专利名称：一种芥子碱活性成分的制备方法
技术领域：
本发明属于天然药物技术领域。具体涉及一种从莱菔子提取芥子碱活性成份的制备方法。
背景技术：
莱菔子(Semen Raphani)为十字花科植物莱菔(Raphanussativus)的干燥成熟种子，莱菔子又称萝卜子。根据历代中医文献记载，莱菔子具有开宣肺气、润肠通便，调节人体整个气机升降的作用。近代医学研究表明，莱菔子具有多种药理活性作用，如抗菌，对葡萄球菌和大肠杆菌具有显著的抑制作用、降压作用以及镇咳祛痰作用。研究证明，莱菔子药材中的降血压活性成分为芥子碱(sinapine)，而芥子碱形成硫酸盐比较稳定，活性较好，其分子结构式如下 据目前的研究资料报道，关于芥子碱成分的研究主要侧重于药理研究方面，中科院上海植物生理研究所的顾瑞琦等发现芥子碱具有明显的抗辐射伤害作用，可以作为一种辐射保护剂。但关于芥子碱成分的制备工艺研究，目前尚无明确报道关于芥子碱成分的工艺制备方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于研究设计芥子碱活性成份的制备方法。
本发明提供了一种从莱菔子提取芥子碱活性成份的制备方法，该方法包括下列步骤(1)提取选取500g的莱菔子原料，研磨得到粗粉。向粗粉中加入3-4倍85-95％浓度的乙醇浸泡三次，每次浸泡时间3-4天，得到浸泡液，合并减压回收乙醇，得到莱菔子粗提物浸膏62.45g，然后加入300-400ml的H2SO4溶液溶解控制pH2-3，离心去除沉淀，得到离心后溶液280ml；(2)分离纯化对于离心步骤(1)后得到的溶液，向其中加入过氯酸盐3.5g，静置沉淀，过滤后的沉淀物抽干重量22.64g。上硅胶柱(100-200目)，流速控制在10-20ml/min，用丙酮进行洗脱，收集洗脱液至无色，合并洗脱液回收至300ml，加入3/4～1/4倍的H2O于30-40℃充分搅拌，至沉淀完全析出，过滤收集沉淀；(3)制得成品向步骤(2)得到的沉淀中加入无水乙醚100ml进行溶解，溶解温度控制在55-65℃，溶解液放置在冰柜中冷藏结晶，得到的结晶进行重结晶，得到芥子碱0.32g；(4)检测经过HPLC的含量检测，分析得到芥子碱的纯度在80-99％的范围内。
通过本发明的方法制得的芥子碱活性成份纯度在80～99％。
本发明的制备工艺简单，收率高，原料资源丰富，成本低，产品纯度高，适宜于规模型的工业化生产。
通过本发明方法制得的芥子碱活性成分经HPLC检测制得的产品纯度高，并且经MS检测分子量为310.15，与理论值相符。
图1、芥子碱的HPLC检测图样品名称芥子碱色谱柱LiChoCART 250*4 LiChrospher 100 RP-18e(5um)流动相甲醇∶乙腈∶磷酸二氢钾(0.08M)＝10∶12∶78波长326nm温度25℃
流速0.5ml/min灵敏度0.005 AUFS计算方法面积归一法分析结果
具体实施例方式实施例一取300g的莱菔子原料，研磨得到粗粉。向粗粉中加入3倍量85％浓度的乙醇浸泡三次，每次浸泡时间3天，得到浸泡液，合并减压回收乙醇，得到莱菔子粗提物浸膏30.8g，然后加入200ml的H2SO4(PH＝2)溶液溶解，离心去除沉淀，得到离心后溶液180ml。
对于离心后得到的溶液，向其中加入过氯酸盐2.0g，静置得到沉淀，过滤后的沉淀物抽干上硅胶柱(100-200目)，流速控制在15ml/min，用丙酮进行洗脱，收集洗脱液至无色，合并洗脱液回收至200ml，加入100ml的H2O于30℃充分搅拌，至沉淀完全析出，过滤后得到沉淀。
向沉淀中加入无水乙醚50ml进行溶解，溶解温度控制在55℃，溶解液放置在冰柜中冷藏，静置得到结晶，得到芥子碱成品0.18g，纯度为85％。
实施例二取1kg的莱菔子原料，研磨得到粗粉。向粗粉中加入3倍量90％浓度的乙醇浸泡三次，每次浸泡时间4天，得到浸泡液，合并减压回收乙醇，得到莱菔子粗提物浸膏106.6g，然后加入500ml的H2SO4(PH＝2)溶液溶解，离心去除沉淀，得到离心后溶液510ml。
对于离心后得到的溶液，向其中加入过氯酸盐10.0g，静置得到沉淀，过滤后的沉淀物抽干上硅胶柱(100-200目)，流速控制在15ml/min，用丙酮进行洗脱，收集洗脱液至无色，合并洗脱液回收至700ml，加入400ml的H2O于35℃充分搅拌，至沉淀完全析出，过滤后得到沉淀。
向沉淀中加入无水乙醚200ml进行溶解，溶解温度控制在60℃，溶解液放置在冰柜中冷藏，静置结晶，得到的结晶物进行重结晶，得到芥子碱成品0.58g，纯度为95％。
实施例三取2kg的莱菔子原料，研磨得到粗粉。向粗粉中加入4倍量95％浓度的乙醇浸泡三次，每次浸泡时间3.5天，得到浸泡液，合并减压回收乙醇，得到莱菔子粗提物浸膏226.2g，然后加入900ml的H2SO4(PH＝2)溶液溶解，离心去除沉淀，得到离心后溶液920ml。
对于离心后得到的溶液，向其中加入过氯酸盐18.0g，静置得到沉淀，过滤后的沉淀物抽干上硅胶柱(100-200目)，流速控制在18ml/min，用丙酮溶剂进行洗脱，收集洗脱液至无色，合并洗脱液回收至1200ml，加入600ml的H2O于40℃充分搅拌，至沉淀完全析出，过滤后得到沉淀。
向沉淀中加入无水乙醚350ml进行溶解，溶解温度控制在65℃，溶解液放置在冰柜中冷藏，静置结晶，得到的结晶物进行重结晶，得到芥子碱成品1.02g，含量检测为96.95％。
权利要求
1.一种从莱服子提取芥子碱活性成分的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)提取选取500g的莱菔子原料，研磨得到粗粉。向粗粉中加入3-4倍85-95％浓度的乙醇浸泡三次，每次浸泡时间3-4天，得到浸泡液，合并减压回收乙醇，得到莱菔子粗提物浸膏62.45g，然后加入300-400ml的H2SO4溶液溶解控制pH2-3，离心去除沉淀，得到离心后溶液280ml；(2)分离纯化对于离心步骤(1)后得到的溶液，向其中加入过氯酸盐3.5g，静置沉淀，过滤后的沉淀物抽干重量22.64g。上硅胶柱，流速控制在10-20ml/min，用丙酮进行洗脱，收集洗脱液至无色，合并洗脱液回收至300ml，加入3/4～1/4倍的H2O于30-40℃充分搅拌，至沉淀完全析出，过滤收集沉淀；(3)制得成品向步骤(2)得到的沉淀中加入无水乙醚100ml进行溶解，溶解温度控制在55-65℃，溶解液放置在冰柜中冷藏结晶，得到的结晶进行重结晶，得到芥子碱0.32g；(4)检测经过HPLC的含量检测，分析得到芥子碱的纯度在80-99％的范围内。
全文摘要
本发明属于天然药物技术领域。本发明公开了一种从莱菔子提取芥子碱活性成分的制备方法。本发明的莱菔子为原料，经过提取、分离纯化等步骤获得芥子碱活性成分，纯度达80－99％。本发明方法工艺简单，原料丰富，适于规模型工业化生产。
文档编号C07C213/00GK1569814SQ20041001823
公开日2005年1月26日 申请日期2004年5月11日 优先权日2004年5月11日
发明者尉亚辉, 栾龙, 董红元, 李小平, 姜涛 申请人:上海纳贝生物技术有限责任公司