氨基酸可包括亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸；甘氨酸和丙氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；丝氨酸和苏氨酸；苯丙氨酸和酪氨酸。
本发明提供了一种多肽——南瓜蛋白的N端顺序，基本上是由<210>1所示的氨基酸序列组成的。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽、优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物。
本发明的多肽在结构和功能上和天花粉蛋白和α-苦瓜子蛋白有高度的同源性和相似性，因而也具有天花粉蛋白和α-苦瓜子蛋白的药用功能。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1南瓜蛋白的N端分析1将本发明一种多肽——南瓜蛋白的N端共27个氨基酸与天花粉蛋白氨基酸序列同源性作比较，同源结果示于表1，相同率为66.7％，相似率为70.3％。
表1是本发明一种多肽——南瓜蛋白的N端共27个氨基酸与天花粉蛋白氨基酸序列同源性比较表。上方序列是南瓜蛋白，下方序列是天花粉蛋白。相同氨基酸在两个序列间用单字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。
表1 相同率＝36/54(66.7％) 相似率＝38/54(70.3％)Cuc1 N V R F D L S S A T S S S Y E T F I K N L R E A L P K 27+ V F L S A T S S S Y F I N L R A L PTCS1 D V S F R L S G A T S S S Y G V F I S N L R K A L P N 27实施例2南瓜蛋白的N端分析2
将本发明一种多肽——南瓜蛋白的N端共27个氨基酸与α-苦瓜子蛋白氨基酸序列同源性作比较，同源结果示于表2，相同率为55.6％，相似率为70.3％。
表2是是本发明一种多肽—南瓜蛋白的N端共27个氨基酸与α-苦瓜子蛋白氨基酸序列同源性比较表。上方序列是南瓜蛋白，下方序列是α-苦瓜子蛋白。相同氨基酸在两个序列间用单字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。
表2 相同率＝30/54(55.6％) 相似率＝38/54(70.3％)Cuc1 N V R F D L S S A T S S S Y E T F I K N L R E A L P K 27+ V F L S A S Y F I K + L R + A L PMOM1 D V S F R L S G A D P R S Y G M F I K D L R N A L P F 27
序列表<110>中国科学院福建物质结构研究所<120>一种多肽——具有南瓜蛋白的N端顺序的多肽<160>1<170>Patent In version 3.1<210>1<211>27<212>PRT<213>Cucurbita moschata<400>1Asn Val Arg Phe Asp Leu Ser Ser Ala Thr Ser Ser Ser Tyr Glu Thr1 5 10 15Phe Ile Lys Asn Leu Arg Glu Ala Leu Pro Lys20 2权利要求
1.一种多肽——具有南瓜蛋白的N端顺序的多肽，其特征在于，它的N端包含有<210>1所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片断、类似物或衍生物。
2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽、类似物或衍生物的N端具有<210>1所示的氨基酸序列至少95％的相同性。
全文摘要
本发明公开了一种多肽——具有南瓜蛋白的N端27个氨基酸顺序的多肽。
文档编号C07K14/415GK1603339SQ0313504
公开日2005年4月6日 申请日期2003年9月29日 优先权日2003年9月29日
发明者陈明晃, 叶晓明 申请人:中国科学院福建物质结构研究所